1、基因工程菌的发酵PPT教学课件基因工程菌的遗传不稳定性的表现 基因工程菌的遗传不稳定性主要表现在重组质粒的不稳定性，这种 不稳定性具有下列两种表现形式：结构不稳定性 重组 DNA 分子上某一区域发生缺失、重排、修饰，导致其表 观生物学功能的丧失 分配不稳定性 整个重组 DNA 分子从受体细胞中逃逸（curing）基因工程菌的遗传不稳定性的的产生机制 受体细胞中的限制修饰系统对外源重组 DNA 分子的降解 外源基因的高效表达严重干扰受体细胞正常的生长代谢 能量、物质的匮乏和外源基因表达产物的毒性诱导受体细胞产生 应激反应：关闭合成途径，启动降解程序 重组质粒在受体细胞分裂时的不均匀分配 这是重组
2、质粒逃逸的基本原因 受体细胞中内源性的转座元件促进重组分子的缺失重排基因工程菌的遗传不稳定性的的产生机制 受体细胞中的限制修饰系统对外源重组 DNA 分子的降解 外源基因的高效表达严重干扰受体细胞正常的生长代谢 能量、物质的匮乏和外源基因表达产物的毒性诱导受体细胞产生 应激反应：关闭合成途径，启动降解程序 重组质粒在受体细胞分裂时的不均匀分配 这是重组质粒逃逸的基本原因 受体细胞中内源性的转座元件促进重组分子的缺失重排重组质粒的逃逸率 当含有重组质粒的工程菌在非选择性条件下生长时，培养系统中一部分细胞不再携带重组质粒，这些空载细胞数与总细胞数之比称为重组质粒的宏观逃逸率。重组质粒逃逸的原因有：
3、高温培养、表面活性剂（SDS）、药物（利福平）、染料促使重 组质粒渗漏 受体细胞中的核酸酶降解重组质粒 重组质粒在受体细胞分裂时不均匀分配，细胞所含重组质粒拷贝 数的差异随着细胞分裂次数的增多而加剧 影响基因工程菌稳定性的因素 载体的选择 遗传特性 宿主的选择 外源基因整合到宿主染色体上 培养基 生长速率 发酵工艺 限制性基质 温度 pH 和溶氧 外源基因表达基因工程菌的稳定性 提高基因工程菌稳定性的策略 改进载体受体系统 以增加质粒稳定性为目的的构建方法包括：将 R1 质粒上的 parB 基因引入表达型载体中 其表达产物可以选择性地杀死由于分配不均匀所产生的无质粒细胞 正确设置载体上的多克隆
4、位点 禁止 DNA 片段插在稳定区内 将受体细胞的致死性基因安装在载体上 同时构建条件致死性的相应受体系统，如大肠杆菌的 ssb 基因 （DNA 单链结合蛋白编码基因）基因工程菌的稳定性培养基 一些基因重组菌在复合培养基中显示较高的质粒稳定性 微生物在含有有机氮源如酵母抽提物、蛋白胨等营养丰富的复合培 养基中培养时，由于培养基提供了生长必须的氨基酸和其他物质，微生物的生长较在基本培养基中快。培养条件对基因工程菌稳定性的影响比生长速率 基因重组菌的比生长速率对质粒稳定性有很大影响。提高比生长速率有助于提高质粒稳定性。基因重组菌的比生长速率与培养环境有关，如温度，pH，溶氧，限制性营养物质浓度，有
