1、第一章 概论1. 临床检验仪器常用性能指标（可能考问答题） 1灵敏度 2 误差 3噪声 4最小检测量 5精确度 6可靠性 7重复性 8分辨率 9测量范围和示值范围 10线性范围 11响应时间 12 频率影响范围1 灵敏度：检验仪器在稳态下输出量变化与输入量变化之比。2 误差：当对某物理量进行检测时，所测得的数值与真值之间的差异。3 噪音:检测仪器在没有加入被检物品时，仪器输出信号的波动或变化范围。4 最小检出量：检验仪器能确切的反应最小物质含量。5 精确度：检测值偏离真值的程度。6 可靠性：仪器在规定时期内及在保持运行不超限的情况下执行其功能的能力，反应仪器是否耐用的一项指标。第二章 离心机
2、1. 离心技术：应用离心沉降进行物质的分析和分离的技术2. 离心机的工作原理：利用离心转子高速旋转产生的强大离心力，迫使液体中的微粒克服扩散，加快沉降速度，把样品中具有不同沉降系数和浮力密度的物质分离。颗粒的沉降速度取决于离心机的转数、颗粒的质量、大小和密度。3. 离心力：由于物体旋转而产生的力，物体作圆周运动所产生的向心力的反作用力。4. 相对离心力：通常颗粒在离心过程中的离心力是相对于颗粒本身所受的重力而言，因此把这种离心力叫做相对离心力。5. 离心机的分类：按转数分为：低速、高速、超高速。6. 离心机的最大容量：离心机一次可分离样品的最大体积，mn,一次可容纳最多离心管一个离心管容纳样品
3、最大体积。7. 沉降系数：颗粒在单位离心力场作用下的沉降速度，其单位为秒。8. 离心机的基本结构低速离心机的结构较简单，由电动机，离心转盘（转头）、调速器、定时器、离心套管与底座等主要部件构成。其最大转速在10000r/min以内，相对离心力在15000xg以内。高速（冷冻）离心机 最大转速为2000025000r/min超速（冷冻）离心机 最大转速可达5000080000r/min 9. 差速离心法：差速离心法又称分步离心法，根据分离物的沉降速度不同，采用不同的离心速度和时间分步离心的方法。10. 差速离心法的优缺点： 优点：操作简单，离心后用倾倒法即可将上清液与沉淀分开，并可使用容量较大的
4、角式转子；分离时间短、重复性高；样品处理量大。 缺点：分辨率有限、分离效果差，沉淀系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开，不能一次得到纯颗粒；壁效应严重，特别是当颗粒很大或浓度很高时，在离心管一侧会出现沉淀，颗粒被挤压，离心力过大、离心时间过长会使颗粒变形、聚集而失活。11. 密度梯度离心法：密度梯度离心法又称区带离心法，该方法主要用于沉降速度差别不大的微粒，将样品放在一定惰性梯度介质中进行离心沉淀或沉降平衡，在一定离心力下把颗粒分配到梯度液中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法。12. 密度梯度离心法的优缺点： 优点：具有很好的分辨率分离、分离效果好，可一次获得较纯的颗粒；分离范围广；
5、缺点：分离时间长，需要制备梯度液，操作严格，不易掌握。第三章 显微镜 1. 光学显微镜的工作原理：光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，供人们提取物质细微结构信息的光学仪器。光学显微镜由两组会聚透镜组成光学折射系统。把焦距较短，靠近观察物、成实像的透镜组称为物镜；焦距较长，靠近眼睛、成虚象的透镜组称为目镜。被观察的物体位于物镜前方，被物镜作为第一级放大后成一倒立的实像，然后此实像再被目镜作为第二级放大，得到最大放大效果的倒立的虚象，位于人眼的明视距离处。2. 光学显微镜的最小分辨率是0.25um3. 光学显微镜的基本结构： 1.光学系统：物镜、目镜、聚光镜、反光镜。 2
6、.机械系统：聚光镜升降、调焦系统、载物台和物镜转换器等运动夹持部件以及底座、镜臂、镜筒等支持部件）4. 光学显微镜放大倍数的计算5. 显微镜的一半操作规程：1打开电源开关，旋转光强调节旋钮使光强适中，2旋转粗调旋钮把载物台姜到最低处，打开夹片器，放好标本，轻轻松开夹片器自然夹住玻片，旋转载物台下标本平面移动控制旋钮，将标本放置在恰当是位置，3旋转物镜转换器把10倍物镜置于标本上方，先从侧面观察，旋转显微镜的粗调，样品尽可能接近物镜，若有锁死装置需锁死；4通过右目镜观察标本，慢慢旋转粗调使载物台下降.，粗调聚焦后再用微调作精细调节，调节光瞳间距调节把手，双目可以观察到一个单一的像，5旋转左目镜上
