1、项目二项目二 精液的处理精液的处理u 任务一 精液的品质评定u 任务二 精液的稀释u 任务三 冷冻精液的制作u 任务四 精液的保存与运输 精液的质量控制和品质保证是影响人工授精效果的关键技术环节，精液的稀释、保存和运输等环节均可影响精液的质量，精液的品质分析又易受环境、检测人员的技术熟练程度及主观判断能力等诸多因素影响而发生偏差，因此精液处理必须严格按照规范程序进行。知识目标知识目标：了解精液的理化特性，熟悉精子的形态结构及生理特性 理解外界因素对精子存活的影响 理解稀释液的主要成分及作用 理解精液的保存原理 了解液氮的特性及液氮罐的结构 理解性控冻精生产的技术原理技能目标：技能目标：熟练评定
2、精液的品质 能熟练确定精液的稀释倍数 会筛选稀释液的配方，并能正确熟练地配制稀释液 会正确稀释精液 根据国标（GB T4143-2008）规范制作牛的冷冻精液 会进行猪精液的保存和运输 能正确运输冷冻精液任务任务一一 精液的品质评定精液的品质评定 某公猪站，采精时用某公猪站，采精时用4 46 6层消毒纱布滤除胶状物质，然后置于层消毒纱布滤除胶状物质，然后置于3737恒温水浴锅中进行品质鉴定。经检测，本次采集精液恒温水浴锅中进行品质鉴定。经检测，本次采集精液300mL300mL，乳白色，乳白色，略有腥味，精子活率为略有腥味，精子活率为0.70.7，精子密度为，精子密度为2 2亿亿mLmL，精子畸
3、形率为，精子畸形率为1212。试分析该精液是否能用于配种？试分析该精液是否能用于配种？任务描述任务描述子子任务任务一一 精液的感官评定精液的感官评定任务任务实施实施一、准备工作一、准备工作采集采集精液精液做好做好标记标记并并置于置于3737温水或保温瓶温水或保温瓶。二、检查与评定二、检查与评定u 采精量采精量：盛放在带有刻度的集精杯或量筒中盛放在带有刻度的集精杯或量筒中。u 颜色颜色：正常为乳白色或灰白色正常为乳白色或灰白色（血精、尿精、（血精、尿精、炎症）。炎症）。u 气味气味：略带腥味略带腥味。u 云雾状云雾状：牛、羊牛、羊精液精液云雾状云雾状较明显较明显。动物种类动物种类 一般采精量（一
4、般采精量（mL）范围（范围（mL）奶牛奶牛5100.514肉牛肉牛480.514水牛水牛360.512山羊山羊0.51.50.32.5绵羊绵羊0.81.20.52.5猪猪150300100500马马407030300鸡鸡0.51.00.21.5子子任务任务二二 精子活率评定精子活率评定任务任务实施实施一、准备工作一、准备工作显微镜（显微镜（全自动精子分析仪全自动精子分析仪）、保温箱、载玻片、盖玻片、玻璃棒等。）、保温箱、载玻片、盖玻片、玻璃棒等。子子任务任务二二 精子活率评定精子活率评定任务任务实施实施二、评定方法二、评定方法u 平板压片法平板压片法：玻璃棒蘸取玻璃棒蘸取1 1滴原精液或经生理
5、盐水稀释的精液，滴在载玻片滴原精液或经生理盐水稀释的精液，滴在载玻片上，呈上，呈4545盖好盖玻片盖好盖玻片（避免气泡避免气泡），置于显微镜下观察，估测呈直线运动的，置于显微镜下观察，估测呈直线运动的精子数占总精子数的百分率。精子数占总精子数的百分率。u 悬滴法悬滴法：取一小滴精液滴于盖玻片上，迅速置于凹玻片的凹窝上形成悬滴取一小滴精液滴于盖玻片上，迅速置于凹玻片的凹窝上形成悬滴片片（结果可能偏高结果可能偏高）。三、结果评定（三、结果评定（十级评分：十级评分：0-1.00-1.0）鲜精：鲜精：0.7-0.80.7-0.8 液态保存：液态保存：0.60.6 冻精：冻精：0.350.35子子任务任
6、务二二 精子活率评定精子活率评定任务任务实施实施四、注意事项四、注意事项u牛、羊和鸡的精液密度较大，可用生理盐水牛、羊和鸡的精液密度较大，可用生理盐水稀释稀释后再检查。后再检查。u活率是评价精液品质一个重要指标，与受精力密切相关，一般在活率是评价精液品质一个重要指标，与受精力密切相关，一般在采精后采精后、精液处理前后精液处理前后及及输精前输精前都要进行检测。都要进行检测。u温度对精子活率影响较大，要求检查温度在温度对精子活率影响较大，要求检查温度在37373838左右，如果没有保左右，如果没有保温装置的，检查速度要迅速，在温装置的，检查速度要迅速，在1010秒内完成。秒内完成。u精子活率评定带
