1、艾滋病实验室的质量管理一、质量保证(QA）质量保证是指从接收样本起，到实验室发出报告止，为确保实验室最终报告结果的正确性所进行的全过程，包括采取各种行政和技术上的措施和方法。行政支持（行政部门关心实验室发展、建设，人员稳定，足够经费）人员培训（新人员上岗前培训获得合格证书，接受复训，筛查实验室人员至少2年一次。检测人员应分为检验人、复核人、签发人。复核人和签发人应具备对检测过程进行分析和解决问题的能力）环境条件（实验室设置、建筑、设备符合要求）标本采集、运送和处理检测方法和试剂的选择设备维护与校准 （酶标仪、移液器、高压灭菌器、温度计等）文件和文件管理 检测方法和试剂的选择使用经国家食品药品监
2、督管理局注册批准的试剂，选择敏感性高，特异性好的，根据参比室组织的国家级艾滋病诊断试剂临床质量评价各实验室更换试剂批号时，应进行平行试验所有试剂盒要严格按照要求条件保存。设备维护与校准目前常用的艾滋病检测设备类安全类：生物安全柜、洗眼器、普通冰箱、超低温冰箱、高压灭菌器。检测类：微量加样器、摇摆平台、全自动蛋白印迹仪、普通离心机、震荡器、移液器、恒温水浴、酶标仪+洗板机、病毒载量仪、流式细胞仪其它：计算机、空调规范化管理的意义遵照全国艾滋病检测技术规范、全国艾滋病检测工作管理办法。检测质量保证延长设备的使用时间便于设备的管理节约资源HIVHIV实验室的设备维护实验室的设备维护日常维护日常维护定
3、期检定和校准定期检定和校准设备对环境的普通要求设备对环境的普通要求电源：电压一定要匹配，插线板合适，电源：电压一定要匹配，插线板合适，专用的专用的.经常停电或电压不稳的实验室，经常停电或电压不稳的实验室，建议配备稳压器和不间断电源建议配备稳压器和不间断电源环境：清洁，温、湿度合适环境：清洁，温、湿度合适良好通风良好通风长时间不用的设备，注意特别容易坏长时间不用的设备，注意特别容易坏酶标仪酶标仪移液器的检定一年至少检定一次一年至少检定一次需检定的原因需检定的原因 -经常使用经常使用 -要求高的准确性要求高的准确性超低温冰箱定期清理灰尘过滤定期清理灰尘过滤器（建议每月一次器（建议每月一次）超低温冰
4、箱注意事项要求环境温度控制在要求环境温度控制在2828度以下度以下空间的清洁空间的清洁稳定的电源供应稳定的电源供应不宜放得太挤不宜放得太挤生物安全柜HEPA-HEPA-过滤装置容纳有过滤装置容纳有害生物气体。害生物气体。需提供人员保护需提供人员保护也为产品提供保护也为产品提供保护 (按按等级而定等级而定)生物安全柜的维护每年检定一次安全柜每年检定一次安全柜保持所有操作在窗扇保持所有操作在窗扇4 4英寸以内英寸以内清洁物质和污染物隔离开，减少相清洁物质和污染物隔离开，减少相互干扰互干扰使用后及时清理使用后及时清理柜内不宜放太多的物品，不能储藏柜内不宜放太多的物品，不能储藏化学物质化学物质离心机的
5、维护（1）要在最佳条件下建立质控图参数。也可以只设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（cut off）的2-3倍为宜。加样器、酶标仪、温度计、高压灭菌器也为产品提供保护(按等级而定)4、仪器的使用维护和校准3、质控图的判定和分析8、实验室数据、相关文件记录与保存使用经国家食品药品监督管理局注册批准的试剂，选择敏感性高，特异性好的，根据参比室组织的国家级艾滋病诊断试剂临床质量评价每次检测之前都应了解质控结果。柜内不宜放太多的物品，不能储藏化学物质分析结果及发出检测报告前，应注意须在试剂盒及外部质控结果满足要求的前提下，对样品进行分析。外部质量评价收到样品后，建立唯一编码，及时登记有关信息，包括受
6、检者姓名或代号、试管编号、性别、职业、送检单位、人群类别、检测结果、送检日期、报告日期、通讯地址制订仪器设备检定计划。试剂盒及外部质控不合格，样品需要重新检测一、质量保证(QA）（5）更换不同厂家的试剂盒后，必须重新绘制质控图。（4）建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂盒。试剂盒及外部质控不合格，样品需要重新检测（5）更换不同厂家的试剂盒后，必须重新绘制质控图。转头、套桶使用离心机的注意事项离心力、离心速度平稳的仪器台不用时，松转头；使用时，拧紧转子保持平衡使用安全：盖子要严使用后要擦干或开盖至晾干防止液体泄漏到腔内高压灭菌器灭菌器的维护压力表需要定期检验（一年两次）等气压和温度下降到正常后,
