1、 HIV HIV检测及临床意义检测及临床意义中国每年新发现的HIV/AIDS病例数（19852002）0 05000500010000100001500015000病例数病例数年份年份AIDSHIV(+)AIDS1020023523295238126 136 230 125 947 1045HIV(+)5197171 299 216 261 274 531 1567 2649 33433306 4677 4527 13429824198519861987198819891990199119921993199419951996199719981999200020012002HIVHIV的检测HI
2、V感染可通过两种途径检测1.1.直接检测病毒或其组成部分直接检测病毒或其组成部分2.2.检测人体检测人体HIV免疫反应免疫反应HIV特异性抗体特异性抗体从感染到血清抗体阳转有一段窗口期，平均为从感染到血清抗体阳转有一段窗口期，平均为1-31-3个个月，有一小部分月，有一小部分HIVHIV感染者出现延迟反应感染者出现延迟反应HIV感染后抗原和抗体的变化及其与疾病关系HIVHIV感染人体后出现一过性病毒血症，感染人体后出现一过性病毒血症，6-86-8周后血周后血清抗体阳转，病毒滴度降低，在随后的清抗体阳转，病毒滴度降低，在随后的5-85-8年无症年无症状带毒期里状带毒期里HIVHIV抗体一直存在，
3、但病毒难查到。进抗体一直存在，但病毒难查到。进入入AIDSAIDS期后血浆中病毒再次出现。期后血浆中病毒再次出现。故诊断故诊断HIVHIV感染多数时间用抗体检测诊断，极早期感染多数时间用抗体检测诊断，极早期（窗口期）用抗原检测。（窗口期）用抗原检测。HIV抗体诊断 目前临床上实际应用的是测定特异性目前临床上实际应用的是测定特异性HIV抗体，包括抗体，包括初筛初筛和和确认确认实验。实验。一、检测试剂一、检测试剂l 筛查试剂必须是筛查试剂必须是HIV-1/2混合型、经国家药品监混合型、经国家药品监督管理局注册批准、批批检合格、临床评估质督管理局注册批准、批批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试
4、剂。量优良、在有效期内的试剂。l 目前常用的筛查试剂有目前常用的筛查试剂有酶联免疫酶联免疫、颗粒凝集颗粒凝集和和其它其它快速诊断试剂快速诊断试剂。采供血机构进行血液筛查。采供血机构进行血液筛查应采用酶联免疫试剂。应采用酶联免疫试剂。l 自采自供血的单位必须进行自采自供血的单位必须进行HIV抗体检测，在抗体检测，在尚未建立艾滋病筛查实验室的偏远地区可由经尚未建立艾滋病筛查实验室的偏远地区可由经过培训的技术人员在规定的场所用快速试剂进过培训的技术人员在规定的场所用快速试剂进行血液筛查。行血液筛查。1.ELISA方法：方法：目前目前最常用的初筛实验最常用的初筛实验，自，自19851985年首次年首次
5、检测检测HIV-1HIV-1抗体的试剂盒供市以来，已从抗体的试剂盒供市以来，已从第一代的全病毒抗原间接法发展到第四第一代的全病毒抗原间接法发展到第四代的以重组的多肽抗原及抗代的以重组的多肽抗原及抗P24P24抗体包被抗体包被的双夹心法，使窗口期缩短了的双夹心法，使窗口期缩短了2-32-3周。周。四代艾滋病酶联免疫试剂比较solidphasespecificdetection ofconjugate第一代第一代病毒裂解液病毒裂解液HIV-1IgG 抗体抗体HIV-1-IgG抗体抗体第二代第二代病毒裂解液病毒裂解液重组抗原合成肽重组抗原合成肽HIV-1/-2IgG 抗体抗体HIV-1/-2 IgG
