1、微生物知识微生物知识&环境控制要求环境控制要求孙青2014.10.21 第一部分第一部分微生物知识微生物知识 什么是微生物？什么是微生物？l定义：微生物是定义：微生物是一切肉眼一切肉眼看不见看不见或或看不清楚的看不清楚的微小微小生物的总称。生物的总称。l必须借助必须借助光学显微镜光学显微镜或或电电子显微镜子显微镜放大数百倍、数放大数百倍、数千倍，甚至数万倍才能观千倍，甚至数万倍才能观察到的微小生物。察到的微小生物。微微生生物物的的分分类类具有细胞结具有细胞结构构的微生物的微生物没有细胞结构没有细胞结构的的微生物：病毒微生物：病毒 原核生物原核生物（由原核细胞构成的）（由原核细胞构成的）真核生物
2、真核生物（由真核细胞构成的）（由真核细胞构成的）真菌真菌显微藻类显微藻类原生动物原生动物细菌细菌放线菌放线菌 细菌细菌：肺炎球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌：肺炎球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌真菌真菌：蘑菇、霉菌、酵母菌、念珠菌（湿疹）：蘑菇、霉菌、酵母菌、念珠菌（湿疹）放线菌放线菌：从放线菌中发现链霉素、土霉素从放线菌中发现链霉素、土霉素支原体支原体：肺炎支原体：肺炎支原体衣原体衣原体：沙眼：沙眼立克次体立克次体：斑疹伤寒：斑疹伤寒螺旋体螺旋体：梅毒：梅毒病毒病毒：甲、乙肝病毒，麻疹病毒，流感病毒。：甲、乙肝病毒，麻疹病毒，流感病毒。微生物微生物种类种类八大类八大类 细菌细菌：是一类：是一类细胞细而短、直
3、径一般为细胞细而短、直径一般为0.55.0mm，结构简单、细胞壁坚韧，以结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂二分裂方式无性繁殖的原核微生方式无性繁殖的原核微生物，分布广泛。生长最适温度为物，分布广泛。生长最适温度为3035，主要去除方法有，主要去除方法有紫外杀菌法、滤膜过滤法及高温杀灭法等。紫外杀菌法、滤膜过滤法及高温杀灭法等。个别细菌如：个别细菌如：嗜热脂肪芽孢杆菌嗜热脂肪芽孢杆菌，能在，能在121条件，可耐受条件，可耐受45min。灭菌柜验证中作为生物指示剂灭菌柜验证中作为生物指示剂最适合生长条件为最适合生长条件为5560微生物微生物种类种类 真菌真菌：包包括单细胞与多细胞两类括单细胞与多细胞两
4、类，单，单细胞真菌呈圆细胞真菌呈圆形形或或卵圆形卵圆形称为称为酵母菌酵母菌；多细胞真菌由菌；多细胞真菌由菌丝和丝和孢子组成，孢子组成，称称为为丝丝状菌或状菌或霉菌霉菌。真真菌生长的最适的温度菌生长的最适的温度为为2328，一般，一般加热加热6070 1小时小时即被杀死即被杀死，用一定浓，用一定浓度的度的酒精及甲醛也可杀死。酒精及甲醛也可杀死。病毒病毒：属非细胞型微生物，在自然界分布非常广泛，：属非细胞型微生物，在自然界分布非常广泛，可在人、动物、植物、真菌和细菌中寄居并引起感染。病毒可在人、动物、植物、真菌和细菌中寄居并引起感染。病毒是是体积最小、结构最简单体积最小、结构最简单的微生物，它仅有
