1、国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库水处理微生物水处理微生物 水污染的生物监测与评价周广阔 副教授知识点国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库知识目标1.微生物监测断面布设方法；2.生物指数法监测和评价污染物的方法；3.污水生物系统评价方法；4.浮游生物监测及评价；5.细菌总数和大肠菌群的检测。能力目标1.会操作微生物采集器；2.能鉴定常见的指示生物；3.会计算常用的生物指数；4.能用PFU法监测评价水体。5.会浮游生物计数器计数。6.会检测水的卫生学指标。素质目标1.法律意识和职业道德；2.勤于动手、学以致用；3.培养SQ4R学习习惯；4.培养严谨、规范的科学精神。水污染的生物监测
2、与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库n有些理化检测项目或参数还需定期采样，只反映瞬时污染状况；生物监测能更为全面地了解污染物对环境造成的长期效应；n指示生物作用；n能反映多种污染物对环境的综合影响，直观、综合和历史可溯源性；n生物对污染物敏感,有些连精密仪器测不出的元素,生物通过“累积放大”作用而被测出。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 采样断面和采样点的布设 生物指数法 水的细菌学检验法 浮游生物监测法 污水生物系统法水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库水
3、体生物监测与评价水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 采样断面和采样点的布设 生物指数法 水的细菌学检验法 浮游生物监测法 污水生物系统法水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库1.1 采样断面和采样点的布设原则与方法n 水环境的整体性、监测连续性和经济性；n 断面要有代表性；n 尽可能与化学监测断面相一致。河流：根据长度，至少设对照断面、控制断面、消减断面；采样点视水面宽、水深、生物分布特点等确定；湖泊（水库）：入湖（库）区、中心区、出口区、最深水区、清洁区等处设监测断面。水污染的生物监测与评价水
4、污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库ABDECFG取水点排污口A 对照断面，G为消减断面，B、C、D、E、F为控制断面。1.2 河流采样断面实例水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库入湖水入湖水入湖水湖中心出湖水鱼类产卵区A-D代表入水监测点，E-F为出水监测点，G-K为湖体本部监测点，L-M为湖边功能区监测点。1.3 湖泊采样断面布设实例水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 采样断面和采样点的布设 生物指数法 水的细菌学检验法 浮游生物监测法 污水生物系统法水污染的生物
5、监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库水体生物群落中的作为指示生物051015202530生生物物类类型型各各类类生生物物所所占占百百分分数数鱼类大型无脊椎动物原生动物大型水生植物藻类细菌指示生物的种类生物指数法：生物指数法：通过指示生物，指示生物，运用数学公式反映生物种群或群落结构的变化，以评价环境质量的方法。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库水污染指示生物：能对水体中污染物产生各种定性、定量反应的生物；（特点：生命周期长，活动环境固定，持久反映污染物对水体的综合影响）；浮游生物：其种类和数量是评价水污染
6、的重要指标；着生生物：反映和指示水体污染程度；底栖动物：应用最广泛。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库浮游生物着生生物附着于长期浸没水中的各种基质表面上的有机体群落。底栖动物栖息在水体底部淤泥内、石块或砾石表面及其间隙的可见水生无脊椎动物。水污染指示生物藻类、原生动物、微型后生动物等。如：细菌、真菌、藻类、原生动物、轮虫、甲壳动物、线虫、寡毛虫类等如：水生昆虫、大型甲壳类、软体动物、环节动物、扁形动物门类等。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库生物指数（生物指数（BI）=2A+BA敏感底栖动物