5、害代谢产物浓度等。在一定的温度和 pH 下，限制性基质浓度往往是决定比生长速率的主要因素。培养条件对基因工程菌稳定性的影响限制性基质 一般培养基中各成分并不是完全平衡的，经过一段时间的培养，微生物的生长通常会受到一种或几种物质的限制。限制性基质的种类对重组菌有不同的影响培养条件对基因工程菌稳定性的影响pH 和溶解氧 pH 和溶氧影响重组酵母菌的稳定性。pH 和溶氧是影响微生物生长的重要参数，在发酵罐培养基因重组菌时，通常都需要维持一定的 pH 和溶氧水平。在基因重组菌的高密度培养时，为了维持所需的溶氧水平，除了提高搅拌转速和通气量，往往还要在通入的空气中补充氧气，以提高发酵罐的供氧能力。培养条
6、件对基因工程菌稳定性的影响外源基因的表达 外源基因的表达会引起重组质粒的不稳定 外源基因高效表达时，有可能因竞争利用物质、能量、核糖体等干扰宿主细胞的正常代谢活动，并造成质粒不稳定。例如，吲哚丙烯酸（IAA）是 trp 操纵子阻遏物的部分去阻遏剂，在培养大肠杆菌 MV12（pVH5）时，在培养基中加入不同量的 IAA，发现随 IAA 量的增加，pVH5 带有的分支酸合成酶和色氨酸合成酶基因的表达水平有很大提高，同时比生长速率下降，培养液中 Trp 的比例上升。电泳分析表明 60%70%色氨酸合成能力丧失是由于质粒结构的变化，其余是由于质粒丢失造成。培养条件对基因工程菌稳定性的影响提高基因工程菌
7、稳定性的策略 施加选择压力 根据载体上的抗药性标记，向培养系统中添加相应的抗生素 药物和食品生产时禁止使用抗生素 加入大量的抗生素会使生产成本增加 添加一些容易被水解失活的抗生素，只能维持一定时间 添加抗生素选择压力对质粒结构不稳定无能为力 载体上的营养缺陷型标记，向培养系统中添加相应的营养组份 培养基复杂，成本较高 提高质粒稳定性的方法提高基因工程菌稳定性的策略 分阶段控制培养 因外源基因表达造成质粒不稳定时，可以考虑将发酵过程分阶段控制 在生长阶段使外源基因处于阻遏状态，避免因表达造成不稳定性问 题的发生；在获得需要的菌体密度后，再去阻遏或诱导外源基因表 达。连续培养时可以考虑采用多级培养
8、，如在第一级进行生长，维持菌 体的稳定性，在第二级进行表达。提高质粒稳定性的方法提高基因工程菌稳定性的策略 控制目的基因的过量表达 使用可控型启动子控制目的基因的定时表达及表达程度 使用可控型复制子控制质粒的定时增殖或降低质粒的拷贝数 优化基因工程菌的培养工艺 培养基组成：限制培养基比丰富培养基更有利于稳定 培养温度：较低的培养温度有利于重组质粒的稳定 提高质粒稳定性的方法提高基因工程菌稳定性的策略 优化基因工程菌的培养工艺 工程菌的培养条件对其质粒的稳定性和表达效率影响很大 可调控的环境参数为：培养基组分、培养温度、pH 和溶解氧浓度。有些含质粒的菌对发酵环境的改变比不含质粒的菌反应慢，因而
