1、中山大学肿瘤医院中山大学肿瘤医院 结直肠科结直肠科伍小军伍小军循环肿瘤细胞分型检测在结直肠癌的临床应用初探肿瘤诊疗的挑战：精准评估与治疗、全程管理Circulating tumor cells.2015.Springer Press.90%癌症患者死亡由转移/复发引起50%结直肠癌根治术/R0患者发生转移 治疗有效吗？肿瘤有转移吗？肿瘤会复发吗？肿瘤何时复发？肿瘤耐药了吗？何时更换治疗方案？复发/转移实时监测手段：CTCs与肿瘤全程管理 CTCs是什么？来源于肿瘤原发病灶、转移病灶，并释放入血的多种肿瘤细胞的统称 哪种CTCs才有临床意义？血细胞冲撞、血流剪切阻力等CTCs进入血液循环细胞失巢
2、凋亡机体免疫系统的防御微小癌栓转移灶极少部分CTCs一定条件下Cancer Res.2003,63:3805-11.Breast Cancer Res.2009,11:R46.Am J Pathol.2011,178:989-96.JAMA Oncology 2015年6月的述评肿瘤常规诊疗手段无法实时获取准确的复发转移信息常规诊断手段提示肿瘤信息 局限性影像学解剖学信息代谢信息1.肿瘤信息的反映存在滞后性，无法实时2.存在辐射血清学肿瘤标志物信息1.大部分特异性和准确性低2.无法作为复发转移信息的实时有效指标CTC：实时反映肿瘤复发/转移信息的有效方法Science.2013,339:580
3、-4.Mol Cancer Res.2011,9:997-1007.J Clin Oncol.2012,30:525-32.Cancer cell.2011,20:576-90.CTCs临床应用方向一：肿瘤预后个体化评估（DFS/RFS/OS）Uenosono et al.Cancer 2013;119:39843991Seeberg et al.Ann Surg 2014;00:18British Journal of Cancer(2015)112,1306不同时间点的CTC检测均可实现预后的有效评估Annals of oncology 20;1223-1229,2009不同时间点的CTC
4、检测均可实现预后的有效评估Annals of oncology 20;1223-1229,2009CTC临床应用方向二：复发风险个体化评估Lu CY et al.,Br J Cancer,2013JNCI J Natl Cancer Inst(2014)106.CTC临床应用方向三：相比血清标志物，更精准评估疗效 J Clin Oncol 2008;26:3213-3221.0p68-kCTC临床应用方向四：结合影像学实现更精准的肿瘤病情评估J Clin Oncol 26:3213-3221临床应用方向五：基于CTC的分子检测Clin Cancer Res 2009;15结直肠癌CTCs与组织
5、KRAS突变一致性高共入组76例爱必妥联合化疗的转移性结直肠癌患者，分别对组织样本、CTC样本同进行KRAS突变检测组织样本中发现33例（43.4%）KRAS突变，30例（39.5%）CTC样本中检测到KRAS突变组织和CTC检测KRAS突变的一致率为90.8%，灵敏度为84.4%，特异性为95.3%结直肠癌CTCs KRAS突变与爱必妥疗效相关Clin Cancer Res 2009;151.预后全面评价2.疗效实时评估3.复发/耐药预警，优化治疗方案4.基于CTCs分子检测，指导治疗Cancer Discov.2016,6(5);113.循环肿瘤细胞（CTCs）检测的临床意义CTC检测临床
6、挑战1：如何检测转移潜能最大的CTCs?形态学分类 单细胞CTC CTC细胞团（CTM）功能学分类 上皮型CTC 间质型CTC 混合型CTC1/40的CTC形成微转移灶1/10000的CTC形成转移灶Clin Cancer Res 2015,21(21)CTC检测临床挑战2：如何检测最容易耐药、导致复发的CTCs?Nature.2016,529:298-306上皮间质转化(EMT)EMT是指肿瘤细胞由上皮细胞表型转化为间质细胞表型1.促进肿瘤细胞进入血管2.促进肿瘤细胞获得干性3.增强肿瘤细胞治疗耐受4.增强肿瘤细胞侵袭转移Circulating tumor cells.2015.Spring
7、er Press.EMT上皮标记物表达减少间质标记物表达增加 与EMT特征相反 有利于CTC定植CTC与上皮-间质转变（EMT）EMBO Mol Med,2015,7:111.MET基于某个或某几个生物标志物的磁珠法/芯片法/微流控分离CTC是否可行？EMT-CTCsFEBS Letters.589(2015):1577-1587.发生EMT的CTCs，即间质型CTC和混合型CTCs在肿瘤侵袭和转移中发挥关键作用能否检测出外周血中发生EMT的CTC？3.3%2.7%Science,2013,339:580-584.12.7%乳腺癌：间质型CTC与乳腺癌预后直接相关乳腺癌：间质型CTC与治疗疗效
8、更相关Science,2013,339:580-584.肿瘤实时全面监测，需结合肿瘤实时全面监测，需结合CTCs的数量和型别差异！的数量和型别差异！消化道肿瘤：间质型CTC与治疗疗效更相关World J Gastroenterol,2015,21(47):13259.间质型CTCs转移能力比上皮型、混合型CTCs强 CTM的转移成瘤能力是单个CTCs的20-50倍CTC分型检测 与 CTC计数检测典型案例1CTCs分型检测：精准评估肿瘤病情典型案例2CTCs分型检测：快速实现治疗疗效快速评价CanPatrolTMCTCs检测步骤CTCs检测的探针序列中山大学肿瘤医院中山大学肿瘤医院CRC患者患
