1、食用菌菌种制作技术食用菌生产技术课程组第一节 菌种生产类型及生产流程第二节 一级菌种制作技术 第三节 二、三级菌种制作技术食用菌菌种制作技术第一节 菌种生产类型及生产流程一、菌种概念二、菌种生产类型三、菌种生产流程四、菌种生产场所及设备一、菌种概念 广义广义：是指以保藏、试验、栽培是指以保藏、试验、栽培和其它用途为目的，具有繁衍能力，和其它用途为目的，具有繁衍能力，遗传特性相对稳定的孢子、组织或菌遗传特性相对稳定的孢子、组织或菌丝体及其营养性或非营养性的载体。丝体及其营养性或非营养性的载体。菌种是一种重要的生物资源，椐其使用的目的不同，可以分为保藏用菌种、试验用菌种和生产用菌种。从食用菌栽培的
2、角度而言，所谓的菌种就是指生产用菌种。菌种一级菌种二级菌种三级菌种从孢子分离培养或组织分离培养获得的纯菌丝体。由一级菌种扩大繁殖成的菌丝体。由二级菌种扩大繁殖成的菌丝体，是直接用于栽培的菌种。种菇种菇一级菌种一级菌种二级菌种二级菌种三级菌种三级菌种栽培栽培菌种为何要经过三级逐步扩大培养？三、菌种生产工艺流程斜面一级种培养基制备高压灭菌接种培养筛选提纯原始种中试后确定一级种保存孢子或组织分离一级种转管、扩大菌种瓶二级种培养基制备高压灭菌接种培养二级菌种罐头瓶菌种袋三级种培养基制备高压或常压灭菌接种三级菌种栽培培养菌种制作流程菌种制作流程一级菌种（配制培养基灭菌接种培养）二级菌种（配制培养基灭菌接
3、种培养）三级菌种（配制培养基灭菌接种培养）栽 培配制培养基灭菌接种培养 （一）菌种场设计基本要求一）菌种场设计基本要求 1、确、确定制种级别及规模定制种级别及规模 良种选育对人员素质、设备条件、种质资源的积累、工良种选育对人员素质、设备条件、种质资源的积累、工作的连续性等都有很高的要求。在菌种生产中，由于前一级作的连续性等都有很高的要求。在菌种生产中，由于前一级菌种是后一级菌种的种源，前一级菌种出现质量问题比后一菌种是后一级菌种的种源，前一级菌种出现质量问题比后一级菌种出现质量问题危害更大。因此对生产和供应较前级菌级菌种出现质量问题危害更大。因此对生产和供应较前级菌种厂家的条件和责任的要求更高
4、。种厂家的条件和责任的要求更高。目前，我国农业部已经颁布包含这方面内容的菌种管理目前，我国农业部已经颁布包含这方面内容的菌种管理行政法规。今后，各菌种厂在制定规划时，应根据本身的技行政法规。今后，各菌种厂在制定规划时，应根据本身的技术力量及设备条件，确定适宜的菌种生产级别和规模。术力量及设备条件，确定适宜的菌种生产级别和规模。2、制种场地的选择、制种场地的选择 水、电、路三通，远离禽舍、畜栏、厕所等污水、电、路三通，远离禽舍、畜栏、厕所等污染源。染源。3、菌种场设置要求、菌种场设置要求 菌种场应设原辅料仓库，原料处理场地，洗涤菌种场应设原辅料仓库，原料处理场地，洗涤室，配料室，灭菌室，冷却室，
5、接种室，培养室室，配料室，灭菌室，冷却室，接种室，培养室,质检室和菌种储藏室。质检室和菌种储藏室。应根据微生物易于在空气中传播及其应根据微生物易于在空气中传播及其传播的特点规划厂房，布设流水线，以使传播的特点规划厂房，布设流水线，以使制种的工艺流程既便于流水作业，节约劳制种的工艺流程既便于流水作业，节约劳力和投资，又有利于对微生物传播的控制，力和投资，又有利于对微生物传播的控制，提高菌种生产的成品率。下面分别介绍简提高菌种生产的成品率。下面分别介绍简易菌种厂和规范化菌种厂的平面布局。易菌种厂和规范化菌种厂的平面布局。配制培养基设备：切片机、粉碎机、过筛机、拌料机、装瓶或装袋机 灭菌设备：高压灭