7、再开阀高压时,放入指示纸,以便判定灭菌效果设备的检定和校准 对检验的准确性和有效性有影响的对检验的准确性和有效性有影响的仪器设备必须进行检定和校准。仪器设备必须进行检定和校准。有国家计量检定规程的仪器设备，由法有国家计量检定规程的仪器设备，由法定计量检定机构或经计量行政部门授权定计量检定机构或经计量行政部门授权的技术机构进行检定；的技术机构进行检定；没有国家检定规程的，可以由厂家、自没有国家检定规程的，可以由厂家、自行检定和校准。行检定和校准。制订仪器设备检定计划。制订仪器设备检定计划。经检定的仪器设备校验结果贴上标志：经检定的仪器设备校验结果贴上标志：合格标志为绿色、准用标志为黄色、停合格标
8、志为绿色、准用标志为黄色、停用标志为红色。用标志为红色。凡检定不合格或超过检定有效期的仪器凡检定不合格或超过检定有效期的仪器设备，一律不得用于检验工作。对超过设备，一律不得用于检验工作。对超过检定期，但暂时不用的仪器设备，贴上检定期，但暂时不用的仪器设备，贴上停用标志。停用标志。强制检定的工作计量器具目录 HIVHIV检测强制检定仪器：检测强制检定仪器：加样器、酶标仪、温度计、高压灭菌器加样器、酶标仪、温度计、高压灭菌器 强制检定的周期，由执行强制检定的计量检强制检定的周期，由执行强制检定的计量检定机构根据计量检定规程确定。定机构根据计量检定规程确定。属于强制检定的工作计量器具，未按照本办属于
9、强制检定的工作计量器具，未按照本办法规定申请检定或者经检定下合格的，任何法规定申请检定或者经检定下合格的，任何单位或者个人不得使用。单位或者个人不得使用。文件及文件管理1.标准操作程序(SOP)2.实验原始记录表3.结果报告4.样品登记和保存5.文件存档 1.标准操作程序(SOP)艾滋病检测实验室要建立覆盖主要工作内容的SOP文件。SOP由各岗位工作人员起草，实验室主任审定，并应定期修订。修订应该在实验室主管人员的领导下进行，每年至少一次。所有工作人员要在所从事工作的SOP文件上签名表示已经阅读并掌握了有关内容。.凡检定不合格或超过检定有效期的仪器设备，一律不得用于检验工作。签发人对试验结论进
10、行审核、分析、总结、签字实验室所有设备的使用记录和维护记录质控图是把检测数据与计算出的“控制限”进行比较的图，包含一条中心横线和其上、下两条平行的控制线，并有按时间顺序点入的质控血清测定值。同时可以了解各批试剂盒的批间差异或孔间差异，绘制质量控制图。（9）附录（包括相关的附加文件如标准表格、设备和试剂盒说明书等。1、组织者 2、频度 3、样品来源及构成加样器、酶标仪、温度计、高压灭菌器需检定的原因 -经常使用 -要求高的准确性强制检定的周期，由执行强制检定的计量检定机构根据计量检定规程确定。（酶标仪、移液器、高压灭菌器、温度计等）（3）控制限：外部对照S/CO值的 2s （4）变异系数(cv)
11、，是反映各次 S/CO 值相对于均值离散程度的一个指标，可以用来衡量检测的重复性或精密度。压力表需要定期检验（一年两次）HIV检测强制检定仪器：一、质量保证(QA）国家艾滋病参比室病毒载量实验室能力验证一年两次（3）从第21次起，将每次检测的质控血清的结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。三、质量评价（EQA）高压时,放入指示纸,以便判定灭菌效果（1）算术平均值(x)代表一组S/CO值的平均值。艾滋病检测实验室应建立以下SOP1、样品的接收、登记、处理、保存和运输2、检测方法和步骤3、试剂使用方法和保存4、仪器的使用维护和校准5、实验中的质量控制要求及程序6、结果解释与报告7、保密程序
