1、HBcAg的检测与应用的检测与应用 检验科检验科 胡亚远胡亚远 机体的机体的Th1型免疫反应可促进病原体的清除，而型免疫反应可促进病原体的清除，而Th2型免疫反应则可加重机体的病理损害，在型免疫反应则可加重机体的病理损害，在HBcAg诱导下，外周血单个核细胞（诱导下，外周血单个核细胞（PBMC）产生）产生Th1类细类细胞因子量明显增高；在胞因子量明显增高；在HBeAg诱导下，诱导下，Th2类细胞因类细胞因子量明显增高。慢性子量明显增高。慢性HBV感染进行免疫调节治疗的感染进行免疫调节治疗的一个目标就是使一个目标就是使HBeAg特异性特异性T细胞由细胞由Th2细胞主导细胞主导型转化为型转化为Th
2、1细胞型，细胞型，HBcAg有望打破有望打破HBeAg诱导的诱导的免疫耐受状态而增强免疫耐受状态而增强Th1细胞优势表达达到治疗的目细胞优势表达达到治疗的目的。慢性乙型肝炎患者和的。慢性乙型肝炎患者和HBV慢性携带者体内针对慢性携带者体内针对HBV的特异性的特异性CTL应答明显低下，纠正这种应答明显低下，纠正这种CTL低低反应状态，对于机体有效地清除反应状态，对于机体有效地清除HBV至关重要。至关重要。2.1.1检测 慢性活动性肝炎中血慢性活动性肝炎中血HBcAg阳性率阳性率明显高于明显高于ASC（无症状病毒携带者），（无症状病毒携带者），说明血说明血HBcAg阳性较多见于病变活动较阳性较多见
3、于病变活动较重的慢性肝炎而较少见于病变较静止的重的慢性肝炎而较少见于病变较静止的ASC。血清中的。血清中的HBcAg阳性与肝脏病变阳性与肝脏病变活动程度有关，且对估计预后有很好价活动程度有关，且对估计预后有很好价值。值。HBcAg检出结果是：肝硬化慢性检出结果是：肝硬化慢性乙型肝炎中型慢性乙型肝炎轻型。乙型肝炎中型慢性乙型肝炎轻型。（1）对血液内）对血液内HBV的开壳处理，能直接检的开壳处理，能直接检测测HBcAg，能比，能比HBeAg更客观地反映血更客观地反映血HBV的的存在，以及作出数量多少的判断，可替代存在，以及作出数量多少的判断，可替代HBeAg而作为病毒复制和传染性的敏感指标，是病毒
4、存而作为病毒复制和传染性的敏感指标，是病毒存在的直接标志。它与在的直接标志。它与HBV复制标志呈正相关，可复制标志呈正相关，可以反映以反映HBV活动的复制程度。活动的复制程度。HBcAg与乙型肝与乙型肝炎病毒其他五项标志物相比更是反映炎病毒其他五项标志物相比更是反映HBV复制的复制的直接证据。它可与其他的直接证据。它可与其他的HBV血清学标志物起到血清学标志物起到相互配合和相互补充的作用。相互配合和相互补充的作用。（2）有助于对乙型肝炎病情和预后的判断，）有助于对乙型肝炎病情和预后的判断，HBcAg感染的肝细胞是细胞免疫效应攻击的靶细感染的肝细胞是细胞免疫效应攻击的靶细胞，肝细胞溶解后胞，肝细
5、胞溶解后HBcAg可直接释放入血，故能可直接释放入血，故能直接反映肝细胞损害和病情进展的程度。在急性直接反映肝细胞损害和病情进展的程度。在急性乙型肝炎早期乙型肝炎早期HBcAg亦达高峰值，而且病情严重亦达高峰值，而且病情严重者的者的HBcAg水平也相应提高。慢性乙型肝炎患者水平也相应提高。慢性乙型肝炎患者，血，血HBcAg阴性者比阳性者有明显的临床及生化阴性者比阳性者有明显的临床及生化指标的改善。指标的改善。HBcAg含量与肝脏损害的情况有关含量与肝脏损害的情况有关，有助于抗病毒药物及免疫治疗的疗效评价。，有助于抗病毒药物及免疫治疗的疗效评价。（3）从理论上讲，聚合酶链反应（）从理论上讲，聚合
