1、1基因诊断课件基因诊断课件第1页/共50页第1页/共50页第2页/共50页第2页/共50页第3页/共50页第3页/共50页第4页/共50页第4页/共50页第5页/共50页第5页/共50页第6页/共50页第6页/共50页第7页/共50页第7页/共50页第8页/共50页（）单链构象多态性（）单链构象多态性（single strand single strand conformation ploymorphism,SSCP)conformation ploymorphism,SSCP)分析分析第8页/共50页第9页/共50页第9页/共50页第10页/共50页 限制性片段长度多态性限制性片段长度多态性
2、 RFLPs(restriction fragment length polymorphisms)样品一样品二1987年等人以RFLP为遗传标记绘制了第一张人类遗传图谱第10页/共50页第11页/共50页第11页/共50页第12页/共50页第12页/共50页第13页/共50页n第13页/共50页第14页/共50页第三阶段：应用基因芯片技术DMD患儿在5岁前发病，20岁左右由于心力衰竭和呼吸衰竭而死亡，发病率在男性活婴中约1/3500。群的频率为0.原理：同一染色体上位置十分靠近的相邻基因或其它遗传标记，在遗传过程中分离的几率很低，常常一起遗传，形成连锁。杜氏肌营养不良症(Duchenne mu
3、scular dystrophy,DMD)可以通过一个或几个基因或遗传标记的分析，了解另一个或几个基因。FQ-PCR技术的两种定量形式:基因组DNA探针法:用突变高发区的常见序列作为探针,检测抗肌萎缩蛋白基因的相应变异.有300多万个单核苷酸多态性,SNP在人类基因组中广泛存在，平均每5001000个碱基对中就有1个，3-4个相邻的标记构成的单倍型（haplotype）就可有8-16种。因重排,使原来相隔数百个碱基的IgH和TCR DNA芯片技术法：根据PCR扩增的目标DNA片段在非变性凝胶电泳中迁移率，将突变基因检测出来。是一种基于单链DNA构象差别来检测点突变的方 法DNA变性形成单链，在
4、中性条件下长度相同的单 链指DNA,如果碱基组成和(或)排列顺序不同,形成的 构象就不同,这样就形成了单链构象多态性.它是由于T细胞受体(TCR)基因和IgH基2)Southern 印迹杂交分析第五节 基因诊断存在的问题与发展前景第一节 基因诊断的基础技术第14页/共50页第15页/共50页第15页/共50页第16页/共50页第16页/共50页第17页/共50页第17页/共50页第18页/共50页第18页/共50页第19页/共50页第19页/共50页第20页/共50页第20页/共50页第21页/共50页第21页/共50页第22页/共50页第22页/共50页第23页/共50页基因诊断方法:一些多
5、基因，多因素的疾病，如：肥胖，哮喘，高血压，冠心病，肿瘤，精神病，自体免疫性疾病等，由于疾病发生的原因复杂，不仅涉及多基因互作，还涉及基因与环境互作。第三阶段：应用基因芯片技术P53基因与肿瘤：p53基因是最常被失活的抑癌基 PCR+ASO 探针法 为主要方法 根据-珠蛋有300多万个单核苷酸多态性,SNP在人类基因组中广泛存在，平均每5001000个碱基对中就有1个，3-4个相邻的标记构成的单倍型（haplotype）就可有8-16种。分为异常血红蛋白病和地中海贫血,前者是由于珠蛋白的基因突变；第五节 基因诊断存在的问题与发展前景（single nucleotid polymorphism，
6、SNP）当在不同梯度浓度变性胶中电泳时,DNA泳动到变性剂浓度能使DNA发生变性，DNA开始解链，从而不同的DNA片段会形成不同的迁移率条带第23页/共50页第24页/共50页第24页/共50页第25页/共50页短串联重复序列短串联重复序列STRs (short tendem repeats,Microsatellites)STR广泛存在于人基因组，占约广泛存在于人基因组，占约5%，基本单位是基本单位是1bp-8bp的的串联重复，串联重复，重复次数重复次数 n=15-60，已知，已知8000多个，多个，主要形式为：主要形式为：(CA)n，(GA)n，(AA)n，(GG)n，(CAA)n，(CG
7、G)n，其中以其中以(CA)n，(GT)n 为多见。为多见。1992年，年，Welssenbanch等以等以STR为标记的为标记的第二代连锁图取代了第二代连锁图取代了RFLP连锁图连锁图。第25页/共50页第26页/共50页 定义定义:主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的变异所引起的DNADNA序列多态性。序列多态性。与与RFLPRFLP与与STRSTR不同不同,它是直接以序列的变异作为标记它是直接以序列的变异作为标记,而不是以片段的而不是以片段的长度差异作为标记长度差异作为标记.人类基因组图谱的初步分析表明，共有人类基因组图谱的初步分析表明，共
8、有3 3万万至万个基因。有至万个基因。有300300多万个单核苷酸多态性多万个单核苷酸多态性,SNP,SNP在在人类基因组中广泛存在，平均每人类基因组中广泛存在，平均每50050010001000个碱基个碱基对中就有对中就有1 1个，个，3-43-4个相邻的标记构成的单倍型个相邻的标记构成的单倍型（haplotypehaplotype）就可有）就可有8-168-16种。种。19961996年，年，LanderLander报道了用单核苷酸多态性报道了用单核苷酸多态性 标记制备第三代遗传连锁图的遗传标记。标记制备第三代遗传连锁图的遗传标记。单核苷酸多态性单核苷酸多态性（single nucleot
9、id polymorphismsingle nucleotid polymorphism，SNPSNP）第26页/共50页第27页/共50页第27页/共50页第28页/共50页第28页/共50页第29页/共50页第29页/共50页第30页/共50页第30页/共50页第31页/共50页第31页/共50页第32页/共50页第32页/共50页第33页/共50页第33页/共50页第34页/共50页第34页/共50页第35页/共50页第35页/共50页第36页/共50页Burkitt 淋巴瘤人类乳头瘤病毒(HPV)宫颈癌通过检测这些病毒的基因就可以帮助诊断相应的肿瘤.EB病毒第36页/共50页第37页/共50页第37页/共50页第38页/共50页第38页/共50页第39页/共50页第39页/共50页第40页/共50页第40页/共50页第41页/共50页第41页/共50页第42页/共50页第42页/共50页第43页/共50页第43页/共50页第44页/共50页第44页/共50页第45页/共50页第45页/共50页第46页/共50页第46页/共50页第47页/共50页第47页/共50页第48页/共50页第48页/共50页第49页/共50页第49页/共50页第50页/共50页
