1、体液感染免疫检查,南方医院医学检验系 李海侠,血清免疫球蛋白检测,1,免疫球蛋白（Ig）,一组具有抗体活性的球蛋白，由浆细胞合成与分泌,存在于血液、体液、外分泌液和部分细胞的膜上,分为IgG、 IgA、 IgM、 IgD、 IgE,免疫球蛋白G检测,IgG为人体含量最多和最主要的Ig，占总Ig的7080 对病毒、细菌和寄生虫等有抗体活性 能够通过胎盘 参考值：7.016.6g/L 临床意义： IgG增高:各种慢性感染、慢性肝病、胶原血管病、淋巴瘤以及自身免疫性疾病；单纯性增高见于免疫增殖性疾病 IgG降低:先天性和获得性体液免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、代谢性疾病等,免疫球蛋白A检测,IgA分为
2、血清型IgA与分泌型IgA（SIgA） 血清型IgA占血清总Ig的1015 SIgA由呼吸道、消化道和泌尿生殖道的淋巴样组织合成，参与这些部位的局部感染、炎症或肿瘤 参考值：血清IgA为0.73.5g/L；SIgA：唾液为0.3g/L，泪液为3080g/L，初乳为5.06g/L，粪便为1.3g/L 临床意义： IgA增高：见于IgA型MM、SLE、类风湿关节炎、肝硬化等 IgA降低：见于反复呼吸道感染、非IgA型MM、重链病、轻链病、免疫缺陷、自身免疫性疾病和代谢性疾病等,血清M蛋白检测,M蛋白又称为单克隆免疫球蛋白，是一种单克隆B细胞增殖产生的具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子及其分子
3、片段。 参考值：蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法：正常人为阴性 临床意义：检测到M蛋白提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于：多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、重链病、轻链病、半分子病等,2,白蛋白,1,: 血清类黏蛋白, 1 抗胰蛋白酶,: 结合珠蛋白, 2 巨球蛋白, 脂蛋白,: 转铁蛋白, 血液结合素, C3补体,: 免疫球蛋白,IgA IgM IgG,正常人,IgG型浆细胞骨髓瘤,原发性巨球蛋白血症,多克隆丙种球蛋白血症,低丙种球蛋白血症,免疫固定电泳图谱示例（IgA-型M蛋白） 、G、A、M分别代表覆盖含抗，抗，抗IgG，抗IgA和抗IgM的抗血清；箭头所指为加样处,Ig M k 型单克隆抗体
4、带,Lambda型自由轻链单克隆抗体,多发性骨髓瘤,注意： 有些轻链病或重链病的M蛋白峰并不明显，富含类风湿因子的血清、溶血标本有些却可以出现类似M蛋白峰的电泳区带，所以要结合其他检测进一步分析判断。,血清补体检测,2,肿瘤标志物检测,3,全球肿瘤发病率逐年升高，呈年轻化趋势，以北美和澳洲发病率最高。,肿瘤现状-世界,早期诊断与定位困难，死亡率高，中国为死亡率最高的区域之一。,CA Cancer J Clin, 2013,CA Cancer J Clin, 2013,CA Cancer J Clin, 2013,中国城市/农村恶性肿瘤发病构成,The incidences and mortal
5、ities of major cancers in China, 2009. Chin J Cancer. 2013 Mar;32(3):106-12.,中国城市/农村恶性肿瘤死亡构成,当前有多种因素导致我国癌症患者增加！,环境污染/雾霾,不良习惯,食品安全,生活压力,恶性肿瘤能否早期诊断,Question,病理检查,恶性肿瘤诊断手段,影像学检查,实验室检查,细胞学检查,活体组织检查,X线,CT、ECT、PET-CT,MRI,肿瘤标志物,常用标志物：AFP、PSA、CEA等,新标志物：miRNAs等,蛋白质肿瘤标志物 甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原(CEA)、组织多肽抗原(TPA)、前列腺特异抗
6、原(PSA)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC) 糖脂肿瘤标志物 癌抗原-50(CA-50)、癌抗原72-4(CA72-4)、糖链抗原19-9(CA19-9)、癌抗原125(CA125)、癌抗原242(CA242)、癌抗原15-3(CA15-3) 酶类肿瘤标志物 前列腺酸性磷酸酶(PAP)、神经元特异性烯醇化酶、异常凝集酶原、-L-岩藻糖苷酶(AFU),特异性好,与肿瘤类型 (大小/分期) 有关,灵敏度高，对肿瘤能早期发现。,具有器官特异性,监测肿瘤治疗效果,监测肿瘤的复发,理想的肿瘤标志物,预测肿瘤的预后,甲胎蛋白的测定(-fetoprotein，AFP),AFP是胎儿发育早期合成的一种糖蛋白(1
