1、医疗器械基础知识及免疫学诊断技术济南卓冠生物技术有限公司济南卓冠生物技术有限公司目录 医疗器械基础知识医疗器械基础知识 体外诊断试剂分类体外诊断试剂分类 胶体金技术简介胶体金技术简介 酶联免疫检测技术简介酶联免疫检测技术简介一 医疗器械基础知识 1 1、医疗器械监督管理条例于、医疗器械监督管理条例于19991999年年1212月月2828日国务院第日国务院第2424次常务会议通过，次常务会议通过，20002000年年4 4月月1 1日起施行。日起施行。2 2、医疗器械：医疗器械是指单独或者组合适用于人体的仪、医疗器械：医疗器械是指单独或者组合适用于人体的仪器、设备、器具、材料或者其他物品，包括
2、所需要的软件；器、设备、器具、材料或者其他物品，包括所需要的软件；其用于人体体表及体内的作用不是用药理学、免疫学或者新其用于人体体表及体内的作用不是用药理学、免疫学或者新陈代谢的搜段获得，但是可能有这些手段参与并起一定的辅陈代谢的搜段获得，但是可能有这些手段参与并起一定的辅助作用；助作用；其使用旨在达到下列预期目的：其使用旨在达到下列预期目的：（1 1）对疾病的预防、诊断、治疗、监护、缓解）对疾病的预防、诊断、治疗、监护、缓解 ；（2 2）对损伤或者残疾的诊断、治疗、监护、缓解、补偿；）对损伤或者残疾的诊断、治疗、监护、缓解、补偿；（3 3）对解剖或者生理过程的研究、替代、调节；）对解剖或者生
3、理过程的研究、替代、调节；（4 4）妊娠控制。）妊娠控制。1.1医疗器械分类 医疗器械按照其医疗器械分类判定的依据医疗器械按照其医疗器械分类判定的依据（一）医疗器械依据其结构特征分为：有源器械和无源（一）医疗器械依据其结构特征分为：有源器械和无源器械。器械。（二）根据不同的预期目的，可将医疗器械归入一定的（二）根据不同的预期目的，可将医疗器械归入一定的使用形式。使用形式。无源器械的使用形式有：医用敷料；外科器械；重复使无源器械的使用形式有：医用敷料；外科器械；重复使用外科器械；一次性无菌器械；植入器械；护理器械、用外科器械；一次性无菌器械；植入器械；护理器械、体外诊断试剂、其他无源接触或无源辅
4、助器械等。体外诊断试剂、其他无源接触或无源辅助器械等。有源器械的使用形式有：诊断监护器械；输送体液器械；有源器械的使用形式有：诊断监护器械；输送体液器械；实验室仪器设备、医疗消毒设备；其他有源器械或有源实验室仪器设备、医疗消毒设备；其他有源器械或有源辅助器械等。辅助器械等。（三）根据使用中对（三）根据使用中对人体产生损伤的可能人体产生损伤的可能性、对医疗效果的影性、对医疗效果的影响，医疗器械使用状响，医疗器械使用状况可分为接触或进入况可分为接触或进入人体器械和非接触人人体器械和非接触人体器械。体器械。根据医疗器械的危险性：根据医疗器械的危险性：第一类是指，通过常规管理足以保证其安全性、有效性第
5、一类是指，通过常规管理足以保证其安全性、有效性的医疗器械；的医疗器械；第二类是指，对其安全性、有效性应当加以控制的医疗第二类是指，对其安全性、有效性应当加以控制的医疗器械；器械；第三类是指，用于支持、维持生命；对人体具有潜在危第三类是指，用于支持、维持生命；对人体具有潜在危险，对其安全性、有效性必须严格控制的医疗器械。险，对其安全性、有效性必须严格控制的医疗器械。1.2医疗器械生产企业应当符合下列条件：具有与其生产的医疗器械相适应的专业技术人员；具有与其生产的医疗器械相适应的专业技术人员；具有与其生产的医疗器械相适应的生产场地及环境；具有与其生产的医疗器械相适应的生产场地及环境；具有与其生产的
6、医疗器械相适应的生产设备；具有与其生产的医疗器械相适应的生产设备；具有对其生产的医疗器械产品进行质量检验的机构或者具有对其生产的医疗器械产品进行质量检验的机构或者人员及检验设备。人员及检验设备。1.3医疗器械经营企业应当符合下列条件 具有与其经营的医疗器械相适应的经营场地及环境；具有与其经营的医疗器械相适应的经营场地及环境；具有与其经营的医疗器械相适应的质量检验人员；具有与其经营的医疗器械相适应的质量检验人员；具有与其经营的医疗器械产品相适应的技术培训、维修具有与其经营的医疗器械产品相适应的技术培训、维修等售后服务能力。等售后服务能力。二 体外诊断试剂 2.1 2.1 定义 体外诊断（，）试剂