5、一种核酸（的微生物，它仅有一种核酸（DNA或或RNA）作其遗传物质。）作其遗传物质。微生物微生物种类种类 微生物微生物体积小、面积大体积小、面积大适应强、变异频适应强、变异频生长旺、繁殖快生长旺、繁殖快吸收多、转化快吸收多、转化快分布广、种类多分布广、种类多微生物五大共性微生物五大共性个体极其微小，必须借助显微镜放大几倍、几百倍、上千倍，乃至数万倍才能看清。食谱广泛，凡是动植物能利用的营养，微生物都能利用，大量的动植物不能利用的物质，甚至剧毒的物质，微生物照样可以视为美味佳肴。二分裂是细菌最普遍、最主要的繁殖方式。能耐0196的低温，可在250300的高温条件下正常生长。耐药性产生的原耐药性产
6、生的原因。因。微生物几乎无处不有，无孔不入，地球上有200万生物，其中微生物有20万种之多。微生物的营养微生物的营养营养营养元素元素碳源是构成碳源是构成细胞的重要细胞的重要物质。物质。氮是组成氮是组成蛋白质和蛋白质和核酸的重核酸的重要元素。要元素。细菌所需无机盐细菌所需无机盐包括磷、硫、镁、包括磷、硫、镁、铁、钾、钠、钙、铁、钾、钠、钙、氯、锰、锌、钴、氯、锰、锌、钴、铜等。铜等。生长因子是某些微生长因子是某些微生物生长发育所必生物生长发育所必需，而其自身又不需，而其自身又不能合成的一类营养能合成的一类营养物质。包括维生素、物质。包括维生素、嘌呤和嘧啶。嘌呤和嘧啶。水占细胞浆的水占细胞浆的70
7、%70%90%90%，是，是细胞的重要组细胞的重要组成成分。成成分。培养基：培养基：人们提供微生物生长繁殖和生物合成各人们提供微生物生长繁殖和生物合成各 种代谢产物所需要的按一定比例配制的种代谢产物所需要的按一定比例配制的 多种营养物质的混合体多种营养物质的混合体。培养基中主要包含了微生物生长所需要的培养基中主要包含了微生物生长所需要的碳源、氮碳源、氮源、无机盐及微量元素源、无机盐及微量元素。影响微生物生长繁殖的因素影响微生物生长繁殖的因素因素因素营养营养温度温度pH渗透压渗透压其他其他水份水份微生物存在微生物存在l水l空气l衣服l地面l废水l排水口l洗手池l嘴l头发l皮肤l鼻子l肠道l食物l
8、昆虫l动物l等等杆菌杆菌(大肠杆菌大肠杆菌)大肠杆菌大肠杆菌(带鞭毛带鞭毛)微生物的主要类群微生物的主要类群杆菌杆菌(碳疽碳疽)沙门氏菌沙门氏菌葡萄球菌葡萄球菌微生物的主要类群微生物的主要类群链球菌链球菌弧状菌弧状菌四叠球菌四叠球菌黑曲霉菌黑曲霉菌微生物的主要类群微生物的主要类群丝状真菌丝状真菌真菌的繁殖：分生孢子真菌的繁殖：分生孢子微生物数量 时间衰亡期衰亡期稳定期稳定期对对数数生生长长期期延缓期延缓期细菌能否无限繁殖下去？微生物的生长规律微生物的生长规律延滞期延滞期：细胞变大，细胞内细胞变大，细胞内RNA含量增高，含量增高，培养基不丰富培养基不丰富 时延滞期较长。时延滞期较长。对数期对数期
9、：细胞分裂最快，代谢旺盛，生长速率由营养成分决定。：细胞分裂最快，代谢旺盛，生长速率由营养成分决定。稳定期稳定期：总体数量保持不变，开始产生代谢产物或开始形成芽孢。：总体数量保持不变，开始产生代谢产物或开始形成芽孢。衰亡期衰亡期：由于代谢毒素的积累，死亡数超过新生数。：由于代谢毒素的积累，死亡数超过新生数。微生物的益处微生物的益处l啤酒，葡萄酒的生产l面包酵母的生产l奶酪的生产l醋的生产l酸奶的生产l维生素的生产l类固醇的生产l抗菌素、干扰素的生产l分解废物，循环利用l帮助肠道中的食物消化l除虫&微生物的害处微生物的害处l导致伤口感染l导致胃肠不适l引起感冒，咳嗽l尿道感染l败血症l癌症l脑脊
