1、我国工程抗体研发概况我国工程抗体研发概况XXXYYYYYYYYYYYYYYY1979 -1980 国内个别单位开始单抗的研制国内个别单位开始单抗的研制1984年以前年以前 基本是技术方法的建立和完善基本是技术方法的建立和完善1985年以后年以后 单抗为基础的诊断试剂用于研单抗为基础的诊断试剂用于研 究和临床究和临床1987年以后年以后 单抗的体内诊断和治疗制剂被单抗的体内诊断和治疗制剂被 列列 入入863计划计划1992年年 我国第一个单抗衍生物被我国第一个单抗衍生物被SDA 批准进入临床批准进入临床单克隆抗体技术在我国的发展单克隆抗体技术在我国的发展细胞表细胞表面抗原面抗原血型抗原血型抗原组
2、织相容性组织相容性抗原抗原白细胞分化抗原白细胞分化抗原CD2CD3CD25CD10CD20CD38CD45CD71CD41CD42CD8.肿瘤相关肿瘤相关抗原抗原胃癌胃癌肺癌肺癌肝癌肝癌鼻咽癌鼻咽癌大肠癌大肠癌宫颈癌宫颈癌乳腺癌乳腺癌结肠癌结肠癌卵巢癌卵巢癌胰腺癌胰腺癌喉癌喉癌脑胶质瘤脑胶质瘤骨肉瘤骨肉瘤病毒病毒HFRSV新城疫新城疫甲肝甲肝轮状轮状登革登革乙肝乙肝RSV乙脑乙脑流感流感马雅罗马雅罗Mayaro 基孔贡亚基孔贡亚Chikungunya Ross River罗斯河罗斯河 盖塔盖塔Getah柯萨奇柯萨奇狂犬狂犬新培斯新培斯Sindbis细菌细菌大肠杆菌大肠杆菌沙门氏菌沙门氏菌痢疾杆
3、菌痢疾杆菌军团杆菌军团杆菌结核杆菌结核杆菌绿脓杆菌绿脓杆菌麻风杆菌麻风杆菌霍乱弧菌霍乱弧菌寄生虫寄生虫血吸虫血吸虫疟原虫疟原虫弓形虫弓形虫旋毛虫旋毛虫丝虫丝虫毛滴虫毛滴虫绦虫绦虫利什曼原虫利什曼原虫可溶性可溶性抗原抗原酶酶血浆血浆蛋白蛋白毒素毒素细胞细胞因子因子补体补体激素激素小分子小分子化合物化合物单克隆抗体的主要用途单克隆抗体的主要用途诊断诊断基础研究基础研究监测监测治疗治疗单单克隆抗体用于基础研究克隆抗体用于基础研究细胞种类及亚型的分析细胞种类及亚型的分析细胞信号转导途径的研究细胞信号转导途径的研究细胞膜受体及其功能研究细胞膜受体及其功能研究蛋白质分离、纯化蛋白质分离、纯化基因分离及功能
4、研究基因分离及功能研究单单克隆抗体用于疾病诊断克隆抗体用于疾病诊断传染病诊断传染病诊断肿瘤诊断肿瘤诊断免疫性疾病诊断免疫性疾病诊断内分泌疾病诊断内分泌疾病诊断血液病诊断血液病诊断单克隆抗体用于食品与环境监测单克隆抗体用于食品与环境监测食品食品水水土壤土壤“七五七五”863导向药物的研究导向药物的研究肝癌导向药物的研究肝癌导向药物的研究胃癌导向药物的研究胃癌导向药物的研究肺癌导向药物的研究肺癌导向药物的研究白血病导向药物的研究白血病导向药物的研究人人-鼠嵌合抗体的研究鼠嵌合抗体的研究人人-人单克隆抗体的研究人单克隆抗体的研究中草药及其他中草药及其他“弹头弹头”药物的研究药物的研究“八五八五”86
5、3基因工程抗体及导向药物的研究基因工程抗体及导向药物的研究肝癌导向药物的研究肝癌导向药物的研究胃癌导向药物的研究胃癌导向药物的研究肺癌导向药物的研究肺癌导向药物的研究白血病导向药物的研究白血病导向药物的研究人人-人单克隆抗体的研究人单克隆抗体的研究高效高效“弹头弹头”药物及新型交联方法的研究药物及新型交联方法的研究基因工程抗体的研究基因工程抗体的研究全套抗体全套抗体(repertoire)表达系统的构建表达系统的构建“九五九五”863抗体工程抗体工程 抗体为载体的导向药物抗体为载体的导向药物 鼠抗体人源化及人源抗体鼠抗体人源化及人源抗体 特殊功能的抗体及衍生物特殊功能的抗体及衍生物 基因工程抗
6、体表达系统基因工程抗体表达系统抗体人源化和人源抗体抗体人源化和人源抗体嵌合抗体嵌合抗体重构抗体重构抗体鼠抗体表面氨基酸残基鼠抗体表面氨基酸残基“人源化人源化”抗原表位定向选择抗原表位定向选择噬菌体抗体库噬菌体抗体库在我国研制成功的人源化和人源抗体在我国研制成功的人源化和人源抗体 嵌合抗体（抗嵌合抗体（抗CEA、VEGF、TNFa、gpIIb/IIIa）重构抗体（抗人重构抗体（抗人CD3）人源抗体（抗甲肝病毒、抗乙肝病毒、流行性人源抗体（抗甲肝病毒、抗乙肝病毒、流行性 出血热、出血热、TNF）抗体亲和力改造抗体亲和力改造链替换链替换(Chain Shuffling)计算机辅助设计下的定点突变计算