7、有一定的主观性，应观察精子活率评定带有一定的主观性，应观察2 23 3个视野，取个视野，取其其平均值。平均值。子子任务任务三三 精子密度评定精子密度评定任务任务实施实施一、估测法一、估测法 1.1.准备工作准备工作u 器材的准备：显微镜、载玻片、盖玻片、玻璃棒、擦镜纸等。器材的准备：显微镜、载玻片、盖玻片、玻璃棒、擦镜纸等。u 精液的准备：新鲜的精液。精液的准备：新鲜的精液。2.2.检查方法检查方法 取取1 1小滴精液滴于清洁的载玻片上，盖上盖玻片，使精液分散成均匀一薄小滴精液滴于清洁的载玻片上，盖上盖玻片，使精液分散成均匀一薄层，不得存留气泡，也不能使精液外流或溢于盖玻片上，置于显微镜下放大
8、层，不得存留气泡，也不能使精液外流或溢于盖玻片上，置于显微镜下放大400400倍观察精子间的空隙。通常结合精子活率评定进行。倍观察精子间的空隙。通常结合精子活率评定进行。精子密度又称为精子密度又称为精子浓度，是指每毫升精液中所含有的精子数。精子浓度，是指每毫升精液中所含有的精子数。子子任务任务三三 精子密度评定精子密度评定任务任务实施实施一、估测法一、估测法 3.3.结果评定结果评定密密（1010亿亿）中中（2 2亿亿1010亿亿）稀稀（250 拓展知识拓展知识四、性控冻精 XY Breeding Livestock CO.LTD:XY Breeding Livestock CO.LTD:创立
9、于创立于20042004年年9 9月，主要生产奶牛性控精月，主要生产奶牛性控精液、性控种牛胚胎，是一家集生产、销售、科研、开发、推广为一体的生物高液、性控种牛胚胎，是一家集生产、销售、科研、开发、推广为一体的生物高科技企业。科技企业。子子任务任务三三 精子密度评定精子密度评定任务任务实施实施二、血细胞计数法二、血细胞计数法 2.2.检查方法检查方法u 镜检镜检:将稀释好的精液滴一滴于计数室上盖玻片的边缘，使精液自动渗入计算将稀释好的精液滴一滴于计数室上盖玻片的边缘，使精液自动渗入计算室室，静置静置3min3min检查，计数具有代表性的检查，计数具有代表性的5 5个中方格内的精子数。一般计数四角
10、个中方格内的精子数。一般计数四角和中间一个（或对角线五个）。和中间一个（或对角线五个）。子子任务任务三三 精子密度评定精子密度评定任务任务实施实施二、血细胞计数法二、血细胞计数法 3.3.结果评定结果评定 正常情况下，正常情况下，羊精子羊精子2020亿亿3030亿；牛精子亿；牛精子1010亿亿1515亿；猪亿；猪2 2亿亿3 3亿亿。该法因检测速度慢，在生产上用得较少，但结果准确，一般都用于该法因检测速度慢，在生产上用得较少，但结果准确，一般都用于结果的校结果的校准及产品质量的检测准及产品质量的检测。4.4.注意事项注意事项血细胞计数板一定要清洗干净血细胞计数板一定要清洗干净；滴入精液不要溢出
11、于盖玻片之外，也不可滴入精液不要溢出于盖玻片之外，也不可出现出现有气泡或干燥之处有气泡或干燥之处；计数时，以头部压线为准，按照计数时，以头部压线为准，按照“数头不数尾、数上不数下、数左不数右数头不数尾、数上不数下、数左不数右”的原则，避免重复或漏掉。的原则，避免重复或漏掉。为了减少误差，应连续检查两次，取其平均值，若两次计数误差大于为了减少误差，应连续检查两次，取其平均值，若两次计数误差大于10%10%，则，则应做第三次检查。应做第三次检查。任务任务二二 精液的稀释精液的稀释 精液稀释是人工授精中的一个重要技术环精液稀释是人工授精中的一个重要技术环节，只有经过稀释的精液，才适于保存、运输节，只
12、有经过稀释的精液，才适于保存、运输及输精。精液的保存方法不同，稀释的倍数及及输精。精液的保存方法不同，稀释的倍数及稀释液的成分也不相同。如何确定精液的稀释稀释液的成分也不相同。如何确定精液的稀释倍数？配制稀释液时需加入哪些成分呢？倍数？配制稀释液时需加入哪些成分呢？任务描述任务描述u 保存：保存：液氮罐液氮罐。使用前要认真检查使用前要认真检查；填充液氮时要小心谨慎填充液氮时要小心谨慎：预冷预冷；及时补充液氮及时补充液氮：当液氮消耗掉当液氮消耗掉1/21/2时，应立即补充时，应立即补充；放置在阴凉、通风且干燥的室内，不得暴晒，放置在阴凉、通风且干燥的室内，不得暴晒，不可横倒放置不可横倒放置；做好
