1、动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体制备单克隆抗体制备动物细胞动物细胞核移植核移植（基础）（基础）一、动物细胞培养一、动物细胞培养 动物细胞培养就是从动物机体内动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。基中，让这些细胞生长和增殖。1 1、概念：、概念：原理：原理：细胞增殖细胞增殖动物胚胎或幼龄动物胚胎或幼龄动物的组织、器官动物的组织、器官细胞悬液细胞悬液10代细胞代细胞50代细胞代细胞传代培养传代培养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加加培养液培养液
2、原代培养原代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶剪碎剪碎动物组织细胞间隙中含动物组织细胞间隙中含有一定量蛋白质有一定量蛋白质2 2、过程、过程动动物细胞培养适物细胞培养适宜的宜的PH为为7.27.4，此环境下，此环境下胃蛋白酶（胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰没有活性，而胰蛋白酶蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。的活性较高。3、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？1、动物细胞培养取材时，一般是取、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动胚胎组织或幼龄动物的组织或器官物的组织或器官，请解释原因？，请解释原因？不能不能，因为动物细胞培养适宜的
3、，因为动物细胞培养适宜的PHPH为为7.27.47.27.4，此环境，此环境下胃蛋白酶没有活性。下胃蛋白酶没有活性。胚胎组织或幼龄动物的组织或器官胚胎组织或幼龄动物的组织或器官生命力旺盛，生命力旺盛，分裂能力强分裂能力强探究探究2、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？先用剪刀先用剪刀剪碎剪碎,后用后用胰蛋白酶胰蛋白酶处理处理4.什么叫什么叫细胞贴壁细胞贴壁？5.什么叫什么叫接触抑制接触抑制？悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就当贴壁细胞分裂生长到表面相互接
4、触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。探究探究6 6、如何理解原代培养和传代培养？、如何理解原代培养和传代培养？8 8、传代培养的细胞都能一直传代下去吗？、传代培养的细胞都能一直传代下去吗？9 9、有些为何能一直传下去？、有些为何能一直传下去？上述过程中，在第一培养瓶中培养就是上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养传代培养不都能不都能悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到
5、表面相互接触时，就会停当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，就会停止分裂增殖，称为接触抑制。止分裂增殖，称为接触抑制。原代培养：原代培养：细胞细胞悬浮悬浮液液1010代代细胞细胞5050代代细胞细胞无限无限传代传代原代培养原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系如何界定原代培养和传代培养；细如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？胞株和细胞系？动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物的组织、器官物的组织、器官细胞悬液细胞悬液10代细胞代细胞50代细胞代细胞无限传代无限传代原代培养原代培养传代培养传代培养剪碎剪碎胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理胰蛋白酶除了可胰蛋白酶除了可消化细胞间的蛋消化细胞间的蛋
6、白质外，白质外，长时间长时间作用也会消化细作用也会消化细胞膜蛋白胞膜蛋白，对细，对细胞有损伤作用，胞有损伤作用，因此必须控制好因此必须控制好胰蛋白酶的消化胰蛋白酶的消化时间。时间。细胞贴壁、接触抑制细胞贴壁、接触抑制培养液培养培养液培养一般而言，一般而言，10代以内能保持代以内能保持正常二倍体的正常二倍体的核型核型增殖会逐渐缓慢，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，以至于完全停止，这时部分细胞的这时部分细胞的细胞核可能会发细胞核可能会发生变化，生变化，2 2、过程、过程1 1、无菌、无毒、无菌、无毒 2 2、营养（培养基成分）、营养（培养基成分）3 3、适宜的温度和、适宜的温度和PHPH值值 4
7、4、必要的气体条件、必要的气体条件（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、血清、血浆血清、血浆等。等。）O O2 2和和COCO2 23 3、条件：、条件：添加一定量的抗生素添加一定量的抗生素定期更换培养液定期更换培养液培养液和培养器具无菌处理培养液和培养器具无菌处理培养基的不同是培养基的不同是动物细胞培养和动物细胞培养和植物组织培养最植物组织培养最重要的区别重要的区别36.5+0.5度度 PH为为7.2-7.4 4 4、应用、应用 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）干扰素、单克隆抗体）培养的
8、动物细胞可以用于检测有毒物培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性质，判断某种物质的毒性 用于生理、病理、药理等方面的研究，用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据为治疗和预防疾病提供理论依据细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植株植株培养结果培养结果获得细胞获得细胞或或细胞产物细胞产物快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的动物血清动物血清植物激素植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养
9、比较项目比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较植物细胞和动物细胞培养的比较1.1.动物细胞核移植的概念、种类：动物细胞核移植的概念、种类：2.2.体细胞核移植的过程：体细胞核移植的过程：3.3.体细胞核移植技术的应用前景：体细胞核移植技术的应用前景：4.4.体细胞核移植技术存在的问题：体细胞核移植技术存在的问题：将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）分分类类细胞分化程度低，恢复
10、全能性容易细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度细胞分化程度高高，恢复全能性，恢复全能性不不容易容易概念：概念：1.1.动物细胞核移植的概念、种类：动物细胞核移植的概念、种类：例：克隆羊例：克隆羊黑面绵羊去黑面绵羊去核卵细胞核卵细胞白面绵羊乳白面绵羊乳腺细胞核腺细胞核细胞核移植细胞核移植重组细胞重组细胞电脉冲刺激电脉冲刺激早期胚胎早期胚胎胚胎移植胚胎移植另另一头绵羊的子宫一头绵羊的子宫妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利2.2.体细胞核移植的过程：体细胞核移植的过程：卵细胞卵细胞母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵
11、裂C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育过程多莉羊的培育过程融合后的卵细胞融合后的卵细胞核移植技术核移植技术 加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 保护濒危物种，增加存活数量保护濒危物种，增加存活数量 克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 可以作为异种移植的供体可以作为异种移植的供体 可以用于组织器官的移植可以用于组织器官的移植3.3.体细胞核移植技术的应用前景：体细胞核移植技术的应用前景：4.4.体细胞核移植技术存在的问题：体细胞核移植技术存在的问题：思考题思考题、核在进行体细
12、胞核移植之前，为何要去掉受体卵母、核在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？细胞的核？为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。物提供的细胞。、用于核移植的供体细胞一般都选用传代、用于核移植的供体细胞一般都选用传代1010代以内的细代以内的细胞，为什么？胞，为什么？1010代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变未突变3 3、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了了100%100%的复制吗？为什么？的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大部分不是，克隆动物绝大部分DNADNA来自供体细胞核，但核外还来自供体细胞核，但核外还有有少部分少部分DNADNA（如线粒体（如线粒体DNADNA）来自受体卵母细胞）来自受体卵母细胞
