1、第11章 主要动物药化学成分掌握动物药的主要有效成分的理化物质和检识。概述研究进展生理活性11.1 胆汁酸类及含该类成分的主要中药胆汁酸的结构特征及其在动物界的分布胆汁酸的化学性质、颜色反应和检识中药实例结构特征和分布*胆汁酸:胆烷酸衍生物(混合物),在动物胆汁中常与甘氨酸或牛磺酸以肽键结合成甘氨胆汁酸或牛磺胆汁酸并以钠盐形成存在。分布:动物胆汁中。高等动物含24个C,如胆酸、去氧胆酸等;鱼类、两栖类、爬行类含27或28个C,如粪甾烷酸等。不同种属动物,胆汁酸组成不同,结合比例也不同。结构特征:(1)A/B顺(正系)或A/B反(别系),B/C反,C/D反;(2):C10-CH3、C18-CH3
2、、C17-侧链;(3):C3-OH或其他位-OH(少数为)。COOHHHH胆烷酸ABHCDCOOHHHH 胆酸3,7,12-三羟基-5-胆烷酸HOHOHHOCOOHHHH 别胆酸3,7,12-三羟基-5-胆烷酸HOHOHHOCONHCH2COOHHHH 甘氨胆酸3,7,12-三羟基-5-胆烷酸-N-(羧甲基)-酰胺HOHOHHOCONHCH2CH2SO3HHHH 牛磺胆酸3,7,12-三羟基-5-胆烷酸-N-(磺酸乙基)-酰胺HOHOHHOCOOHHHH 去氧胆酸(24个C)3,12-二羟基胆烷酸HOHHOHHH粪甾烷酸(28个C)HOHHHH 3,7,12-三羟基-23-粪甾烯酸HOHOHH
3、OCOOHHHH 12表-去氧胆酸(定向)3,12-二羟基胆烷酸HOHHOCOOHHHH 异-去氧胆酸(位置)7,12-二羟基胆烷酸HOHCOOHCOOH化学性质末端羧基的反应 成盐:易溶于水,用于精制各种胆汁酸。成酯:先析出结晶,酸水解后又游离出胆汁酸。催化剂:浓硫酸、浓盐酸;去氧胆酸甲酯:用重氮甲烷进行酯化;猪去氧胆酸甲酯:与离子交换树脂结合,用含盐酸的甲醇洗脱。还原反应:-COOH还原成-CH2OH 还原剂:氢化锂铝、金属钠。甾环上羟基的乙酰化反应 保护羟基,且易结晶,利于胆汁酸的纯化和精制。甾环上酮基的还原反应 先将甾环-OH氧化成-C=O,再用还原法除去酮基。氧化剂:重铬酸钾、硫酸-
4、硝酸混合液 还原剂:Wolff-Kischner-黄鸣龙 NaOH(KOH)+85%水合肼 用于制备各种胆汁酸。颜色反应Pettenkofer反应 胆汁,蒸馏水、10%蔗糖,摇匀,沿管檗加浓硫酸,冷却后界面处有紫色环。Gregory Pascoe反应 胆汁,45%硫酸、0.3%糠醛,摇匀,水浴加热30min,胆酸层显蓝色(可定量)。Hammarsten反应 胆汁,20%铬酸溶液、乙酸,温热,胆酸显紫色,鹅去氧胆酸不显色。色谱检识纸色谱(分离效果好,展层时间长)固定相:70%乙酸浸渍滤纸 展开剂:异丙醚-庚烷(不同比例)显色剂:10%磷钼酸乙醇液等薄层色谱 吸附剂:硅胶 展开剂:游离:异辛烷-异
5、戊醚-冰乙酸-正丁醇-水 (10:5:5:3:1)结合:甲苯-冰乙酸-水(10:10:1)显色剂:10%磷钼酸乙醇液、酶试剂等。如3-羟基甾体氧化酶,选择性地检出3-羟基。喷后37保温30min,可用于尿、血清中胆汁酸测定。气相色谱 色谱柱:OV-17 载气:氮气 检测器:氢火焰 游离型胆汁酸需衍生化;结合型胆汁酸先碱水解游离,再衍生化。高效液相色谱 色谱柱:Bilepak 流动相:A:乙腈-10mM磷酸二氢钾(4:6)B:乙腈-30mM磷酸二氢钾(1:4)梯度洗脱 流速:1ml/min 检测:收集的洗脱液与3-羟基甾体氧化酶及NAD作用,3-羟基被氧化成CO,NAD被还原为NADH,后者有荧