6、菌锅（手提式、立式、卧 式）、常压灭菌灶接种设备：净化工作台、接种箱、接种室培养设备：培养箱（电热恒温、恒温恒湿）、培养室、培养架、空调菌种保藏设备：电冰箱、贮藏室（二、三级菌种）1、制种设备2 2、基本器具、基本器具 玻璃器皿 衡量器具 基础设备3 3、基本药品、基本药品 配置必要的生产设备。配置必要的生产设备。生产能力与生产设备配套生产能力与生产设备配套 选用质量合格、价格适宜的玻璃器皿、塑选用质量合格、价格适宜的玻璃器皿、塑料袋、消毒药品等低值易耗品。料袋、消毒药品等低值易耗品。二、一级菌种培养基的配制1、培养基的概念及分类 根据食用菌对营养、水分、酸碱度的要求，人为配制成 的供食用菌生
7、长发育的基质。类型天然：天然有机物合成：已知成分的化学药品半合成：？原料来源状态液体：营养液固体固体：天然固体原料固化：加1.5%2%琼脂表面形状斜面培养基平板培养基概念 2、一级菌种培养基常用配方 PDA培养基 PSA培养基马铃薯（去皮）200g 马铃薯（去皮）200g葡萄糖 20g 蔗糖 20g琼脂 1823g 琼脂 1823g水 1000ml 水 1000ml PDA培养基和PSA培养基是一级菌种最常用的培养基，适用于大部分食用菌菌种的分离、培养和保藏，既是一种广泛培养基，也是一种基础培养基。注：一级菌种培养基配方众多，可参考课本或其他书籍。粉状条状属天然植物多糖 融点96以上凝点40
8、以下冷水中不溶透明度好、粘着力强不被微生物分解利用特性煮沸20min，取定量滤液制马铃薯滤液滤液沸时加入，融后加余料融化琼脂调节pH值勿污管口，控制装量分装试管准备灭菌包扎成捆1%NaOH或HCl 3.一级菌种培养基的配制过程（二）灭菌与消毒的方法灭菌与消毒的方法1 1、常用的灭菌方法、常用的灭菌方法火焰灭菌用于金属器具，火焰灼烧至红（在火焰2/3处烧）干燥箱灭菌用于玻璃器皿（培养皿、试管、三角瓶、吸管）等。洗净晾干包装放入干燥箱升温160170，保持12h 关闭电源，自然降温60以下打开干燥箱取出灭菌物品，尽快使用。干热灭菌湿热灭菌常压灭菌间歇灭菌第一次蒸，100保持1 h 28-37下培养
9、24 h 第二次蒸，100，保持1 h 培养24 h 第三次蒸，100，保持1 h。不常用的原因：灭菌一锅需要34天时间，且冬天需要保温。持续灭菌蒸，100保持1214 h（方法：攻头，控中间，保尾）。普遍采用，特别用于大规模塑料袋制种和塑料栽培筒的灭菌。注意：常压灭菌锅要设计合理，主要是灭菌彻底与否、燃料费用、周转速度、劳动强度、污染率的高低，直接影响经济效益。高压灭菌手提式高压灭菌锅：用于一级菌种培养基灭菌。卧式或立式高压灭菌锅：用于二、三级菌种培养基灭菌。2 2、常用的消毒方法、常用的消毒方法空间消毒药液喷雾药剂薰蒸紫外线照射0.25%的新洁尔灭，5%的石碳酸，0.25%的多菌灵等。用量
