1、生物分离技术综合实验生物分离技术综合实验植物色素提取、分离及定量与初步鉴定植物色素提取、分离及定量与初步鉴定实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备 一、实验目的一、实验目的:了解有机溶剂提取目的物质（植物色素）的过程与注意了解有机溶剂提取目的物质（植物色素）的过程与注意事项。并了解目的物质提取过程中的主要影响因子及其事项。并了解目的物质提取过程中的主要影响因子及其相互关系。相互关系。二二 实验原理：实验原理：用有机溶剂法从原料中提取黄酮类成分用有机溶剂法从原料中提取黄酮类成分,利用黄酮类物利用黄酮类物质在热乙醇中溶解度较高质在热乙醇中溶解度较高,将其提取出来。将其提取出来。实验一、实验一
2、、植物色素的制备植物色素的制备 三、三、仪器仪器 高速干粉粉碎机、恒温水浴锅、烧杯试管若干、高速干粉粉碎机、恒温水浴锅、烧杯试管若干、中低速离心机、中低速离心机、250ml磨口椎形瓶磨口椎形瓶6个个/每组；每组；10ml容量瓶容量瓶4个个/组。组。四、试剂四、试剂 配配40%（80ml/组）、组）、70%（450 ml/组）的乙醇，组）的乙醇，10硝酸铝溶液硝酸铝溶液50ml/组，组，5亚硝酸钠亚硝酸钠50 ml/组组,质量分数质量分数4.3氢氧化钠氢氧化钠200 ml/组。组。实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备 五、操作五、操作 1、不同、不同浸提剂体积分数浸提剂体积分数对黄酮提取
3、率的影响对黄酮提取率的影响 1.1取干粉原料取干粉原料15克，分成克，分成6组（组（2.5克每组），用克每组），用8倍体积（指倍体积（指料液比料液比v/m为为8：1）即）即20ml的的40%、70%，95%的乙醇浸提的乙醇浸提（温度（温度70，时间，时间1.5h），浸提时每隔），浸提时每隔15 min用手用手轻摇轻摇2min。浸提所得粗液进行离心（浸提所得粗液进行离心（4500r/min20min），得浸提上清液。），得浸提上清液。1.2 精密吸取上清液精密吸取上清液1.0 mL，分别置于，分别置于10 mL容量瓶中，加质容量瓶中，加质量分数量分数5亚硝酸钠亚硝酸钠0.4 mL，放置，放置6
4、min后，加质量分数后，加质量分数10硝硝酸铝酸铝0.4 mL，放置，放置6 min，再加质量分数，再加质量分数4.3氢氧化钠氢氧化钠4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min，在，在510nm波长下测得其波长下测得其吸光度值，得出最优的浸提剂体积分数。吸光度值，得出最优的浸提剂体积分数。（按三个水平，每个水平做两组操作，即每个单因素条件得六（按三个水平，每个水平做两组操作，即每个单因素条件得六个数据。）个数据。）实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备 2、不同、不同浸提时间浸提时间对黄酮提取率的影响对黄酮提取率的影响 2.1 取干粉原料取干粉原料15克，
5、分成克，分成6组（组（2.5克每组），用按克每组），用按8：1（指（指料液比料液比v/m）的）的70%乙醇浸提（温度乙醇浸提（温度70），浸提时间分别为），浸提时间分别为90min、120min，150min，浸提时每隔，浸提时每隔15分钟用手分钟用手轻摇轻摇2min。浸提所得粗液进行离心（浸提所得粗液进行离心（4500r/min20min），得浸提上清液。），得浸提上清液。2.2 精密吸取上清液精密吸取上清液1.0 mL，分别置于，分别置于10 mL容量瓶中，加质容量瓶中，加质量分数量分数5亚硝酸钠亚硝酸钠0.4 mL，放置，放置6 min后，加质量分数后，加质量分数10硝酸铝硝酸铝0.4