7、，包括可单独使用或与仪器、器具、设备或系统组合使用，在疾病的预防、诊断、治疗监测、预后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中，在人体之外通过对人体的样本（如血液、体液、组织等）进行检测而获取临床诊断信息的产品和服务，包括仪器、试剂、校准品、质控品等。原理是通过试剂和体内物质在体外的反应强度或速度来判断体内物质的性质和数量，通过和标准品的比较来判断人体的生理状态。1.1.临床生化试剂：临床生化试剂：用化学方法使样本产生变化，通过测吸用化学方法使样本产生变化，通过测吸光度，波长及颜色反应等进行疾病的诊断、治疗和监控；光度，波长及颜色反应等进行疾病的诊断、治疗和监控；2.2.免疫诊断试剂：免疫
8、生物学发展很快，利用抗原和抗体免疫诊断试剂：免疫生物学发展很快，利用抗原和抗体的特异性反应的原理进行疾病的诊断；的特异性反应的原理进行疾病的诊断；2.2 2.2 体外诊断试剂的分类体外诊断试剂的分类 3.3.分子诊断试剂：分子诊断试剂：应用分子生物学方法检测患者体内遗传应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做出诊断的技术，称为分子物质的结构或表达水平的变化而做出诊断的技术，称为分子诊断。诊断。4.4.功能检测试剂：如血凝试剂，看凝血状态是否正常。功能检测试剂：如血凝试剂，看凝血状态是否正常。5.5.其他：细胞染色切片，镜像等其他：细胞染色切片，镜像等2.3 免疫学诊断试
9、剂的类型 1.1.按方法分为间接免疫学试剂和直接免疫学试剂（如双抗体按方法分为间接免疫学试剂和直接免疫学试剂（如双抗体夹心法，双抗原夹心法，间接法，竞争法等）；夹心法，双抗原夹心法，间接法，竞争法等）；2.2.按示踪剂分为放射免疫法，酶联免疫法，荧光法，化学发按示踪剂分为放射免疫法，酶联免疫法，荧光法，化学发光法，胶体金法，乳胶法等；光法，胶体金法，乳胶法等；免疫层析胶体金技术是出现于2020世纪8080年代初期的一种独特的免疫分析方式,该方法的核心技术是以条状纤维层析材料为固相,通过毛细管作用使样品溶液在层析材料上泳动,并同时使样品中经标记物标记的待测物与包被在层析材料上针对待测物的受体(如
10、抗原或抗体)发生高特异、高亲和性的免疫。三 胶体金技术简介1 1 胶体金标记技术的相关定义l1.1 1.1 定义定义l免疫胶体金技术免疫胶体金技术l 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种免疫标记技术。种免疫标记技术。l胶体金标记胶体金标记l胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理一般认为是胶体体金颗粒表面的包被过程。吸附机理一般认为是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。附而形成牢固结合。胶
11、体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功能，而胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白质等（葡萄不被坏其生物活性，可以与蛋白质等（葡萄球菌球菌A A蛋白、免疫球蛋白）等非共价结合，蛋白、免疫球蛋白）等非共价结合，形成胶体金标记物。形成胶体金标记物。1.2 1.2 透射电镜下观察金颗粒的形状劣质金外形不均一，且非球形，有劣质金外形不均一，且非球形，有凝集现象，颗粒间变异系数较大凝集现象，颗粒间变异系数较大 2 2 胶体金的制备量取量取200超纯水，加热至沸腾，并保持微沸。超纯水，加热至沸腾，并保持微沸。加入加入151%柠檬酸三钠溶液，继续煮沸柠檬酸三钠溶液，继续煮沸5分钟。分钟。
12、加入加入1%的氯金酸的氯金酸5,继续煮沸，待颜色有变化后继续煮沸，待颜色有变化后计时，煮沸计时，煮沸10。停止搅拌，冷却至室温。停止搅拌，冷却至室温。2.12.1胶体金粒径的大小与还原剂的量有关系 粒子大小不同，光吸收性不同，颜色亦不同。粒子大小不同，光吸收性不同，颜色亦不同。1柠檬酸三钠柠檬酸三钠 0.30 0.45 0.70 1.00 1.50 2.00 金溶胶颜色金溶胶颜色 蓝灰蓝灰 紫灰紫灰 紫红紫红 红红 橙红橙红 橙橙 吸收峰吸收峰()220 240 535 525 522 518 径粒径粒()147 97.5 71.5 40 24.5 15 3.制备高质量胶体金的注意事项（1 1