7、种类数B耐污底栖动物种类数 贝克生物指数贝克生物指数：从从采样点采样点采到的底栖大型无脊椎动物采到的底栖大型无脊椎动物n当当BI10时，为时，为清洁清洁水域；水域；nBI为为16时，为时，为中等污染中等污染水域；水域；nBI=0时，为时，为严重污染严重污染水域。水域。2.1 贝克生物指数水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库生物指数（生物指数（BI）=2A+BA敏感底栖动物种类数B耐污底栖动物种类数 贝克津田生物指数贝克津田生物指数：监测的：监测的河段所有河段所有底栖大型无脊椎底栖大型无脊椎动动物物n当当BI20，为，为清洁清洁水区；水区；n10
8、BI20，为，为轻度污染轻度污染水区；水区；n6BI10，为，为中等污染中等污染水区；水区；n0BI6，为，为严重污染严重污染水区水区。2.2 贝克津田生物指数水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库2.3 生物种类多样性指数 种类多样性指数；N单位面积收集到的各类动物样品总数；ni单位面积第i种动物样品个数；S收集到的动物种类数。NnNndisii12logdn 动物种类越多，指数越大，水质越好；反之，种类越少，指数越小，水体污染越严重。n 多样性指数与水样污染程度的关系：1.0：严重污染;=1.03.0：中等污染；3.0：清洁。ddd水污染的生
9、物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库2.4 硅藻生物指数 硅藻指数硅藻指数=10022CBACBAA不耐污染藻类的种类数；B广谱性藻类的种类数；C仅在污染水域才出现的藻类种类数。n 硅藻指数050，为多污带；n 硅藻指数50100，为-中污带；n 硅藻指数100150，为-中污带；n 硅藻指数150200，为轻污带。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库生物指数法的应用特点生物指数法的应用特点p 生物指数法较简单，是一个量化的指标，便于比较；p 对敏感、耐污物种的鉴定需具备类学和生态学知识；p 生物指数法仅
10、考虑生物种类的数量，不考虑每种生物的个体数，故在准确地反映水质受污染程度方面存在缺陷；p 应用时应结合生物学其他指标和物理、化学指标，综合考虑各方面的影响因素。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 采样断面和采样点的布设 水的细菌学检验法 浮游生物监测法 污水生物系统法 生物指数法水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库n 自然水体中的腐生细菌数与有机物浓度成正比自然水体中的腐生细菌数与有机物浓度成正比，测得腐生细测得腐生细菌数，即可推断水体的有机污染状况；菌数，即可推断水体的有机污染状况；n 将受
11、有机物污染的将受有机物污染的河流河流，根据水体中腐生细菌的数量，根据水体中腐生细菌的数量，从上从上游向下游划分为四个相互连续的河段，即游向下游划分为四个相互连续的河段，即多污带段、多污带段、-中污带中污带段、段、-中污带段和寡污中污带段和寡污带段，每个带的污染程度和自净过程都带段，每个带的污染程度和自净过程都各不相同（如：各不相同（如：腐生细菌数与细菌总数的比值腐生细菌数与细菌总数的比值不同）。不同）。3.1 污水生物系统 水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库污水带、特征多污带中污带中污带寡污带腐生细菌数（个/ml）105至1061051041
12、0至104有机物含大量有机物，主要是蛋白质和碳水化合物主要是氨和氨基酸有机物含量少有机物含量极微 溶解氧极低或几乎没有，厌氧性少量，半厌氧性较多，需氧性很多，需氧性BOD5非常高较高较低很低根据细菌数量划分污水带及其特征水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库3.1 污水生物系统 水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库类型类型外外 观观BIP生物特征生物特征河河流流流流向向多多污污带带1.暗灰色，很浑浊，含大量有机物，BOD高，溶解氧极低(或无)，为厌氧状态。2.有机物分解过程中产生H2S、C02和C
13、H4等气体，臭味。3.水底沉积许多由有机和无机物形成的淤泥。水面上有气泡。601001.种类很少，厌氧菌和兼性厌氧菌种类多，每毫升水含有几亿个细菌。有能分解复杂有机物的菌种，硫酸还原菌、产甲烷菌等。2.无植物，鱼类绝迹。3.河底淤泥中有大量寡毛类(颤蚯蚓)动物。*3.2 污水生物系统监测 水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库寡毛类动物颤蚯蚓颤蚯蚓寡毛虫寡毛虫水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库类型类型外外 观观BIP生物特征生物特征河河流流流流向向中中污污带带1.水为灰色，溶解氧少，为半厌氧状态