6、mL，放置，放置6 min，再加质量分数，再加质量分数4.3氢氧化钠氢氧化钠4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min，在，在510nm波长下波长下测得其吸光度值，得出最优的浸提时间。测得其吸光度值，得出最优的浸提时间。（按三个水平，每个水平做两组操作每个水平做两组操作，（按三个水平，每个水平做两组操作每个水平做两组操作，即每个单因素条件做六个数据。）即每个单因素条件做六个数据。）实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备 3、不同、不同料液比料液比对黄酮提取率的影响对黄酮提取率的影响 3.1 取干粉原料取干粉原料15克，分成克，分成6组（组（2.5克每组）
7、，用按克每组），用按6：1，8：1，10：1（指料液比（指料液比v/m，即，即ml/克）的克）的70%乙醇浸提（温度乙醇浸提（温度70，时间，时间1.5h），浸提时每隔），浸提时每隔15分钟用手轻摇分钟用手轻摇2min。浸提所。浸提所得粗液进行离心（得粗液进行离心（4500r/min20min），得浸提上清液。），得浸提上清液。3.2 精密吸取上清液精密吸取上清液1.0 mL，分别置于，分别置于10 mL容量瓶中，加质容量瓶中，加质量分数量分数5亚硝酸钠亚硝酸钠0.4 mL，放置，放置6 min后，加质量分数后，加质量分数10硝硝酸铝酸铝0.4 mL，放置，放置6 min，再加质量分数，再加质
8、量分数4.3氢氧化钠氢氧化钠4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min，在，在510nm波长下测得其波长下测得其吸光度值，按吸光度值，按V*A值的大小比较得出最优的料液比。值的大小比较得出最优的料液比。选做部分：选做部分：若出现从若出现从6：18：110：1的（的（V*A）持续平稳）持续平稳增加，则可以继续加大料液比（可以为增加，则可以继续加大料液比（可以为12：1，14：1,）,直到找到拐点位置的最佳料液比。直到找到拐点位置的最佳料液比。实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备4 4、柱层析样品的制备、柱层析样品的制备（1 1）将本实验中所有的乙醇提取的浸
9、提液集中起来（一定要记）将本实验中所有的乙醇提取的浸提液集中起来（一定要记下这些浸提液所对应的原料质量下这些浸提液所对应的原料质量M M），），量取其量取其总体积总体积V V，将提取液将提取液分出分出50ml50ml，将这，将这50mL50mL提取液倒入干燥并已称重提取液倒入干燥并已称重（记为（记为m m2 2）的的50mL50mL小烧杯中，先用水浴干燥至无醇味，再放入烘箱中中干燥至恒重，小烧杯中，先用水浴干燥至无醇味，再放入烘箱中中干燥至恒重，称重称重（记为（记为m m1 1）。（2 2）其余提取液旋转蒸发浓缩至）其余提取液旋转蒸发浓缩至20mL20mL左右后，放置于分液漏斗左右后，放置于分
10、液漏斗中，中，按等量体积加入石油醚后塞上塞子并充分摇匀，弃石油醚层，按等量体积加入石油醚后塞上塞子并充分摇匀，弃石油醚层，得下层黄酮液，将所得黄酮液放在得下层黄酮液，将所得黄酮液放在90水浴中浓缩，浓缩成水浴中浓缩，浓缩成稀浸稀浸膏状膏状，加入，加入3-4克克60-100目的目的硅胶，在烧杯里进行拌胶，并将其放硅胶，在烧杯里进行拌胶，并将其放在在70烘箱中烘到成分散的颗粒即可，备用。烘箱中烘到成分散的颗粒即可，备用。实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备 六、实验注意事项六、实验注意事项 1 1、在色素提取过程中，每隔一段时间要进、在色素提取过程中，每隔一段时间要进行轻摇，摇晃时幅度要小