7、的屈光度调节环，使样品清晰可见，使双眼视力差得到补偿，6旋转聚光镜上下移动钮将聚光镜转移到最高位置，然后取下目镜镜头，直接往镜筒内看并旋转聚光镜孔径光阑刻度盘使孔径光阑调到大约为物镜NA的80%的位置便可获得高质量的像，要注意更换物镜后都要重新调整孔径光阑；7物质物镜转换器转动，选用所需放大倍数的物镜并配合使用对应的目镜；8观察并记录。第四章 紫外可见分光光度计1. 紫外-可见分光光度计工作原理：光照射到物质可发生折射、反射和透射，一部分光会被吸收，其能量以热释放出来。利用测量物质对某些波长光的吸收来了解物质特性。不同物质会吸收不同波长的光。改变入射光波长，并记录物质对不同波长光的吸收程度，得
8、该物质吸收光谱，可根据物质吸收光谱分析物质结构、含量和浓度。2. 光的吸收定律：即郎伯-比尔定律，是比色分析的基本原理。表达了物质对单色光吸收程度与溶液浓度和液层厚度之间的函数关系。A=-lg I/I0=lg I0/I=lg 1/T=kbc3.郎伯-比尔定律适用条件：1入射光为单色光，2溶液浓度不能过大。4. 紫外可见分光光度计的基本结构：光源、单色器、吸收池、检测器、信号显示系统、光源：提供入射光的装置；单色器：是将来自光源的复合光分解为单色光并分离出所需波段光速的装置，是分光光度计的关键部件；吸收池：又称比色皿、比色杯、样品池或液槽，受用盛放被测溶液的器件；检测器：把光信号转换为电信号的装
9、置。信号显示系统：是把放大的信号以适当的方式显示或记录下来的装置。5. 紫外可见分光光度计的性能指标：1.波长准确度和波长重复性；2.光度准确度 3.光度线性范围 4.分辨率 5.光谱带宽 6.杂散光 7.基线稳定度 8.基线平直度6. 紫外可见分光光度计的基本分析方法 （1）定性分析 （2）定量分析 （3）纯度鉴定：在紫外光区，核算的最大吸收峰是260nm，蛋白质的最大吸收峰是280nm。纯RNA样品的A260/A280的比值是2.0+0.1，纯DNA样品的A260/A280的比值是1.8+0.1，无论是RNA还是DNA，A260/230的比值应大于2.0小于2.4。第五章 临床血液常规检验
10、仪器 1. 血细胞分析仪（BCA）:又称血细胞自动计数仪（ABCC）、血液自动分析仪（AHA）等，是对一定体积全血内血细胞数量和异质性进行自动分析的常规检验仪器。其主要功能是血细胞计数、白细胞分类、血红蛋白测定、先关参数计算等。 2. 血细胞分析仪的细胞计数原理 1. 电阻抗型血细胞分析仪的细胞计数原理：血细胞与等渗的电解质溶液相比为不良导体，其电阻值比稀释值大。当血细胞通过检测器的微孔的孔径感受区时，其内外电极的恒流电路上的电阻值瞬间增大，产生电压脉冲信号。脉冲信号数等于通过的细胞数，脉冲信号幅度大小与细胞体积成正比。根据欧姆定律，在恒电流电路上，电压变化与电阻变化成正比，电阻值又同细胞体积
11、成正比，血细胞体积越大，电压越高，产生信号的脉冲幅度就越大。各种大小不同的细胞产生的脉冲信号分别被送入仪器的检测通道，经计算机处理后，以体积直方图显示出特定细胞群中的细胞体积和细胞分布情况。最后得出白细胞、红细胞、血小板等相关参数。 2. 联合检测型血细胞分析仪的细胞计数原理：以流式技术为基础再联合使用流式、激光、射频、电导、电阻抗、细胞化学染色等多项技术进行细胞分析，并综合分析检测数据，从而得出较为准确的“五分类”结果。其均使用了流式细胞计数，形成流体动力聚焦的流式通道，使单细胞流在鞘液的包裹下通过流式通道，将重叠限制到最低浓度。3. 网织红细胞计数分析基本原理：采用激光流式细胞分析技术与细
12、胞化 学荧光染色技术联合对网织红进行分析，利用网织红中残存的嗜碱性物质RNA，在活体状态下与特殊荧光染料（新亚甲蓝等）结合，激光激发产生荧光，荧光强度与RNA含量成正比；用流式细胞技术检测单个的网织红的大小和细胞内RNA含量及Hb含量。由计算机处理，得出网织红技术及其他参数。 4. 血细胞分析仪测定Hb的原理：除干式离心分层型、无创型外，各种BCA对Hb测定都采用光电比色原理。血细胞悬液中加入溶血剂后，RBC溶解释放出Hb，后者与溶血剂中有关成分形成Hb衍生物，进入Hb测试系统。在特定波长（多为530550nm）下进行光电比色，吸光度值与所含Hb含量成正比。与不同型号BCA配套的溶血剂不同，形