9、采用 间隙改变培养条件的方法以改变这两种菌的比生长速率，从而改善质 粒的稳定性。通过间隙供氧的方法和通过改变稀释速率的方法都可提 高质粒的稳定性。培养基组成：限制培养基比丰富培养基更有利于稳定 培养温度：较低的培养温度有利于重组质粒的稳定 提高质粒稳定性的方法提高基因工程菌稳定性的策略 控制培养条件 有些含质粒的菌对发酵环境的改变比不含质粒的菌反应慢，因而采用间隙改变培养条件的方法以改变这两种菌的比生长速率，从而改善质粒的稳定性。通过间隙供氧的方法和通过改变稀释速率的方法都可提高质粒的稳定性。例如研究表达干扰素 a 的大肠杆菌 W3110(pEC901)在不同比生长速率下的质粒稳定性，随着稀释
10、率的增加，质粒稳定性明显增加，干扰素的比效价也明显增大.提高质粒稳定性的方法 提高质粒稳定性的方法提高基因工程菌稳定性的策略 固定化 固定化可以提高基因重组大肠杆菌的稳定性 基因重组大肠杆菌进行固定化后，质粒的稳定性及目的产物的 表达率都有了很大提高。在游离重组菌系统中常用抗生素，氨基酸等选择性压力稳定质 粒的手段，往往在大规模生产中难以应用。而采用固定化方法 后，这种选择压力则可被省去。不同的宿主菌及质粒在固定化系统中均表现出良好的稳定性。一、基因工程菌的培养方式二、基因工程菌的发酵工艺基因工程菌发酵的基本操作方式有：分批培养 分批培养操作简单，但因不能控制生长，获得的菌体密度也有限 半连续
11、培养（补料分批）在一次投料发酵的基础上，流加一定量的营养，使细胞进一步的 生长，或得到更多的代谢产物 连续培养 不断地流加营养，并不断地取出发酵液。连续培养则多用于动力学特性和稳定性等研究。透析培养 固定化培养基因工程菌培养方式补料分批培养 补料分批培养是将种子接入发酵反应器中进行培养，经过一段时间，间歇或连续地补加新鲜培养基，使菌体进一步生长的培养方法。在分批培养中，为保持基因工程菌生长所需的良好微环境，延长其生长对数期，获得高密度菌体，通常把溶氧控制和流加补料措施结合起来，根据基因工程菌的生长规律来调节补料的流加速率。基因工程菌培养方式连续培养 连续培养是将种子接入发酵反应器中，搅拌培养至
12、菌体浓度达到一定程度后，开动进料和出料蠕动泵，以一定稀释率进行不间断培养。连续培养可以为微生物提供恒定的生活环境，控制其比生长速率，为研究基因工程菌的发酵动力学、生理生化特性、环境因素对基因表达的影响等创造了良好的条件。但是由于基因工程菌的不稳定性，连续培养比较困难。为了解决这一问题，人们将工程菌的生长阶段和基因表达阶段分开，进行两阶段连续培养。在这样的系统中关键的控制参数是诱导水平、稀释率和细胞比生长速率。优化这三个参数以保证在第一阶段培养时质粒稳定，菌体进入第二阶段后可获得最高表达水平或最大产率。基因工程菌培养方式透析培养 透析培养技术是利用膜的半透性原理使培养物和培养基分离，其主要目的是
13、通过去除培养液中的代谢产物来解除其对生产菌的不利影响。采用膜透析装置是在发酵过程中用蠕动泵将发酵液抽出打入罐外的膜透析器的一侧循环，其另一侧通入透析液循环，在补料分批培养中，大量乙酸在透析器中透过半透膜，降低培养基中的乙酸浓度，并可通过在透析液中补充养分而维持较合适的基质浓度，从而获得高密度菌体。膜的种类、孔径、面积，发酵液和透析液的比例，透析液的组成，循环流速，开始透析的时间和透析培养的持续时间段都对产物的产率有影响。基因工程菌培养方式固定化培养 基因工程菌培养的一大难题是如何维持质粒的稳定性。有人将固定化技术应用到这一领域，发现基因工程菌经固定化后，质粒的稳定性大大提高，便于进行连续培养，
