1、1第三章第三章 生物化学检验实验室基本知识生物化学检验实验室基本知识 2n本章内容概要：本章内容概要：第一节第一节 实验用纯水实验用纯水第二节第二节 实验用玻璃仪器实验用玻璃仪器第三节第三节 实验方法的选择实验方法的选择第四节第四节 实验方法的评价实验方法的评价第五节第五节 实验的诊断性能评价实验的诊断性能评价3n教学目的和要求：教学目的和要求：1 1、掌握掌握实验用纯水的三级标准；实验方法的分级、标准品分实验用纯水的三级标准；实验方法的分级、标准品分级及相互之间的联系；实验误差的定义、分类和表示方法；方级及相互之间的联系；实验误差的定义、分类和表示方法；方法评价实验尤其是回收实验和干扰实验的
2、原理和操作；诊断性法评价实验尤其是回收实验和干扰实验的原理和操作；诊断性能评价的指标。能评价的指标。2 2、熟悉熟悉纯水的制备方法；实验方法选择的的原则和步骤；方纯水的制备方法；实验方法选择的的原则和步骤；方法评价的基本内容和步骤；方法评价的指标；参考值和医学决法评价的基本内容和步骤；方法评价的指标；参考值和医学决定水平的概念。定水平的概念。3 3、了解了解水的纯度检查；方法性能判断的指标；受试者工作曲水的纯度检查；方法性能判断的指标；受试者工作曲线的应用和用途。线的应用和用途。4第一节第一节 实验用纯水实验用纯水天然水天然水 自来水自来水 实验用纯水实验用纯水 经简单的物理、化学经简单的物理
3、、化学方法处理，除去悬浮方法处理，除去悬浮物质和部分无机盐物质和部分无机盐 经蒸馏、电渗析等处经蒸馏、电渗析等处理，除去杂质理，除去杂质(悬浮物悬浮物,胶体胶体物质物质,溶解物质溶解物质)5一、纯水的制备方法一、纯水的制备方法 n蒸馏法蒸馏法:优点优点:设备简单设备简单缺点缺点:1:1、挥发性物质难以去除；、挥发性物质难以去除；2 2、耗能大，耗能水多；、耗能大，耗能水多；3 3、需注意管道清洁、需注意管道清洁 纯度：纯度：25时时1 110105 5cmcm如何如何安装：安装：6n离子交换法：离子交换法：氢型强酸性氢型强酸性阳离子交换树脂阳离子交换树脂(R(RSO3HSO3H，R R为母体为
4、母体)，其中的，其中的H+H+与与CaCa2+2+、NaNa+等金属离等金属离子发生交换反应，而将钙、镁离子除去子发生交换反应，而将钙、镁离子除去 氢氧型强碱性氢氧型强碱性阴离子交换树脂阴离子交换树脂(R(RNOHNOH，RR为母体为母体)，其中的，其中的OH-OH-与水中的与水中的CLCL-、碳、碳酸根等阴离子发生交换反应，而将它们酸根等阴离子发生交换反应，而将它们除去：除去：7优点优点:除了可去除除了可去除杂质离子杂质离子以外兼具吸附以外兼具吸附电中性杂质电中性杂质和过滤和过滤颗颗粒杂质粒杂质的作用。的作用。缺点缺点:纯度：纯度：25时时5 510106 6cmcm2 2、由于离于交换为、
5、由于离于交换为可逆反应，可逆反应，故去离子水并非绝对不含离子故去离子水并非绝对不含离子 1 1、设备较复杂，成本较高；、设备较复杂，成本较高；8n电渗透法电渗透法 在电场作用下水中在电场作用下水中各种阳离子趋向阴极各种阳离子趋向阴极，各种阴离子趋向阳极各种阴离子趋向阳极但但阳离子只能透过阳膜阳离子只能透过阳膜而被相邻的阴膜所阻，而被相邻的阴膜所阻，阴离子与此相反阴离子与此相反这样，在这样，在一些隔间内集中了阳离子和阴离子，即形成一些隔间内集中了阳离子和阴离子，即形成含盐多的浓水含盐多的浓水，在另一些隔，在另一些隔间内由于阴、阳离子的迁出降低了含盐量形成间内由于阴、阳离子的迁出降低了含盐量形成淡
6、水淡水 91 1、不需要消耗化学药品，设备简单，操作方便。、不需要消耗化学药品，设备简单，操作方便。消耗电能，当原水中盐浓度过低时，溶液电阻大，用电渗消耗电能，当原水中盐浓度过低时，溶液电阻大，用电渗析也不经济析也不经济 纯度纯度:25:25时时10104 4105cmcm2 2、对于含盐量高的海水等用此法比用离子交换法更为经济、对于含盐量高的海水等用此法比用离子交换法更为经济优点优点:缺点缺点:10n炭吸附法炭吸附法:活性炭是一种非常优活性炭是一种非常优良的吸附剂，它是利用良的吸附剂，它是利用木木炭、各种果壳和优质煤炭、各种果壳和优质煤等等作为原料，通过物理和化作为原料，通过物理和化学方法对
