1、微生物检验的质量控制实验室的质量管理体系微生物检测实验室的质量控制微生物检测实验室的质量控制不仅仅是对检测过程本身简单的控不仅仅是对检测过程本身简单的控制，而是贯穿于实验室全部质量活制，而是贯穿于实验室全部质量活动的始终。要获得可靠的检测结果，动的始终。要获得可靠的检测结果，实验室必须建立一套全面的质量管实验室必须建立一套全面的质量管理体系。理体系。实验室建立质量管理体系的依据食品微生物检测实验室质量控制规范食品微生物检测实验室质量控制规范 CNAL AC23-2003 食品微生物检测实验室食品微生物检测实验室认可准则认可准则GB 19489-2004 实验室生物安全通用要求实验室生物安全通用
2、要求GB/T154812000检测和校准实验室能力检测和校准实验室能力的通用要求的通用要求全国疾病预防控制机构工作规范全国疾病预防控制机构工作规范2001版版省、地、县级疾病预防控制中心实验室建设省、地、县级疾病预防控制中心实验室建设指导意见指导意见省、地、县级疾病预防控制中心实验室建设指导意见 县级：县级：血清学检测实验室，食源性病原血清学检测实验室，食源性病原菌及肠道菌分离鉴定实验室，菌及肠道菌分离鉴定实验室，HIV初筛初筛实验室，结核病实验室，地方病实验室，实验室，结核病实验室，地方病实验室，寄生虫病实验室，食品、化妆品、水质、寄生虫病实验室，食品、化妆品、水质、涉水产品等健康相关产品微
3、生物实验室，涉水产品等健康相关产品微生物实验室，职业卫生和放射防护检测室，理化实验职业卫生和放射防护检测室，理化实验室，生化实验室。室，生化实验室。省、地、县级疾病预防控制中心实验室建设指导意见 县级：县级：开展免疫学、生物化学实验，细菌培开展免疫学、生物化学实验，细菌培养分离鉴定，常见中毒事件微生物培养初步养分离鉴定，常见中毒事件微生物培养初步分离，食品、水、空气、涉水产品、化妆品分离，食品、水、空气、涉水产品、化妆品等的微生物检测，寄生虫病原学检测，寄生等的微生物检测，寄生虫病原学检测，寄生虫病中间宿主的种群鉴定和密度测定，作业虫病中间宿主的种群鉴定和密度测定，作业场所、公共场所、生活居住
4、环境有毒有害因场所、公共场所、生活居住环境有毒有害因素的相关实验，饮用水和水源水质分析，常素的相关实验，饮用水和水源水质分析，常见毒物和化学污染因素的初步分析。见毒物和化学污染因素的初步分析。县级疾控机构涉水微生物主要仪器装备标准空气微生物采样器空气微生物采样器1+2生化培养箱生化培养箱1+2水微生物膜过滤装置水微生物膜过滤装置1恒温水浴箱恒温水浴箱4+5超净工作台超净工作台2+3纯水处理器纯水处理器1生物安全柜生物安全柜1+2紫外线强度分析仪紫外线强度分析仪1+1生物显微镜生物显微镜2+5恒温培养箱恒温培养箱5+10概念质量控制（质量控制（Quality control）实验室为了保证检验结
5、果实事求是地实验室为了保证检验结果实事求是地反映客观存在而建立的操作程序体系。反映客观存在而建立的操作程序体系。食品微生物检测实验室food microbiological laboratory以质量管理、卫生以及监控以质量管理、卫生以及监控HACCP计划的有效性进行评价为目的，进行检计划的有效性进行评价为目的，进行检测、鉴定或描述食品中测、鉴定或描述食品中致病致病微生物存在微生物存在与否的实验室。实验室可以提供其检查与否的实验室。实验室可以提供其检查范围内的咨询性和技术性服务，包括结范围内的咨询性和技术性服务，包括结果解释和为进一步适当检查提供建议以果解释和为进一步适当检查提供建议以及相应的
6、措施。及相应的措施。微生物实验室质控的重要性产品产品微生物检验，在微生物检验，在预防预防疾病疾病及研究工作中及研究工作中发挥发挥越来越重要的作越来越重要的作用，为了保障检验结果的准确性和用，为了保障检验结果的准确性和可靠性，日常工作中可靠性，日常工作中应应注意开展质注意开展质量控制。量控制。微生物检验的质控 微生物学检验的质量控制也微生物学检验的质量控制也分为分为室内室内质量控制质量控制和和室间质量评价室间质量评价两个组成部分。两个组成部分。微生物学检验的质量控制是保证微生微生物学检验的质量控制是保证微生物检验的直接涂片染色、培养、鉴定、药物检验的直接涂片染色、培养、鉴定、药敏试验及血清学分析
7、等的准确性，避免因敏试验及血清学分析等的准确性，避免因操作变化导致检验结果错误，造成经济损操作变化导致检验结果错误，造成经济损失。失。内容 室内质量控制室内质量控制实验室内部质实验室内部质量保证的核心和基础。量保证的核心和基础。室间质量控制评价室间质量控制评价外部组织外部组织或机构质量评价。或机构质量评价。实验室质量控制 实验室内质控实验室内质控 自我控制自我控制 发现随机误差和新出发现随机误差和新出现的系统误差现的系统误差 评价检验质量的稳定评价检验质量的稳定性性 是检验的基础、必需、是检验的基础、必需、常规常规 实验室间质控实验室间质控 外部质控外部质控 发现系统误差和实验发现系统误差和实