9、者CTCs检测临床实践检测临床实践2015.05起CRC患者 检测CTCs +OCT4第一次：手术前第二次：手术后 1月第三次：手术后 6月第四次：手术后12月CRC检测CTCs入组情况诊断例数CTCs阳性CTCs阳性率CTCs中位数CTCs范围结直肠癌866069.830-29上皮型上皮型CTCs混合型混合型CTCs间质型间质型CTCsCTCs总数407亚型数量18416459比例45.2%40.3%14.5%范围0-170-150-5CTCs阳性结直肠癌患者不同表型阳性结直肠癌患者不同表型CTCs分布分布上皮型CTCs混合型CTCs间质型CTCs结直肠癌CTCs分型情况例数例数CTC+患者
10、患者CTC+比例比例P间质型间质型 CTC+患者患者间质型间质型CTC阳性率阳性率PT27457.10.390228.60.6833362980.61336.14171482.4847.1N0261869.20.2341038.50.9861-2342882.41338.2M0463678.30.6941941.30.061111872.7872.7类型类型腺癌腺癌564071.40.1161933.90.066粘液癌粘液癌131292.3861.5分化分化中中483777.10.5391531.30.066低低201470.01155.0CEA=5141285.7321.4CA-199=30
11、77100.0228.6Ki-6760261973.11350.0间质性CTC与转移、分化程度、肿瘤增殖密切相关OCT4 可增强肿瘤细胞侵袭能力，促进EMTBreast Cancer Res.2011;13(5):R94PLoS One.2014;9(1):e87207.干细胞相关基因OCT4在不同分型CTCs的表达情况OCT4在不同在不同CTCs亚型的表达率亚型的表达率CTC类型CTC总数表达OCT4阳性率%P值上皮型1337858.60.034混合型1047572.1间质型312477.4上皮型上皮型混合型混合型间质型间质型OCT4基因在上皮，间质和混合三种类型的CTCs之间呈现统计差异且
12、恶性程度更高的间质型CTCs中OCT4表达高OCT 4基因基因中高表达率中高表达率P间质性间质性 CTCOCT 4基因表达率基因表达率PT2-354.40.0279.60.007473.826.2 N058.70.81710.70.1861-260.417.8 M056.20.00111.50.001187.542.5 TNMI-II57.50.19011.00.009III-IV67.427.4 类型类型腺癌腺癌56.20.01412.40.007粘液癌粘液癌77.530.0 分化分化中中57.20.12513.00.029低低69.025.9 脉管侵犯脉管侵犯否否60.50.34313.2
13、0.035是是67.725.8 干细胞相关基因OCT 4与肿瘤TNM分期、分型、分化和脉管侵犯密切相关 32例出现术后ctc下降或不变 9例出现术后ctc升高术前术前%术后术后%P患者总例数患者总例数3232间质型间质型CTC患者例数患者例数1340.626.30.001表达表达OCT4患者例数患者例数2681.31753.10.017CTC中位数中位数3.510.001表表1：术前术后患者整体变化情况：术前术后患者整体变化情况术前术前%术后术后%PCTC总量总量12553上皮型数量上皮型数量5140.83260.40.017混合型数量混合型数量5342.41935.80.415间质型数量间质
14、型数量2116.823.7740.018表表2：术前术后患者：术前术后患者CTC亚型变化情况亚型变化情况术前术前%术后术后%P表达表达OCT4 的的CTCs个数个数64.867.90.688表达表达OCT4上皮型上皮型CTCs数量数量2632.12055.60.017表达表达OCT4混合型混合型CTCs数量数量3948.11541.70.516表达表达OCT4间质型间质型CTCs数量数量1619.812.80.016表表3：术前术后患者：术前术后患者OCT4基因表达变化情况基因表达变化情况术前术前%术后术后%P患者总例数患者总例数99间质型间质型CTC患者例数患者例数111.1444.40.2
15、94表达表达OCT4患者例数患者例数555.69100.00.023CTC中位数中位数150.004术前术前%术后术后%PCTC总量总量2167上皮型数量上皮型数量1152.41826.90.030混合型数量混合型数量942.93958.20.218间质型数量间质型数量14.7621014.930.448术前术前%术后术后%P表达表达OCT4 的的CTCs个数个数66.771.60.663表达表达OCT4上皮型上皮型CTCs数量数量857.11327.10.037表达表达OCT4混合型混合型CTCs数量数量535.73164.60.054表达表达OCT4间质型间质型CTCs数量数量17.148
16、.30.886表表1：术前术后患者整体变化情况：术前术后患者整体变化情况表表2：术前术后患者：术前术后患者CTC亚型变化情况亚型变化情况表表3：术前术后患者：术前术后患者OCT4基因表达变化情况基因表达变化情况小 结1.间质型CTCs阳性率与结直肠癌转移、分化、增殖相关。2.干细胞相关基因OCT4基因在上皮，间质和混合型CTCs表达呈现统计学差异3.间质型CTCs中干细胞相关基因OCT4表达更高4.结直肠癌患者CTCs及OCT4表达在术后呈明显下降趋势5.进一步观察CTCs及OCT4变化与治疗疗效、DFS、OS的相关性展 望1.进一步观察CTCs及OCT4变化与CRC治疗疗效、DFS、OS的相关性2.动态CTCs的检测能否做为CRC复发转移的实时检测指标总 结1.CTCs是多种CTC的统称2.检测与复发/转移、耐药最相关的CTCs类型更有临床意义3.分析CTCs的EMT分型和干细胞分析具有重要临床价值4.基于细胞大小分离CTCs，并通过多重核酸原位分析技术适用于临床检测5.CTCs分型检测和CTCs分子分析为实现肿瘤实时个体化治疗，推动耐药/复发的分子机制研究提供了重要平台单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式 单击此处编辑母版文本样式 第二级第三级第四级第五级