11、，以免使提取原料行轻摇，摇晃时幅度要小，以免使提取原料粘在壁上，造成原料损失。粘在壁上，造成原料损失。2 2、在做不同料液比对色素提取影响实验时，、在做不同料液比对色素提取影响实验时，比较结果优劣要用比较结果优劣要用V V*A,A,即：体积即：体积*吸光度值。吸光度值。实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备 六、实验注意事项六、实验注意事项 3 3、离心前一定要认真平衡好，两管质量、离心前一定要认真平衡好，两管质量平衡误差应在平衡误差应在0.10.1克以内。同时，在离心克以内。同时，在离心过程中，一定要有专人看护以免发生事过程中，一定要有专人看护以免发生事故。故。4 4、实验当中的提取液
12、一定要全部从磨口、实验当中的提取液一定要全部从磨口锥形瓶和离心管中倒出，在将离心好的锥形瓶和离心管中倒出，在将离心好的色素倒出时，一定要小心，不要将底部色素倒出时，一定要小心，不要将底部的沉降物倒出来。的沉降物倒出来。实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备 5 5、色素提取过程中一定要在锥形瓶上加、色素提取过程中一定要在锥形瓶上加上塞子，若乙醇蒸发较快时上塞子，若乙醇蒸发较快时（如：（如：80%80%以以上的高浓度乙醇提取时），上的高浓度乙醇提取时），可以考虑在可以考虑在磨口锥形瓶上加一蛇形管，但低浓度乙磨口锥形瓶上加一蛇形管，但低浓度乙醇提取时没有必要加蛇形管。醇提取时没有必要加蛇形管
13、。6、测量吸光度时，一定要设空白对照、测量吸光度时，一定要设空白对照（即用（即用1mL70%的乙醇代替样液以外，的其余试液按的乙醇代替样液以外，的其余试液按3.2中所述正常加入）中所述正常加入）实验一、实验一、植物色素的制备植物色素的制备附录附录 1 1、实验前面准备、实验前面准备（1 1）、原料的制备）、原料的制备（同学们不需要做）（同学们不需要做）用高速干粉粉碎机将银杏叶粉碎，过用高速干粉粉碎机将银杏叶粉碎，过4040目以上，目以上，40-6040-60目，目，60-7060-70目，目，70-8070-80目，目，80-9080-90目，目，90-10090-100目，目，100100目
14、以上，筛后目以上，筛后备用。备用。（2 2）、标准曲线的绘制：）、标准曲线的绘制：精密称取芦丁（或槲皮素）对照品精密称取芦丁（或槲皮素）对照品200 mg200 mg，用体积分数，用体积分数(下下同同)70)70乙醇溶解，定容至乙醇溶解，定容至100 mL100 mL容量瓶中摇匀。精密移取容量瓶中摇匀。精密移取10 10 mLmL芦丁乙醇液于芦丁乙醇液于25 mL25 mL容量瓶中，用蒸馏水定容，得到容量瓶中，用蒸馏水定容，得到0.8 mg0.8 mgmLmL标准溶液。精密吸取标准溶液标准溶液。精密吸取标准溶液0.00.0、0.20.2、0.40.4、0.60.6、0.80.8、1.0 mL1
15、.0 mL，分别置于，分别置于10 mL10 mL容量瓶中，加质量分数容量瓶中，加质量分数5 5亚硝酸钠亚硝酸钠0.4 mL0.4 mL，放置，放置6 min6 min后，加质量分数后，加质量分数1010硝酸铝硝酸铝0.4 mL0.4 mL，放置，放置6 min6 min，再加质量分数，再加质量分数4.34.3氢氧化钠氢氧化钠4 mL4 mL，加蒸馏水至刻度，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置摇匀，放置15 min15 min，进行测量，在，进行测量，在510nm510nm处有最大吸收波长。处有最大吸收波长。以测定结果得芦丁（或槲皮素）浓度与吸光度的标准曲线方以测定结果得芦丁（或槲皮素）浓度与吸光度的