8、验室间数据的可比性室间数据的可比性 评价实验室的测试系评价实验室的测试系统和分析能力统和分析能力 有效的校核是参加与有效的校核是参加与标准实验室的比对标准实验室的比对实验室质量控制示意图内部质量控制外部质量评估能力验证实验室间比对计量认证/审查认可（验收）评审表2007年12月31日废止-人员人员-设施和环境设施和环境-设备和标准物质设备和标准物质-量值溯源和校准量值溯源和校准-校准和检测方法校准和检测方法-样品管理样品管理-记录记录-证书和报告证书和报告-校准或检测的分包校准或检测的分包-外部供给验收外部供给验收实验室资质认定评审准则2007年1月1日实施-人员人员-设施和环境条件设施和环境
9、条件-校准和检测方法校准和检测方法-设备和标准物质设备和标准物质-量值溯源量值溯源-抽样和抽样和样品处置样品处置-结果质量控制结果质量控制-结果报告结果报告第一部分 内部质量控制（IQC）实验室内为达到质量要求的操作技术实验室内为达到质量要求的操作技术和活动。其目的在于监测实验室分析测试和活动。其目的在于监测实验室分析测试过程，以评价检验结果是否可靠，并查找过程，以评价检验结果是否可靠，并查找和排除质量环节中所有阶段中导致不满意和排除质量环节中所有阶段中导致不满意的原因。实验室的内部质量控制适用于整的原因。实验室的内部质量控制适用于整个检测过程的所有活动，包括收集样品、个检测过程的所有活动，包
10、括收集样品、检测直至报告检测结果。检测直至报告检测结果。室内质量控制 做好室内质控直接关系到日常检验做好室内质控直接关系到日常检验工作的质量。室内质控主要包括几个方工作的质量。室内质控主要包括几个方面：实验前的质量控制面：实验前的质量控制（主要是操作人（主要是操作人员、员、常用仪器常用仪器设备设备、实验材料如实验材料如培养基、培养基、试剂、诊断血清、试剂、诊断血清、染色液、染色液、标准菌株标准菌株等）等）、样本检验过程样本检验过程的质量控制（的质量控制（主要主要是环境条件和监督是环境条件和监督），及发报告前的质及发报告前的质量控制。都要保证量值溯源。量控制。都要保证量值溯源。内部质量体系包括以
11、下所有的环节：包括以下所有的环节：1.1.选择样本；选择样本；2.2.收集样本；收集样本；3.3.将样本送到试验室；将样本送到试验室；4.4.试验室接受样本；试验室接受样本；5.5.试验室测试样本；试验室测试样本；6.6.样本测试报告样本测试报告7.7.解释样本的报告结果。解释样本的报告结果。从第一步到第三步，必须从第一步到第三步，必须按照将样本送到试验室的按照将样本送到试验室的正确步骤进行操作。正确步骤进行操作。从第四步到第七步，为了从第四步到第七步，为了保证好的有效结果，必须保证好的有效结果，必须按照良按照良好的、规范的试验好的、规范的试验室操作室操作！人员人员 良好的管理良好的管理 完整
12、、有效、适应的质量体系完整、有效、适应的质量体系 训练有素遵守规程训练有素遵守规程,职责分工明确职责分工明确 使实验室的质量活动处于受控使实验室的质量活动处于受控 具有与从事工作具有与从事工作 相关部门衔接协调相关部门衔接协调 状态，而不是随意而为状态，而不是随意而为 相符合的素质和技能相符合的素质和技能 设备校准和检定设备校准和检定 实验室质量控制的目的实验室质量控制的目的 设备、量具、标准物质设备、量具、标准物质 常年处于受控状态常年处于受控状态 是获得有把握的可靠结果是获得有把握的可靠结果 溯源到国家基准溯源到国家基准 设施和环境设施和环境 校准和检测方法文件化校准和检测方法文件化 符合
13、检测要求符合检测要求 处于完全受控状态处于完全受控状态 样品管理保证样品样品管理保证样品 数据处理、记录、数据处理、记录、外部服务质量外部服务质量 的完整性和安全性的完整性和安全性 证书、报告正确证书、报告正确 采购物品的质量采购物品的质量质量手册的规定 各级人员的职责和权限各级人员的职责和权限 实验室生物安全措施实验室生物安全措施 样品采集和处理指南样品采集和处理指南 微生物学检验项目微生物学检验项目 培养基和试剂的配制方法培养基和试剂的配制方法 室内和室间质量控制室内和室间质量控制 参考数据参考数据 室内质量控制对微生物检验人员的要求对微生物检验人员的要求操作规程、作业指导书、质量手册仪器
