1、第七章 革兰阴性球菌医学检验系 革兰氏阴性球菌脑膜炎奈瑟菌N.meningitismeningococcus革兰氏阴性球菌奈瑟菌属奈瑟菌属（Neisseria）奈瑟氏菌属是一群革兰阴性球菌，常成双排列，无鞭毛，无芽胞，有菌奈瑟氏菌属是一群革兰阴性球菌，常成双排列，无鞭毛，无芽胞，有菌毛毛人类为奈瑟氏菌属的自然宿主，对人致病的只有脑膜炎奈瑟菌和淋病奈人类为奈瑟氏菌属的自然宿主，对人致病的只有脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌，两种细菌瑟菌，两种细菌DNA序列有序列有70的同源性的同源性主要主要区别点区别点为，淋病奈瑟菌寄居于尿道黏膜，引起泌尿生殖系统疾病；为，淋病奈瑟菌寄居于尿道黏膜，引起泌尿生殖系统疾病
2、；而脑膜炎奈瑟菌和其他奈瑟菌和其他奈瑟菌均存在于鼻咽腔黏膜。脑膜炎而脑膜炎奈瑟菌和其他奈瑟菌和其他奈瑟菌均存在于鼻咽腔黏膜。脑膜炎奈瑟菌有多糖成分奈瑟菌有多糖成分脑膜炎双球菌脑膜炎双球菌革兰氏阴性球菌形态与染色 G-，0.6-0.8m 肾形或豆形，成双排列，凹面相对；病人脑脊液（CSF）中典型，多位于中性粒细胞内；无鞭毛和芽胞；新分离株具有荚膜和菌毛革兰氏阴性球菌培养特性与生化反应 培养特性 专性需氧。营养要求高。最常用的培养基是巧克力色培养基 生化反应 可产生自溶酶，人工培养时若不及时移种，数日后菌体自溶革兰氏阴性球菌抗原构造、抵抗力革兰氏阴性球菌致病性与免疫性 致病物质 荚膜 菌毛 内毒素
3、 所致疾病 流行性脑膜炎（简称流脑）人类是唯一的易感宿主 免疫性 6月2岁年龄组婴儿免疫力最低，是易感人群革兰氏阴性球菌革兰氏阴性球菌脑膜炎奈瑟菌鼻咽腔繁殖繁殖入血菌菌/败血症败血症中枢神经系统中枢神经系统主要侵犯蛛网膜暴发型脑膜炎暴发型脑膜炎微循环衰竭微循环衰竭、内毒素休克内毒素休克、DICDIC革兰氏阴性球菌儿童和成人的脑膜炎症状革兰氏阴性球菌微生物学检查法 标本 直接涂片镜检 如镜下见到中性粒细胞内、外有革兰阴性双球菌，即可作出初步诊断 分离培养与鉴定 巧克力色血琼脂平板 快速诊断法对流免疫电泳SPA协同凝集试验脑膜炎奈瑟菌（脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis)革兰氏阴性球菌脑膜
4、炎奈瑟菌（脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis)革兰阴性双球菌革兰阴性双球菌,肾形或豆形肾形或豆形生物学性状生物学性状形态染色：形态染色：G-，呈肾型，成双排列（凹面相对，凸面相，呈肾型，成双排列（凹面相对，凸面相背），有荚膜及菌毛背），有荚膜及菌毛 培养特性培养特性 营养要求较高，血平板或巧克力平板或卵黄双抗平板，营养要求较高，血平板或巧克力平板或卵黄双抗平板，形成光滑透明形成光滑透明“露滴样露滴样”菌落菌落专性需氧，专性需氧，510%CO2，35-37（40 30均不生均不生长）长）pH7.47.6易产生自溶酶易产生自溶酶革兰氏阴性球菌生物学性状生物学性状生化反应：生化反应：氧化酶及
