1、血液标本的采集,毛细血管采血法操作步骤,1.WHO 推荐左手中指或无名指指尖内次，半岁以上儿童可取手指，半岁以下通常用拇指或足跟采血 2. 用75%酒精棉球擦拭采血部位，用采血针刺入皮肤2-3mm 3.用无菌棉球擦去第一滴血，用微量吸管吸取一定血液,改良后毛细血管取血法,激光采血法,注意事项,（1）采血部位的选取 （2）保证一人一针防止交叉感染 （3）消毒后酒精一定要擦干净，否则血液流出后会四处扩散。,静脉取血法,目前国内已推广使用真空采血法 真空采血法具有防止血液污染、采血量准、便于血液与抗凝剂混合、有利于自动分析等优点,真空采血管的种类及用途,常用采血管,全血细胞计数,全自动血细胞计数仪,
2、全血细胞计数分为：显微镜法和仪器法 仪器法基本原理库尔特原理 现代新型检验仪器应用了流式细胞技术、半导体激光技术和荧光染色技术等先进技术为临床医生提供了准确的检测结果,现代血细胞细胞检测原理,细胞计数板的结构,用优质厚玻璃制成，每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池计数池双侧各有一支柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池,计数池 为长、宽各3.0mm的方格。被单线分为9个大方格每个大格边长为1.0mm，其容积为0.1mm*3，四角的四个大方格是白细胞计数区。其中，中央大方格用双线分成25个中方格，每个中方格又被分为16个小方格，共400个方格。四个角及中间的中方格用于计数
3、红细胞,红细胞计数方法,1）加稀释液 取红细胞稀释（hayem)液4ml于小试管内。 2）加血 用微量吸管加血20ul后混均 3）静置3-5min后充池镜检 4）充池计数,RBC计算公式,5）红细胞数/L=N*25/5*10*106*200 N为：五个中方格的RBC总数 N*25/5为：中央大方格RBC总数（即：0.1mm（ul）的RBC总数） N*25/5*10为：1mm（ul）RBC总数 N*25/5*10*106为：1L的RBC总数 *200为血液的稀释倍数 公式简化后：红细胞数/L=N/100*1012 公式前面部分都是换算成每微升血多少该计数细胞；最后都是由微升换算到升，乘以10的6
4、次方,注意事项,RBC过多时，在计数时应按计数原则计数，防止漏数，或多数。 防止血液凝固,白细胞计数方法,1）加白细胞稀释液（1%冰醋酸） 0.38ml 2)加血20ul混均 3）溶血混均后静置数分钟，等液体变为棕褐色。 4）充池 静置2-3min 5）计数： 计算公式: 4各大方格内白细胞数/4*10*20*106=白细胞数/L。即四个大方格内白细胞数*0.05*109/L,注意事项,吸取稀释液和血液时要准确无误。 若白细胞数过低（15*109/L)可增大稀释倍数。 若病人血中含有大量有核红细胞是不能被稀释液破坏，可用使结果偏高，可用校正公式。WBC校正数/L=X*100/100+Y X:未
5、校正前WBC，Y：计数100个WBC所含有核红细胞数。,plt计数方法,1）加PLT稀释液(1%草酸铵） 0.38ml 2)加血20ul混均 3）溶血混均后静置数分钟。 4）充池 静置10-15min 5）计数： 计算公式:5个中方格血小板总数*109/L,PLT图片,注意事项,稀释液与血液吸取应准确 充池后应静置15min后再计数 显微镜光线不能过强，应注意与RBC碎片、结晶等杂物区别。 PLT计数应在取血后1h内完成否则结果偏低。,血涂片的制备,血涂片的制备,取末梢血一滴置于载玻片一端，用边缘平滑的推片的一端放在血滴上，血滴既延薄片散开，然后使推片以3045度夹角平稳向前推至玻片另一端。
6、一张良好的图片要具备头、体、尾分明。细胞分布均匀，两边距边缘大约1mm左右。 推片时血滴越大，速度越快，血膜越厚。反之越薄。,血涂片方法,血涂片染色,原理：wright-giemsa复合染料是由酸性伊红和碱性美兰组成。细胞染色既有物理吸附又有化学亲和。各种细胞因化学性质不同对染料亲和力也不同所以有着不同着色特点。 蛋白质所带电荷随染液PH而定，在偏酸环境所带正电荷增多而易亲和带负电荷的伊红，故染色偏红，反之则偏蓝。为使血涂片软色效果较好应配置PH6.4-6.8的缓冲液。,染色步骤,将血涂片平放在染色架上。 加瑞氏染液数滴，覆盖整个血膜，固定细胞约1min。 滴加等量或稍多的缓冲液，与染液充分混均，染色5-10min 用清水冲去染液，待干后镜检。,注意事项,血膜未干透，染色时血膜脱落。 染色时间，与染液浓度、室温有关。染液淡，室温低、细胞多则染色时间长，反之减少染色时间。 染液不能过少，以防蒸发而发生沉淀。 冲洗时不能倒掉染液，以防染液沉淀，应用清水冲掉，但冲洗时间又不能太长，防止血膜被冲掉。 染色过深，可用甲醇脱色。,外周血白细胞形态特点,外周血涂片,中性分叶,外周血白细胞,血细胞图谱,AML-M6(红白血病）,