16、标准曲线方程和相关系数。程和相关系数。实验二、植物色素的分离纯化实验二、植物色素的分离纯化 一、目的一、目的 学习掌握柱层析法分离纯化目的物质（植物色素）的方法学习掌握柱层析法分离纯化目的物质（植物色素）的方法和操作。和操作。二、原理二、原理 柱层析是比较理想的分离黄酮类色素的方法柱层析是比较理想的分离黄酮类色素的方法,其原理是通其原理是通过基质分子与黄酮类化合物分子上的过基质分子与黄酮类化合物分子上的酚羟基形成氢键缔合酚羟基形成氢键缔合物而产生作用物而产生作用,其作用力强弱取决于黄酮类化合物分子上其作用力强弱取决于黄酮类化合物分子上羟基的数目与位置羟基的数目与位置以及以及洗脱剂与黄酮类化合物
17、和基质之间洗脱剂与黄酮类化合物和基质之间形成氢键缔合能力的大小形成氢键缔合能力的大小。常用不同比例的水和醇混合溶。常用不同比例的水和醇混合溶剂作为洗脱剂，能成功分离各种类型的黄酮。剂作为洗脱剂，能成功分离各种类型的黄酮。实验二、植物色素的分离纯化实验二、植物色素的分离纯化 三、器材与试剂三、器材与试剂 1、实验仪器实验仪器 层析柱、试管、烧杯、量筒、烘箱。层析柱、试管、烧杯、量筒、烘箱。2、实验试剂实验试剂 石油醚、石油醚、40%乙醇乙醇200ml/组、组、70%乙醇乙醇300ml/组、组、95%乙醇乙醇200ml/组、基质。组、基质。3、实验材料、实验材料 银杏叶提取液银杏叶提取液实验二、植
18、物色素的分离纯化实验二、植物色素的分离纯化 四、操作四、操作 1、基质的的预处理：、基质的的预处理：称取所需的大孔吸附树脂称取所需的大孔吸附树脂(湿重湿重)，以，以95乙醇浸泡乙醇浸泡24 h，充分溶胀后用乙醇湿法装柱，充分溶胀后用乙醇湿法装柱，2 装柱：装柱：将酒精浸泡好的基质约将酒精浸泡好的基质约40ml（指混匀状态下取样），通过（指混匀状态下取样），通过漏斗缓慢倒入柱中漏斗缓慢倒入柱中（柱中已经装好（柱中已经装好10ml95%乙醇），乙醇），边加边加边用木夹子轻敲柱子，同时用竹签轻轻压实。流速应控制边用木夹子轻敲柱子，同时用竹签轻轻压实。流速应控制在在20滴滴/min，待装至，待装至20
19、cm20cm柱高，再加与柱壁完全吻合的滤柱高，再加与柱壁完全吻合的滤纸片，接着加入纸片，接着加入1.0 cm高海沙（或石英砂高海沙（或石英砂）。（注意，在）。（注意，在整个装柱过程中，树脂应浸泡在溶液中，否则会出现断痕，整个装柱过程中，树脂应浸泡在溶液中，否则会出现断痕，气泡等。气泡等。若柱子无砂芯，若柱子无砂芯，要在装柱前加一小团（大拇指指要在装柱前加一小团（大拇指指甲大小的）棉花封住柱子，以防基质漏出。甲大小的）棉花封住柱子，以防基质漏出。）实验二、植物色素的分离纯化实验二、植物色素的分离纯化 4、平衡：、平衡：用用95%乙醇洗柱，不时检查流出的乙醇液，待流出乙醇洗柱，不时检查流出的乙醇液
20、，待流出的乙醇液与去离子水以的乙醇液与去离子水以1：3的体积比混合，振摇不的体积比混合，振摇不显白色浑浊时结束洗柱，用纯化水将柱中树脂洗至显白色浑浊时结束洗柱，用纯化水将柱中树脂洗至无醇味后备用无醇味后备用。（注意，所有醇洗液需回收到大的（注意，所有醇洗液需回收到大的烧杯里，水洗液不必回收）烧杯里，水洗液不必回收）5、上样：、上样：取取拌好硅胶的样品拌好硅胶的样品上柱，待柱中样品刚好到基质上上柱，待柱中样品刚好到基质上表面时，关闭旋钮，用小勺子缓缓将样品均匀地倒表面时，关闭旋钮，用小勺子缓缓将样品均匀地倒在基质上面，若样品表面不平，可用样品勺轻轻拨在基质上面，若样品表面不平，可用样品勺轻轻拨平