14、，有机物量减少，BOD下降。2.水面上有泡沫和浮泥，有NH3、氨基酸及H2S，臭味。20601.生物种类比多污带稍多。细菌数量较多，每毫升水约有几千万个。2.出现有蓝藻、裸藻、绿藻，原生动物有天蓝喇叭虫、缩虫、椎尾轮虫、臂尾轮虫及栉虾等；3.底泥已部分无机化，滋生了很多颤蚯蚓。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库类型类型外外 观观BIP生物特征生物特征河河流流流流向向中中污污带带1.有机物较少，BOD和悬浮物含量低，溶解氧浓度升高。2.NH3和H2S分别氧化为
15、NO3-和SO42-，两者含量均减少。8201.细菌数量减少，每毫升水只有几万个。2.藻类大量繁殖，水生植物出现；3.原生动物有固着型纤毛虫如独缩虫、聚缩虫等活跃，轮虫、浮游甲壳动物及昆虫出现。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库-中污带的藻类硅藻盘星藻水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库类型类型外外 观观BIP生物特征生物特征河河流流流流向向寡寡污污带带1.有机物全部无机化，BOD和悬浮物含量极低，水的浑浊度
16、低，溶解氧恢复到正常含量；2.H2S消失；3.河流自净过程已完成的标志。081.细菌极少；细菌极少；2.出现鱼腥藻、硅藻、黄出现鱼腥藻、硅藻、黄藻、钟虫、变形虫、轮虫藻、钟虫、变形虫、轮虫、浮游甲壳动物、水生植、浮游甲壳动物、水生植物及鱼物及鱼。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库n 底栖动物的移动能力差，故在正常的水体中种类较多，每个种的个体数量适当，群落结构稳定。n 当水体受到污染后，对污染较为敏感的种类和不适应缺氧的种类逐渐消失，而仅保留耐污种类，成为优势种。目前各国都广泛应用这种方法。3.3 底栖动物监测水污染的生物监测与评价水污染的生
17、物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库项目项目多污带多污带-中污带中污带-中污带中污带寡污带寡污带化学过程还原和分解作用明显开始水和底泥里出现氧化作用氧化作用更强烈因氧化使无机化达到矿化阶段溶解氧没有或极微量少量较多很多BOD很高高较低低硫化氢的生成有强烈的硫化氢臭味无强烈硫化氢臭味无无水中有机物蛋白质、多肽等高分子物质大量存在高分子化合物分解为氨基酸、氨等大部分有机物已完成无机化过程有机物全分解底泥常有黑色FeS存在，呈黑色FeS氧化成氢氧化铁，底泥不呈黑色有Fe2O3存在大部分氧化水中细菌大量存在，每毫升达100万个以上细菌较多，每毫升10万个以上数量减少，每毫升10万个以
18、下数量少，每毫升100个以下污水系统的部分生物学、化学特征水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库3.4 PFU微型生物群落监测法PFUPFU法法是以聚氨酯泡沫塑料块（是以聚氨酯泡沫塑料块（PFUPFU）作为人工基质沉入水）作为人工基质沉入水体中，经一定时间后，水体中大部分微型生物种类均可群体中，经一定时间后，水体中大部分微型生物种类均可群集到集到PFUPFU内；通过观察和测定微生物群落结构与功能评价水内；通过观察和测定微生物群落结构与功能评价水质状况的方法。质状况的方法。n 一般在一般在静水静水中采样约需中采样约需四周四周，在，在流水流水中采样约
19、需中采样约需两周两周；n 采样结束后，带回实验室，把采样结束后，带回实验室，把PFUPFU中的水全部中的水全部挤于烧杯内挤于烧杯内，用显微镜用显微镜观察观察微型生物种类微型生物种类和和数量，数量，测定群集速度测定群集速度。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库漂浮式沉式分散式水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库n PFU（聚氨酯泡沫塑料）基质的使用不受时间和空间的限（聚氨酯泡沫塑料）基质的使用不受时间和空间的限制，即可在任何时间浸泡于任何水体的任何深度；制，即可在任何时间浸泡于任何水体的任何深度；
20、n 所获得的微型生物群落达所获得的微型生物群落达总群落的总群落的85，具环境的真实性，具环境的真实性；n 相对于其它的生物群落法相对于其它的生物群落法(如浮游生物法，底栖动物法等如浮游生物法，底栖动物法等)，具有快速、经济和准确等优点。具有快速、经济和准确等优点。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 采样断面和采样点的布设 水的细菌学检验法 浮游生物监测法 污水生物系统法 生物指数法水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库4.1 浮游生物n 浮游生物如藻类、原生动物、轮虫、枝角类等；n 多数个体小（