6、光,可用光度计检测。很灵敏,但不能区别胆汁酸与胆汁醇(红外)。中药实例牛黄 牛科动物黄牛或水牛的胆囊结石。含胆红素(72-76.5%)、胆汁酸(8%)、SMC(肽类7%)、胆固醇、麦角甾醇和多种氨基酸、无机盐等。具有镇痉、镇静、解热、解毒等作用。熊胆 熊科动物黑熊的干燥胆囊胆汁。主要成分为胆汁酸、牛磺熊去氧胆酸,还含有牛磺鹅去氧胆酸、牛磺胆酸、游离熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸等。具有清热、镇痉、明目、杀虫等作用。干燥熊胆汁加甲醇溶解,适当浓缩后进行柱层析用苯-冰乙酸(8:2)下行展开,切取样品段,用甲醇回流用乙醇-水,乙酸乙酯反复重结晶甲醇液浓缩后,加入20%NaOH沸水水解20h水解液浓盐酸酸化,
7、滤取不溶物不溶物白色结晶制备薄层色谱熊去氧胆酸精品COOHOHHO11.2 蟾蜍浆和蟾酥化学成分检识和鉴定化学成分蟾蜍浆:蟾蜍的耳下腺及皮肤腺的白色分泌物,主要含蟾毒。蟾酥:蟾蜍浆加工干燥而成,主要为蟾毒水解产物。主要成分:(1)蟾蜍甾二烯类(强心作用)(2)强心甾烯蟾毒类(强心作用)(3)吲哚碱类 (4)甾醇类 (5)其他:肾上腺素、多糖、蛋白质、有机酸等。(1)蟾蜍甾二烯类 结构特点:A/B顺(粪甾烷型)、B/C反、C/D顺;C3-OH、C14-OH或C14,15-环氧;C5,C11,C16,C19有-OH、C=O、乙酰氧基等;-OH:C5,C6:、C11:、C12:或。分类:游离型:蟾毒
8、配基 结合型:蟾毒 蟾毒配基脂肪酸酯 蟾毒配基硫酸酯OOHHCOO(CH2)6CONHCH(CH2)3NHCNH2COOHNH蟾毒灵-3-辛二酸精氨酸酯HOOOOHHNaO3SO蟾毒灵-3-硫酸酯OOOHHCOO(CH2)6COOH日蟾毒它灵-3-半辛二酸酯OHOOOHHCOO(CH2)6COOH沙蟾毒配基-3-半辛二酸酯OO(2)强心甾烯蟾毒类 从新鲜蟾蜍浆中分离出沙门苷元-3-辛二酸精氨酸酯、沙门苷元-3-庚二酸精氨酸酯、沙门苷元-3-硫酸酯;从蟾酥中分离出沙门苷元-3-半辛二酸酯等。OOOHHOHCOO(CH2)6CONHCH(CH2)3NHCNH2COOHNH沙门甙元-3-辛二酸精氨酸
9、酯OOOHHOHCOO(CH2)5CONHCH(CH2)3NHCNH2COOHNH沙门甙元-3-庚二酸精氨酸酯OOOHHOHCOO(CH2)6COOH沙门甙元-3-半辛二酸酯OOOHHOHNaO3SO沙门甙元-3-硫酸酯(3)吲哚碱类 5-羟色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍季铵、蟾蜍噻咛、脱氢蟾蜍色胺。NCH2CH2NH2HO5-羟色胺NCH2CH2N(CH3)2HO蟾蜍色胺NCH2CH2N(CH3)3-O蟾蜍季铵+NCH3-O3SO蟾蜍噻咛NH3CNCH3-O脱氢蟾蜍色胺NH3C+(4)甾醇类 胆甾醇、7-羟基胆甾醇、7-羟基胆甾醇、麦角甾醇、菜油甾醇、-谷甾醇等。HO胆甾醇HO-谷甾醇检识和鉴定显色反
10、应 蟾蜍甾二烯类:浓硫酸 强心甾烯蟾毒类:、-不饱和内酯环的反应 如Legal、Raymond、Kedde等薄层色谱 蟾毒配基:吸附剂:硅胶 展开剂:环己烷-氯仿-丙酮(4:3:3)等 显色剂:硫酸、20%三氯化锑等高效液相色谱11.3 麝香化学成分检识和鉴定 麝香是鹿科动物林麝、马麝、原麝的雄体香囊中的分泌物。具有兴奋中枢神经、刺激心血管、雄性激素、抗炎等活性,导致-肾上腺素功能增强的作用。化学成分大环化合物 如麝香酮(2%);性激素 如雄甾烷衍生物(0.5%);蛋白质、多肽和氨基酸 蛋白质(25%);脂肪酸、胆固醇酯和蜡 脂肪酸(5%)、胆固醇(1%);无机成分其他成分O麝香酮HO麝香醇O降麝香酮OOH5-雄甾烷-3,17-二酮HOOH3-羟基-5-雄甾烷-17-酮HOOHH5-雄甾烷-3,17-二醇检识和鉴定制备薄层色谱 吸附剂:硅胶 展开剂:苯 显色剂:UV 气相色谱复习思考题:1.名词解释 胆汁酸Pettenkofer反应Gregory pascoe反应Hammarsten反应2.问答题 (1)简述牛黄、熊胆、麝香、蟾酥的主要有效成分及其理化性质。(2)如何用化学方法鉴别强心苷及蟾蜍甾二烯、强心甾烯蟾毒。