10、不小于30ml/m3；雾粒越细越好；适时更换药液（防止抗药性）。1020ml的甲醛+58g的高锰酸钾/m3；气雾消毒盒，26g/m3；照30min后，再过30min开照明灯器具消毒药液浸泡煮沸消毒75%的酒精；药物揩擦煮沸20min以上培养料消毒熟石灰拌料；杀菌剂拌料（0.1%0.2%的多菌灵）；巴氏消毒（发酵）分离材料消毒75%的酒精棉球擦拭；0.1%升汞浸泡0.51min无菌水冲洗3次无菌纸吸干（三）一级菌种培养基的灭菌（三）一级菌种培养基的灭菌 1 1灭菌设备灭菌设备 手提式高压灭菌锅手提式高压灭菌锅 2 2灭菌要求灭菌要求 1.1kg/cm1.1kg/cm2 2，121121 保持保持
11、2020 30min30min手提式高压灭菌锅手提式高压灭菌锅3 3操作过程操作过程 加水加水装锅装锅盖盖盖盖加热加热当压力升为当压力升为0.5kg/cm20.5kg/cm2时排放冷空气时排放冷空气正式升压正式升压保压保压（1.1kg/cm21.1kg/cm2，121121，保持，保持20-30min20-30min）停停止加热止加热自然降压至零自然降压至零排放余汽排放余汽开盖开盖取出灭菌物品取出灭菌物品趁热摆斜面趁热摆斜面检验灭菌效果检验灭菌效果（3232空白培养空白培养48h48h）。）。无菌操作要点接种环境消毒灭菌酒精棉球消毒双手操作器具消毒灭菌开启的管口、瓶口靠近灯焰拔出的棉塞勿触及任
12、何地方动作快、准、稳要点必备（三）菌种分离的设备（三）菌种分离的设备 1接种箱：操作规程 2净化工作台：操作规程 3接种室：操作规程接种工具净化工作台（四）菌种分离的方法（常用三种）（四）菌种分离的方法（常用三种）组织分离法将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法简单易行保持原菌种性状适用于大型肉质子实体重复多易退化种菇选择种菇消毒切取组织块移接组织块至斜面中央培养特点概念操作过程（以伞菌为例）孢子分离法概念特点操作过程利用子实体产生的成熟有性孢子分离培养获得纯菌种的方法属于有性繁殖，后代易发生变异，可用此法培育新品种分离过程较复杂，适用于胶质菌类和小型伞菌孢子的采集孢子的分离孢子
13、的萌发孢子分离法多个孢子萌发后自由交配获得纯菌种的方法多孢分离单孢分离单个孢子萌发获得纯单个孢子萌发获得纯菌种的方法菌种的方法整菇插种法钩悬法孢子印法平板稀释法连续稀释法毛细血管法基内菌丝分离法概念特点适用范围从生长子实体的培养基中分离菌丝获得纯培养的方法易感染杂菌子实体已腐烂，但又必须保留该种菌种子实体小而薄，用组织分离法和孢子分离法较困难混合菌丝培养类型，如银耳，多采用此法操作示范选种菇外观典型、大小适中、无病虫害、八成熟、第12茬的子实体取组织块取组织块：纵剖（撕）菇体，在柄盖交界处取绿豆粒大的组织种菇消毒用75%的酒精棉球擦拭子实体接组织块培养移接至斜面中部25培养箱纯化概念措施是指对
14、分离获得的菌种进行再提纯，成为生产所需要的菌种的方法菌丝的再提纯菌丝的再提纯污染物的排除污染物的排除 正常的菌种在固体培养基上，菌丝逐渐向四周呈辐射状生长，边缘整齐一致，菌丝浓密健壮！是菌种投入生产前必须做的结实性鉴定试验概念进一步确定菌种，以避免菌种选育不当而造成不可估量的损失目的形态特征、生理特性、栽培性状、经济效益等内容转管过程取直径3-5mm的母种块移入新斜面中部转管目的扩大繁殖，增加母种数量，以满足生产需要注意种块勿太大原老种块勿再接入传代次数勿太多母种培养设备注意条件经常检查，及时剔除污染管控制菌龄（即将长满斜面）外观检查：菌丝白、整齐、粗壮、有弹性、萌发快则质量好，否则质量差电热