13、成Hb衍生物也不同，吸收光谱也有差异，但最大吸收峰都接近540nm，因为国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐的氰化高铁（HiCN）法的最大吸收峰在540nm，仪器Hb的校正必须以HiCN值为标准。 5. 血液凝固分析仪的凝固法是通过检测血浆在凝血激活剂作用下一系列物理量（光、电、超声、机械运动等）的变化，再由计算机分析所的数据并将之换算成最终结果的方法。 6. 血液凝固分析仪检测原理:血凝仪使用的主要检测技术方法有凝固法、底物显色法、免疫学法，干化学法等。凝固法是血栓/止血实验中最基本、最常用的方法。半自动血凝仪以凝固法检测为主，全自动血凝仪还可使用底物显色发和免疫学法等。7. 凝固法：是通
14、过检测血浆在凝血激活剂作用下一系列物理量（光、电、超声、机械运动等）的变化，再由计算机分析所得数据并将之换算成最终结果的方法，故也称生物物理法。 按测量原理可分为电流法、超声分析法、光学法、磁珠。第六章 临床血液流变学检验仪器1. 血液粘度计的分离：工作原理分为毛细管粘度计和旋转式粘度计。2. 红细胞沉降率：是指红细胞在一定条件下沉降的速度，简称血沉。是应用于临床诊断和观察某些疾病活动情况的一项重要参数。在血液流变学测定中常作为红细胞聚集、红细胞表面电荷、红细胞电泳的通用指标，其结果对许多疾病的活动、复发、发展有监测作用。3. 自动血沉仪工作原理：所以自动血沉仪的原理和方法都是建立在魏氏法的基
15、础上，利用光学阻挡原理进行测量；也有采用红外线障碍法或激光光源扫描微量全血进行检测。 4. 影响红细胞沉降的因素：1.红细胞的大小和形态；2.红细胞的变形性；3.红细胞聚集性和相互作用；4红细胞的压积，5血浆介质的上升流动；6.沉降管的倾斜度。 5. 自动血沉仪基本结构：光源、沉降管、检测系统、数据处理系统。 6. 红细胞沉降曲线：分为红细胞不下沉的悬浮期、红细胞缗线状形成的聚集期、红细胞等快速下降的快速沉降期、红细胞开始积压的缓慢沉降期。 7.自动血沉仪的质量控制： 第七章 临床尿液检验仪器1. 尿液分析：是临床诊断泌尿系统疾病的重要措施之一，通过对尿液的物理学检查和化学检查，可观察尿液物理
16、性状和化学成分的变化。在尿沉渣检查中能够看到的有形成分为红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、巨噬细胞、肿瘤细胞、细菌、精子以及由尿液中沉析出来的各种结晶（包括药物结晶）等。这些检查资料对肾和尿路疾患的诊断、鉴别诊断以及疾病的严重程度和预后的判断，都有极重要的意义。随着现代医学科学技术的发展，特别是电子技术及计算机的应用，各种尿液分析仪、特别是尿沉渣全自动分析仪的相继问世，为尿液化学成分检查和尿沉渣的自动化检查提供了可靠的手段。 2. 尿液分析仪的检测原理：（可能考大题）把试剂带浸入尿液以后，除了空白块外，其余的试剂块都因和尿液发生了化学反应而产生了颜色的变化，试剂块的颜色深浅与光的吸收和反射程度有
17、关，颜色越深，相应某种成分浓度越高，吸收光量值越大，反射光量值越小：反之，反射率越大。因为颜色的深浅与光的反射率成反比关系，而颜色的深浅又与尿液中各种成分的浓度成比例关系，所以只有测得光的反射率及可以求得尿液中各种成分的浓度。 3. 尿液分析仪的试剂带结构：单项试剂带以滤纸为载体，将各种试剂成分浸渍后干燥，作为试剂层，再在其表面覆盖一层纤维素膜作为反射层。一般把这样一条上面附有试剂块的塑料条叫做试剂带。尿液侵入试剂带后，与试剂发生反应，可产生颜色变化4. 试剂带的反应原理：pH测定：pH指示剂原理尿蛋白质测定：pH指示剂蛋白质误差的远离尿葡萄糖测定：一种是基于葡萄糖氧化酶法原理，另一种是基于铜
18、还原法的原理尿酮体测定：采用亚硝基铁氰化钠反应测量酮体尿隐血测定：血红素具有过氧化物酶样作用，能催化过氧化氢释放出新生态氧，使色原氧化而显色，其颜色深浅与血红蛋白含量有关尿胆红素测定：采用重氮反应法原理尿胆原测定：采用Ehrlich醛反应原理或重氮反应原理尿亚硝酸盐测定：尿亚硝酸盐试验.5. 试剂带的应用：不同型号的尿液分析仪一般使用自己配套的专用试剂带。试剂块要比测试项目多一个空白块，有些仪器还多一个位置参考块。各试剂块与尿液中被测定成分反应而呈现不同颜色。空白块是为了消除尿液本身的颜色及试剂块分布的状态不均等产生出测试误差，提高测量准确度而设置的。固定块是为了消除在测试过程中因每次测定试剂
19、块的位置不同而产生的测试误差设置的。每次测定前，检测头都会移到参考位置进行自检，必要时，自动调整发光二极管的亮度和灵敏度，以提高检测的信噪比。 （尼龙膜、绒制层、吸水层、塑料底层）。6. 尿液分析仪的质量控制：检测前的质量控制、检测中的质量控制、检测后的质量控制。7. 流式全自动尿有形成分分析仪工作原理：流式全自动尿有形成分分析仪的测定是应用流式细胞术和电阻抗的原理进行的。一个尿液标本被稀释并经染色液染色后，靠液压作用通过鞘液流动池。反应样品从样品喷嘴出口进入鞘液流动室时，被一种无粒子颗粒的鞘液包围，使每个细胞以单个纵列的形成通过流动池的中心（竖直）轴线，在这里每个尿液细胞被氩激光光束照射。每