13、）玻璃器皿必须彻底清洗，最好是经过硅化处理的玻璃器）玻璃器皿必须彻底清洗，最好是经过硅化处理的玻璃器皿，或用第一次配制的胶体金稳定的玻璃器皿，再用双馏皿，或用第一次配制的胶体金稳定的玻璃器皿，再用双馏水冲洗后使用。否则影响生物大分子与金颗粒结合和活化水冲洗后使用。否则影响生物大分子与金颗粒结合和活化后金颗粒的稳定性，不能获得预期大小的金颗粒。后金颗粒的稳定性，不能获得预期大小的金颗粒。（2 2）试剂配制必须保持严格的纯净，所有试剂都必须使用双）试剂配制必须保持严格的纯净，所有试剂都必须使用双馏水或三馏水并去离子后配制，或者在临用前将配好的试馏水或三馏水并去离子后配制，或者在临用前将配好的试剂经
14、超滤或微孔滤膜（剂经超滤或微孔滤膜（0.45m0.45m）过滤，以除去其中的聚合）过滤，以除去其中的聚合物和其它可能混入的杂质。物和其它可能混入的杂质。（3 3）配制胶体金溶液的以中性（）配制胶体金溶液的以中性（7.27.2）较好。）较好。（4 4）氯金酸的质量要求上乘，杂质少。）氯金酸的质量要求上乘，杂质少。4 4 胶体金技术的种类及特点 4.1 4.1 快速免疫金渗滤法 主要由两部分组成：膜渗滤装置和标记结合物。前者为一塑料小盒，其中填满吸水性物质，面上紧贴放置一片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的硝酸纤维膜，标记结合物为免疫金。用微孔滤膜作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检
15、样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体 。斑点金免疫渗滤斑点金免疫渗滤l 4.2 4.2 免疫层析法免疫层析法 以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细血管作用，滴以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细血管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原并利用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。抗体。衬板样品垫金标垫吸收垫膜胶体金免疫层析试纸条的构成胶体金免疫层析试纸条的构成 双抗体夹心法标准抗原标准抗原 其检测原理与上述的其它方法有所不同：胶体金其检测原理与上述
16、的其它方法有所不同：胶体金颗粒标记单克隆抗体，而检测线包被小分子抗原，颗粒标记单克隆抗体，而检测线包被小分子抗原，质控线包被抗鼠。检测时，样本中的待检抗原首质控线包被抗鼠。检测时，样本中的待检抗原首先与金标抗体结合，上行到达检测带时，如待检先与金标抗体结合，上行到达检测带时，如待检抗原把一定量的抗体完全饱和，则金标抗体将不抗原把一定量的抗体完全饱和，则金标抗体将不能与检测带的抗原结合，不会出现肉眼可见的红能与检测带的抗原结合，不会出现肉眼可见的红色条带，为阳性结果。如标本中无待检抗原，则色条带，为阳性结果。如标本中无待检抗原，则金标抗体与检测带的抗原结合，形成红色条带，金标抗体与检测带的抗原结
17、合，形成红色条带，为阴性结果。为阴性结果。选用该方法应特别注意胶体金颗选用该方法应特别注意胶体金颗粒的抗体吸附量及包被抗原量。粒的抗体吸附量及包被抗原量。间接法间接法p测定时将试纸条下端浸入液体标本中，下测定时将试纸条下端浸入液体标本中，下端吸水材料即吸取液体向上端移动，流经端吸水材料即吸取液体向上端移动，流经C C处时使干片上的免疫金复合物复溶，并处时使干片上的免疫金复合物复溶，并带动其向膜条渗移。带动其向膜条渗移。双抗体夹心法为例 若标本中有待测特异抗原，即可与免疫金若标本中有待测特异抗原，即可与免疫金复合物中的抗体结合，此抗原抗体复合物复合物中的抗体结合，此抗原抗体复合物流至测试区即被固
