生化检验项目校准课件.pptx

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1、生化检验项目校准 校准:在规定条件下,为确定测量仪器校准:在规定条件下,为确定测量仪器(或或测量系统测量系统)所指示的量值,或实物量具所指示的量值,或实物量具(或参考或参考物质物质)所代表的值,与对应的由标准所复现的量所代表的值,与对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作。值之间关系的一组操作。仪器的性能验证:仪器的性能验证:零点漂移零点漂移 波长准确度及重复性波长准确度及重复性 杂散光杂散光 吸光度正确度吸光度正确度 吸光度重复性吸光度重复性 吸光度线性误差吸光度线性误差 交叉污染率交叉污染率 温度正确度温度正确度 比色杯间差距比色杯间差距检测项目校准检测项目校准项目校准主要涉及内容项目校

2、准主要涉及内容 校准方法的选择校准方法的选择 校准品的选择及准备校准品的选择及准备 校准频率的选择校准频率的选择 校准后的验证校准后的验证 问题讨论问题讨论校准方法的选择校准方法的选择K K因子法(因子法(+-+-):):理论理论k k值:根据理论摩尔消光系数来计算。通常试值:根据理论摩尔消光系数来计算。通常试剂生产厂家给出的剂生产厂家给出的k k值都属于。值都属于。实测实测K K值:是根据仪器实测的摩尔消光系数来设置值:是根据仪器实测的摩尔消光系数来设置K K值值校准校准k k值:是根据仪器当前的实际状态,试剂的稳值:是根据仪器当前的实际状态,试剂的稳定性等通过校准品校准后得到的定性等通过校

3、准品校准后得到的K K值。值。K K因数法适用的分析方法有一点终点法,两点因数法适用的分析方法有一点终点法,两点终点法,两点速率法,多点速率法。终点法,两点速率法,多点速率法。波长准确度及重复性logit-log4p对数函数法中的一种,适用于浓度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。5、之后校准显示通过,质控在控,证明校准成功定值质控品是否可以替代校准品?试剂改变了种类或更换了批号试剂参数为:Primary wavelength:340nm;零度水平是否均可以用水来代替?(LPa)校准目的是准确度的传递校准后用校准品当样本进行测试,看其值与定值之间的差异R1 reagent volume:185u

4、l;校准范围也定义为分析方法的工作范围。线性校准(Linear):其反应为线性(直线),一般只需一个校准品进行校准。线性校准(线性校准(LinearLinear):其反应为线性(直线):其反应为线性(直线),一般只需一个校准品进行校准。,一般只需一个校准品进行校准。非线性法:又称非直线性校准法非线性法:又称非直线性校准法 非线性法包非线性法包括括logit-loglogit-log法、指数函数法、样条函数法等法、指数函数法、样条函数法等方法方法Logit-log3pLogit-log3p对数函数法中的一种,适用于浓对数函数法中的一种,适用于浓度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。度升高而吸光度表

5、现为收束的工作曲线。P P表表示参数之意,由示参数之意,由3 3个参数(个参数(S1AbsS1Abs、k k、a a)参与)参与计算。计算。S1AbsS1Abs表示试剂空白,表示试剂空白,K K表示校准所得斜表示校准所得斜率,率,a a表示近似常数。表示近似常数。logit-log4plogit-log4p对数函数法中的一种,适用于浓度升对数函数法中的一种,适用于浓度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。高而吸光度表现为收束的工作曲线。样条函数法(样条函数法(splinespline):是将每一标准液测定的):是将每一标准液测定的吸光度连接起来(点对点),形成一个完整曲线吸光度连接起来(点对点),

6、形成一个完整曲线,即为曲线拟合。该曲线拟合优于折线法校准。,即为曲线拟合。该曲线拟合优于折线法校准。logit-logXplogit-logXp与样条函数法与样条函数法抛物线型抛物线型(左下图左下图),则多考虑用,则多考虑用logiclogic方法拟合。方法拟合。曲线类型不确定时,或校准曲线类型如图曲线类型不确定时,或校准曲线类型如图12-3712-37所示所示的的S S型非线性校准类型,则多考虑型非线性校准类型,则多考虑SplainSplain方法拟合。方法拟合。校准品的选择及准备校准品的选择及准备校准品:含有已知量的欲测物,用以校准该测定方法的数值,它与该方法、试剂、仪器是相关联的。校准品

