1、机能实验家兔肠缺血再灌注损伤机能实验家兔肠缺血再灌注损伤p掌握缺血再灌注损伤模型的复制，比较掌握缺血再灌注损伤模型的复制，比较缺血损伤和缺血再灌注损伤的区别缺血损伤和缺血再灌注损伤的区别p观察缺血再灌注损伤的表现，理解缺血观察缺血再灌注损伤的表现，理解缺血再灌注损伤发生的机制再灌注损伤发生的机制 【目的要求】【目的要求】观察缺血再灌注损伤的表现，理解缺血再灌注损伤发生的机制兔手术台、BL-420生物信息采集系统、Y型气管插管、动脉夹、动脉插管、静脉插管、注射器、纱布、棉线、实验动物常用手术器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%乌拉坦、生理盐水、组比较说明：缺血损伤与 是不同的 损伤过程，损
2、伤过程，后者损伤更严重（3）再灌注是否通畅？兔手术台、BL-420生物信息采集系统、Y型气管插管、动脉夹、动脉插管、静脉插管、注射器、纱布、棉线、实验动物常用手术器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%乌拉坦、生理盐水排净气泡，记录前应关闭三通管（1）活性氧的作用）颈部正中切口行动脉插管组：结扎BP BP趋于平稳（相似于结 扎前），肠壁粉红暗红（淤血）肿胀（水肿），无出血点兔手术台、BL-420生物信息采集系统、Y型气管插管、动脉夹、动脉插管、静脉插管、注射器、纱布、棉线、实验动物常用手术器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%乌拉坦、生理盐水腹正中线自剑突下1.排尽气泡，速度不宜太快兔手
3、术台、BL-420生物信息采集系统、Y型气管插管、动脉夹、动脉插管、静脉插管、注射器、纱布、棉线、实验动物常用手术器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%乌拉坦、生理盐水【结果不明显可能存在的问题】舌头无回收，四肢松软n【实验动物】【实验动物】n 家兔家兔n 【实验器材】【实验器材】n兔手术台、BL-420生物信息采集系统、Y型气管插管、动脉夹、动脉插管、静脉插管、注射器、纱布、棉线、实验动物常用手术器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%乌拉坦、生理盐水【实验设计原理】【实验设计原理】n通 过 肠 系 膜 上 动 脉 结 扎，即通 过 肠 系 膜 上 动 脉 结 扎，即SMAO(Supe
4、rior Mesentery Artery Occlusion)来阻断部分肠的血液供应一段时来阻断部分肠的血液供应一段时间后再恢复血流灌注，以复制肠缺血间后再恢复血流灌注，以复制肠缺血/再灌再灌注损伤的动物模型，探讨缺血注损伤的动物模型，探讨缺血/再灌注损伤再灌注损伤的发生机制的发生机制排尽气泡，速度不宜太快机能实验家兔肠缺血再灌注损伤切口范围：颈部正中，甲状软骨下缘胸骨上切迹，长约5cm 峰表示：松开肠系膜上A 血管床容量有效循环血量相对 BP升压反射（再灌注损伤还未来得及发生）有时峰不出现，BP直到死亡排净气泡，记录前应关闭三通管组：结扎 BPBP趋于平稳（机体自身调节）再灌BP，肠壁暗红
5、、水肿、出血点BP低于正常1/2时休克夹闭肠系膜上动脉1h组：结扎BP BP趋于平稳（相似于结 扎前），肠壁粉红暗红（淤血）肿胀（水肿），无出血点夹闭肠系膜上动脉30min，再恢复血流30min颈部正中切口行动脉插管排尽气泡，速度不宜太快插管内事先应加入少量肝素以防凝血；颈部正中切口行动脉插管兔手术台、BL-420生物信息采集系统、Y型气管插管、动脉夹、动脉插管、静脉插管、注射器、纱布、棉线、实验动物常用手术器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%乌拉坦、生理盐水夹闭肠系膜上动脉30min，再恢复血流30minp组：持续缺血组组：持续缺血组 夹闭肠系膜上动脉夹闭肠系膜上动脉1hp组：再灌损伤