7、原料进行破碎、学方法对原料进行破碎、过筛、催化剂活化、漂洗、过筛、催化剂活化、漂洗、烘干和筛选等一系列工序烘干和筛选等一系列工序加工制造而成。加工制造而成。111 1、设备简单，操作方便。、设备简单，操作方便。纯水制备效率低纯水制备效率低.,.,仅作为各种制备纯水配套的一种措施仅作为各种制备纯水配套的一种措施.2 2、它具有、它具有物理吸附和化学吸附物理吸附和化学吸附的双重特性的双重特性,可以有选择的可以有选择的吸附气相、液相中的各种有机物质吸附气相、液相中的各种有机物质.优点优点:缺点缺点:12n超滤膜法超滤膜法特点特点:仅能除去仅能除去胶体细菌等大分子物质和悬浮物胶体细菌等大分子物质和悬浮
8、物,所得水还需进一步纯所得水还需进一步纯化化.也是作为各种制备纯水配套的一种措施也是作为各种制备纯水配套的一种措施.13n混合纯化系统混合纯化系统医用超纯水设备医用超纯水设备 实验室纯水系统实验室纯水系统 橱下式全自动逆渗透纯水机橱下式全自动逆渗透纯水机特点特点:多种方法混合纯化多种方法混合纯化,可获得纯度很高的二级甚至一级纯水可获得纯度很高的二级甚至一级纯水.14二、水的纯度检查二、水的纯度检查 用电导仪或兆欧表测定其用电导仪或兆欧表测定其电导率电导率或或电阻率电阻率用特定试剂检测水中残留的用特定试剂检测水中残留的CaCa2+2+、MgMg2+2+、CICI-、SOSO4 42-2-、硅酸盐
9、硅酸盐等成分的含量等成分的含量微生物含量检测微生物含量检测单位：电导：西门子（电导：西门子（s）电导率：电导率：scm-1电阻：电阻：电阻率：电阻率：cm15CAP:美国病理学家学会美国病理学家学会n实验用纯水标准实验用纯水标准16NCCLS:美国临床实验室美国临床实验室标准化委员会标准化委员会17级水级水:临床实验室用水临床实验室用水,一般实验检验一般实验检验;级水级水:特殊实验如酶活性测定、电解质分析等特殊实验如酶活性测定、电解质分析等;级水级水:用做仪器、器皿的自来水清洁后冲洗用做仪器、器皿的自来水清洁后冲洗.n实验用纯水的用途实验用纯水的用途18n实验用纯水的贮存、运输和使用实验用纯水
10、的贮存、运输和使用:一般选用一般选用聚乙烯或聚丙烯聚乙烯或聚丙烯桶（瓶）贮存，贮存时间不桶（瓶）贮存，贮存时间不宜太长，使用时应避免一切可能的污染，切勿用手接触纯宜太长，使用时应避免一切可能的污染，切勿用手接触纯水或容器内壁水或容器内壁.盛装药品盛装药品,试剂试剂19第二节第二节 实验用玻璃仪器实验用玻璃仪器(了解了解)20第三节第三节 实验方法的选择实验方法的选择 选择选择准确可靠准确可靠的实验方法的实验方法为为临床临床提供提供准确可靠准确可靠的信息的信息临床生化检验分析临床生化检验分析u实验方法选择的目的实验方法选择的目的u实验方法的分级实验方法的分级 u标准试剂的分级标准试剂的分级保保证
11、证21一、实验方法选择的目的一、实验方法选择的目的根本目的：根本目的：各实验室按照方法选择的原则结合自身条件，确各实验室按照方法选择的原则结合自身条件，确定定合适合适的某项目的检测方法。的某项目的检测方法。保证拟使用的检测方法在正式应用于临床分析病保证拟使用的检测方法在正式应用于临床分析病人标本之前，对方法性能及可能引入的误差进行人标本之前，对方法性能及可能引入的误差进行了了解解，作出初步评估。，作出初步评估。22二、实验方法的分级二、实验方法的分级分级依据分级依据：IFCCIFCC根据分析方法的根据分析方法的准确性与精密度准确性与精密度的不同。的不同。v决定性方法决定性方法 v参考方法参考方
12、法 v常规方法常规方法 分为三级：分为三级：23（一）决定性方法（一）决定性方法definitive methoddefinitive methodp定义定义：是指是指准确度最高，系统误差最小准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，经过详细的研究，没有没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，其测定结，其测定结果与真值最为接近。果与真值最为接近。p主要方法：主要方法：重量分析法重量分析法、中子活化法、同位素稀释、中子活化法、同位素稀释-质谱分析法（质谱分析法（ID-MSID-MS）24p应用：应用：由于由于技术要求太高，费用昂贵技术要求太高