10、膜炎l破伤风l艾滋病许多细菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能产生热原。许多细菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能产生热原。热原热原：是微量即可引起恒温动物体温异常升高的物质的总称：是微量即可引起恒温动物体温异常升高的物质的总称 主要物质为细菌内毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗主要物质为细菌内毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗 体复合物等。（体复合物等。（家兔法进行检查家兔法进行检查）细菌内毒素细菌内毒素：一般指革兰阴性细菌细胞壁的结构成分，主要一般指革兰阴性细菌细胞壁的结构成分，主要 是脂多糖。（是脂多糖。（鲎试剂法进行检查鲎试剂法进行检查）耐热性：耐热性：250加热加热30min，才可彻底破坏；，才可彻底破坏；
11、滤过性：其体积小，约在滤过性：其体积小，约在15nm之间；之间；具有水溶性及不挥发性，可被活性碳吸附；具有水溶性及不挥发性，可被活性碳吸附；能被强酸、强碱及氧化剂破坏。能被强酸、强碱及氧化剂破坏。消毒、灭菌概念消毒、灭菌概念概念概念杀死所有微生物包括芽孢和繁殖体杀死病原微生物阻止或抑制微 生物生长繁殖无活的微生物1.灭菌灭菌2.消毒消毒3.防腐防腐4.无菌无菌消毒和灭菌前提条件：消毒和灭菌前提条件：清洗干净清洗干净!灭菌（消毒）类型灭菌（消毒）类型温度与时间温度与时间杀菌范围杀菌范围灭菌物品灭菌物品干干热热灭灭菌菌火焰灭菌火焰灭菌火焰灼烧火焰灼烧 全部全部微生物微生物耐热物品、接种环、耐热物品
12、、接种环、试管口等试管口等热空气灭菌热空气灭菌160 2 h160 2 h玻璃器皿、金属用具、玻璃器皿、金属用具、等耐热物品等耐热物品湿湿热热灭灭菌菌高压高压蒸汽蒸汽灭菌灭菌法法121 15-30min121 15-30min培养基、生理盐水、培养基、生理盐水、玻璃器皿等玻璃器皿等115 15-20min115 15-20min湿热灭菌湿热灭菌比干热效比干热效果好果好水蒸汽穿透力强蒸汽凝结成水，放出潜热，提高物体温度菌体蛋白质吸收水分易凝固热力灭菌热力灭菌化学消毒化学消毒类别类别名称名称常用浓度常用浓度应用范围应用范围作用机理作用机理醇类醇类乙醇乙醇70-7570-75皮肤、体温计、器械消毒皮
13、肤、体温计、器械消毒脱水、蛋白质变性脱水、蛋白质变性表面活表面活性剂性剂新洁尔灭新洁尔灭0.05-10.05-1皮肤、器械消毒皮肤、器械消毒破坏细胞膜、改变破坏细胞膜、改变通透性通透性酸类酸类乳酸乳酸0.33-1mol/L0.33-1mol/L空气消毒空气消毒 /氧化剂氧化剂过氧乙酸过氧乙酸0.2-0.5%0.2-0.5%（需严格控（需严格控制浓度）制浓度）塑料、玻璃、纺织原料及人造塑料、玻璃、纺织原料及人造纤维制品；也适用于食品表面纤维制品；也适用于食品表面消毒（水果、蔬菜、蛋类）和消毒（水果、蔬菜、蛋类）和环境地面消毒环境地面消毒与蛋白质活性基团与蛋白质活性基团反应，酶失活反应，酶失活氯制