20、个细胞有不同程度的荧光强度，从染色尿液细胞发出的荧光，主要反映细胞的定量特性（如细胞膜、核膜、线粒体和核酸）、前向散射光强度，它成比例地反映细胞的大小和电阻抗的大小（电阻抗电信号与细胞的体积成正比）。仪器将这种荧光、散射光等光信号转变成电信号，并对各种信号进行分析，最后得到每个尿液标本产生出的直方图和散射图、通过分析这些图形，即可区分每个细胞并得出有关细胞的形态。8. 流式全自动尿有形成分分析仪仪器结构：流式全自动尿有形成分分析仪包括光学检测系统、液流系统、电路系统和自动进样装置。第八章 临床自动生化分析仪器1. 自动生化分析仪器及特点：自动生化分析仪器是将生物化学分析过程中的取样、加试剂、去
21、干扰、混合、保温反应、自动检测、结果计算、数据处理和打印报告，以及实验后的清洗等步骤自动化的仪器。这类仪器一般都具有灵敏、准确、快速、节约和标准化等优点，不仅工作效率高，而且减少了主观误差，稳定了检验质量。2. 自动生化分析仪根据仪器反应装置结构的不同，可分为连续流动以，离心式、分立式和干化学式。3. 自动生化分析仪的基本结构：样品处理系统、检测系统、计算机系统。样品处理系统：样品装载和输送装置，闭盖穿刺、开盖闭盖装置，试剂仓，样品和试剂取样单元，搅拌系统。检测系统：1.光源2.分光装置 目前多用光栅。使用后分光技术，可以在同一体系中测定多种成分。如果比色池中有多种吸收特征不同的组成物质，当复
22、色光通过后，各物质分别对各自的特征性光波产生吸收，之后再分成光谱对不同的波长进行测定，可以在同一体系中同时得到多组分结果，无需移动仪器的任何部分，稳定性好，速度快，噪声低，分析精确度和准确度高，故障少。3.比色杯4.恒温装置5.清洗装置6.信号转换与传输装。4. 自动生化分析仪的性能指标：1.检测准确度 检测准确度包含正确度和精密度，由检测仪器、试剂、校准品等共同组成的检测系统决定。 精密度是正确度的基础，主要取决于仪器各部分诸如加样和加试剂系统，温控系统、光路检测系统等的加工精密度和良好的工作状态。2.自动化程度3.分析效率4.应用范围5.其他性能。5. 自动生化分析仪的相关参数：基本分析参
23、数（1）终点分析法：又称平衡法，是通过测定反应开始至反应达到平衡时的产物或底物浓度的总变化量来求出待测物浓度或活性的方法。可分为：一点法：指样品和试剂混合后，反应一定时间到达终点时，通过吸光度的检测计算待测物浓度。该法简便，但易受样品、试剂颜色、血清浊度及干扰物的影响。单试剂型的生化检测项目需选用一点法，如钙、磷、镁的测定两点法：常应用于具有双试剂的检测项目。加入样品后分别读取试剂I、II吸光度值，即样品空白值和实际呈色反应值，计算待测物浓度。该法可在一定程度上消除样品、试剂颜色、血清浊度及干扰物的影响。目前大多数生化检测项目都可使用双试剂，如血清总蛋白、白蛋白、总胆红素、结合胆红素、葡萄糖、
24、总胆固醇、甘油三酯等的测定。固定时间法：是终点分析法的一种情况，可减少非特异性反应，指样品和试剂混合后分别读取延滞期后和反应一定时间后的吸光度，计算待测浓度。（2）连续监测法：又称速率法，是通过连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物的吸光度，根据吸光度随时间的变化求出待测物浓度或活性的方法。（3）免疫投射比浊法：用于测定产生抗原抗体特异性浊度的项目，在光源的光路方向测量投射强度来测定物质浓度，常采用终点法。6. 检测波长 可选择单波长或双波长，自动生化分析仪常用双波长或多波长 7. 反应温度 通常设有25、30、37等温度。一般选用37 8.试剂选择 可选择单试剂或双试剂 （2）双试剂法：在
25、反应过程中试剂分开配制和加入反应系统，可消除干扰和非特异性反应，稳定试剂，使检测结果更准确。包括双试剂单波长一点法双试剂二点法双试剂双波长法。第九章 临床电化学分析仪器1. 电化学分析法就是利用这些性质，通过点击变换器，将被测物质的浓度转变为电学参数而进行测量的方法 2. 血气分析仪 PCO2电极：是一个气敏电极，其前端有一层半透膜，只允许CO2分子通过，其内部有一玻璃电极和参比电极。PO2电极：是一种Clark电极，属于气敏氧电极，也是极谱电极。第十章 临床微生物检测仪器1. 目前微生物鉴定的自动化系统大致分为2类：一类是自动血培养检测和分析系统，另一类是自动微生物鉴定及药敏分析系统。2.