7、球蛋白)，分子量70kD，胎儿出生后不久即逐渐消失。 参考值：RIA、CLIA、ELISA: 血清AFP 25g/L,HCC患者血清中AFP明显增高，约77%的患者400ng/mL, 18%的患者无AFP升高。 病毒性肝炎、肝硬化患者有不同程度的升高，但常 100ug/mL。 肝胆管癌时，AFP多正常,应用：1 、对高危人群（慢性肝炎或者肝硬化） 进行普查发现及指导原发性肝癌的治疗 2、 用于生殖腺胚胎性肿瘤的诊断及监测 治疗如：睾丸癌、畸胎瘤,妇女妊娠3个月后AFP开始升高，78个月达到高峰（400ug/l)，胎儿出生后3周恢复正常。水平异常升高 提示胎儿有神经管畸形的可能。,AFP alp
8、ha-fetoprotein,癌胚抗原（carcino-embryonic antigen，CEA）,1965年CEA发现于成人结肠癌组织中，分子量约为200kD，可溶性糖蛋白，主要存在于成人癌组织以及胎儿的胃肠管组织中，故名癌胚抗原，是一种广谱肿瘤标志物。 参考值：血清CEA 5.0g/L,(CEA carcinoembryonic antigen),主要产生于胎儿的胚胎期 胃肠道 胎儿血清 出生后组织含量很低 成年人只微量发现于 肠道 胰腺 肝脏 在健康成人中很少升高,病理情况 胃肠道的恶性肿瘤会升高 结、直肠癌 一些良性疾病也会升高， 但很少会超出10ng/mL 肝炎、肝硬化、胰腺炎 结
9、直肠息肉、结肠炎等,Non-smoking:2.5-5.0ng/ml Smoking :7-10ng/ml,前列腺特异性抗原 (PSA),参考值：血清 t-PSA 0.25,PSA是一种由前列腺上皮细胞分泌的蛋白酶。在血清中PSA 以两种生化形式存在： 一部分(5%40%)是以低分子量(33kD)的 游离PSA（f-PSA）形式存在； 大部分(60%90%)是以PSA和1抗糜蛋白酶、 2-巨球蛋白等结合的形式存在， 称复合PSA(c-PSA)。 总PSA（t-PSA）,包括血清中f-PSA和c-PSA。,血清PSA升高 前列腺癌患者升高，但大约25%患者，其PSA水平正常；而大约有50%的良性
10、前列腺疾病患者PSA水平增高。为增加PSA对前列腺癌检测的敏感性和特异性，可使用PSA年龄特异性参考范围，PSA密度、PSA速率、f-PSA/t-PSA比值等； 前列腺肥大，前列腺炎和泌尿生殖系统的疾病，也可见血清PSA水平升高，故当PSA在4.0g/L10.0g/L的灰区时，须进行f-PSA和 f-PSA/t-PSA比值的测定。,存在假阳性率（高达30） 1、肛门指诊、膀胱镜、前列腺物理检查会PSA的异常分泌。因此应在上述检查前抽血化验。 2、骑单车后半小时内。 3、年龄因素：随着年龄的增长，如老年人前 列腺会发生增大，结果导致PSA的合成分泌 增多。（不同年龄段，参考范围不同） 4、性生活
11、：在进行前列腺特异性抗原检查之 前，至少应该有两天的时间不能进行性生 活。,PSA prostatic acid phosphatase,糖链抗原15-3 ( CA 15-3),CA15-3是一种乳腺癌相关抗原，属糖蛋白，分子量超过400kD，可用一对单克隆抗体（MAb115D8和MAbDF3）进行双抗体夹心法来识别。与CA15-3同类的多态性上皮粘蛋白抗原还有MCA，CA27-29，CA549等。 参考值：血清CA15-328kU/L, 乳腺癌，但在乳腺癌的早期阳性率较低约为30%， 转移性乳腺癌阳性率可达80%； 其他恶性肿瘤，如肺癌，结肠癌，胰腺癌，卵巢癌， 子宫颈癌，原发性肝癌等，也有
12、不同程度的阳性率； 肝脏，胃肠道，肺，乳腺，卵巢等非恶性肿瘤疾病， 阳性率一般低于10%。,（2）糖链抗原125 ( CA 125),CA125是很重要的卵巢癌相关抗原，1981年Bast发现。CA125是一种大分子多聚糖蛋白。 参考值 ：血清CA 125 35kU/L,卵巢癌的筛查和诊断 卵巢癌82%、卵巢良性病6%。 卵巢癌疗效观察的指标 卵巢癌预后的判定指标 若以每月增长速度25U/ml做 为上限值，则CA12-5诊断复发性卵巢癌的特异度就可 达100%。 子宫腺肌病的诊断 子宫腺肌病患者CA12-5水平显著高于正常妇女及子宫肌瘤者，其值是正常的10倍，阳性率达87.1%，有助于腺肌病和