21、整。平整。实验二、植物色素的分离纯化实验二、植物色素的分离纯化 6、洗脱（解吸附）：、洗脱（解吸附）：6.1 依次依次用用3倍柱体积（约倍柱体积（约150ml）去离子水洗脱）去离子水洗脱（流速约流速约30滴滴/min）、40%200ml（流速约流速约30滴滴/min）、）、70%300ml（流速约（流速约20滴滴/min）、）、95%200ml（流速约（流速约40滴滴/min）乙醇）乙醇分别进行洗脱，将试管放在试管架上按序接收洗脱液，每管分别进行洗脱，将试管放在试管架上按序接收洗脱液，每管收集收集 8ml左右洗脱液左右洗脱液 6.2 从第一管起，每接收从第一管起，每接收3管，则精密吸取第管，则
22、精密吸取第1、4、7、10等管中的洗脱液等管中的洗脱液1.0 mL，置于，置于10 mL容量瓶中，加质量分数容量瓶中，加质量分数5亚硝酸钠亚硝酸钠0.4 mL，放置，放置6 min后，加质量分数后，加质量分数10硝酸铝硝酸铝0.4 mL，放置，放置6 min，再加质量分数，再加质量分数4.3氢氧化钠氢氧化钠4 mL，加，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min，在在510nm波长下测得其波长下测得其吸光度值；吸光度值；实验二、植物色素的分离纯化实验二、植物色素的分离纯化 6、洗脱（解吸附）：、洗脱（解吸附）：6.3 确定黄酮所在的主要流分后，将吸光度值在确定黄酮所在的主要
23、流分后，将吸光度值在0.1以上（含以上（含0.1）的所有管中的洗脱液集中起来，混匀后，测出其）的所有管中的洗脱液集中起来，混匀后，测出其总体总体积积V纯化纯化，再，再取取1mL测出其吸光度值测出其吸光度值A A纯化纯化。预留一个预留一个50ml在在一已一已干燥并称重过的小烧杯干燥并称重过的小烧杯中中，并，并将其余的纯化液将其余的纯化液旋蒸旋蒸至至至至10mlL，用保鲜膜封闭后放在，用保鲜膜封闭后放在4中低温避光保存（亦中低温避光保存（亦可直接进行后续的鉴定试验），备用。可直接进行后续的鉴定试验），备用。实验二、植物色素的分离纯化实验二、植物色素的分离纯化 五、实验注意事项五、实验注意事项 1
24、1、装柱前在柱子、装柱前在柱子底部加一小棉花球。底部加一小棉花球。2 2、装柱时，边加树脂边用木质棒（或橡胶棒）轻、装柱时，边加树脂边用木质棒（或橡胶棒）轻敲柱子，使基质缓缓下沉敲柱子，使基质缓缓下沉 。3 3、装柱要求连续、均匀、无纹格、无气泡，表面、装柱要求连续、均匀、无纹格、无气泡，表面平整，整个层析过程中液面一定不得低于树脂表面。平整，整个层析过程中液面一定不得低于树脂表面。4 4、要注意及时开启和关闭旋纽，即在上一种液体、要注意及时开启和关闭旋纽，即在上一种液体刚好没入基质时，才开始加入下一种液体，刚好没入基质时，才开始加入下一种液体，且一定且一定要用玻棒引流要用玻棒引流。实验二、植
25、物色素的分离纯化实验二、植物色素的分离纯化 五、实验注意事项五、实验注意事项 5 5、要注意控制流速，不宜过快。、要注意控制流速，不宜过快。6 6、在加入好样品后（在洗壁前）就要接收洗、在加入好样品后（在洗壁前）就要接收洗脱液。脱液。7 7、柱子预处理时的流出液用三角瓶或烧杯接、柱子预处理时的流出液用三角瓶或烧杯接收，而上样后的色素洗脱液则用试管接收。收，而上样后的色素洗脱液则用试管接收。8 8、所预留的纯化液、所预留的纯化液50mL50mL，必须是在所有洗脱，必须是在所有洗脱下来的下来的A A值大于值大于0.10.1的纯化液混匀后才能取液。的纯化液混匀后才能取液。实验三、植物色素的定量与初步
26、鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定 一、目的一、目的 用化学方法鉴定上面所纯化的提取液中有黄酮存在，用化学方法鉴定上面所纯化的提取液中有黄酮存在，同时测定黄酮的含量和最后的得率。同时测定黄酮的含量和最后的得率。二、原理二、原理 黄酮化合物分子结构中具有黄酮化合物分子结构中具有C5、C6位的酚羟基或邻二位的酚羟基或邻二酚羟基可与酚羟基可与金属盐试剂铝盐金属盐试剂铝盐生成有色络合物，黄酮络生成有色络合物，黄酮络合物在合物在510nm处有较大的吸收峰，可由分光光度法测处有较大的吸收峰，可由分光光度法测出黄酮含量。根据黄酮的一些特性，利用黄酮与一些出黄酮含量。根据黄酮的一些特性，利用黄酮与一些试剂发