14、剂氯制剂漂白粉漂白粉（次氯酸（次氯酸钙）钙）0.5-1.2%0.5-1.2%饮用水、厂房和用具，饮用水、厂房和用具，澄清溶液可用水果和蔬菜消毒澄清溶液可用水果和蔬菜消毒杀死细菌芽孢杀死细菌芽孢卤素卤素氯气氯气0.2-1ppm0.2-1ppm饮用水消毒饮用水消毒同上同上酚类酚类来苏尔来苏尔1-21-2手、皮肤消毒手、皮肤消毒同上同上3-53-5器械、地面消毒器械、地面消毒 第二部分第二部分环境控制要求环境控制要求药品生产中微生物控制药品生产中微生物控制l 为什么要对药品生产进行微生为什么要对药品生产进行微生物控制？物控制？微生物可以致病微生物可以致病甚至致命甚至致命。特别是注。特别是注射剂的危害
15、射剂的危害（乙肝疫苗，刺五加）（乙肝疫苗，刺五加）。l如果细菌得到了如果细菌得到了必要的养料、一定量必要的养料、一定量的水份和合适的温度，的水份和合适的温度，它们就能迅速它们就能迅速繁殖，它们繁殖的速度快得惊人。通繁殖，它们繁殖的速度快得惊人。通常一个细菌在仅仅常一个细菌在仅仅24小时后可产生出小时后可产生出281兆兆(百万百万)个个的细菌。的细菌。主要的微生物污染源主要的微生物污染源l人员l 设备l 原辅料l 法l环人员是洁净室中的最大污染源。人员是洁净室中的最大污染源。人在代谢过程中会释放和分泌污染物，人体表面、衣服能沾人在代谢过程中会释放和分泌污染物，人体表面、衣服能沾染、携带污染物，在
16、洁净室内的各种动作也会产生微粒和微染、携带污染物，在洁净室内的各种动作也会产生微粒和微生物。生物。GMPGMP对人员有着严格的要求。对人员有着严格的要求。防范措施：防范措施：1.建立个人健康档案建立个人健康档案 新员工入厂全面体检，直接接触药品的生产人员每年至少体检一次，新员工入厂全面体检，直接接触药品的生产人员每年至少体检一次，如发现有传染疾病应立即隔离。如发现有传染疾病应立即隔离。2.清洁的个人卫生清洁的个人卫生 勤洗澡、理发、剪指甲勤洗澡、理发、剪指甲 正确的洗手、更衣流程及防护方式正确的洗手、更衣流程及防护方式3.洁净区内的自我约束洁净区内的自我约束 不佩带首饰，不化妆不佩带首饰，不化
17、妆 进出次数应可能地少，在操作过程中应减小动作幅度进出次数应可能地少，在操作过程中应减小动作幅度 规范各类操作及避免违规行为规范各类操作及避免违规行为人员需要规范或注意的部分人员需要规范或注意的部分净化工作服穿戴净化工作服穿戴一次更鞋一次更鞋：阻断外界粘在鞋底的垃圾、颗粒及微生物。相对而言，阻断外界粘在鞋底的垃圾、颗粒及微生物。相对而言，脚底是最脏的部分。脚底是最脏的部分。脱去外套脱去外套：阻断外界沉降在外套上的颗粒和微生物。阻断外界沉降在外套上的颗粒和微生物。一更洗手一更洗手：规范的洗手能消除手部皮肤的污垢和大部分的微生物。洗规范的洗手能消除手部皮肤的污垢和大部分的微生物。洗 手一定要用洗手
18、液和充足的流水。手一定要用洗手液和充足的流水。二更二更带口罩带口罩：阻断鼻腔、呼吸道的微生物发散，洁净区内不能脱下口罩。阻断鼻腔、呼吸道的微生物发散，洁净区内不能脱下口罩。带发套带发套：阻断头发、头皮表面的微生物发散。保证发套完整的包裹头发。阻断头发、头皮表面的微生物发散。保证发套完整的包裹头发。穿连体服穿连体服：阻断体表皮肤的微生物发散。洁净区内不能解开连体服。阻断体表皮肤的微生物发散。洁净区内不能解开连体服。手消毒手消毒：再次消除手部的细菌和微生物。再次消除手部的细菌和微生物。75%75%的酒精能杀灭手部的酒精能杀灭手部95%95%以上的以上的 微生物。微生物。人员进入洁净区的程序人员进入