6、组组：再灌损伤组 夹闭肠系膜上动脉夹闭肠系膜上动脉30min，再恢复血，再恢复血流流30min 【实验分组】【实验分组】【实验方法与步骤】【实验方法与步骤】n1.称重称重n2.全麻（耳缘静脉注射全麻（耳缘静脉注射25%乌拉坦乌拉坦4ml/kg）n 注意：从耳缘静脉的远心端开始注射，注意：从耳缘静脉的远心端开始注射，n排尽气泡，速度不宜太快排尽气泡，速度不宜太快n 麻醉效果：角膜反射麻醉效果：角膜反射n 基本消失，钳夹家兔基本消失，钳夹家兔n 舌头无回收，四肢松软舌头无回收，四肢松软舌头无回收，四肢松软肠系膜上A夹闭要彻底，缺血再灌注组结扎时注意垫橡皮管，恢复血流灌流（复流）要完全、组比较说明：
7、缺血损伤与 是不同的 损伤过程，损伤过程，后者损伤更严重颈部正中切口行动脉插管长约2-3cm，穿线备用插管内事先应加入少量肝素以防凝血；插管内事先应加入少量肝素以防凝血；先结扎远心端，后夹闭近心端，剪口部位尽量靠近远心端，成45度角朝向近心端剪一小口，约为管径的1/3-1/2，插管方向朝向近心端，插入1-1.（1）活性氧的作用）兔手术台、BL-420生物信息采集系统、Y型气管插管、动脉夹、动脉插管、静脉插管、注射器、纱布、棉线、实验动物常用手术器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%乌拉坦、生理盐水排尽气泡，速度不宜太快（3）再灌注是否通畅？兔手术台、BL-420生物信息采集系统、Y型气管插
8、管、动脉夹、动脉插管、静脉插管、注射器、纱布、棉线、实验动物常用手术器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%乌拉坦、生理盐水全麻（耳缘静脉注射25%乌拉坦4ml/kg）排净气泡，记录前应关闭三通管n3.仰卧固定（背部交叉）、备皮仰卧固定（背部交叉）、备皮n 颈部正中（甲状软骨下缘颈部正中（甲状软骨下缘胸骨上切迹）胸骨上切迹）n 腹部正中（剑突下腹部正中（剑突下1.5cm起向下起向下5cm）n 注意：平贴皮肤剪毛，勿拎起皮肤！注意：平贴皮肤剪毛，勿拎起皮肤！n4.颈部正中切口行动脉插管颈部正中切口行动脉插管p切口范围：颈部正中，甲状软骨下缘切口范围：颈部正中，甲状软骨下缘胸骨胸骨上切迹，长约上
9、切迹，长约5cmp分离左侧颈总动脉：胸分离左侧颈总动脉：胸骨舌骨肌与胸锁乳突肌之骨舌骨肌与胸锁乳突肌之间深面的颈动脉鞘内，与间深面的颈动脉鞘内，与 气管平行，颜色鲜红、气管平行，颜色鲜红、较细、触之有搏动感，较细、触之有搏动感，长约长约2-3cm，穿线备用，穿线备用注意：（注意：（1）钝性分离钝性分离 （2）辨清颈）辨清颈A鞘内的血管神经鞘内的血管神经血管插管血管插管先结扎远心端，后夹闭近心先结扎远心端，后夹闭近心端，剪口部位尽量靠近远心端，剪口部位尽量靠近远心端，成端，成45度角朝向近心端度角朝向近心端剪一小口，约为管径的剪一小口，约为管径的1/3-1/2，插管方向朝向近，插管方向朝向近心端
10、，插入心端，插入1-1.5cm【插管的注意事项】【插管的注意事项】p插管内事先应加入少量肝素以防凝血；排净气插管内事先应加入少量肝素以防凝血；排净气泡，记录前应关闭三通管泡，记录前应关闭三通管p插管易滑脱，应双线固定，结扎牢靠插管易滑脱，应双线固定，结扎牢靠p勿使插管尖端与血管壁形成角度，避免刺破血勿使插管尖端与血管壁形成角度，避免刺破血管管n 5.5.腹部正中切口：腹部正中切口：n 腹正中线自剑突下腹正中线自剑突下1.5cm1.5cm起向下做起向下做5cm5cm切口切口 n6.6.寻找肠系膜上动脉：寻找肠系膜上动脉：n 将家兔腹腔内脏左移，找到齐右肾门对侧垂直向腹主将家兔腹腔内脏左移，找到齐
11、右肾门对侧垂直向腹主动脉分出的肠系膜上动脉，穿双线备用，注意避免损伤其动脉分出的肠系膜上动脉，穿双线备用，注意避免损伤其他血管（缺血再灌注夹闭时注意垫橡皮管）他血管（缺血再灌注夹闭时注意垫橡皮管）n 7.7.记录一段正常血压曲线记录一段正常血压曲线n 8.8.复制肠缺血复制肠缺血-再灌注模型，轻轻提起肠系膜上动脉的穿再灌注模型，轻轻提起肠系膜上动脉的穿线，用动脉夹夹闭，同时观察各项生理指标变化。线，用动脉夹夹闭，同时观察各项生理指标变化。p 9.9.分组进行实验并记录各项指标。（分组进行实验并记录各项指标。（组：夹闭肠系膜组：夹闭肠系膜上动脉上动脉1h 1h 组：夹闭肠系膜上动脉组：夹闭肠系膜