18、相抗体捕获，在膜上显流至测试区即被固相抗体捕获，在膜上显出红色反应线条（出红色反应线条（T T）。）。过剩的免疫金复合物继续前行，至参照区过剩的免疫金复合物继续前行，至参照区与固相抗小鼠结合（免疫金复合物中的单与固相抗小鼠结合（免疫金复合物中的单克隆抗体为小鼠），而显出红色质控线条克隆抗体为小鼠），而显出红色质控线条（R R）。）。阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。条。4.2.1 4.2.1 结果判定图示卡型4.2.2 4.2.2 结果判定图示条型4.2.3 4.2.3 结果判定说明阳性结果：出现质控线和反应线两条紫红色线，实验结果为阳性。阳性结果：出
19、现质控线和反应线两条紫红色线，实验结果为阳性。阴性结果：仅出现一条紫红色质控线，实验结果为阴性。阴性结果：仅出现一条紫红色质控线，实验结果为阴性。无效：不出现质控线红线或仅出现一条反应线红线，实验结果为无效：不出现质控线红线或仅出现一条反应线红线，实验结果为无效结果，应重试。无效结果，应重试。竞争法的结果判定则相反竞争法的结果判定则相反5 5 免疫胶体金技术的特点p简捷快速：操作简单，一般只要简捷快速：操作简单，一般只要5-10 5-10 就会出结果，而其它就会出结果，而其它方法如需要方法如需要1-2h1-2h，需要时间更长。需要时间更长。p结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。结
20、果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。p特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这决定了它特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这决定了它具有很好的特异性。具有很好的特异性。6 6 胶体金技术的应用胶体金技术的应用 7 相关仪器 喷膜仪仪器参数仪器尺寸为：430410360平台大小:45070 平台移动速度:0-330 X、Y、Z轴移动误差:50 定位精度:10 1;25 2 喷点方式 3000:非接触喷点3000:非接触喷点 划线宽度 3000:0.50（喷点0.20）3000:0.5-5 最小喷量 3000:103000:1 划线精密度3000:1%3000:2%切条机仪器
21、参数:进料宽度：100 进料长度：不限,可连续进料切割切割宽度：1,宽度连续可调切割宽度设定位数：0.01 切割精度：0.1 切割速度：230次/分钟,速度连续可调切条计数：单次工作和总工作分别计数刀片:日本进口,耐磨高碳钢材料抗静电装置：建议选配电源：220重量：20尺寸：430(L)330(W)260(H)它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。以是抗体也可以是抗原。在这种测定方法中有在这种测定方法中有3种必要
22、的试剂：种必要的试剂：固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）酶标记的抗原或抗体（标记物）酶标记的抗原或抗体（标记物）酶作用的底物（显色剂）酶作用的底物（显色剂）四四 酶联免疫检测（酶联免疫检测（)技术简介技术简介1.的原理的原理 测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体
23、）反应结合后，再加上酶的相应底的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。含量成正比。这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。以测定。其方法简单，特异性强。其方法简单，特异性强。2 2的类型的类型2.1 双抗原夹心法测抗体双抗原夹心法测抗体用特异性抗原进行包被和制备酶结合物。此法中受检标本不需稀用特异性抗