19、洁净区的程序 NoYes大家来找茬大家来找茬-1头发应完全包在帽子内36大家来找茬大家来找茬-2不能配戴手表、首饰大家来找茬大家来找茬-3定时或在任何关键操作前，应消毒手套填写批记录后，手套应消毒2023-2-1039手的卫生手的卫生l每只手可携带40万个细菌；刚洗过的手，每平方厘米也可检验出3200个细菌。l110万个细菌/1cm2皮肤表面!l用流水（如自来水）洗手，能使手上的致病微生物减少80%；l用皂液充分洗手，再用自来水冲洗能使致病微生物减少95%。l洗手后正确使用消毒剂能使致病微生物减少到99%。洗手的重要性洗手的重要性:洗手的正确方法洗手的正确方法1.用清水润湿双手及手腕以用清水润
20、湿双手及手腕以上上10厘米厘米2.均匀涂上均匀涂上 洗手液洗手液 3.掌心相对，掌心相对，手指并拢手指并拢 相互摩擦相互摩擦 4.手心对手背沿指缝相手心对手背沿指缝相 互摩擦交换进行互摩擦交换进行 5.掌心相对，双手交叉，掌心相对，双手交叉，沿指缝相互摩擦沿指缝相互摩擦 6.弯曲各手指关节，弯曲各手指关节，在另一手掌旋转搓在另一手掌旋转搓擦，交换进行擦，交换进行 7.一手握另一手大拇指旋一手握另一手大拇指旋转搓擦，交换进行转搓擦，交换进行8.搓洗手腕，交换搓洗手腕，交换 进行。进行。9.将手及手腕用水冲洗将手及手腕用水冲洗干净，最后才可以用干干净，最后才可以用干净的手将干净的水龙头净的手将干净
21、的水龙头关掉。关掉。10.然后在烘手然后在烘手器下吹干器下吹干洗手手的细菌对照实验洗手手的细菌对照实验 未洗的手未洗的手 漂洗的手漂洗的手 (只用清水只用清水)洗净的手洗净的手 洗净的手洗净的手(用皂液用皂液)()(用消毒剂用消毒剂)设备的卫生应从设备的设计开始，要求设备的卫生应从设备的设计开始，要求产尘少、脱落粒产尘少、脱落粒子少、易清洗、消毒和灭菌子少、易清洗、消毒和灭菌。设备与物料的接触面不得与物。设备与物料的接触面不得与物料反应，不得吸附物料，设备的内表面材质要料反应，不得吸附物料，设备的内表面材质要平整、光滑平整、光滑，凹凸不平的区域不仅不易清洗，而且易存留残液等，它将成凹凸不平的区
22、域不仅不易清洗，而且易存留残液等，它将成为微生物繁殖滋生的场所。管道的安装要避免批与批之间的为微生物繁殖滋生的场所。管道的安装要避免批与批之间的交叉污染交叉污染，管道要能定期清洗消毒。，管道要能定期清洗消毒。防范措施：防范措施：建立相应的设备清洁保养制度及规程建立相应的设备清洁保养制度及规程保持一贯的清洁状态，发现污渍、污水、残余物等应立即清除保持一贯的清洁状态，发现污渍、污水、残余物等应立即清除机修人员在线维修设备时，应注意操作尽量减少对药品产生污染机修人员在线维修设备时，应注意操作尽量减少对药品产生污染对直接接触药品的设备进行清洁验证对直接接触药品的设备进行清洁验证 对于物料卫生的问题，从
23、对于物料卫生的问题，从供应商的审计、物料进厂后的检供应商的审计、物料进厂后的检验、使用全过程验、使用全过程，均要严格按照，均要严格按照GMP规定的卫生要求进行。规定的卫生要求进行。我公司物料主要包括：原辅料、接口、盖子及工艺用水。我公司物料主要包括：原辅料、接口、盖子及工艺用水。防范措施：防范措施：正确的原辅料的正确的原辅料的脱包、消毒、运送脱包、消毒、运送(容器容器)及投加操作及投加操作。正确的胶塞清洗流程。正确的胶塞清洗流程。对精洗残余水、胶塞清洗水及工艺用水的定期监测。对精洗残余水、胶塞清洗水及工艺用水的定期监测。原辅料使用前的抽检。原辅料使用前的抽检。洁净区人员的操作是否规范，洁净区人