14、特别是对分泌型菌更为有利。由于这一优点，基因工程菌固定化培养研究已得到迅速开展。基因工程菌的培养方式 应用发酵罐来大规模培养基因工程菌。为了防止工程菌丢失携带的质粒，保持基因工程菌的遗传特性，因而对发酵罐的要求十分严格。由于生化工程学和计算机的发展，新型自动化发酵罐完全能满足这些要求。常规的微生物发酵设备可直接用于基因工程菌的培养。不同点在于，微生物发酵主要收获的是它们的初级或次级代谢产物，细胞生长并非主要目标。基因工程菌培养是为了获得最大量的基因表达产物。由于这类物质是相对独立于细胞染色体之外的重组质粒上的外源基因所合成的、细胞并不需要的蛋白质，因此，培养设备以及设备控制应满足获得高浓度的受
15、体细胞和高表达的基因表达产物。发酵罐的组成部分有：发酵罐体 保证高传质作用的搅拌器、精细的温度控制和灭菌系统、空气无菌过滤装置 残留气体处理装置 参数测量与控制系统（如 pH、O2、CO2 等）培养液配制及连续操作装置等。基因工程菌的培养设备基因工程菌在发酵培养过程中要求 环境条件恒定，不影响其遗传特性，更不能引起所带质粒丢失。对发酵罐有特殊要求 如要提供菌体生长的最适条件 培养过程不得污染 保证纯菌培养 培养及消毒过程中不得游离出异物，干扰细菌代谢活动基因工程菌的培养设备发酵罐的结构材料的稳定性要好，一般要应用不锈钢制成罐体表面光滑易清洗，灭菌时没有死角与发酵罐连接的阀门要用膜式阀，不用球形
16、阀所有的连接接口均要用密封圈封闭，不留“死腔”，不得有泄漏搅拌器转速和通气应适当空气过滤系统要采用活性碳和玻璃纤维棉材料培养液要经化学处理或热处理后才可排放发酵罐的排气口须有蒸汽灭菌或微孔滤器除菌后才将废气放出。轴封可采用磁力搅拌或双端面密封基因工程菌的培养设备 壶系宜兴窑产品。砂质，肝红色，质地较粗，壶面有缸坛飞釉。球腹，腹下部稍敛，平底，弯流，流与腹衔接处贴塑四瓣柿蒂形纹饰。圆角四棱的提梁近似桥形，转折处为倭角，后部有一栓绳系盖的小系。平盖，组件葫芦状，无子母口，盖内有“十”字形筋。整个壶造型严谨，做工规整。此壶从南京市中华门外马家山明代司礼太监吴经墓中出土，同出的砖刻墓志表明墓葬年份为明
17、嘉靖十二年(1533年)。这是我国目前唯一有绝对纪年可考的嘉靖早年紫砂器。壶通体呈栗色，略带黄，布满梨皮状小白斑点，器盖尤为明显。丰肩，直颈，下腹渐收，平底，假圈足。曲流装于器腹正中，圆孔。柄体圆，内壁线条足卵形。盖口严密。盖的弧面上倒立三只扁鼎足，足外侧呈外撇的弧线，内侧为两个连弧。器底有单行竖排“时大彬制”阴刻楷书款识，刀法娴熟有力，字体方正，起笔处多圆折。此壶1987年7月11日出于于福建省漳浦县盘陀乡庙埔村明万历年间户、工二部侍郎卢维祯(15431610年)墓中，同时出土有墓志铭等纪年物。壶在出土时盖圈已有轻度磨损，当为墓主生前使用过的。壶身似球形，腹鼓似鬲，三足矮小如乳头。壶盖贴塑四