7、的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统性误差。l最好为人血清基质,减少基质效应l仪器、试剂、校准品的配套性l如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质l要有明确的不确定度l冰冻产品的处理步骤冰冻产品的处理步骤:从从-70-70或或-20-20冰箱中取出冰箱中取出样本,置室温(样本,置室温(18-2518-25)下平衡,使之完全融化下平衡,使之完全融化,温和混匀。,温和混匀。l冻干产品的复溶步骤:冻干产品的复溶步骤:从冰箱中取出样本,置室从冰箱中取出样本,置室温(温(18-2518-25)下平衡,并放置在水平桌面上,轻下平衡,并放置在水平桌面上,轻拍小瓶,以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部,小

8、拍小瓶,以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部,小心拔开胶塞,采用心拔开胶塞,采用已校准的移液管已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确沿瓶壁缓慢精确加入规定体积的去离子水,压胶塞到原位后置室温加入规定体积的去离子水,压胶塞到原位后置室温下使之完全溶解,温和混匀。下使之完全溶解,温和混匀。应按厂家提供说明书操作应按厂家提供说明书操作。校准品浓度水平及个数选择校准品浓度水平及个数选择 校准至少包含你需要报告结果的内容校准至少包含你需要报告结果的内容/范围。范围。校准范围也定义为分析方法的工作范围。校准范围也定义为分析方法的工作范围。个数要与仪器要求相匹配个数要与仪器要求相匹配案例分析案例分析一、现象:一、现象:某

9、品牌某品牌HCYHCY试剂(仪器:雅培试剂(仪器:雅培 C8000 C8000),校准无法通过),校准无法通过,出现,出现“校准失败校准失败”的报警。的报警。试剂参数为:试剂参数为:Primary wavelengthPrimary wavelength:340nm340nm;Secondary wavelengthSecondary wavelength:700nm700nm;Main read time Main read time:31-3331-33;Blank read time Blank read time:26-2826-28;Sample volume Sample volu

10、me:10ul10ul;R1 reagent volume R1 reagent volume:185ul185ul;R2 reagent volume R2 reagent volume:50ul50ul;Calibration method Calibration method:SplineSpline;校准品个数设置:校准品个数设置:3 3;浓度分别设置为:浓度分别设置为:0 0、1010、33umol/L33umol/L。二、了解情况:二、了解情况:查看校准结果,发现其每个浓度的吸光度实查看校准结果,发现其每个浓度的吸光度实际在该仪器上已做出测定,分别为:际在该仪器上已做出测定,分别为

11、:0 0:-0.0027 100.0027 10:-0.0344 33-0.0344 33:-0.0738-0.0738,但参,但参与最终结果计算的与最终结果计算的Cal FactorCal Factor(校准因数)却(校准因数)却显示为显示为0 0,说明该仪器并未通过所测定的吸光度,说明该仪器并未通过所测定的吸光度进行曲线拟合,故出现进行曲线拟合,故出现“校准失败校准失败”报警。报警。三、处理三、处理:1.1.分别对分别对10umol/L10umol/L、33umol/L33umol/L的校准品进行对倍的校准品进行对倍稀释,得到稀释,得到5umol/L5umol/L、16.5umol/L16

12、.5umol/L浓度的校准浓度的校准;2.2.把参数中校准品个数修改为:把参数中校准品个数修改为:5 5;3.3.浓度设置修改为浓度设置修改为0 0、5 5、1010、16.516.5、33umol/L33umol/L。4.4.仍采用仍采用SplineSpline定标模式重新进行校准,后校准定标模式重新进行校准,后校准顺利通过,结果如下:顺利通过,结果如下:0 umol/L0 umol/L5 umol/L5 umol/L10 umol/L10 umol/L16.5 16.5 umol/Lumol/L33 umol/L33 umol/LCal Cal FactorFactor-87.2-87.2