13、，费用昂贵，这类方法不直接用于鉴定，这类方法不直接用于鉴定常规方法的准确性，只用于常规方法的准确性，只用于评价参考方法与一级标准品评价参考方法与一级标准品。储氢重量分析仪储氢重量分析仪 (北京英格海德分析技术有限公司北京英格海德分析技术有限公司)25（二）参考方法（二）参考方法reference methodp定义：定义：是指是指准确度与精密度已经被充分证实准确度与精密度已经被充分证实，且经公认的权，且经公认的权威机构（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁威机构（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁布的方法。这类方法布的方法。这类方法干扰因素少干扰因素少，系统误差很小，有适当的
14、系统误差很小，有适当的灵敏度、特异度、较宽的分析范围并且线性良好灵敏度、特异度、较宽的分析范围并且线性良好，重复测定，重复测定中的中的随机误差可以忽略不计随机误差可以忽略不计。p主要方法：主要方法：原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法、火焰光度法、免疫化学法，离子交换层析法等、火焰光度法、免疫化学法，离子交换层析法等26p应用：应用：能在能在条件优越条件优越的实验室作的实验室作常规分析常规分析，主要用于鉴定主要用于鉴定常规方法，评价其误差大小、干扰因素并决定是否可以常规方法，评价其误差大小、干扰因素并决定是否可以被接受；用于鉴定二级标准品和为质控血清定值；用于被接受；用于鉴定二级标准品和为质控
15、血清定值；用于商品试剂盒的质量评价。商品试剂盒的质量评价。27（三）常规方法（三）常规方法（routine method）p定义：定义：应具有应具有足够足够的精密度、准确度和特异度，有的精密度、准确度和特异度，有适当适当的分析范围，的分析范围，经济实用经济实用，其性能指标符合临床或其它目的的需要。其性能指标符合临床或其它目的的需要。p主要方法：主要方法：溴甲酚绿法、双缩脲法、溴甲酚绿法、双缩脲法、J-GJ-G法等。法等。p应用：应用：临床临床常规检验常规检验使用，常规方法在使用，常规方法在作出评定以后，经有关学术组织认可，作出评定以后，经有关学术组织认可，可以作为可以作为推荐方法（推荐方法（r
16、ecommended recommended methodmethod）。偏差已知方法偏差已知方法偏离未知方法偏离未知方法28项目项目决定性方法决定性方法参考方法参考方法钙钙ID-MS原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法氯氯电量滴定法、中子活化法电量滴定法、中子活化法电流滴定法电流滴定法镁镁ID-MS原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法磷磷ID-MS钾钾ID-MS、中子活化法中子活化法火焰光度法火焰光度法钠钠重量分析法、中子活化法重量分析法、中子活化法火焰光度法火焰光度法白蛋白白蛋白免疫化学法免疫化学法总蛋白总蛋白双缩脲法双缩脲法肌酐肌酐ID-MS、离子交换层析法离子交换层析法离子交换层析法离
17、子交换层析法尿素尿素ID-MS尿素酶法尿素酶法尿酸尿酸ID-MS尿酸酶法（紫外法尿酸酶法（紫外法）胆红素胆红素重氮反应法重氮反应法葡萄糖葡萄糖ID-MS己糖激酶法己糖激酶法胆固醇胆固醇ID-MSAbell-Kendall法，胆固醇氧化酶法，胆固醇氧化酶法法甘油三酯甘油三酯ID-MS酶法酶法AST（GOT）MDH-NADH法法ALT（GPT）LDH-NADH法法转肽酶（转肽酶（r-GT）连续监测产物生成法连续监测产物生成法肌酸激酶肌酸激酶 NAD+偶联法偶联法29三、标准试剂的分级三、标准试剂的分级标准试剂（标准品）的定义：标准试剂（标准品）的定义：国际标准化委员会将标准品（参考物，国际标准化委
18、员会将标准品（参考物，reference material）的定义暂定）的定义暂定为：它的为：它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定一种或几种物理或化学性质已经充分确定；被用于；被用于校正仪器或用校正仪器或用于评价一种测定方法于评价一种测定方法的物质，并将其分成三级。的物质，并将其分成三级。标准品的应用：标准品的应用：方法评价、仪器校正、常规分析的质量控制方法评价、仪器校正、常规分析的质量控制30标准品的分级：标准品的分级：v一级标准品一级标准品 v二级标准品二级标准品 v控制物控制物 31（一）一级标准品（原级参考物）（一）一级标准品（原级参考物）p定义：定义：是是已经确定的稳定而均一已经