7、机辅助设计下的定点突变高亲和力克隆的选择高亲和力克隆的选择提高抗体提高抗体效应功能效应功能抗体融合蛋白抗体融合蛋白双特异性抗体双特异性抗体偶连细胞毒物质偶连细胞毒物质细胞内抗体细胞内抗体双特异性抗体双特异性抗体 抗人肝癌单抗抗人肝癌单抗/抗人抗人 CD3单抗单抗 抗抗Her2/neu单抗单抗/抗人抗人CD16单抗单抗 抗人抗人CD20单抗单抗/抗人抗人CD3单抗单抗 抗抗人人卵巢癌单抗卵巢癌单抗/抗人抗人CD3单抗单抗抗体融合蛋白抗体融合蛋白 抗人抗人Her2/neu单抗单抗-IL-2 CTLA-4-Ig 抗纤维蛋白抗纤维蛋白-ProUK抗抗活化血小板活化血小板-UK抗人抗人卵巢癌单抗卵巢癌单
8、抗-IL-2偶连细胞毒物质偶连细胞毒物质 连接放射性同位素连接放射性同位素(131I、99mTc）连接植物或细菌毒素（连接植物或细菌毒素（ricin、PE40）连接细胞毒性药物（连接细胞毒性药物（C1027、柔红霉素）柔红霉素）SDA批准进入临床的体内诊断用抗体批准进入临床的体内诊断用抗体 131I-抗人肝癌单克隆抗体抗人肝癌单克隆抗体(HAb18、Hepama-1）99mTc-抗人小细胞肺癌单克隆抗体（抗人小细胞肺癌单克隆抗体（2F7）SDA批准进入临床的治疗用单抗批准进入临床的治疗用单抗抗抗T细胞和细胞和C-ALL免疫毒素免疫毒素抗抗EGFR的人源化抗体的人源化抗体131I-抗肝癌单克隆抗
9、体抗肝癌单克隆抗体抗人抗人CD25单克隆抗体单克隆抗体抗乙脑单克隆抗体抗乙脑单克隆抗体抗流行性出血热抗体抗流行性出血热抗体抗抗131I-CEA人源化抗体人源化抗体抗人抗人CD3单克隆抗体单克隆抗体抗人抗人IL-8单克隆抗体单克隆抗体0 010102020303040405050606070708080 市 场 市 场I/II期临床I/II期临床国内国内国外国外我国体内诊断和治疗用抗体的研制我国体内诊断和治疗用抗体的研制我国工程抗体研发中存在的主要问题我国工程抗体研发中存在的主要问题基因工程抗体表达量低基因工程抗体表达量低动物细胞规模化培养技术落后动物细胞规模化培养技术落后新新抗体抗体我国抗体表
10、达载体的研究我国抗体表达载体的研究原核表达系统原核表达系统包涵体方式表达包涵体方式表达可溶性表达可溶性表达真核表达系统真核表达系统昆虫细胞昆虫细胞哺乳动物细胞哺乳动物细胞植物植物动物动物动物细胞培养动物细胞培养中空纤维系统中空纤维系统微囊培养微囊培养气升式培养气升式培养微载体培养微载体培养悬浮培养悬浮培养今后抗体药物发展的方向今后抗体药物发展的方向寻找新的靶抗原寻找新的靶抗原建立高通量抗体制备和筛选技术建立高通量抗体制备和筛选技术基于抗原立体结构设计和改造抗体基于抗原立体结构设计和改造抗体基于抗原基于抗原-抗体相互作用设计抗体模拟物抗体相互作用设计抗体模拟物新的靶抗原的发现新的靶抗原的发现疾病
11、发病机理的研究疾病发病机理的研究人类基因组研究人类基因组研究蛋白质组研究蛋白质组研究HRP-anti-E-TagscFv-E-TagAg FilterMaster Filter2xYT-AG2xYT-AG2xYT-AIColony-lift assayDevelopAg-Filter丝状噬菌体丝状噬菌体E.colitraAAB噬菌体展示技术与细菌展示技术结合的原理图噬菌体展示技术与细菌展示技术结合的原理图AntibodyVP16 ADAntigenLexA-DBDVector 1Vector 2Co-transfect yeast cellsLacZ gene activationHis3 g
12、ene activationLex A-DBSor双杂交系统筛选细胞内功能性抗体双杂交系统筛选细胞内功能性抗体Library BDHFR-f2Library ADHFR-f1lactamasecotransformSequence DNAlactamaseLib A-DHFR-f1Lib B-DHFR-f2抗原抗原抗体抗体DHFR-f1DHFR-f2DHFRFRP5 (Anti-ErbB2)+/-Herceptin (Anti-ErbB2)+/+Western-blot(Z12)1 GST2 GST+hTNF92-1573 GST+hTNF1-914 GST+hTNF1 157 92 157kD263336431 914 3 2 1 M 4 3 2 1 M蛋白转膜，丽春红显色蛋白转膜，丽春红显色免疫印迹，免疫印迹，DAB显色显色Anti-hTNFhTNFEpitopeCDR