6、抗体抗体第三代第三代病毒裂解液病毒裂解液重组抗原合成肽重组抗原合成肽HIV-1/-2/-OIgM/IgG 抗体抗体HIV-1/-2/-O病毒裂解液病毒裂解液重组抗原合成肽重组抗原合成肽HIV-1/-2/-O第四代第四代病毒裂解液病毒裂解液重组抗原合成肽重组抗原合成肽HIV-1/-2/-Oanti-p24 AbIgM/IgG 抗体抗体HIV-1/-2/-Op24 抗原抗原病毒裂解液病毒裂解液重组抗原合成肽重组抗原合成肽HIV-1/-2/-Oanti-p24 抗体抗体快速诊断试剂：快速诊断试剂：采用乳胶凝集、免疫斑点和免疫层析三种原理采用乳胶凝集、免疫斑点和免疫层析三种原理快速、不需特殊仪器快速、
7、不需特殊仪器敏感度、特异度低于敏感度、特异度低于ELISAELISA，且价格贵，且价格贵适用于血站覆盖不到的边远地区适用于血站覆盖不到的边远地区/城市大医院急诊手术前检查城市大医院急诊手术前检查快速诊断阳性结果还需经快速诊断阳性结果还需经ELISAELISA方法验证方法验证蛋白印迹实验（蛋白印迹实验（WB）广泛使用的确认实验广泛使用的确认实验用聚丙烯酰胺凝胶电泳将纯化的用聚丙烯酰胺凝胶电泳将纯化的HIVHIV蛋白抗原分开后转移到硝酸纤维膜上。标本中蛋白抗原分开后转移到硝酸纤维膜上。标本中存在的存在的HIVHIV抗体与条带上的抗原结合，再加入酶偶联的抗人抗体与条带上的抗原结合，再加入酶偶联的抗人
8、IgGIgG抗体和底物，在抗原抗体和底物，在抗原抗体结合的部位会出现有色条带抗体结合的部位会出现有色条带其可检测标本中针对其可检测标本中针对HIVHIV不同抗原不同抗原的抗体，故被用做确认试剂。的抗体，故被用做确认试剂。不同的研究机构有不同的判定标准不同的研究机构有不同的判定标准 HIV抗体确认检测流程图抗体确认检测流程图免疫印迹法免疫印迹法(HIV1/2(HIV1/2混合型混合型)HIV-1HIV-1阳性反应阳性反应可疑反应可疑反应出现出现HIV-2HIV-2指带指带HIV-1HIV-1阳性报告阳性报告可疑反应可疑反应阳性反应阳性反应阴性反应阴性反应报告报告HIV-2HIV-2血清学阳性反血
9、清学阳性反应报告必要时测核酸应报告必要时测核酸阴性报告阴性报告免疫印迹法（免疫印迹法（HIV-2HIV-2）每每3 3个月随访一次，共个月随访一次，共2 2次，仍属可疑，则作阴性报告如随访期间出现阳性反应则报告阳性次，仍属可疑，则作阴性报告如随访期间出现阳性反应则报告阳性阴性反应阴性反应阴性报告阴性报告 P24抗原测定抗原测定（一）适用范围（一）适用范围（三）结果报告和解释1、HIV-1 P24抗原的阳性结果必须经过中和试验确认。2、HIV-1 P24抗原阳性仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能依此确诊。3、HIV-1 P24抗原阴性结果只表示在本试验中无反应，不能排除HIV感染。HIV核酸检
10、测 PCR PCR对与缩短窗口期病毒抗体试验PCR缩短HCV82天23天72HBV59天34天41HIV22天11天501 1、辅助诊断、辅助诊断m某些非典型的抗体反应，特别是不确定反应时，某些非典型的抗体反应，特别是不确定反应时，RNARNA的测的测定可提供非常有用的证据。定可提供非常有用的证据。m单纯使用单纯使用RNARNA测定不能完全确定感染与否，但当测定不能完全确定感染与否，但当RNARNA测定测定出现较高拷贝数的阳性结果时（出现较高拷贝数的阳性结果时（10001000）提示感染发生的）提示感染发生的可能性非常大。可能性非常大。m使用此指标应综合其他检测数据和样品背景情况进行综使用此指