12、8、实验室数据、相关文件记录与保存9、不确定样本的追踪和处理10、实验室安全防护及实验室的的清理和消毒11、职业暴漏SOP通常包括以下内容（1）标题和编号（2）编写和修改日期（3）编写和修订人员姓名（4）方法、目的和应用范围（5）相应的职业规范（6）检测设备和试剂（7）安全防护相关步骤（8）结果的解释和报告（9）附录（包括相关的附加文件如标准表格、设备和试剂盒说明书等。）2、实验原始记录表 应按实验要求，设计操作的原始记录表，标明空白对照、阳性对照、阴性对照、外部对照以及待检样品的位置，便于指导实验人员加样。要注明试剂厂家、测定方法、批号、有效期、操作人员和复核人员姓名及检测日期。ELISA原
13、始记录快速原始记录表实验室样本交接记录08高压灭菌器.实验室所有设备的使用记录和维护记录 3、结果报告 分析结果及发出检测报告前，应注意须在试剂盒及外部质控结果满足要求的前提下，对样品进行分析。试剂盒及外部质控不合格，样品需要重新检测复核人对检测结果进行仔细复核并对结果提出结论签发人对试验结论进行审核、分析、总结、签字4、样品登记和保存 收到样品后，建立唯一编码，及时登记有关信息，包括受检者姓名或代号、试管编号、性别、职业、送检单位、人群类别、检测结果、送检日期、报告日期、通讯地址5、文件存档 实验原始记录表、打印数据、膜反应条带或其照片、检测记录表、标本登记、标本保存记录以及仪器设备维修和校
14、准记录等都应该妥善存档保存10年以上。最好同时使用计算机保存各种文件和记录。二、质量控制(QC)p15 质量控制是指为确保实验工作正常进行而在每一步实验过程中必须采取的各种措施。是对检验结果的即时性评价，通过对质控结果的连续观察，监测实验室结果的精密性。（一）抗体检测的统计学室内质量控制在所有实验中必须包含有试剂盒内部对照质控血清和室内质控品（外部对照质控血清）。1、试剂盒内部对照质控品即为试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。试剂盒内部对照用于判断每次实验的有效性，但不能做为室内质控品使用。内部对照是质量控制的基础。每一次检测必须使用内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。内部对照结果无效必须
15、重新实验。试剂盒及外部质控不合格，样品需要重新检测8、实验室数据、相关文件记录与保存统计室内质控的主要方法-建立质控图安全类：生物安全柜、洗眼器、普通冰箱、超低温冰箱、高压灭菌器。改用新批号试剂盒如结果偏离较大也应重新制作质控图。(2)失控：外部对照的S/CO值超出3s，称为失控，则本次实验结果不能被接受。（9）附录（包括相关的附加文件如标准表格、设备和试剂盒说明书等。为了统计学上有显著性意义，应该采用至少20次(天)所测得的外部对照质控血清S/CO值结果计算出平均值。质量保证是指从接收样本起，到实验室发出报告止，为确保实验室最终报告结果的正确性所进行的全过程，包括采取各种行政和技术上的措施和
16、方法。遵照全国艾滋病检测技术规范、全国艾滋病检测工作管理办法。4、考核结果及判定标准 5、程序每次检测之前都应了解质控结果。加样器、酶标仪、温度计、高压灭菌器职能考核：问卷调查和现场评价内部对照结果无效必须重新实验。签发人对试验结论进行审核、分析、总结、签字外部质量评价包括职能考核和能力验证2、室内质控品（外部对照）每次检测之前都应了解质控结果。使用经国家食品药品监督管理局注册批准的试剂，选择敏感性高，特异性好的，根据参比室组织的国家级艾滋病诊断试剂临床质量评价2、室内质控品（外部对照）为非试剂盒组份的外部质控品，是为了监控检测的重复性而设置的，包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清。也可以只设置一
17、个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（cut off）的2-3倍为宜。外部质控品的作用是，判断该批临床样本检测的有效性，因此，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重新实验。室内质控品可以是商品或实验室自行制备室内质控品的保存（1）按一周实验用量分装、分类、标记、封口、-20冻存。（2）外部对照血清不可反复冻融，一旦融化后应该存放2-8，一周内使用。3、室内质控品的使用 每一次实验必须使用室内质控品，以便监控实验的重复性。同时可以了解各批试剂盒的批间差异或孔间差异，绘制质量控制图。统计室内质控的主要方法-建立质控图最常用的质控图是Levey-Jennings质控图，该图使用累计和技术或趋势分析