26、自动血培养系统分为四类：1 BioArgos系统、 2 Bact/Alert系统、 3、Bactec9000系列、4、Vital系统3. 微生物自动鉴定原理；采用微生物数码鉴定原理，即通过数学的编码技术将细菌的生化反应模式转换成数学模式，给每种细菌的反应模式赋予一组数码，建立数据库。然后将待检菌有关生化试验结果转换成生物数码，与编码数据库进行对比，得到细菌名称。4. 微生物自动化抗菌药物敏感试验原理；实质是微型化的肉汤稀释试验。将抗菌药物微量稀释在条孔或条板中，加入菌悬液孵育后放入仪器或在仪器中直接孵育，仪器每隔一定的时间自动测定细菌生长的浊度，或测定培养基中荧光指示剂的强度，或荧光原性物质是
27、水解，观察细菌的生长情况。得出待检菌在各药物浓度的生长斜率，经回归分析得到最低抑菌浓度MIC值，并根据CLDI标准得到相应敏感 5. 药敏测试板：药敏测试板分为常规测试板和快速荧光测试板。常规测试板原理为比浊法，如Vitek系统，在含有抗菌药物的培养基中，浊度的增加提示细菌生长，根据判断标准解释敏感或耐药；快速荧光测试板原理为荧光法，如Sensititre系统，在每一反应孔内参与荧光底物，若细菌生长，表面特异酶系统水解荧光底物，激发荧光，反之没有荧光。以最低药敏浓度仍无荧光产生的浓度为最低抑菌浓度（MIC）第十一章 临床免疫检验仪器酶免疫分析技术EIA分类：可分为非均相（或异相）酶免疫测定和均
28、相酶免疫测定两种。均相酶免疫分析法：以激素、药物等小分子抗原或半抗原为主，测定过程中无需分离结合的和游离的酶标记物，实验在液相中进行，可直接用自动生化分析仪进行测定。非均相酶免疫分析法：是在抗原抗体反应达平衡后，将游离的与抗原或抗体结合的酶标记物加以分离，再通过底物显色进行测定，酶标仪与普通光电比色计的不同之处在于，酶标仪比色液的容器不是比色皿，而是塑料微孔板；以垂直光束通过微孔板中的待测液。现在大部分的酶标仪还加上了判读系统和软件操作分析系统等，可进行资料录入、结果计算、储存信息和质控管理等操作分析，在各类实验室已广为应用。酶免疫分析仪性能评价：滤光片波长精度检查及其峰值测定、灵敏度和准确度
29、、通道差与孔间差检测、零点漂移、精密度评价、线性测定、双波长评估。 全自动化学发光免疫分析方法：固相抗原竞争法，双抗体夹心法，双抗原夹心法：时间分辨荧光免疫检测原理：用镧系三价稀土离子及其螯合物作为示踪物标记抗体、抗原、核酸探针等物质。当免疫反应发生后，根据稀土离子螯合物的荧光光谱的特点，用时间分辨荧光分析仪延缓测量时间，排除标本中非特异性荧光的干扰，所得信号完全是稀土元素螯合物发射的特异荧光，测定免疫反应最后产物的特异荧光信号。根据荧光强度判断反应体系中分析的浓度，达到定量分析的目的。时间分辨荧光免疫分析仪特点：特异性强、敏感度高、标记物稳定、荧光信号强。第十二章 临床即时检验仪器非重点章节
30、 1. 即时检验POCT：也称床边检验，指在患者身边，由非检验专业人员利用便携式仪器快速分析患者标本并准确获取结果的分析技术，或者说测试不在主实验室而在一个可移动的系统内进行。2. 即时检验的特点:1仪器小型化，便于携带；2操作简单化，一般3-4个步骤即可完成实验；3报告及时化，缩短检验周期；4经权威机构的质量认证； 5仪器和配套试剂中应配有质控品，可检测仪器和试剂的工作状态；6仪器检验项目具备临床价值和社会意义；7仪器的检测费用合理；8仪器试剂的应用不应对患者和工作人员的健康或对环境造成不良影响。3 快速血糖测试仪的检验原理： 目前快速检测血糖仪多采用葡萄糖脱氢酶法，根据酶电极的响应电流与被
31、测血样中的葡萄糖浓度呈现线性关系来计算血标本中的葡萄糖浓度值。4 即时检验仪器分类：1.按照用途分类 快速血糖检测仪，电解质分析仪，血液分析仪，血气分析仪，抗凝测定仪，心肌损伤标志物检测仪，药物应用检测仪，酶联免疫检测仪，放射免疫分析仪，甲状腺激素检测仪等。2.根据体积大小和重量分类 便携型，桌面型，手提式，手提式一次性使用型等。3.根据所用的一次性装置分类 卡片式装置，单一或多垫试剂条，微制造装置，生物传感器装置，其他多孔材料等多种装置。5.及时检验POCT检验仪器的构成：分析系统和信号检测系统两大类第十三章 PCR核酸扩增仪 1. PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依