19、确定的稳定而均一的物质，其数值已由决定性方法确定或由高的物质，其数值已由决定性方法确定或由高度准确的若干方法确定，度准确的若干方法确定，所含杂质已经定量所含杂质已经定量。p应用：应用：用于用于校正决定性方法，评价和校正参考方法以及为校正决定性方法，评价和校正参考方法以及为“二级标准品二级标准品”定值。定值。32（二）二级标准品（次级参考物）（二）二级标准品（次级参考物）p定义：定义：这类标准品可以是这类标准品可以是纯溶液纯溶液（水或有机溶剂的溶液），也可以（水或有机溶剂的溶液），也可以存在于相存在于相似基质中似基质中。可由实验室自己配制或为商品，其中有关物质的量由参考方法。可由实验室自己配制或
20、为商品，其中有关物质的量由参考方法定值或用一级标准品比较而确定。定值或用一级标准品比较而确定。p应用：应用：主要主要用于常规方法的标化和控制物的定值。用于常规方法的标化和控制物的定值。33（三）控制物（质控物）（三）控制物（质控物）用二级标准品和常规方法测定，用二级标准品和常规方法测定，用于常规质量控制，以控制病人标本用于常规质量控制，以控制病人标本的测定误差的测定误差。控制物不能用于标定仪器或方法。控制物不能用于标定仪器或方法。定值血清：定值血清：在发生问题时查找原因在发生问题时查找原因 未定值血清：一般情况下使用未定值血清：一般情况下使用 另：用二级标准品和常规方法测定，然后定值经过修正后
21、得到校准品。用二级标准品和常规方法测定，然后定值经过修正后得到校准品。34v决定性方法 一级标准品v参考方法 二级标准品v常规方法 控制物35四、实验方法选择的原则四、实验方法选择的原则总原则：总原则：从实际出发，根据实验室的条件和检测要求确定从实际出发，根据实验室的条件和检测要求确定适当的方法适当的方法。条件优越的实验室：参考方法条件优越的实验室：参考方法一般临床化学实验室实验室：常规方法或使一般临床化学实验室实验室：常规方法或使用方便的参考方法用方便的参考方法36 尽量选用尽量选用国内外通用方法或推荐方法国内外通用方法或推荐方法，便于方法，便于方法的规范化和质量控制，重点考虑的规范化和质量
22、控制，重点考虑实用性和可靠性实用性和可靠性。常规方法选择时的原则：常规方法选择时的原则：37（一）实用性（一）实用性微量快速、方微量快速、方法简便、安全法简便、安全可靠、成本低可靠、成本低廉廉（二）可靠性（二）可靠性 所选方法具有较高的精密度、准确度和较大的检所选方法具有较高的精密度、准确度和较大的检测能力，保证测定结果的准确性能满足方法允许误差测能力，保证测定结果的准确性能满足方法允许误差限度的要求。限度的要求。标本标本l、试、试剂剂ml38五、实验方法选择的步骤五、实验方法选择的步骤（一）广泛查阅文献：（一）广泛查阅文献：（二）选定侯选方法：全面认识该法。（二）选定侯选方法：全面认识该法。
23、（三）侯选方法的初步试验：（三）侯选方法的初步试验：根据方法选择的要求，比较各种方法根据方法选择的要求，比较各种方法39初步试验包括：简单初步试验包括：简单 标准曲线和重复性标准曲线和重复性 质控血清和新鲜标本的重复实验质控血清和新鲜标本的重复实验 析浓度不同的标本，并与公认的参考方法的结果对比析浓度不同的标本，并与公认的参考方法的结果对比.初步试验目的初步试验目的:使工作者使工作者熟悉有关技术熟悉有关技术,掌握各分析步骤要点掌握各分析步骤要点,判断能否适判断能否适合本室条件要求合本室条件要求.根据所获得的资料确定是否有必要作进一步根据所获得的资料确定是否有必要作进一步研究。研究。初步试验初步
24、试验40第四节第四节 实验方法的评价实验方法的评价 初步试验初步试验判断符合实验要求判断符合实验要求系统评价系统评价决定该方法是否可接受决定该方法是否可接受分析评价试验测得结果和分析评价试验测得结果和比较方法性能判断的标准比较方法性能判断的标准u实验方法系统评价的过程实验方法系统评价的过程:对实验误差的测定对实验误差的测定41一、实验误差一、实验误差定义定义:指量值的指量值的给出值给出值与其客观与其客观真值真值之差之差.(一一)实验误差的分类实验误差的分类:依据来源性质依据来源性质实验误差实验误差系统误差系统误差 SESE随机误差随机误差 RERE恒定系统误差恒定系统误差 CECE比例系统误差
25、比例系统误差 PEPE广泛性广泛性不可求不可求另：粗大误差另：粗大误差42p系统误差（系统误差（systematic error，SE）定义定义:指一系列测定值对真值存在指一系列测定值对真值存在同一倾向同一倾向的偏差的偏差。特点特点:具有单向性，而没有随机性，常有一定的大小和方向具有单向性，而没有随机性，常有一定的大小和方向；一般由恒定的因素引起，并在一定条件下多次测定中重复一般由恒定的因素引起，并在一定条件下多次测定中重复出现；出现；当找到引起误差的原因，采取一定措施即可纠正，消除系当找到引起误差的原因，采取一定措施即可纠正，消除系统误差能提高测定的准确度。统误差能提高测定的准确度。43分类