14、设备的质量控制培养基的质量控制试剂、染色液及诊断血清的质控样本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存环境条件（生物安全）的质量控制对微生物检验人员的要求特别强调高度的主观判断力特别强调高度的主观判断力 个人的技能、经验个人的技能、经验 微生物学的专业水平微生物学的专业水平培训班培训班专业实验室进修专业实验室进修学术会议交流学术会议交流专业期刊专业期刊检验人员的培养检验质量可以通过正确的操作来检验质量可以通过正确的操作来体现，例如革兰氏染色，可以通过对体现，例如革兰氏染色，可以通过对标准菌株的染色来反映操作和试剂的标准菌株的染色来反映操作和试剂的质量，这是有形的、看得见的。质量，这是有形的、看得
15、见的。检验人员的培养然而，质量保证更依赖检验者的认然而，质量保证更依赖检验者的认知能力。一个能够严谨地分析实验结果知能力。一个能够严谨地分析实验结果的检验者，不仅仅忠实地记录实验数据，的检验者，不仅仅忠实地记录实验数据，而是可以实施更加严格的标准。而是可以实施更加严格的标准。配配有一名经严格训练并长期从事于微生物有一名经严格训练并长期从事于微生物检验的技术人员，全面负责实验室的工检验的技术人员，全面负责实验室的工作。作。检验人员的培养当遇到一些不常见检验结果或一些当遇到一些不常见检验结果或一些散发的错误，例如，试验中发现的少见散发的错误，例如，试验中发现的少见菌、从未见过的药敏表型、污染率的增
16、菌、从未见过的药敏表型、污染率的增加等，往往通过一些质控方法难以检查加等，往往通过一些质控方法难以检查出来，但具有质量意识的微生物技术人出来，但具有质量意识的微生物技术人员能对这些现象质疑，及时纠正，保证员能对这些现象质疑，及时纠正，保证结果的准确可靠。结果的准确可靠。检验人员的培养1.定期进行新理论、新技术和新方法的业定期进行新理论、新技术和新方法的业务学习。尤其是对于最新的检验方法标准务学习。尤其是对于最新的检验方法标准的培训。的培训。2.定期进行理论考核和操作技能考核。定期进行理论考核和操作技能考核。3.相互监督检验工作。相互监督检验工作。4.编写原始记录表格、操作规程、作业指编写原始记
17、录表格、操作规程、作业指导书的过程，就是一次重新学习的过程。导书的过程，就是一次重新学习的过程。检验人员能力的确认检验人员应考核后按检验项目上岗。检验人员应考核后按检验项目上岗。上岗证上面应该写明具体项目，而非上岗证上面应该写明具体项目，而非“微生物检验微生物检验”。校核者应为从事该工作五年以上的校核者应为从事该工作五年以上的同科室检验人员。同科室检验人员。保密原则。保密原则。室内质量控制对微生物检验人员的要求对微生物检验人员的要求操作规程、作业指导书、质量手册操作规程、作业指导书、质量手册仪器设备的质量控制培养基的质量控制试剂、染色液及诊断血清的质控样本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存
18、环境条件（生物安全）的质量控制参考资料GB/T 47892003食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验GB/T 85381995饮用天然矿泉水检验方法饮用天然矿泉水检验方法生活饮用水卫生规范生活饮用水卫生规范2001年版年版消毒技术规范消毒技术规范2002年版年版化妆品卫生规范化妆品卫生规范2002年版年版伯杰氏细菌学手册伯杰氏细菌学手册操作规程、作业指导书国家标准、规范中没有明确说明的步国家标准、规范中没有明确说明的步骤，或者不够明确的判断指标。骤，或者不够明确的判断指标。国家标准、规范中出现错误的部分。国家标准、规范中出现错误的部分。本实验室改进的、独特的处理方法。本实验室改进的、独特的
19、处理方法。比如新仪器的应用，其实这是一种偏离。比如新仪器的应用，其实这是一种偏离。不过，通过验证，完全可以使用。不过，通过验证，完全可以使用。没有标准、规范可以参照的。没有标准、规范可以参照的。新的检验方法的确认开展一项新的检验项目，必须进行相开展一项新的检验项目，必须进行相应的确认。全部参加该检验项目的人员共应的确认。全部参加该检验项目的人员共同仔细学习试验步骤，统一操作程序和实同仔细学习试验步骤，统一操作程序和实验结果的判断指标。验结果的判断指标。按要求的步骤进行实验，详细记录每按要求的步骤进行实验，详细记录每一步结果，同时用已知阳性对照进行参比。一步结果，同时用已知阳性对照进行参比。实验