6、酶链反应（PCR）检）检测法比固相放射免疫法灵敏度高，但实际上可出测法比固相放射免疫法灵敏度高，但实际上可出现现HBcAg阳性而阳性而HBV DNA阴性的结果。因此，两阴性的结果。因此，两种检测方法可以互补使用，以减少漏检。在不具种检测方法可以互补使用，以减少漏检。在不具备备PCR检测条件的单位，以酶联（检测条件的单位，以酶联（ELISA）法试）法试剂盒在检测血清剂盒在检测血清HBV五项标志的同时，检测五项标志的同时，检测HBcAg不仅能进一步了解病毒的复制情况，还可不仅能进一步了解病毒的复制情况，还可了解肝细胞损害和病情进展的程度，且检测费用了解肝细胞损害和病情进展的程度，且检测费用低廉，有
7、临床实用价值。低廉，有临床实用价值。（4）在对献血员的筛选中，单凭）在对献血员的筛选中，单凭HBsAg的测定来判断是否受的测定来判断是否受HBV感染也是不够的感染也是不够的，会漏诊，会漏诊HBsAg阴性而阴性而HBcAg和抗和抗-HBc阳阳性的乙型肝炎患者，只有三者同时检测，性的乙型肝炎患者，只有三者同时检测，才能更好地诊断乙型肝炎并防止在输血中才能更好地诊断乙型肝炎并防止在输血中传播，降低输血后肝炎的发生率。传播，降低输血后肝炎的发生率。HBcAg主要存在于主要存在于HBV颗粒和受染颗粒和受染的肝细胞中，的肝细胞中，HBV复制时复制时HBcAg表达于表达于肝细胞内，分胞核型、胞质型和胞膜型肝
8、细胞内，分胞核型、胞质型和胞膜型。Delladetsima et al发现胆管上皮细胞也发现胆管上皮细胞也是是HBV的适合宿主，的适合宿主，HBV能够在其中复能够在其中复制并表达制并表达HBcAg和和HBsAg抗原。抗原。肝内肝内HBcAg与与HBV DNA的分布区域常较一的分布区域常较一致，有的肝细胞可同时检出致，有的肝细胞可同时检出HBcAg和和HBV DNA，但多数，但多数HBV DNA（）肝细胞并不同时含有（）肝细胞并不同时含有HBcAg。HBV高复制期高复制期HBcAg以胞核表达为主，以胞核表达为主，无或很少在胞质内表达；而低复制期时相反，无或很少在胞质内表达；而低复制期时相反，HB
9、cAg在肝细胞核内而不是细胞质内的表达程度在肝细胞核内而不是细胞质内的表达程度能够精确地反映慢性乙型肝炎患者的病毒复制水能够精确地反映慢性乙型肝炎患者的病毒复制水平。肝平。肝HBcAg与血清与血清HBV DNA水平呈正相关。水平呈正相关。经干扰素经干扰素治疗后的慢性活动性乙型肝炎患者，治疗后的慢性活动性乙型肝炎患者，HBcAg发生从核内向胞质的转换。发生从核内向胞质的转换。HBcAg与与HBeAg常同时表达在肝细胞内常同时表达在肝细胞内，但在亚细胞水平有重要差异。在病毒活跃，但在亚细胞水平有重要差异。在病毒活跃复制的复制的ASC，常有较强的，常有较强的HBcAg胞核表达和胞核表达和HBeAg胞
10、质表达；活动性慢性乙型肝炎时常胞质表达；活动性慢性乙型肝炎时常有有HBcAg的胞质表达，因免疫清除而病毒减的胞质表达，因免疫清除而病毒减少，难以检出少，难以检出HBeAg。作为免疫攻击的靶抗。作为免疫攻击的靶抗原，原，HBeAg不及不及HBcAg重要。重要。乙型肝炎引起的肝硬化肝组织中乙型肝炎引起的肝硬化肝组织中HBcAg、HBV DNA的阳性率较高。的阳性率较高。HBcAg颗粒在肝组织中颗粒在肝组织中主要呈弥漫的浆膜型分布，主要呈弥漫的浆膜型分布，HBcAg和和HBV DNA呈呈浆、膜型分布者，其肝组织中浆、膜型分布者，其肝组织中HBV DNA表达程度表达程度、炎症活动度和纤维组织增生程度，
11、明显较呈核、炎症活动度和纤维组织增生程度，明显较呈核型分布者高。型分布者高。HBcAg及及HBV DNA阳性的肝组织，阳性的肝组织，炎症活动明显，界面呈碎屑坏死，灶性坏死。炎症活动明显，界面呈碎屑坏死，灶性坏死。HBV合并合并HDV感染者的肝组织中，感染者的肝组织中，HBcAg和和HDAg阳性细胞分布关系不密切，阳性细胞分布关系不密切，HBcAg阳性细胞明显少于阳性细胞明显少于HDAg阳性细胞，阳性细胞，HBcAg主要呈核型表达，胞质中阳性颗粒较主要呈核型表达，胞质中阳性颗粒较少见到，表达强度也较弱，表明少见到，表达强度也较弱，表明HDV感染者感染者HBV是低水平复制，是低水平复制，HDV可能