32、赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成 2. 原位PCR仪：即在细胞内进行PCR扩增，而组织细胞的形态不被破坏，它是原位杂交与PCR技术的结合。以往手工技术操作复杂，扩增效果及实验结果重复性均不理想。原位PCR仪以其创新的设计，比较好地解决了这些问题。原位PCR仪与普通PCR仪的区别在于，其样品基座上有若干平行的铝槽，每条铝槽内可垂直放置一张载玻片，每张载玻片面均与铝槽紧密接触，温度传导极佳，控温很精确。目前也有在普通PCR仪上增加原位PCR模块的，就可以进行原位PCR扩增。不少厂家的PCR仪都可以提供原位适配器，配有支持原位PCR模块的PCR仪可以一机
33、两用，比较经济。 2. 实时荧光定量PCR核酸扩增仪结构：定量PCR仪通常由两部分组成：PCR系统和荧光检测系统。荧光检测系统包括激发光源和检测器。 3. PCR扩增仪的性能指标 （一） 温度控制：是决定PCR反应能否成功的关键，主要包括温度的准确性，均一性以及升降温度，对PCR扩增仪而言温度控制意味着质量。 （二）荧光检测 （1）Ct值重复性错误 （2）荧光检测范围 （3）仪器的检测通道数量 （三） 样品基座容量和样品数4. PCR核酸扩增仪常见的故障的排除 荧光强度减弱或不稳定：原因有滤光片发霉或有水气等，需工程师检修；或光源损耗，需更换光源；或需调节检测元件灵敏度，也需工程师调试。5.
34、各孔独立控温的荧光定量PCR仪 各孔独立控温的定量PCR仪设计非常独到，不同样品槽分别拥有独立的智能升降温模块，各孔独立控温，可以在同一台定量PCR仪上分别进行不同条件的定量PCR反应，随时利用空置的样品槽开始其他定量反应，使用效率非常高。升降温速度高达10/s，控温精度高。每个模块独立控制的激发光源和检测器直接与反应管壁接触，保证荧光激发和检测不受外界干扰。该类仪器整合多通道光学检测系统，能有效分辨FAM/SYBRGreeni、Tet/Cy3、Texasred和cy5等多种荧光染料，可对同一样品进行多靶点分析，同时检测四种荧光信号。可使用Taqman探针，分子信标，Amplifluor引物等
35、多种检测方法，定量线性范围可达9个数量级。其软件允许一台仪器同时操作多个样品模块，既满足高速批量要求，又能灵活运用，还可实现任意梯度反应。但是上样不如传统方法方便，而且需要独特的扁平反应管，使用成本较高。适合多指标快速检测，但目前在国内应用尚少。6. 荧光检测：Ct值重复性误差：Ct值是每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小，一般要求CV2.5%。7. 实时荧光定量PCR技术原理：荧光实时定量PCR是在PCR反应体系中加入特异性的荧光染料或探针，荧光信号的变化真实的反映了体系中模板的增加，通过检测
36、荧光信号，可以实时监测整个PCR反应过程，最好通过标准曲线对未知模板进行定量分析。第十四章 全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪1. 目前DNA测序的工作原理主要利用Sanger双脱氧链末端终止法或MaxamGilbert化学降解法2. 目前使用的全自动DNA测序仪都是通过凝胶电泳技术进行DNA片段的分离。第十五章 流式细胞仪1. 流式细胞仪的分析原理:将特异荧光染料染色的单细胞悬液放入样品管，在气体压力作用下，悬浮在样品管中的单细胞经管道进入FCM的流动室，沿流动室的轴心向下流动形成样品流。流动室轴心至外壁的鞘液也向下流动，形成包绕样品流的鞘液流。鞘液流和样品流在喷嘴附近组成一个圆柱流束，自