18、瓣对称的柿蒂纹。壶身无纹饰，表面满布微凸小颗粒，似“石榴皮”的质感，色浅绛无光。壶的嘴柄相对，柄下方腹壁上有阴刻楷“大彬”两字，字体工整有力。整体造型古朴雅致。此壶从无锡系甘露乡萧塘坟明崇祯二年华涵莪墓中出土。壶身方形，略呈上阔下敛状，圆口，环柄，曲流，四角有过底矮足。平底外满髹黑漆，中心漆层下隐约现出“时大彬制”起先楷书款，似为阴刻。壶外涂红漆，厚约3mm，上雕多种纹饰；腹部四面开光，两面山水人物，两面杂实纹，柄、流上流云飞鹤，肩、盖上亦为杂实纹。此壶造型端庄朴雅，雕饰华美，是紫砂工艺与雕漆工艺结合的成功作品。此种复合工艺始于明代，制品多壶类。有时大彬款的雕漆紫砂壶，此为仅见。罐平口直颈，长
19、圆腹，底微向里凹。肩部有六瓣柿蒂纹。盖面中心有“周氏俊造”阳文篆字款。小碟同时出土两件，形制大小及纹饰完全一致，唯颜色各异，一件朱泥制成，呈赭色，一件紫泥制成，呈深褐色。胎极薄，厚度为0.1cm。底内凸。制造工艺简练，先用手工捏塑成形，底部指纹清晰可见，然后模印花卉。出土于扬州城北公社卜西大队马庄小队。此壶是宜兴制陶名手陈鸣远所制。他的制品新颖灵巧，铭刻书法古雅，有晋唐风格。茶具、瓜果小品等均极精妙，名驰中外，影响甚广。南瓜形壶，壶嘴堆雕瓜叶，把手饰茎纹，盖状瓜蒂。砂质温润，色近橘红。叶脉筋络自然逼真，巧夺天工，妙趣盎然。壶身一侧刻楷书“仿得东陵式盛来雪乳香”十字，刻款“鸣远”并钤阳文篆书“陈
20、鸣远”方印。壶身呈莲蓬形，鼓腹下部渐收敛。壶身四周饰八片宽体莲瓣。壶嘴短，饰荷叶纹。壶盖面上以六颗莲子装饰在圆形钮四周，钮和莲子均能活动。壶盖和壶口结合紧密。壶肩部装有一藕节形的银配。在壶身一莲瓣上刻有“资雨清德烦暑咸涤君子友之以永朝夕”铭文，并刻有陈鸣远名款及二篆书印“陈”、“鸣远”。泥质紫褐色中闪点点金星，俗称“桂花砂”。器形为半爿石榴，树枝形杯把，底部雕塑枝叶，杯把旁塑一蓓蕾。整个造型稳重协调。在蓓蕾与树枝中间藏有阳文篆书“陈鸣远”三字印。壶呈六方形，直口，短颈，折肩，折底，短流，如意式曲柄，盖与壶口严密吻合。整体瘦长挺拔。用紫红色砂泥制作。壶身三面印制烹茶图，图中二人在茶楼的几案旁坐饮
21、，一书僮在廊中煮水，另一书僮端两茶杯作送茶状。四周有松、竹、梅及洞石作陪衬。壶身另三面镌刻乾隆御制诗：“雨中烹茶泛卧淳书室有作 溪烟山雨相空，生衣独坐杨柳风。竹炉茗碗泛清濑，米家书画将无同。松风泻处生鱼眼，中泠三峡何须辨。清香仙露沁诗脾，座间不觉芳堤转。”诗后篆刻阳文“乾隆”二字章式款。这首诗是清高宗弘历于乾隆七年夏至那天，在地坛神毕返回圆明园途中所作。烹茶图取材于乾隆御制诗，诗书结合，形式和内容有机地融为一体。通体呈方形，直口，口以下渐广，方圈足。曲形柄，流、柄均凸起四棱，与壶体相呼应。口上附盖与壶体相吻合。用紫色砂泥制作，形体古朴大方。腹部一面用金银彩绘山水、楼阁和松柏。另一面为金彩篆书御