24、员的操作是否规范，影响药品灭菌前的微生物影响药品灭菌前的微生物负荷，最终将影响产品的无菌保证值负荷，最终将影响产品的无菌保证值(SAL)。F06D121+D121lgN0 F0:标准灭菌时间标准灭菌时间;N0：产品灭菌前的带菌量；：产品灭菌前的带菌量；D121：在：在121下杀灭下杀灭90%微生物所需时间。微生物所需时间。防范措施：防范措施：制定日常操作的规范并严格执行。制定日常操作的规范并严格执行。直接与药品有接触的操作应带无菌手套并频繁冲洗，操作过程中动作不宜过大。直接与药品有接触的操作应带无菌手套并频繁冲洗，操作过程中动作不宜过大。加强对微生物知识的了解，增强无菌操作意识。加强对微生物知
25、识的了解，增强无菌操作意识。环境中的微生物种类繁多环境中的微生物种类繁多，主要有附着于尘埃上的从地面飞起的，主要有附着于尘埃上的从地面飞起的球菌属（包括八叠球菌属在内的好氧菌）；形成孢子的好氧性杆菌球菌属（包括八叠球菌属在内的好氧菌）；形成孢子的好氧性杆菌（如枯草芽孢杆菌）；青霉等霉菌的孢子等。微生物的存在严重影响（如枯草芽孢杆菌）；青霉等霉菌的孢子等。微生物的存在严重影响着药品生产的安全，依次必须加以严格控制。着药品生产的安全，依次必须加以严格控制。防范措施：防范措施：1.合理的厂房布局及高效的空气过滤系统合理的厂房布局及高效的空气过滤系统2.完善的洁净区日常卫生管理完善的洁净区日常卫生管理
26、3.每周进行空气消毒每周进行空气消毒(臭氧熏蒸臭氧熏蒸)4.定期对洁净环境进行监测定期对洁净环境进行监测洁净度测定包括：微生物 -浮游菌 悬浮粒子 -沉降菌 新版新版GMP对洁净区微生物的动态要求对洁净区微生物的动态要求洁净洁净级别级别悬浮粒子最大允许数悬浮粒子最大允许数/米米3 At rest/静态静态In operation/动态动态Grade 0.5m 5.0m 0.5m 5.0mA3 520203 52020B3 52029 352 0002 900 C352 0002 9003 520 00029 000D3520 00029 000不作规定不作规定Not defined我国我国-W
27、HO洁净级别标准洁净级别标准级级别别b浮游菌浮游菌CFU/m3沉降碟沉降碟（90mm）CFU/4小时小时c接触碟接触碟（55mm）CFU/碟碟5指手套指手套CFU/手套手套A 1 1 1 1B10555C1005025D20010050无菌产品洁净级别的确定无菌产品洁净级别的确定lA A级级：高风险操作区，如：无菌灌装区，灭菌后的内包装容器暴露的高风险操作区，如：无菌灌装区，灭菌后的内包装容器暴露的区域及无菌装配区域及无菌装配/连接操作的区域。连接操作的区域。通常用层流操作来维护该区的环境状态。层流系统在其工作区域必须通常用层流操作来维护该区的环境状态。层流系统在其工作区域必须均匀送风，风速为