18、技术的图形提供系统偏移和漂移的状况。下面以ELISA方法检测HIV抗体为例，描述建立质控图步骤：（二）质控图的建立及应用1.建立质控图参数2.绘制质控图3.质控图的判断和分析4.绘制和分析质控图的要点5.变异系数（CV）分析6.灰区1、建立质控图参数 （1）算术平均值(x)代表一组S/CO值的平均值。为了统计学上有显著性意义，应该采用至少20次(天)所测得的外部对照质控血清S/CO值结果计算出平均值。（2）标准差(s)是描述样本与均数之间离散程度的一个指标，是与对照值的均值有关的预期范围。一组S/CO值的标准差以s表示。（3）控制限：外部对照S/CO值的 2s （4）变异系数(cv)，是反映各
19、次 S/CO 值相对于均值离散程度的一个指标，可以用来衡量检测的重复性或精密度。计算公式为：x x=n s 计算公式为：(xn-x)2 s =n-1 cv 计算公式为：s cv=x 100%x 2、绘制质控图 质控图是把检测数据与计算出的“控制限”进行比较的图，包含一条中心横线和其上、下两条平行的控制线，并有按时间顺序点入的质控血清测定值。质控图的绘制步骤是 （1）在常规条件下，对同一批血清连续测定20次（天）或以上，获得一组S/CO值，求均数(x)和标准差(s),超出2s或3s的数据不应删除。（2）将均值(x)和标准差(s)分别在质控框架图中标示出来。以S/CO值作纵座标(Y轴)，每一次(天
20、)试验作横座标(x轴)，绘制质控图。（酶标仪、移液器、高压灭菌器、温度计等）艾滋病检测实验室要建立覆盖主要工作内容的SOP文件。清洁物质和污染物隔离开，减少相互干扰长时间不用的设备，注意特别容易坏计算公式为：x x=n s 计算公式为：(xn-x)2 s =n-1 cv 计算公式为：s cv=x 100%x为了统计学上有显著性意义，应该采用至少20次(天)所测得的外部对照质控血清S/CO值结果计算出平均值。对检验的准确性和有效性有影响的仪器设备必须进行检定和校准。艾滋病检测实验室应建立以下SOPHEPA-过滤装置容纳有害生物气体。（2）标准差(s)是描述样本与均数之间离散程度的一个指标，是与对
21、照值的均值有关的预期范围。标准操作程序(SOP)2.内部对照结果无效必须重新实验。目前常用的艾滋病检测设备类（3）移漂：连续几个（3-5次）外部对照S/CO值都落在均值的一侧则称为位移，提示实验条件发生了较大的变化。9、不确定样本的追踪和处理（二）质控图的建立及应用（9）附录（包括相关的附加文件如标准表格、设备和试剂盒说明书等。4、仪器的使用维护和校准（酶标仪、移液器、高压灭菌器、温度计等）1、样品的接收、登记、处理、保存和运输 （3）从第21次起，将每次检测的质控血清的结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。质控图3、质控图的判定和分析 （1）告警：外部对照的S/CO值超出2s，系统处
22、于告警状态，应予以注意，是否可以继续检测需要进一步观察。(2)失控：外部对照的S/CO值超出3s，称为失控，则本次实验结果不能被接受。可能是系统误差或外部对照滴度下降造成。（3）移漂：连续几个（3-5次）外部对照S/CO值都落在均值的一侧则称为位移，提示实验条件发生了较大的变化。应重新绘制质控图。（4）趋势：连续几个（5-7个）外部对照质控血清S/CO值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。4、绘制和分析质控图的要点 （1）要在最佳条件下建立质控图参数。（2）用S/CO比值绘制质控图。（3）由专人负责建立质控图，每月定期召开质控分析会，讨论本月的质量控制情况。每次检测之前都应