5、触酶（氧化酶及触酶（+），分解葡萄糖），分解葡萄糖和麦芽糖和麦芽糖抗原和分类：抗原和分类：根据荚膜多糖群特异性抗原的不根据荚膜多糖群特异性抗原的不同可分为同可分为13个血清群，根据膜蛋白不同，各血个血清群，根据膜蛋白不同，各血清群又可分为若干血清型清群又可分为若干血清型抵抗力：抵抗力：很弱，对热、冷、干燥和消毒剂极度很弱，对热、冷、干燥和消毒剂极度敏感敏感脑膜炎奈瑟菌（脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis)革兰氏阴性球菌氧化酶试验阳性：紫红色 阴性：无色革兰氏阴性球菌氧化酶：氧化酶：+DNA酶：酶：-营养琼脂生长：营养琼脂生长：-葡萄糖：葡萄糖：+麦芽糖：麦芽糖：+革兰氏阴性球菌 综合性
6、预防措施 隔离病人、检查带菌者、预防性投药，室内通风：6个月-2岁接种两次，间隔1月 A群脑膜炎球菌多糖抗原。制备疫苗 青霉素、磺胺大剂量治疗 脑膜炎接种革兰氏阴性球菌淋病奈瑟菌，淋球菌Gonococcus革兰氏阴性球菌脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌 相似点：生物学性状 差异：荚膜：有荚膜（），分离初期有荚膜（）质粒：很少有质粒（），有质粒（）；所致疾病：引起脑膜炎（），引起泌尿生殖系统疾病（）。感染部位不同，标本取材部位不同两者关系两者关系革兰氏阴性球菌形态与染色 革兰染色阴性，0.6-0.8m 肾形、成双排列 有菌毛，无芽胞和鞭毛，新分离株有荚膜革兰氏阴性球菌革兰氏阴性球菌革兰氏阴性球菌革兰氏阴
7、性球菌革兰氏阴性球菌培养特性 生化反应 培养特性 需氧，营养要求高。常用的培养基为 生化反应 除外，革兰氏阴性球菌与脑膜炎奈瑟菌相似，营养要求更高，只能在巧克力平板及专用培养基上生长，形成灰白色细小S型呈滴露样菌落革兰氏阴性球菌主要菌体表面抗原构造 与粘附有关，免疫原性不强 经常变异，相应抗体不能防止再感染 PI：主要外膜蛋白，将淋病奈瑟菌分为 PII：吸附易感细菌的蛋白革兰氏阴性球菌致病物质 菌毛 脂多糖（内毒素）IgA1蛋白酶革兰氏阴性球菌所致疾病 淋病 人类是淋球菌唯一的天然宿主 成人淋病绝大多数通过性接触感染，是重要的（sexually transmitted disease，）新生儿
8、淋球菌性结膜炎“脓漏眼”革兰氏阴性球菌革兰氏阴性球菌微生物学检查法 标本 保暖（运送时35C保温）、保湿、立即送检 直接涂片镜检 分离培养与鉴定 巧克力色培养基快速诊断法 ELISA法、核酸杂交、PCR技术革兰氏阴性球菌 生物学特性生物学特性 形态染色：与脑膜炎奈瑟菌相似，形态染色：与脑膜炎奈瑟菌相似，G G，双球菌，咖啡豆，双球菌，咖啡豆状，有荚膜和菌毛，无芽胞，无鞭毛状，有荚膜和菌毛，无芽胞，无鞭毛 脓汁标本中脓汁标本中 急性病人：细菌位于中性粒细胞内急性病人：细菌位于中性粒细胞内 慢性病人：细菌位于细胞外慢性病人：细菌位于细胞外 培养特性：培养特性：与脑膜炎奈瑟菌相似，营养要求更高，只能
9、在与脑膜炎奈瑟菌相似，营养要求更高，只能在巧克力平板及专用培养基上生长，形成灰白色细小巧克力平板及专用培养基上生长，形成灰白色细小S S型菌型菌落落 生化反应：生化反应：氧化酶（氧化酶（+），只分解葡萄糖，不分解麦芽糖），只分解葡萄糖，不分解麦芽糖（脑膜炎奈瑟菌分解麦芽糖脑膜炎奈瑟菌分解麦芽糖）等其它糖类等其它糖类 抗原及分类：抗原及分类：以外膜蛋白抗原分以外膜蛋白抗原分1616个血清型个血清型 抵抗力：抵抗力：极弱（与脑膜炎奈瑟菌相似）极弱（与脑膜炎奈瑟菌相似）淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌革兰氏阴性球菌淋病奈瑟菌鉴定依据淋病奈瑟菌鉴定依据：1.涂片染色为革兰涂片染色为革兰阴性双球菌；阴性双球菌；2.