27、生特殊的发色反应来检测黄酮。试剂发生特殊的发色反应来检测黄酮。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定 三、实验器材三、实验器材 1、实验仪器：、实验仪器：分光光度计，烘箱，电子天平，分光光度计，烘箱，电子天平，10ml 容量容量瓶瓶1支支/组，组，100mL容量瓶容量瓶1支支/组，移液管若干。组，移液管若干。2、实验试剂：、实验试剂：80%的氢氧化钠（质量分数）溶液，的氢氧化钠（质量分数）溶液，10%的的FeCl3，10%的的FeCl2溶液，溶液，2%NaBH4溶液，甲醇。溶液，甲醇。3、实验材料：、实验材料：实验二中所得的洗脱液的浓缩液总体积为实验二中所得的洗脱液的
28、浓缩液总体积为10ml。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定 四、实验步骤四、实验步骤（一）物质初步鉴定操作（一）物质初步鉴定操作（样液是实验二中纯化液浓缩样液是实验二中纯化液浓缩而来的而来的10mL）：1、在所纯化的提取液在所纯化的提取液2ml中加入中加入10%的氢氧化钠（的氢氧化钠（质量质量分数）溶液分数）溶液2ml，若色素液马上由黄色变为深黄色；则认，若色素液马上由黄色变为深黄色；则认定黄酮化合物的存在。定黄酮化合物的存在。2、在所纯化的提取液两份，各为在所纯化的提取液两份，各为2ml，分别加入，分别加入10%的的FeCl3，Fe Cl2；若发现两种离子都使色
29、素溶液变为蓝绿；若发现两种离子都使色素溶液变为蓝绿色，则可认定黄酮化合物的存在。色，则可认定黄酮化合物的存在。3、硼酸氢钠反应：取黄酮纯化液硼酸氢钠反应：取黄酮纯化液2ml，再加等量的，再加等量的2%NaBH4的甲醇溶液的甲醇溶液1min后加浓盐酸后加浓盐酸（买来即用，不（买来即用，不需调配）需调配）数滴，若有紫色或紫红色出现，则说明此黄酮数滴，若有紫色或紫红色出现，则说明此黄酮纯化液中有二氢黄酮存在。纯化液中有二氢黄酮存在。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定（二）目的物质得率的确定：（二）目的物质得率的确定：将实验二中测出的总纯化液的吸光度值将实验二中测出的总纯
30、化液的吸光度值A A纯化纯化代入标准曲线方程代入标准曲线方程Y=Kx+b(Y：黄酮浓度，：黄酮浓度，gL；x：吸光值：吸光值;K和和b分别是实验一所得标准分别是实验一所得标准曲线方程的常数曲线方程的常数)，可以得到待测样品的黄酮浓度：可以得到待测样品的黄酮浓度：C纯化纯化（单位为（单位为mg/ml）。）。C纯化纯化=Y*10（由于测定浓度过程中，待测液由（由于测定浓度过程中，待测液由1ml稀释到稀释到10ml）黄酮得率黄酮得率%=测得的黄酮含量（测得的黄酮含量（mg）/原料总质量原料总质量100%=（C纯化纯化 V纯化）纯化）mg（M1000）mg100%M代表代表V所对应的原料的总质量。将书
31、本公式中的所对应的原料的总质量。将书本公式中的“V提取液提取液/200”去掉去掉，因为实验二中，因为实验二中10ml浓缩液对应的是所有提取液。浓缩液对应的是所有提取液。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定（三）目的物质的纯度测定：（三）目的物质的纯度测定：取实验一中所得的取实验一中所得的提取液提取液50ml，放置在已经烘干，并已，放置在已经烘干，并已经称好质量为经称好质量为m1的小烧杯中，放在真空干燥箱中干燥，的小烧杯中，放在真空干燥箱中干燥，干燥到恒重后，称其重量干燥到恒重后，称其重量m2，得色素浸膏重量为（，得色素浸膏重量为（m2 m1），再根据前面），再根据前