26、分类:CE：指：指由干扰物引起由干扰物引起的使测定值与真值存在恒定大小的的使测定值与真值存在恒定大小的误差，误差，误差大小与被测物浓度无关，而与干扰物浓度相关。误差大小与被测物浓度无关，而与干扰物浓度相关。PE：指相对于被测物浓度有：指相对于被测物浓度有相同的百分比误差相同的百分比误差，误差的误差的绝对量与被测物浓度成正比。绝对量与被测物浓度成正比。引起误差的原因：引起误差的原因：方法误差：方法误差：最严重，最难避免最严重，最难避免；仪器和试剂误差：仪器和试剂误差：可以采取措施避免。可以采取措施避免。44p随机误差（随机误差（random error，RE）特点特点:误差没有一定的大小和方向，
27、可正可负，数据呈正态分布误差没有一定的大小和方向，可正可负，数据呈正态分布；具有不可预测性，不可避兔，但可控制在一定范围内；具有不可预测性，不可避兔，但可控制在一定范围内；当分析步骤越多，造成种误差的机会越多；当分析步骤越多，造成种误差的机会越多；随测定次数增加，其算术均数就越接近于真值。随测定次数增加，其算术均数就越接近于真值。定义定义:指在实际工作中，指在实际工作中，多次重复测定多次重复测定某一物质时引起的误某一物质时引起的误差。差。45 由测定仪器、试剂、环境等实验条件的改变以及由测定仪器、试剂、环境等实验条件的改变以及分析人分析人员操作习惯员操作习惯等因素的变化而引起。等因素的变化而引
28、起。p系统误差系统误差 随机误差随机误差引起误差的原因引起误差的原因引起误差的原因：引起误差的原因：46(二二)实验误差的表示方法：实验误差的表示方法：p平均误差：算术平均偏差，用平均误差：算术平均偏差，用dm表示表示p标准偏差（标准差）：表示精密度的较好的指标。标准偏差（标准差）：表示精密度的较好的指标。p绝对误差和绝对偏差：绝对误差和绝对偏差：dm=di/n=X-/nXdi2=N-1绝对误差绝对误差=X-T绝对偏差绝对偏差=X-X47p相对误差和相对偏差：相对误差和相对偏差：p变异系数（变异系数（coefficient of variation，CV）相对误差相对误差=X-TT100%相对
29、偏差相对偏差=X-X X100%CV=S X100比较各组数据间的变异情况比较各组数据间的变异情况CV 离散度离散度 精密度精密度4849二、方法评价的基本内容和步骤二、方法评价的基本内容和步骤(一)方法评价的基本内容方法评价的基本内容p基本内容基本内容:通过实验途径，测定并评价方法的通过实验途径，测定并评价方法的精密度和准确度精密度和准确度。p评价试验的过程评价试验的过程:就是对就是对误差误差的测定。的测定。精密度和准确度精密度和准确度误差误差方法评价指标方法评价指标不可直接测定不可直接测定 实际测定实际测定可直接测定可直接测定方法评价试验方法评价试验50(二二)方法评价步骤方法评价步骤p评
30、价前实验评价前实验:研究候选方法的最适条件。研究候选方法的最适条件。p初步评价初步评价:批内和日内重复性试验、回收试验、干扰试验批内和日内重复性试验、回收试验、干扰试验 p最后评价最后评价:依顺序作依顺序作日间重复性试验日间重复性试验，方法比较试验方法比较试验和总体判断方法和总体判断方法是否可接受是否可接受 。p评价后实验评价后实验:如方法可接受，则进行临床相关研究如方法可接受，则进行临床相关研究.p方法应用方法应用:建立质控系统，培训操作者，引人常规工作等建立质控系统，培训操作者，引人常规工作等。随机误差随机误差系统误差系统误差方法性能方法性能判断判断诊断学评价诊断学评价51三、方法评价指标
31、三、方法评价指标 精密度、准确度、特异度和干扰以及检测能力等精密度、准确度、特异度和干扰以及检测能力等（一）精密度（一）精密度（Precision）p定义定义:表示测定结果中表示测定结果中随机误差大小随机误差大小程度的指标。它表示程度的指标。它表示同一标本同一标本在在一定条件下一定条件下多次重复测定多次重复测定所得到的所得到的一系列单次测定值的符合程度一系列单次测定值的符合程度。p表示方法表示方法:自身无量度指标，常用自身无量度指标，常用标准差（标准差（S S）或或变异系数（变异系数（CVCV）表示。表示。（n n，X X）（n n，X X）52p分类分类：v连续测定的精密度连续测定的精密度