24、原进行包被和制备酶结合物。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。2.2 2.2 双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法测抗原反应原理和模式与双抗原夹心法类似。用特异性抗体进行包反应原理和模式与双抗原夹心法类似。用特异性抗体进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗原。与间接法测抗体的被和制备酶结合物，以检测相应的抗原。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗体代替酶标抗抗体。不同之处为以酶标抗体代替酶标抗抗体。2.3 2.3 间接法测抗体间接法测抗体 间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体间接法是检测抗体常用的方法。其
25、原理为利用酶标记的抗抗体（二抗）以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。（二抗）以检测与固相抗原结合的受检抗体，故称为间接法。2.4 2.4 竞争法测抗原竞争法测抗原 小分子抗原或半抗原缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹小分子抗原或半抗原缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标心法进行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，最后的显色也
26、愈浅。愈少，最后的显色也愈浅。2.5 2.5 捕获法测抗体捕获法测抗体 3 3 的试剂制备及操作的试剂制备及操作 以双抗体夹心法为例以双抗体夹心法为例获得待分析物的未标定抗体获得待分析物的未标定抗体将特异性抗体与固相将特异性抗体与固相载体连接形成固相抗体载体连接形成固相抗体 洗涤除去未结合的洗涤除去未结合的抗体及杂质抗体及杂质 加入封闭蛋白溶液以封闭载体加入封闭蛋白溶液以封闭载体表面残留的蛋白结合位点表面残留的蛋白结合位点洗涤并除去未结合的封闭蛋白洗涤并除去未结合的封闭蛋白加受检标本（抗原）形成加受检标本（抗原）形成固相抗体抗原复合物固相抗体抗原复合物 洗涤除去其他洗涤除去其他未结合的物质未结
27、合的物质 加酶标抗体生成加酶标抗体生成抗体抗体待测抗原待测抗原酶标记抗体酶标记抗体的复合物的复合物 加底物进行加底物进行酶催化反应酶催化反应 根据颜色反应的根据颜色反应的程度进行该抗原程度进行该抗原的定性或定量测定的定性或定量测定4.4.特点特点4.14.1特异性特异性 抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间。抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间。化学结构和空间构型互补关系，具有高度的特异性。化学结构和空间构型互补关系，具有高度的特异性。测定某一特定的物质，而不需先分离待检物。测定某一特定的物质，而不需先分离待检物。AbAg4.2 灵敏度 该测定法的灵敏度来自酶。
28、众所周知,酶是一种有机催化剂，很少量的酶即可诱导大量的催化反应，产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。5 5 结果判断结果判断 5.15.1定性测定定性测定定性测定的结果判断作出定性测定的结果判断作出“有有”或或“无无”的回答，分别用的回答，分别用“阳性阳性”、“阴性阴性”表示。表示。在间接法和夹心法中，阳性孔呈色在间接法和夹心法中，阳性孔呈色深于阴性孔。在竞争法中则相反，深于阴性孔。在竞争法中则相反，阴性孔呈色深于阳性孔。阴性孔呈色深于阳性孔。5.2 5.2 定量测定定量测定操作步骤
29、复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。曲线。测定大分子量物质的夹心法，标准曲线的范围一般较宽，曲测定大分子量物质的夹心法，标准曲线的范围一般较宽，曲线的值逐点连接，所得曲线一般呈线的值逐点连接，所得曲线一般呈S S形，其头、尾部曲线趋于形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。6 6的应用的应用1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位、免疫酶染色各种细胞内成份的定位2、研究抗酶体、研究抗酶体3、显现微量的免疫沉淀反应、显现微量的免疫沉淀反应4、定量检测体液中抗原或抗体成份、定量检测体液中抗原或抗体成份