20、结果综合分析，组织专家评价。实验结果综合分析，组织专家评价。室内质量控制对微生物检验人员的要求对微生物检验人员的要求操作规程、作业指导书、质量手册操作规程、作业指导书、质量手册仪器设备的质量控制仪器设备的质量控制培养基的质量控制试剂、染色液及诊断血清的质控样本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存生物安全的质量控制常用仪器质量控制通常通常包括对冰箱、包括对冰箱、恒温培养恒温培养箱、箱、生化培生化培养箱、电热恒温养箱、电热恒温水浴箱、厌氧培养箱等基本水浴箱、厌氧培养箱等基本设备温度的监控记录设备温度的监控记录。每日（多少次？）观。每日（多少次？）观测测记录记录温度，可绘制温度曲线图。如温度，可绘
21、制温度曲线图。如超出规超出规定范围马上找原因，及时纠正。在仪器的旁定范围马上找原因，及时纠正。在仪器的旁边置一记录本，每次使用、保养、维修都要边置一记录本，每次使用、保养、维修都要记录记录，便于出现便于出现故障故障时时寻找原因。寻找原因。这些仪器这些仪器设备都必须检定并进行期间核查。设备都必须检定并进行期间核查。常用仪器质量控制为避免偶然发生的交叉污染，实验室的为避免偶然发生的交叉污染，实验室的仪器不应频繁移动。仪器不应频繁移动。已经移动了仪器，应记录。已经移动了仪器，应记录。常用仪器质量控制对于箱式设备还要对于箱式设备还要定期清理消毒，定期清理消毒，冰箱定期化霜。冰箱定期化霜。厌氧培养箱或厌
22、氧培养箱或厌氧罐必须厌氧罐必须进行厌氧环境监控。可以使用美兰指示条进行厌氧环境监控。可以使用美兰指示条或者刃天青指示剂（或者刃天青指示剂（化学法化学法）。也可以。也可以使用使用铜绿假单胞菌培养铜绿假单胞菌培养（生物法生物法）。如果）。如果是是CO2培养箱，还需要每天检查、记录箱培养箱，还需要每天检查、记录箱内的内的CO2含量。含量。仪器设备的质量控制标准仪器设备的质量控制标准 设备设备 控制标准控制标准 允许范围允许范围高压灭菌器高压灭菌器121 121培养箱培养箱 36 1水浴箱水浴箱 46 0.5冰箱冰箱 4 2低温冰箱低温冰箱20 5CO2培养箱培养箱5%10%10%高压灭菌锅的质量控制
23、 对于消毒灭菌器械，首先要求检定。对于消毒灭菌器械，首先要求检定。对于日常的灭菌效果对于日常的灭菌效果定期监测（每月一次）定期监测（每月一次）或者期间核查，可以使用化学指示剂胶带或者期间核查，可以使用化学指示剂胶带或者嗜热脂肪芽胞杆菌或者嗜热脂肪芽胞杆菌生物生物指示菌片，选指示菌片，选择较低的灭菌温度时，采用枯草杆菌芽胞择较低的灭菌温度时，采用枯草杆菌芽胞指示菌片。这些产品，除了美国指示菌片。这些产品，除了美国3M公司，公司，还有一些国产货。还有一些国产货。高压灭菌锅的质量控制 高压灭菌锅由专人按作业指导书操作，并高压灭菌锅由专人按作业指导书操作，并做好每一次的作业记录。应包含以下信息：做好每
24、一次的作业记录。应包含以下信息：高压灭菌的材料、开始时间、压力高压灭菌的材料、开始时间、压力/温度、温度、取出时间、高压灭菌指示胶带的颜色变化取出时间、高压灭菌指示胶带的颜色变化（常用无菌培养代替）。（常用无菌培养代替）。高压灭菌锅温度波动范围：高压灭菌锅温度波动范围：110，115和和1212。高压灭菌锅校准周期一般在半年。高压灭菌锅校准周期一般在半年。干热灭菌器的质量控制 干燥灭菌箱日常工作记录中应包括以下信干燥灭菌箱日常工作记录中应包括以下信息：开始的时间、到达灭菌温度时的时间、息：开始的时间、到达灭菌温度时的时间、取出的时间（或关闭时间）。取出的时间（或关闭时间）。干燥灭菌箱的温度校准
25、；用参考温度计进干燥灭菌箱的温度校准；用参考温度计进行温度测试。行温度测试。干燥灭菌箱温度要求与精确度：干燥灭菌箱温度要求与精确度：1605 灭菌灭菌2 h。干燥灭菌箱校准时间一般为一年。干燥灭菌箱校准时间一般为一年。培养基配制用纯净水的控制 对于纯净水器来说：按设备说明，定期清对于纯净水器来说：按设备说明，定期清洁离子交换器和更换离子交换材料。洁离子交换器和更换离子交换材料。检测要求：按照国家标准饮用纯净水检测要求：按照国家标准饮用纯净水GB 173231998电导率为电导率为 10 m ms/cm。检测频率：每次出水。检测频率：每次出水。购买定点供应蒸馏水，应做好相应的质量购买定点供应蒸馏
26、水，应做好相应的质量控制，记录检测结果。控制，记录检测结果。天平的管理 天平放置要求：无振动、无气流影响及天平放置要求：无振动、无气流影响及水平台面上。水平台面上。天平要有使用及运行检查记录。天平要有使用及运行检查记录。天平作为计量仪器是列入国家强制检定天平作为计量仪器是列入国家强制检定的范围，一般的范围，一般1次次/年进行检定。年进行检定。运行检查频率按运行计划或按产品（天运行检查频率按运行计划或按产品（天平生产厂家）给出的标准重量单位进行平生产厂家）给出的标准重量单位进行对照。对照。pH计 pH计使用前应用标准液进行校准。计使用前应用标准液进行校准。缓冲液使用有效期：缓冲液使用有效期：pH