13、定期的清洗和保养工作做好定期的清洗和保养工作，每年清洗一次每年清洗一次；防冻伤防冻伤 任务任务实施实施二、牛精液的保存与运输任务任务四四 精液的保存与运输精液的保存与运输 牛牛 猪猪 羊羊 马马 人人 小鼠小鼠 鸡鸡 任务一 精液的品质评定每1000mL加青霉素、链霉素各50万-100万IU高温：3738检查活力的最好温区，温度上升，运动剧烈，很快死亡然后把稀释精液连同稀释液一起缓慢降温至05，并在此温度下进行第二次稀释。填充液氮时要小心谨慎：预冷；将精液从甲地运往乙地，应如何运输？肌醇（mg/100mL）包装要严密，多采用精液运输箱或广口保温瓶；二、牛精液的保存与运输3固定 置于96%酒精固
14、定液中固定56min，取出冲洗后阴干。计算:1mL原精液的精子数=5个方格内的精子总数5101000稀释倍数。精液的质量控制和品质保证是影响人工授精效果的关键技术环节，精液的稀释、保存和运输等环节均可影响精液的质量，精液的品质分析又易受环境、检测人员的技术熟练程度及主观判断能力等诸多因素影响而发生偏差，因此精液处理必须严格按照规范程序进行。0h（姬姆萨液）水洗、干燥、镜检（100倍物镜）。子任务二 精子活率评定一般计数四角和中间一个（或对角线五个）。背景知识背景知识四、外界因素对精子的影响u 温度：温度：高温：高温：37373838检查活力的最好温区，温度上升，运动剧烈，很快死亡检查活力的最好
15、温区，温度上升，运动剧烈，很快死亡 低温：体温降到低温：体温降到1010以下（缓慢），否则以下（缓慢），否则“冷休克冷休克”低温冲击，由于突然急低温冲击，由于突然急剧降温使精子失去活力而不能复苏。剧降温使精子失去活力而不能复苏。超低温：超低温：196196、79 79（有害温区：（有害温区：0 06060，尤其，尤其151525 25）u 光照和辐射：光照和辐射：“棕色棕色”u 渗透压：渗透压：等渗等渗u PHPH值：值：牛牛6.9-7.06.9-7.0、绵羊、绵羊7.0-7.27.0-7.2、猪、猪7.0-7.57.0-7.5、兔、兔6.86.8、鸡、鸡7.37.3、人、人7.4-7.87.
16、4-7.8u 化学药品：化学药品：抗生素、磺胺类、甘油、消毒药品（酒精、来苏儿）抗生素、磺胺类、甘油、消毒药品（酒精、来苏儿）u 电解质浓度：电解质浓度：u 稀释：稀释：稀释打击稀释打击 背景知识背景知识 七、液氮的特性及液氮罐结构u 液氮的特性液氮的特性 无色、无味、无毒无色、无味、无毒的透明液体；的透明液体；超低温性超低温性：沸点为：沸点为-195.8-195.8，可抑制，可抑制精子代谢和细菌繁殖；精子代谢和细菌繁殖；很强的膨胀性很强的膨胀性：当温度达到：当温度达到1515时，时，在标准大气压下，在标准大气压下，1L1L液氮可气化为液氮可气化为680L680L氮气，膨胀率为氮气，膨胀率为6
17、80680倍；倍；挥发性挥发性：当液氮用量大时，要注意通：当液氮用量大时，要注意通风，以防窒息。风，以防窒息。1 1保护圈保护圈 2 2把手把手 3 3真空嘴真空嘴 4 4外壳外壳 5 5夹层夹层 6 6颈管颈管 7 7活性炭活性炭 8 8内壳内壳 9 9液氮液氮 10 10定位板定位板 拓展知识拓展知识三、牛冷冻精液国家标准（GB/T4143-2008）产品产品技术要求技术要求（GB T4143-2008）（GB/T4143-1984）欧盟国标欧盟国标牛牛冷冷冻冻精精液液直线前进运动精子数（万个）直线前进运动精子数（万个）800（水牛（水牛1000）1000600活率活率0.35（水牛（水牛0.3）0.30.4畸形率（畸形率（%）18（水牛（水牛20）2020顶体完整率（顶体完整率（%）4040细菌菌落数（个）细菌菌落数（个）8001000500病原微生物病原微生物无无无无无无情期受胎率（情期受胎率（%）50