21、肉眼不可见），游泳能力弱或完全没有游泳能力，过着随波逐流的生活；n 多数浮游生物对环境变化敏感，可作水质的指示生物；n 浮游生物为水生食物链基础；浮游植物进行光合作用，是初级生产者。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库色球蓝细菌念珠蓝细菌颤蓝细菌项圈蓝细菌 平裂蓝细菌腔球藻属腔球藻属胶刺蓝细菌蓝细菌（Cyanophyta）水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库浮游生物泵浮游生物网4.2 浮游生物监测取样水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库n 确定采
22、样地点、深度、频率；n 标签：日期，采样点，研究水域、样品类型，水深；n 记录：地点、深度、类型、时间、气候条件、浊度、水温；n 采样量、平行样。n 浮游生物固定方法：l浮游植物：用鲁哥氏液、5%福尔马林，防褪色可加1ml饱和硫酸铜/L样品或避光保存；l浮游动物：用70%乙醇、5%福尔马林、鲁哥氏液；分析生物量的用5%福尔马林；另加洗涤剂可防止结团。4.3 浮游生物监测取样水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库n 浮游植物的永久性湿封片：摇匀沉淀样品，准确吸取0.1mL样品至载玻片上，盖上盖玻片。用粘合剂圈封盖玻片。对于半永久性封片，可在样品中加
23、入甘油。n 浮游动物的封片：从样品中吸取5mL样品，视样品浓度可作适当稀释或浓缩。用聚乙烯乳酰酚制备半永久性浮游动物封片。4.4 检验标本的制作水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库浮游生物沉降器浮游动物计数框浮游生物计数管浮游植物计数框浮游生物分样器4.5 浮游生物的计数水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库VSAACMs1M每毫升的生物数；C所计数的生物数；A1盖玻片的面积mm2；V盖玻片下面样品的体积ml；As个长条的面积mm2；S计数的长条的条数。n 移取0.1ml水样至一载玻片上，用222
24、2mm盖玻片盖上，计数3-4个盖玻片宽度和长度的生物。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 采样断面和采样点的布设 生物指数法 水的细菌学检验法 浮游生物监测法 污水生物系统法水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库水的细菌学监测与评价水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 采样断面和采样点的布设 水的细菌学检验法 浮游生物监测法 污水生物系统法 生物指数法水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库u 水中细
25、菌总数与水体受有机污染的程度成正相关，因此细菌总数常作为评价水质的一个重要指标。u 细菌总数越大，水中有机质含量越大，水体污染越严重。u 细菌种类多，其生理特性不同。实际测定通常用一种适合大多数细菌生长的培养基培养，以其菌落总数表明有机物污染程度。u 在水质卫生学检验中，细菌菌落总数是指1ml水样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中经37、24 h培养后所生长出的细菌菌落数。我国规定1ml自来水中细菌总数不得超过100个。5.1 细菌菌落总数的测定原理水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库1.材料和仪器准备（1）培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（2）试剂：无
26、菌水（3）器皿：三角瓶，带塞玻璃瓶，培养皿，移液管，试管等2.水样的采集（1）自来水：先将水龙头用火焰烧灼3 min灭菌，再放水510 min，用无菌容器接取水样，速送回实验室检测。（2）池水：将无菌带塞瓶口向下浸入1015 cm，翻转瓶口向上，除塞后水流入瓶中，取完样后将瓶塞塞好，从水中取出，速送检。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库融化并冷却至46的培养基1215ml3.倒平板1 ml10-110-24.接种每个稀释度重复2个培养皿。1 ml100水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库倒置于