27、 4.00约约1年。年。pH 7.00，约，约6个月。个月。pH 9.00，约，约6个月。个月。pH计的维护：电极外表的定期清洗；计的维护：电极外表的定期清洗；电极敏感性检测及极性恢复。电极敏感性检测及极性恢复。专用仪器设备的质量控制专用微生物生化专用微生物生化鉴定仪等仪器鉴定仪等仪器的使用、保养、维修的使用、保养、维修也都必须也都必须记录。记录。使用细菌鉴定仪要注意维持使用细菌鉴定仪要注意维持环境环境清清洁，洁，制作悬浊液、从鉴定仪中制作悬浊液、从鉴定仪中取、取、放鉴定条放鉴定条都都要小心，以免打翻溢出要小心，以免打翻溢出。专用仪器的质量控制举例全自动微生物生化鉴定仪：举例全自动微生物生化鉴
28、定仪：a.及时更新系统操作软件。及时更新系统操作软件。b.定期请工程师定期请工程师对仪器的探测部位进行清洁。对仪器的探测部位进行清洁。c.校对比色、比浊系统，也可用标准菌株校对比色、比浊系统，也可用标准菌株对对每批号的鉴定卡、条和板每批号的鉴定卡、条和板作质控对照。为作质控对照。为了保证鉴定结果准确，可在了保证鉴定结果准确，可在全自动全自动细菌鉴细菌鉴定仪自动鉴定后定仪自动鉴定后，再，再用肉眼核对一次用肉眼核对一次每个每个比色比色反应反应结果结果。专用仪器的质量控制目测看看鉴定板上目测看看鉴定板上各各个生化反应个生化反应的判断是否妥当。比如的判断是否妥当。比如单核细胞增生单核细胞增生李斯特李斯
29、特菌在菌在API 鉴定条上的生化反应鉴定条上的生化反应结果多半是相同的，区别主要在第结果多半是相同的，区别主要在第1 组，所组，所以，以，我们要特别留意这我们要特别留意这3组生组生化反应的判断。化反应的判断。室内质量控制对微生物检验人员的要求对微生物检验人员的要求操作规程、作业指导书、质量手册操作规程、作业指导书、质量手册仪器设备的质量控制仪器设备的质量控制培养基的质量控制培养基的质量控制试剂、染色液及诊断血清的质控样本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存环境条件（生物安全）的质量控制卫生检验中常用的培养基 水质检测用培养基：水质检测用培养基：7种种 化妆品检验用培养基化妆品检验用培养基：8
30、种种 食品检验用培养基食品检验用培养基：常用的有：常用的有37 种，种，110种被列入了种被列入了GB/T 4789中，其中生化试验培中，其中生化试验培养基养基23种，一般和专用培养基种，一般和专用培养基89种。种。食品、化妆品及涉水产品等产品微生物检食品、化妆品及涉水产品等产品微生物检验常规项目中所用的增菌分离培养基有所验常规项目中所用的增菌分离培养基有所不同。对于菌种鉴定所用的培养基，各类不同。对于菌种鉴定所用的培养基，各类产品分离的菌种其鉴定所用的培养基基本产品分离的菌种其鉴定所用的培养基基本相同。相同。培养基质量控制培养基质量控制包括培养基质量控制包括三三方面。方面。一是原料选择；一是
31、原料选择；二是配制方法二是配制方法；三是质量检查。三是质量检查。培养基质量控制 原料选择：原料选择：基础培养基一定基础培养基一定要要挑选优质挑选优质品牌，如品牌，如Oxoid、Difco、生物生物梅梅里埃产品等。里埃产品等。即使在国内的产品中，即使在国内的产品中，也有明显的差异。可以用好的产品也有明显的差异。可以用好的产品作为比对材料。作为比对材料。培养基质量控制配制方法配制方法：每次配制均按每次配制均按生产厂家提供生产厂家提供的说明书上的的说明书上的方法与分量，记录方法与分量，记录品名、干品名、干粉的批号、称取份量、加水量、粉的批号、称取份量、加水量、配制配制规格、规格、使用的天平、高压锅、
32、灭菌时间、使用的天平、高压锅、灭菌时间、pH计计与与最初最终的最初最终的pH、操作者、操作者、操作操作日期，日期，并于包装上标明品名、使用期限。并于包装上标明品名、使用期限。培养基质量控制 实验室要确保所有的试剂（包括储存溶实验室要确保所有的试剂（包括储存溶液）、培养基、稀释剂和其它的悬浮液都液）、培养基、稀释剂和其它的悬浮液都贴上标签，标明其适用性、特性、浓度、贴上标签，标明其适用性、特性、浓度、储存条件、准备日期、有效期和（或）推储存条件、准备日期、有效期和（或）推荐的储存时期。荐的储存时期。负责微生物检验准备的试验人员可以从记负责微生物检验准备的试验人员可以从记录中确认。录中确认。培养基