13、子宫肌瘤的鉴别诊断。,CA 125 卵巢癌相关抗原,上皮性卵巢癌的主要标记物,CA125与CA72-4联合检测，作为诊断原发性及复发性卵巢肿瘤的标志，特异性可达100%,NSE是烯醇化酶的一种同功酶，烯醇化酶同功酶根据，三个亚基的不同，可分为、和五种二聚体同功酶。 亚基组成的同功酶属神经元和神经内分泌细胞特有，故命名为神经元特异性烯醇化酶， NSE是一种酸性蛋白酶，参与糖酵解。肿癌组织糖酵解作用加强，细胞增殖周期加快，细胞内的NSE释放进入血液增多，导致此酶在血清内含量增高。,参考值：血清NSE15g/L,神经元特异性烯醇化酶（NSE）,良性疾病：良性肺病（5%12g/L） 脑部疾病：特别是在
14、脑血管性脑膜炎、脑缺血和梗死、 头部外伤、脑部炎性疾病、急性感染性多发性神经炎 等患者的脑脊液中的NSE水平升高。 非恶性肿瘤患者的NSE水平升高，可12g/L， 尿毒症患者以及50%的怀有神经管缺陷胎儿的妇女NSE 也会升高。 标本：标本溶血，NSE升高。,NSE（神经特异性烯醇化酶）,监测神经内分泌肿瘤患者的疗效和病程，尤其适用于 小细胞肺癌和神经母细胞瘤。由于临床敏感度和特异 性问题，NSE检测不适用于临床筛选或辅助诊断。,一种肿瘤可分泌多种肿瘤标志物，而不同的肿瘤或同种肿瘤的不同组织类型可有相同的肿瘤标志物。因此，单独检测一 种肿瘤标志物，可能会因为测定方法的敏感性不够而出现假阴性，联
15、合检测多种肿瘤标志物有利于提高检出的阳性率。为此，选择一些特异性较高，可以互补的肿瘤标志物联合测定，对提高肿瘤的检出率是有价值的。常用肿瘤标志物的联合使用。,肿瘤标志物的联合应用,不同脏器肿瘤标志物的首选及组合,病毒性肝炎标志物检测,4,肝炎病毒 HEPATITIS VIRUSES,HAV 甲型肝炎病毒 HBV 乙型肝炎病毒 HCV 丙型肝炎病毒 HDV 丁型肝炎病毒 HEV 戊型肝炎病毒 HFV 已型肝炎病毒 HGV 庚型肝炎病毒 TTV TT型肝炎病毒,乙型肝炎病毒标志物检测,全球约有20亿人曾感染过乙肝 其中3.5亿人为慢性HBV感染者,几乎一半在中国,http:/www.who.int
16、/mediacentre/factsheets/fs204/en,慢性乙肝全球流行分布图,china,肝癌,肝硬化,慢性肝炎,HBV携带者,中国乙肝病情发展情况,40%,20%,80%,14%,形态结构SHAPE AND STRUCTURE,There are 3 particles in patients blood Dane particle Dane颗粒（大球形颗粒） small spherical particle 小球形颗粒 tubulose particle管形颗粒,Dane particle,Complete particle, infective HBV spherical，d
17、ouble capsid球形,双层衣壳。 outer capsid=envelope 外衣壳=包膜(脂质双层+蛋白质) HBsAg等 inner capsid内衣壳： HBcAg、HBeAg internal内部： DNA- circular, double- stranded环状 双链 DNA polymerase 多聚酶,抗原组成Antigen of HBV,Antigen of outer capsid 外衣壳抗原 hepatitis B surface antigen HBsAg表面抗原 indicates that virus replication is occurring in
18、the liver 说明病毒在肝中复制（机体受感染标志） four phenotypes：adr,adw,ayr,ayw antiHBs:neutralization antibody中和抗体,Antigens of inner capsid 内衣壳抗原 hepatitis B core antigen HBcAg核心抗原 not found in blood一般不能检出 antiHBc nonneutralization antibody非中和抗体 Core IgM indicates recent infection. 抗HBc IgM说明HBV复制 Core IgG indicates