32、面“（二）（二）”中的公式算出中的公式算出50ml提取提取液液对应的黄酮量，则其纯度为：对应的黄酮量，则其纯度为：目的物质的目的物质的纯化前纯化前纯度纯度=C纯化纯化 50 V纯化纯化 100%m2 m1 V提取提取-50其中其中“50 50 V V纯化纯化”表示表示50ml50ml粗提液对应的纯化液的体积粗提液对应的纯化液的体积 V V提取提取-50-50实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定（三）目的物质的纯度测定：（三）目的物质的纯度测定：取实验二中所得的取实验二中所得的纯化液纯化液50ml，放置在已经烘干，并已，放置在已经烘干，并已经称好质量为经称好质量为m3
33、的小烧杯中，放在真空干燥箱中干燥，的小烧杯中，放在真空干燥箱中干燥，干燥到恒重后，称其重量干燥到恒重后，称其重量m4，得色素浸膏重量为（，得色素浸膏重量为（m4 m3），），再根据前面再根据前面“（二）（二）”中的公式算出中的公式算出50ml纯化液纯化液对应的黄酮量，则其纯度为：对应的黄酮量，则其纯度为：目的物质的目的物质的纯化后纯化后纯度纯度=C纯化纯化50 100%m4 m3 实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定（三）目的物质的纯度测定（三）目的物质的纯度测定 纯化倍数计算：纯化倍数计算：N =目的物质的目的物质的纯化后纯化后纯度纯度 目的物质的目的物质的纯化前
34、纯化前纯度纯度实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定 五、实验注意事项五、实验注意事项 1 1、在进行、在进行目的物质得率的确定目的物质得率的确定的实验中，一定要注的实验中，一定要注意实验数据测量的精确性。意实验数据测量的精确性。2、在进行在进行目的物质的纯度测定目的物质的纯度测定的实验中，要注意色的实验中，要注意色素容器（小烧杯）一定要先在高温烘干后称其重量，素容器（小烧杯）一定要先在高温烘干后称其重量，然后把色素倒入其内，在高温下进行烘干。然后把色素倒入其内，在高温下进行烘干。实验三、植物色素的定量与初步鉴定实验三、植物色素的定量与初步鉴定 五、实验注意事项五、实
35、验注意事项 3 3、在测定洗脱液的、在测定洗脱液的A A值时，若洗脱液经过稀释到值时，若洗脱液经过稀释到n n倍后倍后再测定时，则须在原来的再测定时，则须在原来的C C纯化纯化数值的基础上在乘以稀数值的基础上在乘以稀释倍数释倍数n n，在去计算相应的得率和纯度。，在去计算相应的得率和纯度。在此情况下，测定液相当于稀释了在此情况下，测定液相当于稀释了两次两次，一次是样，一次是样液本身的稀释，另一次是样液测定时加入的显色剂使液本身的稀释，另一次是样液测定时加入的显色剂使之稀释到之稀释到1010倍。计算时的倍数是两次稀释倍数的乘积。倍。计算时的倍数是两次稀释倍数的乘积。4 4、每天的水浴锅、烘箱、水龙头、门窗等在晚上离开、每天的水浴锅、烘箱、水龙头、门窗等在晚上离开实验室时必须关闭。实验室时必须关闭。后记后记 1 1、同学们在实验结束后，一定要将所有用过的设备、同学们在实验结束后，一定要将所有用过的设备洗涤干净后，摆放整齐。并把所用到的所有实验室洗涤干净后，摆放整齐。并把所用到的所有实验室打扫干净。打扫干净。2 2、周五下午、周五下午15:3015:30，每个组派一名同学每个组派一名同学过来，把领过来，把领用的东西由组长负责归还给老师，并将实验室整理用的东西由组长负责归还给老师，并将实验室整理好。好。3 3、实验报告在第、实验报告在第1515周周四前交上来。周周四前交上来。