23、了解质控结果。（4）建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂盒。（5）更换不同厂家的试剂盒后，必须重新绘制质控图。改用新批号试剂盒如结果偏离较大也应重新制作质控图。使用新批号或不同厂家的试剂盒必须在质控图上注明使用日期。（6）如发现质控值剧烈位移或失控，应填写报告单，上交质量负责人，分析原因并决定是否发出检测报告。（7）使用新批次的外部对照质控血清时，必须重新绘制质控图。（8）及时发现质控结果失控 5、变异系数（CV）分析变异系数(cv)小于20，表示外部对照处于稳定状态。6、灰区通常把临界值上下10的范围定为灰区，对灰区标本应进行复测。三、质量评价（EQA）内部质量评价 外部质量评价 内部质量评
24、价 本实验室组织的质量评价，实验室定期应组织内部质量评价，包括样品的接收、检测、保存至发出检测报告的各个环节 外部质量评价 由实验室之外的机构或单位组织，包括质量保证和质量控制工作的评价，职能工作考核主要是评价实验室质量保证工作，能力验证或室间质量评价主要是评价实验室质量控制工作，是检验实验室对未知样品获得正确结果的能力。外部质量评价包括职能考核和能力验证职能考核：问卷调查和现场评价能力验证：指利用实验室间的比对确定实验室的检测能力。实施内容和程序主要包括：1、组织者 2、频度 3、样品来源及构成4、考核结果及判定标准 5、程序能力验证：指利用实验室间的比对确定实验室的检测能力。（8）结果的解
25、释和报告艾滋病检测实验室要建立覆盖主要工作内容的SOP文件。(2)失控：外部对照的S/CO值超出3s，称为失控，则本次实验结果不能被接受。实验室所有设备的使用记录和维护记录标准操作程序(SOP)外部质量评价检测人员应分为检验人、复核人、签发人。三、质量评价（EQA）复核人对检测结果进行仔细复核并对结果提出结论（8）及时发现质控结果失控8、实验室数据、相关文件记录与保存实施内容和程序主要包括：（二）质控图的建立及应用实验原始记录表、打印数据、膜反应条带或其照片、检测记录表、标本登记、标本保存记录以及仪器设备维修和校准记录等都应该妥善存档保存10年以上。（7）使用新批次的外部对照质控血清时，必须重
26、新绘制质控图。一组S/CO值的标准差以s表示。国家艾滋病参比室病毒载量实验室能力验证一年两次每次检测之前都应了解质控结果。下面以ELISA方法检测HIV抗体为例，描述建立质控图步骤：我实验室接受考核情况接受国家艾滋病参比实验室血清学PT考核一年3次（HIV、乙肝、丙肝、梅毒、确证条带判读）国家艾滋病参比室病毒载量实验室能力验证一年两次国家艾滋病参比室CD4+T淋巴细胞检测能力验证一年两次高压时,放入指示纸,以便判定灭菌效果制订仪器设备检定计划。高压时,放入指示纸,以便判定灭菌效果（3）从第21次起，将每次检测的质控血清的结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。凡检定不合格或超过检定有效期
27、的仪器设备，一律不得用于检验工作。（1）在常规条件下，对同一批血清连续测定20次（天）或以上，获得一组S/CO值，求均数(x)和标准差(s),超出2s或3s的数据不应删除。（9）附录（包括相关的附加文件如标准表格、设备和试剂盒说明书等。（二）质控图的建立及应用4、绘制和分析质控图的要点使用后要擦干或开盖至晾干（4）方法、目的和应用范围（3）移漂：连续几个（3-5次）外部对照S/CO值都落在均值的一侧则称为位移，提示实验条件发生了较大的变化。签发人对试验结论进行审核、分析、总结、签字HIV检测强制检定仪器：1、样品的接收、登记、处理、保存和运输制订仪器设备检定计划。1、试剂盒内部对照质控品即为试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。（1）告警：外部对照的S/CO值超出2s，系统处于告警状态，应予以注意，是否可以继续检测需要进一步观察。（2）标准差(s)是描述样本与均数之间离散程度的一个指标，是与对照值的均值有关的预期范围。可能是系统误差或外部对照滴度下降造成。谢谢观看！