13、-213.5-213.5-279.6-279.6-365.3-365.3吸光度吸光度-0.0032-0.0032-0.0195-0.0195-0.0366-0.0366-0.0558-0.0558-0.0744-0.07445 5、之后校准显示通过,质控在控,证明校准成功、之后校准显示通过,质控在控,证明校准成功四、分析四、分析:1.1.全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或非线性的选择。当我们对其进行设置时,会根据非线性的选择。当我们对其进行设置时,会根据试剂盒的反应原理选择合适的校准模式。试剂盒的反应原理选择合适的校准模式。2.2.通常情况下,

14、常规的生化项目我们会选择线性模通常情况下,常规的生化项目我们会选择线性模式校准,而免疫比浊项目我们会选择非线性模式式校准,而免疫比浊项目我们会选择非线性模式校准。校准。3.3.若选择线性校准,往往我们只需带一个校准品进若选择线性校准,往往我们只需带一个校准品进行两点校准即可行两点校准即可。4.4.若选择非线性校准时,我们会带多个浓度校准品若选择非线性校准时,我们会带多个浓度校准品进行多点校准。进行多点校准。5.5.不同的仪器,在做非线性校准时所要求的校准品不同的仪器,在做非线性校准时所要求的校准品个数是不同的。个数是不同的。例如:例如:日立、奥林巴斯等仪器,要求至少带三个浓度的日立、奥林巴斯等

15、仪器,要求至少带三个浓度的校准品即可进行非线性拟合;校准品即可进行非线性拟合;贝克曼、东芝等仪器,则要求至少带四个浓度的贝克曼、东芝等仪器,则要求至少带四个浓度的校准品才进行非线性拟合。校准品才进行非线性拟合。五、总结五、总结:我们在进行新项目实验前,除了选择正确的校我们在进行新项目实验前,除了选择正确的校准模式外,还要根据该仪器的性能特点,选择符准模式外,还要根据该仪器的性能特点,选择符合要求的校准品个数,以保证实验的顺利进行。合要求的校准品个数,以保证实验的顺利进行。校准频率的选择校准频率的选择理想状况下进行每批次检测前都应进行理想状况下进行每批次检测前都应进行l试剂改变了种类或更换了批号

16、试剂改变了种类或更换了批号l仪器进行了大的维护维修或更换了重要的配件,仪器进行了大的维护维修或更换了重要的配件,如光源灯、滤光片等如光源灯、滤光片等l室内质控出现了趋势性变化或飘移(系统性误室内质控出现了趋势性变化或飘移(系统性误差);或者超出了实验室规定接受限,采取了一差);或者超出了实验室规定接受限,采取了一般性纠正措施后,不能识别和纠正问题时般性纠正措施后,不能识别和纠正问题时l厂家试剂有明确校准时限规定的厂家试剂有明确校准时限规定的校准后的验证校准后的验证校准后用校准品当样本进行测试,看其值与定值之间的差异测定室内质控,看结果是否在控。参加室间质评或返测已知浓度的室间质评样本。记录每次

17、校准结果,与之前的校正结果进行比较。记录每次校准结果,与之前的校正结果进行比较。问题讨论问题讨论 定值质控品是否可以替代校准品?定值质控品是否可以替代校准品?空白校准的选择?空白校准的选择?K K值究竟该选择理论、实测、校准值究竟该选择理论、实测、校准K K值?值?零度水平是否均可以用水来代替?(零度水平是否均可以用水来代替?(LPaLPa)校准品的保存与使用?校准品的保存与使用?室内质控失控是否都应进行校准纠正?室内质控失控是否都应进行校准纠正?不同批号的校准品使用和对不同批号的校准品使用和对k k值的影响?值的影响?校准品是否可以通用于各仪器和方法,测量次校准品是否可以通用于各仪器和方法,测量次 数?数?

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