19、exposure to HBV,hepatitis B e antigen e抗原HBeAg the best correlate to the presence of infectious virus. 感染性病毒存在的最有效证据（复制及具传染性的标志） anti-HBe indicates low infectivity in a carrier 抗HBe说明病毒感染性较低（是预后良好的征象）,Pathogenesis and Immunity,source of infection传染源 patients or carriers 急性、慢性患者或无症状HBsAg携带者 route of
20、transmission传播途径 sexual routes parenteral肠胃外的 routes injection of the virus into the blood stream contaminated blood and blood components by transfusion, needle sharing, acupuncture针灸, ear piercing, or tattooing perinatal围产期 routes contact with the mothers blood at birth and in mother milk,血清标志物 HBs
21、Ag、 抗HBs HBeAg、 抗HBe HBcAg、 抗HBc Pre-S2、 抗Pre-S2,Laboratory Diagnosis,乙肝“两对半”及临床意义 HBsAg、 抗HBs HBeAg、 抗HBe HBcAg、 抗HBc,乙肝表面抗原携带者,乙肝两对半常见结果模式及其意义,急性肝炎早期，传染性强,乙肝两对半常见结果模式及其意义,急性或慢性现症感染，传染性强。,“大三阳”,乙肝两对半常见结果模式及其意义,乙肝趋向恢复，属慢性携带，传染性弱,“小三阳”,乙肝两对半常见结果模式及其意义,急性感染或是慢性乙肝表面抗原携带，传染性弱,“小二阳”,乙肝两对半常见结果模式及其意义,急性乙肝恢
22、复期或既往感染,乙肝两对半常见结果模式及其意义,乙肝疫苗接种后,乙肝两对半常见结果模式及其意义,未感染过HBV,乙肝两对半常见结果模式及其意义,乙肝两对半罕见结果模式及其意义,急性感染趋于恢复，血清学转换,不同亚型HBV二次感染；血清学转换,乙肝两对半罕见结果模式及其意义,急性感染趋向恢复,乙肝两对半罕见结果模式及其意义,基因突变；钩状效应；爆发性肝炎；抗原表达量低，检测不出,乙肝两对半罕见结果模式及其意义,感染免疫检测,5,病毒感染免疫检测,TORCH试验 是妇科产前的常规检查项目 包括：弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒I型和II型的病原抗体检测,风疹病毒检测,儿童是主要易感者 呼
23、吸道传播 局部淋巴节增殖后经病毒血症散播全身 可垂直传播导致胎儿先天性感染 病后可获得终身免疫力 早孕发生胎儿先天性风疹感染，新生儿致畸致残率可达80% 主要损害五官神经系统和智力，有流行性,单纯疱疹病毒检测,单纯疱疹病毒（HSV）是一种DNA病毒 HSV属疱疹病毒亚科，单纯疱疹病毒属，可分为HSV-1和HSV-2两个亚型 HSV-1型主要引起生殖器以外的部位 感染-2型主要引起生殖器部位皮肤粘膜的感染,临床意义,HSV-1感染： 口咽部疱疹 疱疹性角膜结膜炎 皮肤感染（如疱疹性湿疹） 散发性脑炎,HSV-2感染： 生殖器疱疹 子宫颈癌,巨细胞病毒检测,巨细胞病毒（CMV）属于人类疱疹病毒，具
24、双链DNA 多呈不显性感染或者潜伏感染 CMV围生期感染是引起胎儿畸形的主要原因之一，还可引起早产、胎儿宫内发育迟缓等 抗CMV测定，双份血清抗体水平呈4倍或4倍以上增长时，有诊断意义，特异性抗CMVIgM阳性为CMV近期感染的指标。 临床意义：产前诊断的指标；器官移植病人的筛查,弓形虫检测,弓形虫抗体测定 人畜共患性疾病 传染源：猫和其他宠物 症状： 轻型：无症状，血清中可检测到抗体 重型：高热，肌肉、关节疼痛，淋巴结肿大 孕妇急性弓形虫感染，弓形虫可通过胎盘感染胎儿 检测方法：IFT、ELISA检测IgM抗体 临床意义：产前诊断指标,性传播疾病病原体检测,6,艾滋病（AIDs）,世界感染人
25、口：51，271，288 （2015/10/11/10：50）,http:/www.med.sc.edu:85/lecture/hiv-world.htm,全国累计报告HIV/AIDS分布地图（截至2010年6月30日）,全国累计报告艾滋病病人数分布地图 （截至2010年6月30日）,流行因素广泛存在，一般人群感染增加,HIV模型图,脂双层膜,gp120,gp41,包膜糖蛋白,p24衣壳蛋白,p14内膜蛋白,P7、9核心衣壳蛋白,逆转录酶,蛋白酶,整合酶,RNA,艾滋病的传播,两个必要条件： 皮肤有缺口或粘膜暴露 有足够量的病毒进入体液 传染源： AIDS病人 无症状HIV感染者,体液中的HI