22、制诗：“御制 花港观鱼，锦梭不籍。天孙掷练，影中堆万。族云设兴，水仙作春。服天边风，月傲清华。”共三十四字。盖面用金彩彩描绘卷枝纹作边饰，壶口边、足边刻络绎纤细的回纹。底阳印“乾隆年制”四字篆款。彩绘技法娴熟，书意清逸典雅，篆书用笔流畅，是紫砂器中的珍品。壶为梅花形，并有梅花形盖，盖上塑二桃形钮。壶流朝天，为半圆形。梅花形矮圈足。底心有一圆形戳记，字模糊不清。整体造型俊秀，小巧玲珑。壶身似杯，有短平流，无把。盖身、圈足均作四瓣瓜棱形。盖顶堆塑双桃，瓜棱腹两侧用胭脂红、蓝、青、黄、黑等多种色料绘山水画。器形规整，制作讲究。盖内及壶底均刻草书“王伦”二字，底又印有椭圆形款记，惜字迹模糊，难以辨认。
23、1959年浙江杭州半山清乾隆年间墓葬出土。壶盖呈扁圆形，壶身呈扁圆柱形，口及底渐收，有圈足，短流，把手上圆下方。周身以深浅蓝珐琅彩满绘花纹带。盖上绘花卉、如意纹，壶口下部一周是回纹，回纹外一周是如意纹，腹中部一周绘花卉卷草纹，近底部绘变形莲瓣纹。花纹的颜色和紫砂胎本色既对比又和谐，在加彩装饰的紫砂器中堪称佳作。杯以桃实半部为形，折枝作把，并以枝、叶、花为饰。杯下三足，亦由枝、叶及桃实构成。枝干中心触空，留下斑斑疤痕，形象逼真。泥质细净，色呈暗红。是宜兴紫砂器中极少见的珍品。有杯托，为近代名艺人裴石民所配。杯表镌有“阆苑花前是醉乡，拈翻王母九霞觞”诗句，款署“圣思”，钤“圣思氏”篆书阳文方印。平
24、盖，短颈，鼓腹，圆底，乳式鼎足。流若龙首，把饰 蟠螭，钮似伏狮。壶体绛红色，腹部饰黑泥印云雷纹装饰带。底钤凤舞纹样方印，盖内钤有阳文直书正楷“绶馥”椭圆小章。绶馥，姓陈，乾、嘉年间人。披云楼旧藏有陈绶馥制于乾隆三十八年的紫砂大壶。其名不及杨彭年之辈炫显，作品传世甚少。壶为紫砂胎外包锡皮。壶身呈斛形，四角形短直流上细下粗，镶螭虎状青玉环形把，正方形盖上嵌矩形白玉钮。器身一侧刻牡丹纹，另一侧刻隶书：“微润欲沾，雨前吐尖。己丑小春月，石梅”己丑年为清道光九年(1829年)。深赭色紫砂胎底内钤“杨彭年制”阳文篆书印款。此壶将紫砂与锡、玉工艺相结合，堪称珠联璧合，相得益彰，为难得的工艺珍品。此壶出土于清
25、咸丰元年墓。壶形似梅椿一段，敛口，直腹，假圈足。壶身贴塑梅枝三丛，繁花盛开，再饰以断枝瘿节。钮、把、嘴皆作梅枝形。色呈暗红，泥质细密。壶底钤阳文篆书“杨氏”小圆印。作者杨凤年为清代宜兴制壶名手杨彭年之妹。造型作方钟形，敛口，鼓腹，底微凹。方形流，流下部紧贴腹壁。扁环形把。四注式盖，弧形钮。紫砂胎，器表施蓝釉，腹壁两侧以白、红、绿彩绘博古图。底正中钤一阳文方印，字迹不清。壶身外壁似一捆整齐的竹段，中腰以一竹束之。竹段顶端(即壶面边沿)逐个雕刻小圆圈，以示竹心中空，形象逼真。壶盖以的为中心雕入卦纹，把、流堆雕龙头。壶底三足，亦雕刻矮竹段编连状，底面雕星象纹。壶色泽蟹青，造型典雅，装饰协调，堪称上品