28、均匀送风，风速为0.36-0.54m/s0.36-0.54m/s（指导值）。（指导值）。lB B级级：指指A A 级区所处的背景区域。级区所处的背景区域。lC C级和级和D D级级：指生产无菌产品过程中重要程度较次的辅助操作区，除指生产无菌产品过程中重要程度较次的辅助操作区，除菌前药液的配制，容器具处理、包装材料清洗等区域。菌前药液的配制，容器具处理、包装材料清洗等区域。悬浮粒子的要求：附录悬浮粒子的要求：附录11 第九、十条第九、十条1、A级区确认时的采样量不少于1m32、洁净区的动态监测悬浮粒子的动态监测关键操作的全过程，对A级区进行粒子监测A级区的监测频率、取样量，及时发现人为干预、偶发
29、事件及任何系统的破坏B级区：类似于A级区，采样频率、采样量可以调整C级区：质量风险管理原则确定D级区：一般不作要求，（法规：必要时）（法规：必要时）对于C/D级区的自净时间应达到规定要求控制微生物污染途径控制微生物污染途径环境控制环境控制控制微生物污染途径控制微生物污染途径环境控制环境控制微生物的要求：附录1 第十一条监测方法有：1.空气浮游菌监测沉降菌法-被动法定量空气浮游菌采样法-主动法2.环境表面监测表面取样法（如棉签擦拭法和接触碟法）3.人员监测表面取样法（接触碟法）1.空气浮游菌监测空气浮游菌监测沉降菌法沉降菌法-被动法被动法l沉降碟在空气中的暴露时间沉降碟在空气中的暴露时间 4小时
30、小时l监控整个灌装过程监控整个灌装过程l只能给出定性和半定量的数据只能给出定性和半定量的数据l应结合空气浮游菌的数据，对沉降碟的结果进行评价应结合空气浮游菌的数据，对沉降碟的结果进行评价定量空气浮游菌采样法定量空气浮游菌采样法-主动法主动法l撞击式，离心式和膜过滤（明胶）取样仪撞击式，离心式和膜过滤（明胶）取样仪l应取一定体积的空气（取样体积应有代表性）应取一定体积的空气（取样体积应有代表性）l仪器应经过校验仪器应经过校验522，洁净区的验证和监测2.环境表面监测：环境表面监测：表面取样法表面取样法应对接触产品表面、设备、地面、墙面等定期监测接触蝶法：适用于平整表面l取样面积25cm2 l培养
31、基略有凸起，高于碟子边缘，便于取样 l培养基中应含有中和剂/保护剂棉签擦拭法：适用于不规则表面l取样面积25cm2 l定性或定量表面样应在无菌操作结束时取l以最大限度地降低无菌制造过程中关键表面污染的风险532，洁净区的验证和监测3.人员监测人员监测表面取样法（接触碟法），取样时间一般为：l工作结束，离开洁净区前取样l处理异常情况后（取样后重新更衣或更换手套）l生产过程中随时监测特别注意：特别注意：l不得在刚消毒过后取样不得在刚消毒过后取样54每个手套(5只手指)胸口处衣帽结合处帽兜额头处靴子与工作裤接口处 前臂55无菌区人员更衣无菌区人员更衣确认和监测确认和监测-手和操作服手和操作服环境监控
32、整体要求环境监控整体要求洁洁净净区区监监测测年度洁净级别确认年度洁净级别确认日常环境监测日常环境监测动态监测动态监测静态监测静态监测无菌生产区无菌生产区A/B最终灭菌最终灭菌C级的级的主要功能间主要功能间C级区域级区域D级区域级区域洁洁净净区年度级别确认区年度级别确认测试测试项目项目空气洁净度测试空气洁净度测试静压差测试静压差测试风速或风量测试风速或风量测试换气次数换气次数温度温度相对湿度相对湿度照度照度噪声噪声日常环境监测频次日常环境监测频次测试项目测试项目环境级别环境级别测试频次测试频次A级两周一次沉降菌/浮游菌C级一个月一次D级两个月A级/B级两周一次悬浮粒子C级一个月一次D级两个月A/