15、恒温培养箱25左右、干净、干燥、黑暗、通风（一）保藏目的及原理使菌种不死亡不生长不污染，不降低或不丧失其优良性，以尽量延长使用时间。保藏目的保藏原理创造不利于菌种生长的一切条件，使其代谢处于休眠状态。（二）菌种保藏方法（常用）特点简便保藏时间短易污染及退化不适于草菇等菌类 1.斜面低温法斜面菌种置46冰箱中（36个月）2.矿油保藏法3.自然基质保藏法自学！（三）菌种保藏注意事项用保种培养基及时保藏（菌丝占斜面2/3）最好换胶塞用时活化严防棉塞受潮复习思考题 1什么是一级菌种？简述一级菌种制作的工艺流程。2一级菌种培养基常用的配方是什么？简述其制作过程 3名词解释：消毒、灭菌、提纯。4如何对一级
16、菌种培养基进行灭菌？如何检验其灭菌效果？5什么是菌种分离？菌种分离有哪几种方法？6简述组织分离法的操作过程。7为什么要进行出菇试验？8什么叫转管？为什么要转管？9什么是无菌操作？怎样才能做到无菌操作？配制培养基灭 菌二级菌种培 养接 种培 养接 种灭 菌配制培养基三级菌种一级菌种二级菌种（一）配制原则（一）配制原则 1选择适宜的营养物质。2营养物质间配制的比例要恰当。3选择经济实用、来源广泛的原料。4适宜的pH值和含水量。木屑培养基阔叶树木屑 78%麸皮(或米糠)20%蔗 糖 1%石膏粉 1%料水比 1:1.11.3 棉籽壳培养基棉籽壳 78%麸皮(或米糠)20%蔗 糖 1%石膏粉 1%料水比
17、 1:1.11.3称料拌料调节pH值分装培养料清洁（洗或擦）瓶、袋外壁封口1.不溶性主、辅料混拌均匀2.可溶性辅料溶于水后拌入主辅料3.注意检查含水量（手测法等）比实际要求的pH值调高1左右容器：菌种瓶、菌种袋要求：上紧下松，外紧内松，中间一个洞卧式高压蒸汽灭菌锅分析原因？三.二、三级菌种的接种概念：菌种移至新培养基上的过程关键：无菌操作接种接种环境消毒灭菌酒精棉球消毒双手操作器具消毒灭菌开启的管口、瓶口靠近灯焰拔出的棉塞勿触及任何地方动作快、准、稳无菌操作要点接种方法二级种三级种用接种耙取蚕豆大母种放于瓶中料面上用接种匙（镊、铲）取枣大原种放于袋中或瓶中料面上注意：1、严格挑选待接的菌种质量
18、；2、勿接入表面老菌丝及老种块。菌种的培养实际就是对菌丝体的培养培养条件场所清洁空气清新光线暗温度约25空气湿度60%70%培养条件勿堆放过挤及时剔除污染瓶（袋）栽培种的菌袋缺氧时可刺孔增氧控制菌龄（菌丝长满7-01天后使用）五.二、三级菌种的质量鉴定菌丝白（或呈该菌种应有的颜色）均匀、粗壮、有菇香味接种后萌发快无杂色、无黄水、无结皮、无原基、无干缩脱壁等现象菌种出售菌种出售必须贴有菌种质量合格标签，必须贴有菌种质量合格标签，标明菌种种类、级别、品种、生产单位和标明菌种种类、级别、品种、生产单位和接种日期。接种日期。合格菌种菌种制作过程中，只要做到选择正确的配方和优质原料严格灭菌优良的二、三级菌种优良的二、三级菌种严格无菌操作科学培育选择优良菌种复习思考题 1简述二、三级菌种的制作流程。2根据实际操作说明如何测定培养基的含水量和pH值。3.分装培养料时，为何要在料中打一个孔？4.简述二、三级培养基的灭菌方法及要求。5.如何检验二、三级菌种培养基的灭菌效果？6.简述一级菌种转接二级菌种，二级菌种转接三级菌种的过程。7.合格的培养室有什么要求？8试述二、三级菌种的培养方法？9如何检查二、三级菌种质量？10请你以一个菌种厂厂长或技术员的身份，谈谈如何搞好菌种生产。