11、标应综合其他检测数据和样品背景情况进行综合分析与判断。合分析与判断。2 2、窗口期辅助诊断、窗口期辅助诊断m在窗口期抗原峰出现前后通常出现一个病毒载量的高峰，在窗口期抗原峰出现前后通常出现一个病毒载量的高峰，通常此高峰高于发病时的血浆病毒水平，早期病毒通常此高峰高于发病时的血浆病毒水平，早期病毒RNARNA测测定具有特殊的意义。定具有特殊的意义。m目前国际上正在尝试使用这种检测对采供血样品进行多个目前国际上正在尝试使用这种检测对采供血样品进行多个样品混合后的样品混合后的RNARNA检测以降低窗口期传播的残余危险度。检测以降低窗口期传播的残余危险度。3 3、病程监控、病程监控m由于由于HIVHI
12、V感染发生后病毒载量的变化具有一定规律，并且感染发生后病毒载量的变化具有一定规律，并且这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。m通常在感染后无症状期内发生的临床症状很难与通常在感染后无症状期内发生的临床症状很难与AIDSAIDS发病发病时的症状区别，病毒载量测定可以帮助医生判断一个刚发时的症状区别，病毒载量测定可以帮助医生判断一个刚发生的症状是否与生的症状是否与HIVHIV感染有关。感染有关。4 4、指导治疗方案及疗效测定m并非在任何情况下感染者都应该进并非在任何情况下感染者都应该进行抗病毒治疗，这不但是经济上的行抗病毒治疗，这不但是经济上的原因，更重要的是
13、在于抗病毒药物原因，更重要的是在于抗病毒药物的副作用和疗效。通常在病毒载量的副作用和疗效。通常在病毒载量达到一定水平后（如达到一定水平后（如35000-5000035000-50000拷贝拷贝/毫升）才具有良好的效果。毫升）才具有良好的效果。m只有通过治疗后病毒水平的检测才只有通过治疗后病毒水平的检测才能确定治疗是否有效，通常治疗后能确定治疗是否有效，通常治疗后病毒水平降低病毒水平降低50%50%才被认为临床有才被认为临床有效。效。v随着政府加速对国产抗艾滋病药物上市的批随着政府加速对国产抗艾滋病药物上市的批准，我国艾滋病人的治疗已经出现了曙光。准，我国艾滋病人的治疗已经出现了曙光。v艾滋病临
14、床治疗中各种艾滋病临床治疗中各种免疫指标免疫指标(CD4+、CD8+T细胞细胞 等等)对于确定感染状态、预测发病、对于确定感染状态、预测发病、评价药物疗效及新药开发具有重要的作用。评价药物疗效及新药开发具有重要的作用。CD4 T淋巴细胞淋巴细胞：（流式细胞术）（流式细胞术）CD4 TCD4 T细胞是细胞是HIVHIV的主要靶细胞的主要靶细胞,感染后随着病程进展，感染后随着病程进展，CD4 TCD4 T细胞不断下细胞不断下降降 500/500/mmmm3 3有临床诊断意义有临床诊断意义 200/200/mmmm3 3AIDSAIDS病程进展，病程进展，AIDSAIDS诊断和疗效观察的指标诊断和疗
15、效观察的指标HIVHIV感染几周内，出现类流感症状，也称为血清阳转期感染几周内，出现类流感症状，也称为血清阳转期，CD4CD4细胞的数量降低。随之出现的免疫应答可以控制急细胞的数量降低。随之出现的免疫应答可以控制急性症状，恢复性症状，恢复CD4CD4细胞的数量，但并不能清除病毒。随着细胞的数量，但并不能清除病毒。随着CD4CD4细胞不断下降，当降至细胞不断下降，当降至500/ul500/ul左右时，开始出现机会左右时，开始出现机会性感染或其它疾病，进入症状期。当性感染或其它疾病，进入症状期。当CD4CD4低于低于200/ul200/ul时，时，即进入艾滋病期。即进入艾滋病期。HAARTHAARTCD4+TCD4+T淋巴细胞介导的免疫淋巴细胞介导的免疫功能逐渐丧失功能逐渐丧失CTLCTL丧失必要的体内环境，丧失必要的体内环境，功能下降功能下降 谢谢