27、培养箱中，37培养24h，计数。水样10010-110-21 ml1 ml水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库5.计数方法及结果分析u 细菌菌落总数计算通常是采用同一浓度的两个平板菌落总数，取其平均值，再乘以稀释倍数，即得1 ml水样中细菌菌落总数。稀释倍数水样10010-110-2平板1 平板2平均值菌落总数（CFU/ml）水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库15.2 水中粪大肠菌群的监测u 大肠菌群是理想的指示生物。粪大肠菌群指示水体被粪便污染的程度，从而间接推测其他病原菌存在的概率。u 大
28、肠菌群是一群需氧或兼性厌氧的、在37培养2448 h能发酵乳糖产酸与产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌，且具有数量多、易于培养和观察等特点。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库1水中粪大肠菌群的检测方法1）多管发酵法：标准分析法，将一定量的样品接种乳糖发酵管，根据发酵反应的结果，确证大肠菌群的阳性管数后，在大肠菌群MPN检索表中查出大肠菌群的近似值。2）滤膜法：一种快速的替代方法，能测定大体积的水样。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库测定原理：根据大肠菌群能发酵乳糖产酸、产气，G-，无芽孢，呈杆状等有
29、关特性，通过假设、证实、确认三个步骤进行检验；假设检验是在发酵管中分别接种三种不同量的待测水样，推断出水样中大肠菌群的最可能数（MPN），再经过证实和确认检测，求得水样中的总大肠菌群数。5.2.1 多管发酵法测大肠菌群水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库三倍浓缩乳糖三倍浓缩乳糖5ml/管管接种水样各接种水样各100ml三倍浓缩乳糖三倍浓缩乳糖50ml/管管接种水样各接种水样各10ml水样水样37培养培养24h24h产酸产酸产气产气48h产酸产酸产气产气48h不产不产酸产气酸产气无大肠菌无大肠菌群存在群存在有大肠菌有大肠菌群存在群存在可疑可疑划线
30、接种至划线接种至伊红美蓝培养基伊红美蓝培养基37培养培养24h初发酵试初发酵试验（假设验（假设检验）检验）平板分离（证实）平板分离（证实）复发酵复发酵实验实验（确认）（确认）革兰氏革兰氏染色染色乳糖发酵乳糖发酵10ml产酸、产气者，产酸、产气者，有大肠菌群有大肠菌群37培养培养24h饮用水水样水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库池水、河水、湖水等水样37培养培养24h24h产酸产酸产气产气48h产酸产酸产气产气48h不产不产酸产气酸产气无大肠菌无大肠菌群存在群存在有大肠菌有大肠菌群存在群存在可疑可疑划线接种至划线接种至伊红美蓝培养基伊红美蓝培养
31、基37培养培养24h初发酵试初发酵试验（假设验（假设检验）检验）平板分离（证实）平板分离（证实）复发酵复发酵实验实验（确认）（确认）革兰氏革兰氏染色染色乳糖发酵乳糖发酵10ml产酸、产气者，产酸、产气者，有大肠菌群有大肠菌群37培养培养24h三倍浓缩乳糖三倍浓缩乳糖5ml/管管接种水样各接种水样各1ml接种水样各接种水样各0.1ml接种水样各接种水样各10ml水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库1）乳糖蛋白胨培养液。2）三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：除蒸馏水外，其余用量增至三倍。3)伊红美培养基：贮备培养基的制备；平皿培养基的制备。4)革兰氏染色剂
32、：结晶紫染色液：助染剂：脱色剂：95%乙醇。复染剂：将0.25g沙黄加到10mL95%乙醇中，完全溶解后，加90mL蒸馏水。1.材料和仪器水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库池水、河水或湖水水样：将无菌的带玻璃塞瓶瓶口向下浸入距水面1015cm的深层水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，当取完水样后，即将瓶塞塞好（注意：采样瓶内水面与瓶塞底部间留些空隙，以便在测定时可充分摇匀水样），再从水中取出。2.水样的采集水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库1)向装有5mL三倍乳糖培养液的5个发酵管