33、质量控制 制作过程必须固定统一。不得随意变化。制作过程必须固定统一。不得随意变化。严格遵守并执行产品说明书上标明的培养严格遵守并执行产品说明书上标明的培养基或添加剂的剂量、基或添加剂的剂量、pH值、灭菌处理时值、灭菌处理时间及温度。间及温度。培养基名称、批号、配制量、规格、配方、培养基名称、批号、配制量、规格、配方、配制日期和配制人员姓名都必须详细记录。配制日期和配制人员姓名都必须详细记录。培养基外观检查 新配制或新购入的培养基必须先以肉眼检查其新配制或新购入的培养基必须先以肉眼检查其外观，颜色、透明度等等，无开裂和皱褶。外观，颜色、透明度等等，无开裂和皱褶。培养基应测培养基应测pH值，不得超
34、过所预期值的值，不得超过所预期值的0.2。平板培养基最易脱水，应放在严密的有盖容器平板培养基最易脱水，应放在严密的有盖容器内或塑料袋内。这样平板内培养基可在内或塑料袋内。这样平板内培养基可在4冰箱冰箱内避光保存两周左右，试管内培养基可保存内避光保存两周左右，试管内培养基可保存12个月。我们使用橡胶塞的生理盐水瓶包装的琼个月。我们使用橡胶塞的生理盐水瓶包装的琼脂，可以维持更长的时间。脂，可以维持更长的时间。培养基的使用量 平板培养基厚度一般平板培养基厚度一般3 mm（90 mm平皿平皿1520 mL培养基）。培养基）。药敏试验用药敏试验用2 mm（90 mm平皿平皿10 mL培养基）培养基）斜面
35、不超过试管的斜面不超过试管的2/3。以免产气的时候以免产气的时候涌出试管。涌出试管。培养基的有效性试验的判断指针检查实验室内制备的培养基、稀释剂和其检查实验室内制备的培养基、稀释剂和其它悬浮液的性质是否合适，可参照以下几它悬浮液的性质是否合适，可参照以下几项进行：项进行：a)目标微生物的恢复或生活力的维持；目标微生物的恢复或生活力的维持；b)非目标微生物的抑制；非目标微生物的抑制；c)生化（区别的和诊断的）性质；生化（区别的和诊断的）性质；d)理化性质（例如理化性质（例如pH，体积）。体积）。培养基的有效性试验每一批新制或新购的培养基，使每一批新制或新购的培养基，使用前均须取已知性质的标准菌株
36、试验用前均须取已知性质的标准菌株试验是否能支持，区分或选择某类细菌的是否能支持，区分或选择某类细菌的生长。生长。常用培养基的质量控制 生长率测试适用于液体培养基：将生长率测试适用于液体培养基：将菌培养液，用生理盐水做倍比稀释，菌培养液，用生理盐水做倍比稀释，取合适稀释度进行平板计数，同时取合适稀释度进行平板计数，同时以按相关的培养基配方新鲜配制的以按相关的培养基配方新鲜配制的培养基进行对照。不低于培养基进行对照。不低于10%。常用培养基的质量控制常用培养基的质量控制 菌落大小测试：划线分离测试菌，菌落大小测试：划线分离测试菌，取取10个菌落测量直径大小，其直径个菌落测量直径大小，其直径均值与新
37、鲜配制的培养基无统计学均值与新鲜配制的培养基无统计学差异。差异。培养基的有效性试验培养基的试验结果需要加以记录，培养基的试验结果需要加以记录，项目包括试验日期、试验结果以及实项目包括试验日期、试验结果以及实验者的签名等。验者的签名等。此记录本需便于检验室人员的查此记录本需便于检验室人员的查看，以便能随时解决任何发生的难题。看，以便能随时解决任何发生的难题。培养基的有效期配制好的培养基有效期的长短，配制好的培养基有效期的长短，应参考相应的书籍。应参考相应的书籍。若购买现用的培养基，均应注意若购买现用的培养基，均应注意有效期的标示是否正确。如血平板的有效期的标示是否正确。如血平板的有效期为有效期为
38、3星期，厌氧菌分离培养基为星期，厌氧菌分离培养基为12星期等。星期等。培养基的无菌试验每批配好的培养基须进行无菌每批配好的培养基须进行无菌试验。可结合空白检验进行。试验。可结合空白检验进行。随机选取随机选取510%的量，如果的量，如果配制大量的培养基，则任意选取配制大量的培养基，则任意选取10个平板或管装培养基，个平板或管装培养基，35过夜培过夜培养，证明无菌生长为合格。养，证明无菌生长为合格。培养基质量控制1.日常检验时进行的空白对照，可以证明日常检验时进行的空白对照，可以证明培养基已经达到灭菌效果。培养基已经达到灭菌效果。2.用用标准标准菌株接种菌株接种，以保证各种培养基能以保证各种培养基
39、能培养分离出相应的致病菌，提高分离率。培养分离出相应的致病菌，提高分离率。3.玻璃器具：注意残留消毒剂或者其他抑玻璃器具：注意残留消毒剂或者其他抑菌物质对微生物生长的影响。菌物质对微生物生长的影响。培养基质量控制a.基础培养基：要求微生物生长良好，并表现其典基础培养基：要求微生物生长良好，并表现其典型的特征。型的特征。如如血琼脂血琼脂平板接种平板接种金黄色葡萄球菌和金黄色葡萄球菌和溶血链球菌溶血链球菌。b.选择性培养基：要求被抑制的细菌不生长或生长选择性培养基：要求被抑制的细菌不生长或生长较弱，而被选择生长的细菌生长良好。同时较弱，而被选择生长的细菌生长良好。同时看其看其长势是否符合规定，长势