32、v重复性精密度重复性精密度 （了解）（了解）v再现性精密度再现性精密度 （了解）（了解）53连续测定的精密度：连续测定的精密度：在在相同条件相同条件下，对下，对同一标本同一标本连续连续进行进行n次重复测定次重复测定结果的符合程度。结果的符合程度。在有限次测定情况下，一般用在有限次测定情况下，一般用（总体标准差）的估计值（总体标准差）的估计值S（样本标准差）（样本标准差）来表达这种精密度。来表达这种精密度。定义：定义：54重复性精密度：重复性精密度：又称室（批）内精密度，指在又称室（批）内精密度，指在相同条件下相同条件下（同样方法、同一种试剂和标（同样方法、同一种试剂和标准品、同样仪器、在同一实
33、验室由同一人操作，并要保持实验期间准确性不准品、同样仪器、在同一实验室由同一人操作，并要保持实验期间准确性不变）对变）对同一标本同一标本在在尽可能短的时间尽可能短的时间内进行内进行m m轮轮n n次次重复测定结果之间相互接近重复测定结果之间相互接近的程度。重复性（批内）精密度（的程度。重复性（批内）精密度（S S）Si2mS S=Si=(xt-xt)2n-1CV=CV=S S X X100100定义：定义：55再现性精密度再现性精密度定义：定义：又称室（批）间精密度，指在又称室（批）间精密度，指在不同条件下不同条件下（不同操作者，用不同仪（不同操作者，用不同仪器，在不同实验室和不同时间）器，在
34、不同实验室和不同时间）采用同一方法采用同一方法对对同一标本同一标本所获得的单次测所获得的单次测定结果之间彼此符合程度。定结果之间彼此符合程度。应用：应用：多用于多用于实验室间的质量估计，其标准差常称为室间标准差实验室间的质量估计，其标准差常称为室间标准差。室（批）。室（批）间标准差，是在对室（批）间重复性试验结果进行单因素完全随机设计间标准差，是在对室（批）间重复性试验结果进行单因素完全随机设计方差分析后进行计算。方差分析后进行计算。56（二）准确度：（二）准确度：p定义定义:指指测定结果与真值接近测定结果与真值接近的程度，一般用的程度，一般用偏差和偏差系数偏差和偏差系数表示表示。p表示方法表
35、示方法:偏差为重复测定均值（偏差为重复测定均值（X）与真值之差。）与真值之差。偏差系数偏差系数（CB）=100。真值真值-X真值真值定量的标准品定量的标准品确认的标准方法确认的标准方法或或57p影响因素：影响因素：系统误差、随机误差（了解）系统误差、随机误差（了解）表示已定系统误差的综合表示已定系统误差的综合。A=+（不确定度不确定度）不确定度（不确定度（uncertaintyuncertainty）是表达测定结果的一个组成是表达测定结果的一个组成部分，它表明被测标本中真值存在的范围部分，它表明被测标本中真值存在的范围58（三）特异度和干扰（三）特异度和干扰 即专一性，是指在特定实验条件下即专
36、一性，是指在特定实验条件下分析试剂只对待测物质起反应分析试剂只对待测物质起反应，而，而不与其它结构相似的非被测物质发生反应不与其它结构相似的非被测物质发生反应。分析方法特异度越高，则测定。分析方法特异度越高，则测定结果越准确。结果越准确。p特异度（特异度（specificityspecificity）是指标本中某些是指标本中某些非被测物质本身不与分析试剂反应非被测物质本身不与分析试剂反应但以其它形式但以其它形式使待使待测物测定值偏高或偏低测物测定值偏高或偏低，这些非被测物质称为干扰物。，这些非被测物质称为干扰物。p干扰（干扰（interferenceinterference）特异度特异度干扰干
37、扰方法的准确性方法的准确性侧面指标侧面指标正面指标正面指标59（四）检测能力（四）检测能力 p 定义定义：即检测限度或检出限（即检测限度或检出限（detection limitdetection limit），是指能与适当的），是指能与适当的“空白空白”读数读数相区别的待测物的最小值。相区别的待测物的最小值。p空白读数空白读数：指由基质、试剂所得的读数和结果，以及由仪器或测定过程所产生的影指由基质、试剂所得的读数和结果，以及由仪器或测定过程所产生的影响测定步骤的残余偏差。响测定步骤的残余偏差。p试剂空白试剂空白：试剂试剂+D.W+D.Wp检出限检出限T TT TT T B B 60四、评价试验