33、中，分别加入10mL水样；向各装有10mL乳糖蛋白胨培养液的5个发酵管中，分别加入1mL水样；再于各装有10mL乳糖培养液的5个发酵管中，分别加入1mL 110稀释的水样。共计15管，三个稀释度，将各管充分混匀。3.粪大肠菌群的检测流程水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库2)37培养24h，未产气的继续培养至48 h。3)平板划线分离、涂片、染色、镜检。4)复发酵试验检查各发酵管中是否有大肠菌群存在。5)证实有大肠菌群存在后，根据初发酵试验的阳性管数查阅接种水样总量为300ml检数表，即得大肠菌群数。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价
34、国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库n 证实总大肠菌群存在的阳性管数，查“最可能数（MPN）表”，即求得每100mL水样中存在的总大肠菌群数。n 我国以1L为报告单位，故MPN值再乘以10，即位1L水样中的总大肠菌群数。n 如：某水样接种10mL的5管均为阳性；接种1mL的5管中有2管为阳性；接种110的水样1mL的5管均为阴性。从最可能数（MPN）表中查检验结果520，得知100mL水样中的总大肠菌群数为49个，故1L水样中的总大肠菌群数为4910=490个。4.最可能数（最大或然数）计算结果水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库10ml
35、水量的阳性管数100ml水量中的阳性管数10ml水量的阳性管数100ml水量中的阳性瓶数01201202305183070 注：水样总量300ml（2份100ml，10份10ml），此表用于测定生活饮用水。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库1.测定原理：滤膜是一种微孔性薄膜（孔径0.45m）。将水样注入已灭菌的放有滤膜的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在滤膜上，然后将滤膜贴在M-FCM-FC培养基上，37温度下培养，计数滤膜上生长的此特征的细菌数，计算出1L水样中含有总大肠菌群数。5.2.2 滤膜法检测水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评
36、价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库放在琼脂培养基上培养放在液体培养基上培养放在NPS上培养水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库NPS用于微生物检查的培养基套件用于微生物检查的培养基套件n 将各种培养基预先干燥在的吸附垫上，制成 培养基垫，在放入的培养皿内，灭菌后做成 无菌包装。n 根据不同的培养基垫所针对的微生物种类不同，预先选配最适合的颜色和孔径的网格膜(单片独立无菌包装)，将其与培养基垫和培养皿的无菌包装组合，制成微生物检测培养基套件，简称为NPS(Nutrient Pad Set)。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国
37、家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库1）M-FC 培养基的制备、消毒。2）水样量的选择：水样量的选择根据细菌受检验的特征和水样中预测的细菌密度而定。3）先估计出适合在滤膜上计数所应使用的体积，然后再取这个体积的1/10和10倍，分别过滤。理想的水样体积是一片滤膜上生长2060个粪大肠菌群菌落，总菌落数不得超过200个。4）滤膜及滤器的灭菌：121高压蒸汽灭菌30min。检测方法水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库5）过滤装置安装：以无菌操作装好滤器装置。6）过滤：在滤床上贴放滤膜，将水样注入滤器中，加盖，开动真空泵抽滤。7）培养：将滤膜置于
38、M-FC琼脂或吸收垫表面，于37经24h2h 培养。8）结果计算：大肠菌群菌落在M-FC 培养基上呈蓝色或蓝绿色，计数呈蓝或蓝绿色的菌落，计算出每1L 水样中的粪大肠菌群数。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库滤膜法测粪大肠菌群流程水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库n 滤膜法的优点：省时、省料、设备要求低，可以采集较多的检验水样。n 滤膜法局限性：p易受悬浮物干扰；p受其它细菌的干扰；p受水样中毒物的干扰。水污染的生物监测与评价水污染的生物监测与评价国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库小结小结水体生物监测与评价水体生物监测与评价水的细菌学监测与评价水的细菌学监测与评价稳定塘生物处理技术稳定塘生物处理技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库 谢谢！