12、有抑制可能有抑制HBV基基因复制或病毒抗原表达的作用，特别是在因复制或病毒抗原表达的作用，特别是在HDV复制活跃的阶段，即复制活跃的阶段，即HDAg大量表达时大量表达时，HBV复制受到的抑制最为明显。复制受到的抑制最为明显。儿童肝内儿童肝内HBcAg主要表达于核内。肝内主要表达于核内。肝内HBcAg呈弥漫性分布者，多见于呈弥漫性分布者，多见于10岁以内的岁以内的较小儿童；而呈局灶性分布者，多见于较小儿童；而呈局灶性分布者，多见于10岁岁以上的较大儿童，以上的较大儿童，HBcAg呈局灶性分布比弥呈局灶性分布比弥漫性分布者，漫性分布者，ALT水平较高并伴有较明显的水平较高并伴有较明显的肝脏炎症活动
13、。在儿童慢性乙型肝炎患者中肝脏炎症活动。在儿童慢性乙型肝炎患者中，肝内，肝内HBcAg呈弥漫性分布者为病毒感染早呈弥漫性分布者为病毒感染早期，期，HBcAg呈局灶性分布并伴随呈局灶性分布并伴随HBeAg阳性阳性者为疾病短期内进展的标志。者为疾病短期内进展的标志。（1）检测肝组织）检测肝组织HBcAg有助于有助于确定乙型肝炎病原学诊断，尤其是对确定乙型肝炎病原学诊断，尤其是对于血清乙型肝炎病毒标志物阴性病例于血清乙型肝炎病毒标志物阴性病例，在病原学诊断中弥补血清学诊断乙，在病原学诊断中弥补血清学诊断乙型肝炎的不足。型肝炎的不足。（2）有助于评估肝细胞坏死炎性活）有助于评估肝细胞坏死炎性活动的程度
14、及病变发展的趋向，推测慢性乙动的程度及病变发展的趋向，推测慢性乙型肝炎的预后。肝细胞内型肝炎的预后。肝细胞内HBcAg转阴和肝转阴和肝细胞坏死病变减轻具有一致性。细胞坏死病变减轻具有一致性。HBcAg浆浆膜型者显示此种一致性，而核型则否，可膜型者显示此种一致性，而核型则否，可能由于肝细胞质、膜上的能由于肝细胞质、膜上的HBcAg作为靶抗作为靶抗原易受到杀伤性了淋巴细胞的攻击，导致原易受到杀伤性了淋巴细胞的攻击，导致肝细胞损害，而核型肝细胞损害，而核型HBcAg则不具有此种则不具有此种作用。作用。（3）HBcAg检测也是判断检测也是判断HBV复制状态的一项重要指标，肝组织复制状态的一项重要指标，
15、肝组织HBcAg与与HBV DNA两种病毒复制标两种病毒复制标志物相关。研究结果证实肝组织志物相关。研究结果证实肝组织HBcAg检测具有多种实用价值，值得检测具有多种实用价值，值得推荐。推荐。国内学者对乙型肝炎孕妇所分娩的死国内学者对乙型肝炎孕妇所分娩的死胎进行研究，发现胎进行研究，发现HBcAg在多种脏器内均在多种脏器内均可表达，其中以肺、肝、肾脏、脐带为最可表达，其中以肺、肝、肾脏、脐带为最高，胸腺、心脏、脾、胎盘次之，大脑最高，胸腺、心脏、脾、胎盘次之，大脑最低。说明低。说明HBV有可能在多种组织内复制并有可能在多种组织内复制并表达抗原。这可能是表达抗原。这可能是HBV通过产妇传播，通过
16、产妇传播，导致新生儿乙型肝炎的高发病率、新生儿导致新生儿乙型肝炎的高发病率、新生儿发育不良和死亡的重要因素。发育不良和死亡的重要因素。总之，充分认识总之，充分认识HBcAg的生物学特点和的生物学特点和其在血液、肝组织内表达的规律，有助于我其在血液、肝组织内表达的规律，有助于我们通过对们通过对HBcAg的检测而正确判断是否有的检测而正确判断是否有HBV的复制以及复制的强度，正确评估肝病的复制以及复制的强度，正确评估肝病活动及肝组织损害的程度，从而指导制定有活动及肝组织损害的程度，从而指导制定有效的治疗方案。对效的治疗方案。对HBcAg的强免疫原特性的的强免疫原特性的认识，可以指导我们研制更有效的预防或治认识，可以指导我们研制更有效的预防或治疗乙型病毒性肝炎的疫苗。疗乙型病毒性肝炎的疫苗。