38、四、评价试验 评价试验包括评价试验包括v重复性试验重复性试验v回收试验回收试验v于扰试验于扰试验v方法比较试验方法比较试验 61（一）重复性试验（一）重复性试验p试验的目的试验的目的:p试验的方法试验的方法:对对同一材料（标准液、质控液、标本等）同一材料（标准液、质控液、标本等）分成数份试验标本进行分成数份试验标本进行多次分多次分析测定析测定，并计算其，并计算其均数、标准差与变异系数。均数、标准差与变异系数。检测候选方法的随机误差检测候选方法的随机误差（1 1）批内）批内:标准液标准液 （2 2）日内）日内:（3 3）日间）日间:质控液质控液 （4 4）平行双份）平行双份:p试验的形式试验的形
39、式:p应注意的问题应注意的问题:（1 1）分析标本选择）分析标本选择（2 2）被测物浓度）被测物浓度62(二二)回收试验回收试验p试验的目的试验的目的:p试验的方法试验的方法:将被测物标准液加人病人标本中，成为将被测物标准液加人病人标本中，成为分析标本分析标本；原病人；原病人标本中加人等量的无被测物的溶剂作标本中加人等量的无被测物的溶剂作基础标本基础标本；然后用候选方；然后用候选方法测定并得到各自浓度。法测定并得到各自浓度。检测候选方法的比例系统误差。检测候选方法的比例系统误差。p回收回收:指候选方法准确测定指候选方法准确测定加入常规分析标本的纯分析加入常规分析标本的纯分析物物的能力。的能力。
40、63回收浓度回收浓度=分析标本测得浓度分析标本测得浓度 -基础标本测得浓度基础标本测得浓度（实际测得值）（实际测得值）p计算计算:加入浓度加入浓度=标准液量标准液量病人样品量（病人样品量（mlml）标准液量（）标准液量（mlml）标准液浓度（理论真实值）标准液浓度（理论真实值）回收率（回收率（%）=回收浓度回收浓度加入浓度加入浓度 100100（理想值为）（理想值为）比例系统误差回收率比例系统误差回收率真实值测定值真实值测定值真实值真实值误差值误差值真实值真实值64p注意事项：注意事项：吸量准确；吸量准确；加入标准液后，其实验样品的被子测浓度最加入标准液后，其实验样品的被子测浓度最好达到医学决
41、定水平；好达到医学决定水平；总浓度必须在方法分析范围内；总浓度必须在方法分析范围内；需加入高中低不同浓度回收试验，计算平均需加入高中低不同浓度回收试验，计算平均回收率；回收率；加入标准液的体积一般在加入标准液的体积一般在10%10%内；内；重复重复2-32-3次。次。65(三三)干扰试验干扰试验p试验的目的试验的目的:用来检测候选方法的用来检测候选方法的恒定系统误差恒定系统误差。干扰物。干扰物浓度浓度不同，不同，误差大小也不同误差大小也不同p干扰干扰:指标本中某些指标本中某些非被测物质本身不与分析试剂反应非被测物质本身不与分析试剂反应但以但以其它形式其它形式使待测物测定值偏高或偏低使待测物测定
42、值偏高或偏低。66p试验的方法试验的方法:基本与回收试验一样，但在病人标本中加人的是疑有干基本与回收试验一样，但在病人标本中加人的是疑有干扰或非特异性反应的物质。将可能引起干扰的物质配成一定扰或非特异性反应的物质。将可能引起干扰的物质配成一定浓度的溶液，加到病人标本中成为干扰分析样本；原病人标浓度的溶液，加到病人标本中成为干扰分析样本；原病人标本加人相同量的无干扰物质的溶剂作为基础样本；然后用候本加人相同量的无干扰物质的溶剂作为基础样本；然后用候选方法对此两种样本同时测定，两者之差即表示该干扰物质选方法对此两种样本同时测定，两者之差即表示该干扰物质产生的干扰所引起的误差，即干扰值产生的干扰所引
43、起的误差，即干扰值干扰值干扰值=分析标本测得浓度分析标本测得浓度 -基础标本测得浓度基础标本测得浓度p计算计算:67p注意事项注意事项被试验的物质：胆红素、溶血、防腐剂、抗凝剂、被试验的物质：胆红素、溶血、防腐剂、抗凝剂、药物等药物等可疑干扰物的浓度：干扰物浓度有可能达到病理标可疑干扰物的浓度：干扰物浓度有可能达到病理标本最高浓度值。本最高浓度值。本试验检测的误差包括方法特异度不高和干扰物作本试验检测的误差包括方法特异度不高和干扰物作用引起的误差。用引起的误差。p消除干扰常用方法消除干扰常用方法空白对照：空白对照：试剂空白试剂空白：常见：常见标本空白：内空白法和外空白法标本空白：内空白法和外空
44、白法物理、化学方法分离干扰物物理、化学方法分离干扰物双波长或多波长法检测排除干扰双波长或多波长法检测排除干扰误差较大又无法消除，则改进或更换方法。误差较大又无法消除，则改进或更换方法。（分析标本就是模拟实际标本）（分析标本就是模拟实际标本）68(四四)方法比较试验（对比试验）（熟悉）方法比较试验（对比试验）（熟悉）p试验的目的试验的目的:p试验的方法试验的方法:对一组病人的标本用候选方法和比较方法同时进行分析对一组病人的标本用候选方法和比较方法同时进行分析测定，观察二者之间的差异。这是考验候选方法是否可采用测定，观察二者之间的差异。这是考验候选方法是否可采用的重要措施。的重要措施。用于检测候选