37、喷嘴的圆形孔喷出，与水平方向的激光束垂直相交，相交点称为测量区。染色的细胞受激光照射后发出荧光，同时产生光散射。这些信号分别被光电倍增管和光电二极管接收，并转换为电子信号，再经过模数转换器输入计算机。计算机通过相应的软件储存、计算、分析这些数字化信息，就可得到细胞的大小、核酸含量、酶和抗原的性质等信息。如果在压电晶体上加上频率为30kHz的信号，就会使其产生同频率的机械振动，流动室也随之振动，于是通过测量区的液柱断裂成一连串均匀的液滴。由于各类细胞的特性信息在细胞形成液滴以前在测量区已被测定，并储存在计算机中，因此，当要分选某类细胞时，FCM就将在这类细胞形成液滴时给含有这类细胞的液滴充以特定
38、的电荷，而不符合分选条件的含细胞液滴和不含细胞的空白液滴不被充电，即不带电荷。带有电荷的液滴向下落入偏转板间的静电场时，依所带电荷的不同分别向左偏转或向右偏转，落入指定的收集器内。不带电的液滴不发生偏转，垂直落入废液槽中被排出，从而达到细胞分类收集的目的，分选出的细胞可以进一步分析、培养和研究。2. 前向角散射：前向角散射与被测细胞的大小有关，确切的说与细胞直径的平方密切相关。侧向角散色：对细胞膜、细胞质、核膜的折射率更为敏感，可提供细胞内精细结构和颗粒性质的信息。两种信号均来自于激光光速，其波长与激光相同。3. 荧光信号的宽度和面积：荧光信号的面积是对荧光光通量进行积分测量，荧光信号的宽度常
39、用于区分双联体细胞。第十六章 临床电泳分析仪器1. 电泳（EP）：指带电荷的溶质或粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的现象。2. 常用的电泳分析方法：醋酸纤维素薄膜电泳、凝胶电泳、等电聚焦电泳、双向电泳、毛细管电泳。3. 电泳的基本原理：物质分子在正常情况下一般不带电，即所带正负电荷量相等，故不显示带电性。但是在一定的物理作用或化学反应条件下，某些物质分子会成为带电的离子，不同的物质，由于其带电性质、颗粒性状和大小不同，他们在一定的电场中移动的方向和速度也就不同，因此就可以将他们分离。 4. 影响电泳的外界因素：电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度、电渗作用、粒子的迁移率、吸附作
40、用。5. 免疫电泳技术有两大优点，一是加快了沉淀反应的速度；二是将某些蛋白组分根据其带电荷的不同而分开，再与抗体起反应，从而使此方法更为微量化、多样化。 6. 免疫电泳可用于的研究：抗原和抗体的相对应性，测定样品的各成分及他们的电泳迁移率，根据蛋白质的电泳迁移率，免疫特性及其他特性，可以确定该复合物中某些蛋白质，鉴定抗原或抗体的程度。 7. 毛细管的内径是20-100um。第十八章 色谱分析仪器1. 色谱法的基本原理：色谱分离中的两相是指系统具有一个有大比表面积的固定相（可以是固体或以某种方式固定了的液体）和一个能携带待分离混合物流过固定相的所谓流动相（可以是气体或液体）。2. 色谱仪的分类：
41、目前比较成熟的色谱仪主要是气相色谱仪和高效液相色谱仪两大类3.气相色谱柱和温度控制：气相色谱柱：1固定相2柱管形状和尺寸。温度控制：在气相色谱仪的使用过程中，必须使用气态样品（如果是液态样品需要经过气化处理），温度对样品在色谱柱上的分离过程、对许多检测器（如热导、电子捕获、示差折光等）的检测结果等都有很大影响。因此，必须对色谱柱箱、检测器和气化室等实行温度控制。其关键在于温度条件的稳定性，它将直接影响色谱柱的分离效率，保留参数的重复性以及检测器的性能。 温度对于固定相也非常重要。操作时一定要知道所用固定相温度的极限，把全部操作保持在临界温度以下1015进行。这将有助于延长柱子的使用寿命和避免检
42、测器与其他装置受固定相“流失”所造成的污染。第二十一章 生物安全柜 1. 生物安全柜：是防止操作者和环境暴露于试验过程中产生的生物气溶胶的负面过滤排风柜，是防止实验室获得性感染的主要设备。2. 生物安全柜的工作原理：主要是将柜内空气向外抽收，使柜内保持负压状态，安全柜内的气体不能外泄从而保护工作人员。外界空气经高效空气过滤器过滤后进入安全柜内，以避免处理样品被污染；同时，柜内的空气也需经过高效空气过滤器过滤后再排放到大气中以保护环境。 3. 生物安全柜的分类：目前世界上生物安全柜领域执行的标准主要有欧盟标准化委员会于2000年5月颁布的欧洲标准EN12469：2000和美国国家标准学会于200