26、V,可以传播HIV的体液,不传播HIV的体液,传播途径,日常生活接触不会传染艾滋病,窗口期,HIV-1P24抗原 HIVRNA,HIV检测面临的挑战,病毒自身的特点：高度变异 防治工作需要：缩短窗口期、发病率监测、降低成本/简化样本采集和检测方法，提高方法的适用性 针对新问题，建立新方法（自然感染与疫苗应答、新药物的应用）,HIV感染各种检测方法的窗口期,核酸检测：窗口期约10天 HIV Ab检测：窗口期约21天 HIV Ag或HIV Ag/Ab联合检测：窗口期约15天,1、病原学检测方法 核酸检测（cDNA测定-PCR、RNA测定-病毒载量） 病毒培养分离 P24抗原检测 2、抗体检测方法
27、初筛：1）酶联免疫吸附法 ELISA：第三代、第四代 2）快速检测 ：金标、硒标 3）简单法 PA: 明胶颗粒凝集 4）电化学发光法 ECIA 确证：1）免疫印迹法 WB:（Western Blot） 2）条带免疫印迹法 SIA或LIA 3）放射免疫沉淀试验 RIPA 4）间接免疫荧光试验 IFA 3、其他相关检测方法 免疫功能测定：CD4/CD8检测,检测方法,HIV抗体确认,目的是排除初筛的假阳性 有多种方法，如免疫印迹法(WB)，条带免疫印迹（LIA），免疫荧光法(IFA)等 检测的是不同HIV抗原的抗体 结论：HIV抗体阳性(Positive)，HIV抗体阴性(Negative)，HI
28、V抗体不确定(Indeterminate),HIV抗体确认的标准,阳性：二条env带或一条env带加一条p24带 阴性：无任何条带 不确定：有一个或几个条带但又不满足阳性标准,1,gP160,gP120,P66,P55,P51,gP41,P31,P24,P17,血清对照,P39,HIV-2特异带,1,阴性,阳性,HIV抗体不确定(Indeterminate),原因：HIV感染早期； 非特异反应，与其他病原体的交叉反应 在正常人群中的发生率较高，10%15% 处理方法：随访36个月和检测HIV的其他指标，如p24，HIV RNA等,梅毒病,由梅毒螺旋体所致的慢性疾病 传播途径：性接触、接吻、哺乳
29、、对梅毒患者的检查、手术意外、胎盘传播等 感染特点： 早期梅毒：多以皮肤、粘膜和淋巴结的典型性损害（硬性下疳、梅毒疹） 晚期梅毒：可累及心脏、心血管和中枢神经系统，如梅毒性心脏病、梅毒性骨膜炎、脊髓痨等,梅毒血清学试验的分类,非梅毒螺旋体抗原血清试验 性病研究实验室试验（VDRL） 不加热血清反应素试验（USR） 血浆反应素环状卡片试验（RPR TRUST） 梅毒螺旋体抗原血清试验 梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA TPPA） 荧光梅毒螺旋体吸收试验（FTAABS） 检测梅毒螺旋体IgM抗体的血清学试验,非梅毒螺旋体血清试验,抗类脂抗原的抗体 即是反应素 是机体对损害细胞和梅毒螺旋体表面所释放
30、的脂类物质的免疫反应 在感染后3-4周产生 是IgM和IgG的混合体 未经治疗可长期存在 经正规治疗后 这种抗体减少 转成阴性 是用心磷脂、卵磷脂和胆固醇作检测抗原,所有的非梅毒螺旋体血清试验的抗原基本成分都是一样的 包括有VDRL试验 USR试验 RPR 试验TRUST(甲苯胺红)试验 基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇 抗原抗体结合形成复合物 凝集成网状沉淀颗粒 被肉眼所见 上述方法的敏感性和特异性都基本相似,梅毒螺旋体血清试验,用梅毒螺旋体作抗原 检测血清中特异的抗梅毒螺旋体抗体 有:梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA或TPPA试验) 荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS试验) 该两个试验有很好的特异性用于确诊试验,梅毒螺旋体IgM抗体有很强的特异性 IgM抗体与梅毒螺旋体活动性感染成正相关关系 即有感染而出现 随感染消失而消失 IgM抗体在感染后2周即可出现 治疗后消失也快(与反应素比较) IgM抗体是一种聚合体 不能通过胎盘和脑膜 故可用于检测先天梅毒和神经梅毒,THANK YOU!,