10、2.巧克力平板上为巧克力平板上为半半透明、灰白色、凸透明、灰白色、凸 起起滴露状滴露状菌落；菌落；3.3.氧化酶及触酶均阳氧化酶及触酶均阳性；性；4.4.只分解葡萄糖，只分解葡萄糖，产酸不产气；产酸不产气；5.5.血清学试验阳性。血清学试验阳性。革兰氏阴性球菌防治原则 预防淋病应取缔娼妓、防止不正当的两性关系 新生儿1%硝酸银滴眼，或红霉素、四环素眼药膏 药物首选，但多有耐药性，应用革兰氏阴性球菌脑膜炎奈瑟菌与淋病奈瑟菌比较脑膜炎奈瑟菌与淋病奈瑟菌比较 革兰氏阴性球菌小 结革兰氏阴性球菌化脓性球菌化脓性球菌 革兰阳性菌：葡萄球菌，链球菌，肺炎链革兰阳性菌：葡萄球菌，链球菌，肺炎链球菌球菌 革兰
11、阴性菌：脑膜炎奈瑟菌，革兰阴性菌：脑膜炎奈瑟菌，淋病奈瑟淋病奈瑟菌菌N.gonorrhoeaeN.meningitidisS.pneumoniaestaphylococcusStreptococcus革兰氏阴性球菌36脓汁或脓汁或喉拭子喉拭子 涂片、革兰染色、镜检涂片、革兰染色、镜检血琼脂平板血琼脂平板观察菌落特征观察菌落特征及溶血情况及溶血情况生化反应、致病力试验及药敏试验生化反应、致病力试验及药敏试验病原性球菌的鉴别病原性球菌的鉴别 由脑脊液标本中发现中性粒细胞内外有由脑脊液标本中发现中性粒细胞内外有G G-双球菌双球菌，可初步诊，可初步诊断为断为脑膜炎球菌脑膜炎球菌 由泌尿、生殖系统来源
12、的标本中分离出的由泌尿、生殖系统来源的标本中分离出的G G-双球菌双球菌，可初步，可初步诊断为诊断为淋球菌淋球菌 37 24h革兰氏阴性球菌葡萄球菌鉴别葡萄球菌鉴别 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌 色素色素 金黄色金黄色 白色白色-溶血素溶血素 +-血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验 +-耐热耐热DNADNA酶试验酶试验 +-+-甘露醇发酵试验甘露醇发酵试验 +-致病力致病力 强强 弱或无弱或无脓汁标本脓汁标本 找出两种菌落找出两种菌落 GramGram染色染色 甘露醇发酵试验甘露醇发酵试验革兰氏阴性球菌菌落小、半透明菌落小、半透明 、表面光滑、边缘整齐表面光滑、边缘整齐G+
13、G+、链状、链状 完全溶血完全溶血 不溶血不溶血 草绿色不完全溶血环草绿色不完全溶血环菊糖发酵试验菊糖发酵试验 -（紫色）（紫色）+（黄色）（黄色）胆汁溶菌试验胆汁溶菌试验 -（混浊）（混浊）+（澄清）（澄清）喉拭子标本喉拭子标本 找出两种菌落找出两种菌落 Gram染色染色革兰氏阴性球菌39痰培养肺炎链球菌检验全程报道姚军微生物检验革兰氏阴性球菌401.痰涂片（肺炎链球菌镜下）:革兰氏阴性球菌411.痰涂片（肺炎链球菌镜下）:革兰氏阴性球菌422.原始培养物18h后菌落（肺炎链球菌菌落）:革兰氏阴性球菌432.原始培养物18h后菌落（肺炎链球菌菌落）:革兰氏阴性球菌443.传代后的纯培养物:革
14、兰氏阴性球菌453.传代后的纯培养物:传代后的菌落直径较首代有些缩小了传代后的菌落直径较首代有些缩小了,菌落湿润程度也有些降低菌落湿润程度也有些降低,但仍然很湿润但仍然很湿润.革兰氏阴性球菌464.Optochin抑制试验:抑菌环中也微弱的生长了些菌落抑菌环中也微弱的生长了些菌落,但经过涂片发现是口腔球菌但经过涂片发现是口腔球菌.可可能是做该试验的同事挑菌落的时候能是做该试验的同事挑菌落的时候,没把握好没把握好.把杂菌带进去了把杂菌带进去了.尽尽管如此管如此,抑菌环还是非常明显而宽大抑菌环还是非常明显而宽大(22mm).革兰氏阴性球菌475.生化反应:用的就是普通微量管用的就是普通微量管,在接
15、种前滴加小牛血清在接种前滴加小牛血清1滴滴.5%CO2,35培养培养1824h后读取并记录结果后读取并记录结果.革兰氏阴性球菌486.肺炎链球菌乳胶凝集试验：左边是测试，右边是阴性对照：革兰氏阴性球菌497.药敏试验（K-B法）：革兰氏阴性球菌507.药敏试验（K-B法）：革兰氏阴性球菌51思考题革兰氏阴性球菌一、填空题：革兰氏阴性球菌一、填空题：革兰氏阴性球菌二、是非题：革兰氏阴性球菌三、选择题：革兰氏阴性球菌三、选择题：革兰氏阴性球菌三、选择题：革兰氏阴性球菌三、选择题：革兰氏阴性球菌四、名词解释：1、血浆凝固酶 2、葡萄球菌A蛋白革兰氏阴性球菌问答题 1、如何从脓汁标本中检出金黄色葡萄球菌，请写出检验程序，鉴定依据？2、肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌的主要区别有那些？3、简述下列细菌的形态特征、首选培养基及主要菌落特点？金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、霍乱弧菌。4、流脑患者脑脊液革兰氏染色的镜下特征，如何分离培养及菌落特点？5、如何从脓液中检出乙型溶血性链球菌？6、简述下列细菌的形态特征、首选培养基及主要菌落特点？肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、铜绿假单胞菌。革兰氏阴性球菌此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！革兰氏阴性球菌62