33、C级每班生产结束手和操作服C级一个月一次D级三个月洁净区监测的位置洁净区监测的位置取样位置选择时考虑因素：l哪些部位的微生物污染最可能对产品质量造成不良影响？哪些部位的微生物污染最可能对产品质量造成不良影响？l在生产过程中，什么地点最容易长菌？在生产过程中，什么地点最容易长菌？l哪些地方是清洁、消毒或灭菌时最难覆盖哪些地方是清洁、消毒或灭菌时最难覆盖/接触或最难奏接触或最难奏效的部位？效的部位？l什么活动会导致污染的扩散？什么活动会导致污染的扩散？l在某一部位的取样操作，足以导致测试数据的差错或污染在某一部位的取样操作，足以导致测试数据的差错或污染产品？取样只应在生产结尾换班时进行吗？产品？取
34、样只应在生产结尾换班时进行吗？应符合“GB16292-2010”“GB16294-2010”的要求基于风险的设计监测点设置在潜在风险最大的位置a)药品b)容器c)连接处d)人流和物流经过的地方e)监测点靠近“工作高度”洁净区监测的位置洁净区监测的位置示例：无菌灌装线示例：无菌灌装线l取样点应在产品或组件暴露的区域周围取样，如：l在灌装针头处l将产品装载入冻干腔室处l胶塞供料桶l无菌部件进行连接操作的部位l操作人员频繁活动处（不影响生产过程）l注意：靠近产品，但不接触产品的位置注意：靠近产品，但不接触产品的位置洁净区监测的位置洁净区监测的位置粒子在线监测布置图例粒子在线监测布置图例传感器低于机器
35、，采样管伸入灌装操作区内灌装后冻干前监测点位置：药瓶是半封闭状态（敞口）保证灌装后，冻干前的环境区域是受控的。正确的取样点位置：靠近传送带。浮游菌、沉降菌取样点浮游菌、沉降菌取样点l沉降菌、浮游菌：监控点位置，高度一般为离地80cm左右，或操作台面。l浮游菌、沉降菌监控点的设置根据生产工艺及污染风险综合考虑。洁净区表面微生物取样点洁净区表面微生物取样点lC级区取样点：一般为地面、墙面及操作人员十指手套。对C级下的局部A级区取样宜在生产结束后进行，避免造成污染。地面取样墙面取样灌装机（A级）产品转移（A级）环境监测常用仪器环境监测常用仪器/设备设备/培养基培养基沉降菌/浮游菌直径：90mm表面微
36、生物监测直径：55mm浮游菌监测 100升/分悬浮粒子监测MetOne 341328.3升/分 预制培养平板包装预制培养平板包装l无菌区使用预制平板：一般采用三层包装形式：55mm接触平板90mm预制平板66预制平板进入洁净区预制平板进入洁净区l预制平板进入无菌区，须避免对监控区域的污染。去除最外层包装 放入传递窗开启紫外灯消毒或用酒精喷洒外表面消毒处理67预制平板脱包装预制平板脱包装l经传递窗进入洁净区的预制培养平板继续脱去外面两层包装就可以使用。脱出第二层包装脱出第三层包装脱包装后单个平板68预制平板使用示意图预制平板使用示意图l接触碟表面取样示意图：1，取样点采样2，取样位置消毒 3，用无尘布清洁4，标明取样点编号5，平板入无菌保管袋6，保管袋密封待培养69针对口服制剂的环境监测针对口服制剂的环境监测l法规要求：第四十八条口服液体和固体制剂、腔道用药（含直肠用药）、表皮外用药品等非无菌制剂生产的暴露工序区域及其直接接触药品的包装材料最终处理的暴露工序区域，应当参照应当参照“无菌药品无菌药品”附录中附录中D级洁净级洁净区的要求设置区的要求设置，企业可根据产品的标准和特性对企业可根据产品的标准和特性对该区域采取适当的微生物监控措施。该区域采取适当的微生物监控措施。70因此，口服制剂的环境监测项目和标准可以参考无菌药品的D级区Thanks!