45、方法的系统分析误差。用于检测候选方法的系统分析误差。对所得数据进行分析，对所得数据进行分析，可提供系统误差的性质（恒定或和比例误差）可提供系统误差的性质（恒定或和比例误差）69在进行临床化学常规方法的评价时，最好选择参考方法作为比较方法在进行临床化学常规方法的评价时，最好选择参考方法作为比较方法若采用已知偏差法，则有部分误差来自比较方法（与已知偏差若采用已知偏差法，则有部分误差来自比较方法（与已知偏差 一致一致的那部分误差），剩余的则属于侯选方法。的那部分误差），剩余的则属于侯选方法。若采用未知偏差法，分析误差可能来源于二者之一或两者都有，难以若采用未知偏差法，分析误差可能来源于二者之一或两者
46、都有，难以分析。分析。p比较方法的选择：比较方法的选择：p应注意的问题应注意的问题:p统计处理：统计处理：配对配对t t检验、相关和回归分析。检验、相关和回归分析。70方法学评价实验小结v重复性试验：重复性试验：测定候选方法的偶然误差，衡量精密度。测定候选方法的偶然误差，衡量精密度。v回收试验：回收试验：测定比例系统误差，衡量准确度测定比例系统误差，衡量准确度。v干扰试验：干扰试验：测定恒定系统误差，衡量准确度测定恒定系统误差，衡量准确度。v方法对比试验：方法对比试验：检测候选方法的系统分析误差检测候选方法的系统分析误差。71五、方法性能判断五、方法性能判断方法的选择方法的选择 方法的评价方法
47、的评价实验的诊断性能评价实验的诊断性能评价方法性能判断方法性能判断建立质控建立质控,引入常规检验引入常规检验实验误差实验误差某一确定的某一确定的允许误差允许误差某一确定的允许误差某一确定的允许误差方法性能标准方法性能标准(PS):运用统计方法制定出一系运用统计方法制定出一系列列医学决定水平上医学决定水平上的的标本允许误差限度标本允许误差限度72（一）方法学性能指标：（一）方法学性能指标：、允许分析误差：允许分析误差：依据依据Westgard制定的制定的标本的标本的允许误差限度允许误差限度，或者，或者的病人标本其误差应的病人标本其误差应小于小于这个这个限度限度，用，用表示。表示。是大量研究是大量
48、研究,运用统计学方法制定出的。运用统计学方法制定出的。、医学决定水平：对临床病人的诊疗具有医学判断作用的临界分析物浓度，、医学决定水平：对临床病人的诊疗具有医学判断作用的临界分析物浓度，用用c表示。表示。c代表一个阈值。每个检测指标有一个或多个阈值。代表一个阈值。每个检测指标有一个或多个阈值。性能指标性能指标:和和c组成某方法的性能指标。即某方法在一定组成某方法的性能指标。即某方法在一定XC下的下的值。值。73制定性能标准，要反映临床应用与解释结果的要求（医学制定性能标准，要反映临床应用与解释结果的要求（医学效用限度），又要基本符合实验室所能做到的技能状态。效用限度），又要基本符合实验室所能做
49、到的技能状态。方法学性能标准制定原则方法学性能标准制定原则74（二）方法性能判断指标（二）方法性能判断指标：p判断标准：判断标准：各种误差值各种误差值 确定的允许误差值确定的允许误差值：任何一项各种误差值任何一项各种误差值 确定的允许误差值确定的允许误差值：p性能判断指标：两套（了解）性能判断指标：两套（了解）第一套：单值判断指标：第一套：单值判断指标：简单，用于初步估量简单，用于初步估量第二套：可信区间判断指标第二套：可信区间判断指标：复杂，对方法性能评价更客观，用于最后复杂，对方法性能评价更客观，用于最后判断判断75、单值判断指标、单值判断指标 误差类别误差类别 判断指标判断指标 备注备注
50、随机误差随机误差（RE）1.96STMEA STM=重复试验的标准差重复试验的标准差 比例误差（比例误差（PE）(|R-100|)(XC/100)EA R=平均回收率平均回收率恒定误差恒定误差(CE)|偏差偏差|EA 由干扰试验测出由干扰试验测出系统误差系统误差(SE)|(a+bXc)-Xc|EA 对比试验回归方程对比试验回归方程总误差总误差(TE)RE+SEEA 包括偶然及系统误差包括偶然及系统误差76（）可信区间、可信上限和可信下限：（）可信区间、可信上限和可信下限：统计学的规律说明，每种测定结果的可靠性与测定次数有统计学的规律说明，每种测定结果的可靠性与测定次数有关，次数愈多，结果反映真
