1、第八章 细菌感染的检查方法与防治原则,细菌学诊断,细菌感染的诊断内容包括: 查病原菌及其成分（抗原、代谢产物）细菌学诊断 查特异性抗体: 用已知的抗原检测标本中未知的抗体血清学诊断 查致病菌特异性DNA片段为目的基因诊断,细菌学诊断,（一） 标本的采集和送检原则,严格执行无菌操作,不同期不同标本,用抗生素以前,采集病变明显部位,运送注意保存,标本必须新鲜,细菌感染的检查方法与防治原则,一、病原菌检测,（二）病原菌检测的方法 1、形态结构检查 2、分离培养鉴定 3、抗原检测 4、其他检测,（二）致病菌的检验程序,药物敏感试验,标本,直接涂片检查,分离培养,生化试验,血清学试验,动物试验,明确诊断
2、,初步诊断（结合临床）,分子生物学技术,其他检测技术,1.形态结构检查,一般程序： 标本涂片 固定 染色 镜检 （观察镜下特征：菌体形态、排列、染色性及特殊结构等） 初步鉴定,炭疽杆菌,病原菌检测的主要技术,（1）显微镜放大技术 A.普通光学显微镜 以可见光为光源分辨率： 0.25m 放大倍数： 1000,病原菌检测的主要技术,B. 电子显微镜 以电子流代替光波，电磁圈代替放大透镜 分辨率：1nm 放大倍数：10万以上 电镜标本制作复杂且必须真空干燥状态下观察-不能观察活的微生物,猴子脾脏上炭疽杆菌,病原菌检测的主要技术,C. 其他显微镜:适用不同观察目的 暗视野显微镜 相差显微镜 荧光显微镜
3、 共聚焦显微镜,病原菌检测的主要技术,（2）染色技术 细菌易与带正电荷的碱性染料结合而着色 简单染色法：只用一种染料，过程简单， 可观察菌体形态、排列方式 复合染色法：用二种或二种以上染料多步骤 染色,能反映菌体内部染色特征,病原菌检测的主要技术,革兰染色法：革兰阳性菌（紫色） 革兰阴性菌（红色） 抗酸染色法：抗酸阳性菌（红色） 抗酸阴性菌（蓝色） 特殊染色法：细菌荚膜、芽孢、鞭毛、 细胞壁、核质等染色,炭疽杆菌（芽孢）,粪产碱杆菌鞭毛染色（周鞭毛）,革兰染色法(Gram stain)：标本涂片，固定 结晶紫初染 碘液媒染 95%乙醇脱色 沙黄复染 革兰阳性菌（G+）蓝紫色； 革兰阴性菌(G-
4、)淡红色。,革兰阳性菌,革兰阴性菌,返回,抗酸染色法(acid-fast stain) ：以5石炭酸复红染色，再用3盐酸酒精脱色，然后用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色(+)，其他细菌和背景物质为蓝色(-)。,抗酸染色法分枝杆菌属的实验诊断,实验过程：取痰液 涂片（略厚）干燥固定 石炭酸复红染色810分钟后用3%的盐酸酒精脱色约12分钟，脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止 水洗后，用碱性美蓝复染1分钟水洗，印干 镜检,返回,2.分离培养与鉴定（一般程序）,标本（或增菌后） 接种,普通琼脂平板,血琼脂平板,选择培养基平板,培养特征： 营养、生长条件 菌落特征 溶血环特征等,纯 菌,染色镜检：根据形态
5、特征初步鉴定,生化反应：如肠道杆菌的乳糖发酵试验纯菌,炭疽杆菌（普通平板）,2.分离培养与鉴定,药敏试验,血清学鉴定：用已知的抗体检查未知的抗原 鉴定细菌的种、型,毒力鉴定,内、外毒素检测 动物试验：家兔、豚鼠等,纸片法：只可定性 试管法：可定量（测MBC、MIC）,3、其他检测,代谢产物的检测： 如气相色谱法鉴定厌氧细菌 PCR检测核酸： 注意防止污染、易出现假阳性 基因芯片,二、血清学诊断,原理：用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。（用已知Ag测未知Ab） 标本：血清和其他体液 标本要求:双份血清(早期；恢复期) 诊断
6、恢复期或一周后血清Ab效价比早期升高4倍及4倍以上 现症感染,血清学诊断常用方法,凝集试验： 肥达试验（Widaltest）-诊断伤寒、副伤寒 外斐试验（Well-Felix）-诊断立克次体病 中和试验： 抗“O”试验-诊断链球菌性风湿病,肥达试验 是一种试管凝集反应。用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与病人血清作定量凝集试验,以测定患者血清中无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊断的参考。,特异性预防与治疗,人工主动免疫 是将疫苗及类毒素接种于人体，使机体主动产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。 自然免疫 患病、隐性感染 人工免疫 疫苗、类毒素 人工被动
7、免疫 是注射含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体、细胞因子或致敏的免疫细胞等，使机体立即获得特异性免疫，因而作用及时。人工被动免主要用于急性传染病的治疗或紧急预防。,自然免疫 胎盘、初乳 人工免疫 抗毒素、丙球,人工被动免疫,1抗毒素（antitoxin） 抗毒素能中和相应外毒素，阻断各种毒素的作用。注射前务必先做皮肤试验，测试有无超敏反应。必要时可采用脱敏疗注射法。应用人源性免疫球蛋白可避免发生超敏反应。 2抗菌免疫血清（antibacterial immune serum） 含有抗原特异性抗体的血清，是用细菌免疫动物制成的。目前已基本淘汰。只是某些多重耐药菌（如铜绿假单胞菌）感染时，仍可考虑抗菌血清治疗。,人工被动免疫,3胎盘（丙种）球蛋白(immune serum globulins) 是从健康产妇的胎盘和婴儿脐带血中提取而制成，主要含有丙种球蛋白。胎盘球蛋白主要用于麻疹、甲型肝炎、脊髓灰质炎等病毒性疾病的紧急预防。 4细胞因子制剂(cytokines) 是近年来研制的新型免疫治疗剂，主要试用于一些病毒性疾病和肿瘤中，例如转移因子(transfer factor,TF)、干扰素、IL-2、LAK细胞(lymphokine-activated cell)等。,为伤病注射破伤风抗毒血清，使参战人员受伤后的死亡率明显降低,人工主动免疫与人工被动免疫的比较,