43、2年认可的美国国家卫生基金会的第49号标准（NSF49）等。我国的中华人民共和国医药行业标准：生物安全柜（YY0569-2005）于2006年正式实施，该标准积极吸收采纳EN12469：2000和NSF49这两个生物安全柜标准中的重要部分，并对其中部分内容做了修改、提高。YY0569-2005标准的实施结束了长期以来我国在生物安全柜方面缺乏统一标准的局面。4. 根据气流及隔离屏障设计结构，将生物安全柜分为，级。级生物安全柜 是指用于保护操作人员与环境安全，而不保护样品安全的通风安全柜。级生物安全柜 是指用于保护操作人员，环境，以及样品安全的通风安全柜，也是临床生物防护中应用最广泛的一类生物安全
44、柜。级生物安全柜 是具有完全密闭，不漏气结构的通风安全柜。（安全柜分级不知考否）5. 生物安全柜的结构：箱体和支架。核心结构高效空气过滤器。6. 生物安全柜内实验操作注意事项:1.个人防护，在使用安全柜时必须穿防护服，戴防护手套，最好戴口罩和帽子，根据需要戴防护眼罩或面罩。 2.安全柜内物品摆放原则，柜内放置的仪器和材料等物品保持最低数量，按照从清洁区到污染区的原则摆放，所有物品尽可能放在工作台中后部，前玻璃门进气口不能被纸、设备或其他东西阻挡，盛放废弃物及污物的容器应摆放在柜内污染区。3.紫外灯的使用，每周对紫外灯进行清洁，除去可能影响消毒效果的灰尘和污垢，每次生物安全柜的认证要检查紫外灯的
45、亮度，以确保适度的光发射量。4.尽量避免使用明火，明火可造成生物安全柜内的气流紊乱、干扰气流模式，并且可能破坏高效空气过滤器。5.操作宜缓慢，在安全柜内进行操作时手臂应缓慢移动，手臂不能频繁进出安全柜，操作完毕后，应将手臂从柜内缓慢抽出，避免将柜内污染空气带出，操作者背后其他人员的活动量要达到最小，以避免影响正常的气流。6.柜内移动物品时应尽量避免交叉感染，柜内有两种及以上物品需要移动时，需按照低污染物品向高污染物品移动的原则。7.避免振动，离心机等仪器造成的振动会将积留在滤膜上的颗粒物质抖落，导致柜内清洁度降低，仪器散热片排风口气流还可能影响柜内的正常气流方向，所以应避免此类仪器放入安全柜。
46、8.操作结束后应选用合适的消毒剂清洁安全柜内表面。9.安全柜只有在工作正常时才能使用，柜子的风扇在工作开始前和工作完成后要再各运行5分钟。第二十二章 培养箱1. 培养箱:是进行组织，细胞，细菌培养的一种必备仪器，它通过对周围环境条件的控制，制造出一个能使细菌，细胞更好地生长的环境，是现代大中型医院进行日常工作和科学研究必不可少的重要设备。2. 常用培养箱有电热恒温培养箱，二氧化碳培养箱和厌氧培养箱等。 3. 细胞培养:是指从体内组织取出细胞，在体外模拟体内生理环境下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种体外培养技术。 4. 细胞培养对生长环境要求如下：1无菌环境2恒定的温度3气体环境4细胞培
47、养基 5. 细胞培养箱工作原理：细胞培养箱的温度是通过电热丝加热，再通过箱内温度传感器检测温度变化，使箱体内的温度恒定在设置温度。箱内温度一般设定在370.2左右。在加热过程中，加热信号灯始终点亮，当培养箱的温度达到设定温度并稳定后，该加热器停止加热，信号灯熄灭。细胞培养箱的二氧化碳浓度是通过二氧化碳浓度传感器来进行检测的。二氧化碳传感器是用来检测箱体内的二氧化碳浓度，将检测结果传递给控制电路及电磁阀等控制器件，如果检测到箱内二氧化碳浓度偏低，则电磁阀打开，二氧化碳进入箱体内，直到二氧化碳浓度达到所设置浓度，此时，电磁阀关闭，箱内二氧化碳切断，达到稳定状态。气体混合泵将箱体底部二氧化碳气体与空气充分混合均匀后，再次注入箱内，避免了二氧化碳的分层或不均匀现象。 6. 二氧化碳气体范围为0-20%。第二十三章 实验室自动化系统 1. 实验室自动化系统的分类：1实验室模块自动化系统、2全实验自动化2. 实验室自动化系统的基本组成包括：标本传送系统，标本处理系统，自动化分析系统，分析后输出系统和分析测试过程控制系统。3. 离心单元在全自动标本前处理系统中通常作为独立可选单元存在的。