40、是否符合规定，如如SS平板接种平板接种沙门氏菌、志沙门氏菌、志贺氏菌贺氏菌、大肠、大肠埃希氏埃希氏菌。菌。c.生化反应培养基：要求用标准阳性和阴性菌株进生化反应培养基：要求用标准阳性和阴性菌株进行质量控制。行质量控制。培养基质量控制可以按照卫生部的可以按照卫生部的WS/T 2322002商品性微生物培养基质量检验规程商品性微生物培养基质量检验规程进行培养基的质量控制。进行培养基的质量控制。如果有条件可参照国际食品微生物如果有条件可参照国际食品微生物与食品卫生委员会（与食品卫生委员会（ICFMH）提供的关提供的关于培养基质控方法进行质控。于培养基质控方法进行质控。培养基名称培养基名称 菌株名称菌
41、株名称 预期结果预期结果普通琼脂普通琼脂 大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌 生长生长 表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌 生长生长血琼脂平板血琼脂平板 乙型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌 生长、乙型溶血生长、乙型溶血 甲型溶血性链球菌甲型溶血性链球菌 生长、甲型溶血生长、甲型溶血伊红美蓝琼脂伊红美蓝琼脂 大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌 生长、发酵乳糖生长、发酵乳糖 鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌 生长、不发酵乳糖生长、不发酵乳糖 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 不生长不生长SS琼脂琼脂 大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌 生长不良生长不良 鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌 生长生长 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 不生长不生长 尿素培养基
42、尿素培养基 普通变形杆菌普通变形杆菌 阳性（红色）阳性（红色）志贺氏菌志贺氏菌 阴性（不变色）阴性（不变色）培养基的质量控制没有列在没有列在WS/T 2322002商商品性微生物培养基质量检验规程品性微生物培养基质量检验规程中的培养基，必须自行制定质量控中的培养基，必须自行制定质量控制作业指导书。注意必须区分定性制作业指导书。注意必须区分定性培养基或者定量培养基的质控要求培养基或者定量培养基的质控要求不同。不同。培养基的质量控制培养基的质量控制购置培养基时，要求供应商提供产品质购置培养基时，要求供应商提供产品质控证书，选择通过控证书，选择通过ISO9001的生产厂的生产厂家。家。培养基使用前必
43、须用对照菌株进行评估。培养基使用前必须用对照菌株进行评估。按照培养基和试剂标签说明的贮藏条件按照培养基和试剂标签说明的贮藏条件保存。保存。培养基的质量控制培养基的质量控制Oxoid出产质量控制标准菌株出产质量控制标准菌株Quanti-Cult，含有指定数目的微生物，用于质量控制工作。含有指定数目的微生物，用于质量控制工作。在定义的程序和生长条件下，形成指定数目在定义的程序和生长条件下，形成指定数目的菌落单位；如果在其它条件下，或者培养的菌落单位；如果在其它条件下，或者培养基含有更多的抑制剂（选择剂），或者培养基含有更多的抑制剂（选择剂），或者培养基的营养不良，则不能保证形成指定数目的基的营养不
44、良，则不能保证形成指定数目的菌落单位。菌落单位。培养基的质量控制培养基的质量控制20062006年，国家质检总局批准年，国家质检总局批准49种国家标准物质，其中包括用作种国家标准物质，其中包括用作食品微生物菌落总数标准物质。食品微生物菌落总数标准物质。培养基的质量控制培养基的质量控制此次批准的食品微生物菌落总数标准物此次批准的食品微生物菌落总数标准物质，一种是以模拟食品实物，添加芽胞杆菌、质，一种是以模拟食品实物，添加芽胞杆菌、肠杆菌、沙雷氏菌等菌株经冷冻干燥制成，肠杆菌、沙雷氏菌等菌株经冷冻干燥制成，另一种是以鱼粉为基质与细菌混合经冷冻干另一种是以鱼粉为基质与细菌混合经冷冻干燥制成。这类标准