12、上动脉30min30min，再恢复血流，再恢复血流30min30min）肠系膜上动脉示意图肠系膜上动脉示意图全麻（耳缘静脉注射25%乌拉坦4ml/kg）排尽气泡，速度不宜太快先结扎远心端，后夹闭近心端，剪口部位尽量靠近远心端，成45度角朝向近心端剪一小口，约为管径的1/3-1/2，插管方向朝向近心端，插入1-1.颈部正中切口行动脉插管（1）实验过程中是否发生了大血？（1）活性氧的作用）颈部正中切口行动脉插管分离左侧颈总动脉：胸骨舌骨肌与胸锁乳突肌之间深面的颈动脉鞘内，与腹部正中（剑突下1.切口范围：颈部正中，甲状软骨下缘胸骨上切迹，长约5cm较细、触之有搏动感，腹正中线自剑突下1.、组比较说明
13、：缺血损伤与 是不同的 损伤过程，损伤过程，后者损伤更严重（1）活性氧的作用）5cm起向下做5cm切口n1.移动内脏时，动作要轻柔移动内脏时，动作要轻柔n2.分离肠系膜上分离肠系膜上A时需小心细致，不要使用锐利时需小心细致，不要使用锐利器械，以免损伤血管造成大出血器械，以免损伤血管造成大出血n3.肠系膜上肠系膜上A夹闭要彻底，缺血再灌注组结扎时夹闭要彻底，缺血再灌注组结扎时注意垫橡皮管，恢复血流灌流（复流）要完全注意垫橡皮管，恢复血流灌流（复流）要完全【注意事项】【注意事项】【结果分析】【结果分析】峰表示：结扎肠系膜上峰表示：结扎肠系膜上A A 血管床容量血管床容量 有效循环血量有效循环血量相
14、对相对BPBP 压力感受器压力感受器(+)(+)减压反射减压反射BPBP 峰表示：松开肠系膜上峰表示：松开肠系膜上A A 血管床容量血管床容量有效循环血量有效循环血量相对相对 BP BP升压反射（再灌注升压反射（再灌注损伤还未来得及发生）有时损伤还未来得及发生）有时峰不出现，峰不出现，BPBP直到死亡直到死亡 血压持续下降，有再灌注损血压持续下降，有再灌注损伤伤n组：结扎BP BP趋于平稳（相似于结 扎前），肠壁粉红暗红（淤血）肿胀（水肿），无出血点n组：结扎 BPBP趋于平稳（机体自身调节）再灌BP，肠壁暗红、水肿、出血点BP低于正常1/2时休克n 、组比较说明：缺血损伤与 是不同的 损伤过
15、程，损伤过程，后者损伤更严重【典型结果】【典型结果】基本消失，钳夹家兔兔手术台、BL-420生物信息采集系统、Y型气管插管、动脉夹、动脉插管、静脉插管、注射器、纱布、棉线、实验动物常用手术器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%乌拉坦、生理盐水仰卧固定（背部交叉）、备皮肠系膜上A夹闭要彻底，缺血再灌注组结扎时注意垫橡皮管，恢复血流灌流（复流）要完全【结果不明显可能存在的问题】插管内事先应加入少量肝素以防凝血；注意：从耳缘静脉的远心端开始注射，复制肠缺血-再灌注模型，轻轻提起肠系膜上动脉的穿线，用动脉夹夹闭，同时观察各项生理指标变化。、组比较说明：缺血损伤与 是不同的 损伤过程，损伤过程，后者
16、损伤更严重（3）白细胞的作用）夹闭肠系膜上动脉30min，再恢复血流30min分离左侧颈总动脉：胸骨舌骨肌与胸锁乳突肌之间深面的颈动脉鞘内，与（1）实验过程中是否发生了大血？插管内事先应加入少量肝素以防凝血；将家兔腹腔内脏左移，找到齐右肾门对侧垂直向腹主动脉分出的肠系膜上动脉，穿双线备用，注意避免损伤其他血管（缺血再灌注夹闭时注意垫橡皮管）【结果不明显可能存在的问题】【结果不明显可能存在的问题】n（1）实验过程中是否发生了大血？n（2）缺血是否完全？n（3）再灌注是否通畅？n（4）记录结果时基线是否改变？n（5）个体差异【I/R的发生机制】的发生机制】n（1）活性氧的作用）n（2）钙超载）n（3）白细胞的作用）n（4）高能磷酸化合物生成障碍）