26、。盖内钤瓜子形阳文楷书小印“大亨”。此壶选泥精细，泥色极为纯正。通身作海水波浪纹，线条流利，简洁明快。鱼龙吐珠，神韵生动。壶盖安装的龙首伸缩自如，优美灵活。配以龙尾执柄，浑成一体，格律谨严。考清代中叶阳次制壶名手一时涌现，特以二泉杨彭年为制曼生壶饮誉独高，然细审传世真品，大亨所制巧思出群，格调高雅，诚有过之。借其颇自珍重，距今虽百年余年，而作品传世绝少。鱼化龙式为其代表作，此壶已为国内孤品。壶盖内钤阳文楷书“大亨”瓜子形印。钮、盖、口、身、圈足统一协调成四方菱花形整体，制作精细规整。紫砂色调呈赤褐，夹有细小的黄砂及黑点。底有楷书刻款“友泉”两字。此小船坞为白泥所制，扁圆腹，底有五柱形足。腹上凸
27、雕对称的四个茎干形节，还凹挖两个树叶形和一个拱形装饰，内各贴一片紫泥，紫泥上点戳蜂窝状小圆点。另有一处凹挖为鸡心形，内无紫泥。腹内施白釉，开小碎片。腹内底心上有蓝色隶书“胡兴隆”三字，行书“秀记”二字。胎泥呈土黄色，砂质细腻。塑造一罗汉坐于象背，大象缓缓前行，回首张望。造型象征期望天下太平，子孙安乐。象腹底部印有篆书款“彭年”二字。盘呈浅长方体。在紫砂器的赭红色底上以蓝白两色釉绘面蝶花图案，壁项饰湖蓝地深蓝色回纹边。碗敞口，小圈足。盖径小于碗口径，有小圈顶。整个盖碗用黄黑两色泥绞成深浅相间的木纹。器表有四个层次的彩绘：圈足为蓝白相间的回纹边，底部为莲瓣纹带，中部为蓝色的团蝠和红色的团寿，器口为
28、蓝色如意头饰带。盖部纹饰与碗相似。碗内壁为开鱼子片白釉。碗作葵式造型，敞口，弧腹，四角弧折，圆底，下附喇叭形高圈足。紫砂胎，内外满施蓝釉。腹部镌有行书：“咸丰岁在丙辰文登于子良造”。字内填白釉。整体做成鼓的形状。器壁为土红色，盖和底呈土黄色，似所蒙皮面，周围还饰一圈黑色小乳钉。壁面刻行书：“山似蜀，泥可琢，东坡云，此间乐。乙丑秋。”壶身近圆，颈高而直。高圆小盖，钮为带弦纹的圆柱形。壶把和壶嘴均细长弯曲，线条柔软流畅。壶腹彩绘山水、屋舍、树木。无款。挂屏是紫砂制品中不常见的品种。这件挂屏在赭红色紫砂平板上用不同色泥堆贴松鼠、葡萄，松鼠在葡萄藤蔓之间。画面左上角署款：“岁次壬寅冬月朔日阳羡岐陶刻。
29、”表明作品制于清光绪二十八年(1902年)。壶身作圆球状，敛口，短颈，鼓腹，底内凹，圆饼形盖。钮、嘴、提梁皆作树枝状，提梁曲为三折。壶身一面刻有砖瓦文“嘉佑”、“平乐阿宫”，署行书“仿金石索本。陈升和制”。另一面镌刻书“香分花上露，水汲石中录”，以行书署款“阳羡泉石并作”。盖内钤有阴文楷书“郭记”印记，底有“宜兴紫砂”长方印、“郭记”阳文书扇形印。坛作圆球形，小圆口，短直颈，圆肩，腹微鼓，平底内凹。器表施绿釉，腹部以蓝、白两色釉作开光各二。白釉开光以彩釉绘山水，蓝釉开光以白釉行书题七言诗各一首。肩部以黄釉绘如意云头纹及白釉带红彩简化蔓草纹一周，近底部亦饰白釉带红彩简化蔓草纹一周。壶形正方，盖与口齐平，把、流、的均取方形。以黄泥拼制，内壁土黄无釉，外壁四面和口沿、盖面施白釉地，彩绘草虫、搔要、花卉小品五组。把、流、的挂绿釉。壶上无款字、印章。胎泥呈浅褐黄色，器形作横卧佛手状，柄似枝条，盖似叶片。款识不详。
