1、一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理三、实验材料三、实验材料四、实验步骤四、实验步骤五、结果判定五、结果判定n了解血凝和血凝抑制试验的原理。了解血凝和血凝抑制试验的原理。n了解血凝价和血凝单位的概念。了解血凝价和血凝单位的概念。n掌握血凝和血凝抑制试验的操作步骤和结果判掌握血凝和血凝抑制试验的操作步骤和结果判定的方法。定的方法。一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理（一）血凝试验（一）血凝试验（HA）n一些病毒能够促使动物如鸡、鹅、豚鼠和人的红一些病毒能够促使动物如鸡、鹅、豚鼠和人的红细胞发生凝集，叫做细胞发生凝集，叫做血凝试验血凝试验。n病毒凝集红细胞是一种较为普遍的现
2、象，可以作病毒凝集红细胞是一种较为普遍的现象，可以作为鉴定病毒的一个指标。为鉴定病毒的一个指标。HA试验的原理图试验的原理图 一层一层RBC均匀铺在孔底者为均匀铺在孔底者为+；基本同上，但边缘不整齐，有下坠倾向者为基本同上，但边缘不整齐，有下坠倾向者为+；RBC在孔底形成一个环状，四周有小凝集块者为在孔底形成一个环状，四周有小凝集块者为+；RBC在孔底形成一个小团，但边缘不光滑，四周有小凝集块为在孔底形成一个小团，但边缘不光滑，四周有小凝集块为+;RBC在孔底形成一个小团，边缘光滑，四周有似小凝集块者为在孔底形成一个小团，边缘光滑，四周有似小凝集块者为;红细胞在孔底形成一个小团，边缘光滑，整齐
3、者为红细胞在孔底形成一个小团，边缘光滑，整齐者为-。+-血凝试验结果判定血凝试验结果判定1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210 C C n血凝价：血凝价：能使红细胞产生能使红细胞产生50%50%凝集的病毒最高凝集的病毒最高稀释度。稀释度。（二）血凝抑制试验（二）血凝抑制试验（HI）当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种红细胞当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞凝集抑制试验，凝集的现象就被抑制，称红细胞凝集抑制试验，即即血凝抑制试验血凝抑制试验。因此，可以用已知病毒来检测被检血清中的相因此，可以用已知病毒来
4、检测被检血清中的相应抗体，也可以用已知血清来鉴定未知病毒。应抗体，也可以用已知血清来鉴定未知病毒。HA试验的原理图试验的原理图 HI试验的原理图试验的原理图 三、实验材料三、实验材料1.鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（Lasota）接种鸡胚、收获尿囊液制备。接种鸡胚、收获尿囊液制备。2.鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，以生理盐水洗涤以生理盐水洗涤35次，将血浆、白细胞等充次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液使红细胞悬液使用。用。3.0.85%生理盐水。生理盐水。4.被检血
5、清，采自被检鸡的健康血清被检血清，采自被检鸡的健康血清。四、实验步骤四、实验步骤（一）血凝试验（一）血凝试验（HA）1.在血凝板第一排的在血凝板第一排的112孔加入孔加入50l生理盐水。生理盐水。2.在第在第1孔中加入孔中加入50l病毒抗原，反复吸取混匀病毒抗原，反复吸取混匀后吸后吸50l到第到第2孔，如此孔，如此倍比稀释倍比稀释直到第直到第10孔，孔，混匀后弃混匀后弃50l；最后两孔（最后两孔（11、12）为红细）为红细胞对照。胞对照。3.将将1%的红细胞的红细胞轻轻摇动混匀轻轻摇动混匀，在，在112孔中每孔中每孔加入孔加入50l。4.手工震荡，手工震荡，37静置静置2530min后观察结果
6、。后观察结果。5.病毒液的血凝价是病毒液的血凝价是1:2？。n血凝价：血凝价：能使红细胞产生能使红细胞产生50%50%凝集的病毒最高凝集的病毒最高稀释度。稀释度。（二）血凝抑制试验（二）血凝抑制试验（HI）1.在血凝板的在血凝板的111孔加入孔加入25l生理盐水，最后一孔（生理盐水，最后一孔（12孔）加孔）加50l。2.第第1孔加待检血清孔加待检血清25l，混匀后吸混匀后吸25l至第至第2孔，倍比孔，倍比稀释直至第稀释直至第10孔，混匀后弃孔，混匀后弃25l。3.从从111孔，每空加稀释好的孔，每空加稀释好的25l 4 4个血凝单位个血凝单位的病毒的病毒悬液悬液。37 静置静置2530min如
7、果血凝价为如果血凝价为1:21:28 8，那么，那么4 4个血凝单位就是个血凝单位就是1:21:26 6第第11、12孔不加孔不加第第12孔不加孔不加n血凝价：血凝价：能使红细胞产生能使红细胞产生50%50%凝集的病毒最高稀凝集的病毒最高稀释度。释度。n1 1个血凝单位：个血凝单位：能使能使50%50%的红细胞发生凝集的病毒的红细胞发生凝集的病毒悬液悬液。病毒浓度病毒浓度1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1:27 1:28 1:29 1:210 C C 4.将将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在的红细胞轻轻摇动混匀，在112孔中每孔中每孔加入孔加入50l。5.手工震荡，在手
8、工震荡，在37静置静置2530min后观察结果。后观察结果。6.结果判定：以红细胞凝集结果判定：以红细胞凝集100%的抑制作为结的抑制作为结果判定的终点。果判定的终点。7.血凝抑制价是血凝抑制价是1:2？，被检血清为阴，被检血清为阴/阳性。阳性。1:24为阳性为阳性1:22为阴性为阴性1:23为可疑为可疑血凝抑制价血凝抑制价 第第1111孔为病毒对照，应该完全凝集，第孔为病毒对照，应该完全凝集，第1212孔为细胞对照，孔为细胞对照，应该完全沉积到孔底。应该完全沉积到孔底。HAHI细胞对照五、结果判定五、结果判定n血凝价是血凝价是1：？；：？；n血凝抑制价是血凝抑制价是1：？；：？；n被检血清为阴性还是阳性被检血清为阴性还是阳性?