45、物质在控制食品中细菌总燥制成。这类标准物质在控制食品中细菌总数的测量中起着数的测量中起着测量标准测量标准的作用，有利于食的作用，有利于食品中细菌数量测量方法的核准和量值统一，品中细菌数量测量方法的核准和量值统一，更有利于保证检验质量。更有利于保证检验质量。室内质量控制对微生物检验人员的要求对微生物检验人员的要求操作规程、作业指导书、质量手册操作规程、作业指导书、质量手册仪器设备的质量控制仪器设备的质量控制培养基的质量控制培养基的质量控制试剂、染色液及诊断血清的质控试剂、染色液及诊断血清的质控样本检验过程的质量控制标准菌株的来源和保存环境条件（生物安全）的质量控制试剂的质量控制注意有效期。注意有
46、效期。监控贮存条件，并定时记录。监控贮存条件，并定时记录。用阳性和阴性标准菌株进行核查。用阳性和阴性标准菌株进行核查。血浆凝固酶血浆凝固酶金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌氧化酶试剂氧化酶试剂铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌靛基质试剂靛基质试剂大肠埃希氏菌、产气肠杆菌大肠埃希氏菌、产气肠杆菌常用试剂的阳性、阴性对照菌株常用试剂常用试剂 阳性对照菌株阳性对照菌株阴性对照菌株阴性对照菌株血浆凝固酶试剂 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌触酶试验用试剂 金黄色葡萄球菌 化脓链球菌V-P试验用试剂阴沟肠杆菌大肠埃希氏菌靛基质试剂大肠埃希氏菌阴沟肠杆菌氧化酶试剂铜绿假
47、单胞菌大肠埃希氏菌 试剂的质量控制 各类试剂，在配制或购入后均应进行各类试剂，在配制或购入后均应进行“有效有效”试验，用已知阳性及阴性菌株进行试验。试验，用已知阳性及阴性菌株进行试验。试剂须根据标示的配制要领或制造者的要求适试剂须根据标示的配制要领或制造者的要求适当的储存。当的储存。对较稳定的试剂，如靛基质试剂应在配制时及对较稳定的试剂，如靛基质试剂应在配制时及每周予以检测核对，凡不稳定的试剂每天使用每周予以检测核对，凡不稳定的试剂每天使用时均应检测，合格后才能使用。时均应检测，合格后才能使用。染色液质量控制染色液必须按标准方法与分染色液必须按标准方法与分量量配制配制，过滤后使用，每次记录，过
48、滤后使用，每次记录并并且标明配制且标明配制量量、操作者操作者以及购入或以及购入或者配制日期。者配制日期。染色方法质量控制染色方法染色方法也也必须必须进行进行染色步骤染色步骤质控。如革兰质控。如革兰氏氏染色在一张玻片上染色在一张玻片上同时涂有同时涂有金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌和大肠和大肠埃埃希氏希氏菌等等菌等等，每次质控与检品同步，每次质控与检品同步进行，进行，以保证染色性判断准确无误。以保证染色性判断准确无误。购买现成的试剂盒，则使用标准菌购买现成的试剂盒，则使用标准菌株作为参照。株作为参照。各种常用染色液的质控菌株染色液阳性对照菌阴性对照菌监控频度染色液阳性对照菌阴性对照菌监控频度革兰氏染
49、色液金黄色葡萄球菌大肠埃希氏菌每批革兰氏染色液金黄色葡萄球菌大肠埃希氏菌每批荚膜染色液肺炎克雷伯菌每批荚膜染色液肺炎克雷伯菌每批鞭毛染色液普通变形杆菌福氏志贺氏菌每次鞭毛染色液普通变形杆菌福氏志贺氏菌每次诊断血清的质控对待诊断血清，因为容易变质，所以对待诊断血清，因为容易变质，所以需要经常进行质量控制。原理与培养基的需要经常进行质量控制。原理与培养基的质量控制相同。在购入新的批号或者期间质量控制相同。在购入新的批号或者期间核查的时候，必须记录日期、观察澄清度、核查的时候，必须记录日期、观察澄清度、颜色和是否有沉淀物，然后置颜色和是否有沉淀物，然后置4冰箱保冰箱保存。存。诊断血清的质控使用标准菌
50、株来核查血清的凝集情况，使用标准菌株来核查血清的凝集情况，测试其敏感性和特异性。注意有效期和效价测试其敏感性和特异性。注意有效期和效价的变化，的变化，尤其是接近保质期的时候。每次使尤其是接近保质期的时候。每次使用前应注意检查诊断血清的批号、有效期，用前应注意检查诊断血清的批号、有效期，如发现浑浊或有絮状沉淀物时，很可能系污如发现浑浊或有絮状沉淀物时，很可能系污染所致，不能再继续使用。染所致，不能再继续使用。微生物实验室诊断血清质控记录表 名称检测频率质控物质控鉴定记录日期操作者沙门氏菌属诊断血清每月伤寒沙门氏菌大肠埃希氏菌（ATCC25922）鼠伤寒沙门氏菌无菌盐水 伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌
