1、实验八实验八 石蜡切片法石蜡切片法 染色、封藏染色、封藏p切片通过不同方法，使其干燥，然后进行染色。因为每切片通过不同方法，使其干燥，然后进行染色。因为每一张载片上粘贴的是蜡带，因此必须先用一张载片上粘贴的是蜡带，因此必须先用二甲苯二甲苯去除石去除石蜡再用蜡再用酒精酒精去除二甲苯，再进入水中，才能染色，染色去除二甲苯，再进入水中，才能染色，染色的方法很多，要根据每张标本要求显示的目的选择不同的方法很多，要根据每张标本要求显示的目的选择不同的染剂，染色后显示清晰的细胞形态和核的大小，位置，的染剂，染色后显示清晰的细胞形态和核的大小，位置，然后使带水的载片经历脱水然后使带水的载片经历脱水透明等步骤
2、最后用树胶封透明等步骤最后用树胶封片。片。实验原理实验原理染色原理染色原理物理作用物理作用o渗透作用渗透作用：染料渗透到多孔的组织中，与组织没有牢固的结合；染料渗透到多孔的组织中，与组织没有牢固的结合；o吸收作用吸收作用：又称溶解学说，组织吸收染料中的色素粒子，与之牢又称溶解学说，组织吸收染料中的色素粒子，与之牢固结合，组织着色与染液的颜色相同，不一定与干燥染料的颜色固结合，组织着色与染液的颜色相同，不一定与干燥染料的颜色相同。如品红在干燥时为绿色，而其溶液呈红色，组织在染色后相同。如品红在干燥时为绿色，而其溶液呈红色，组织在染色后也呈红色，即使组织干燥后，其红颜色不变；也呈红色，即使组织干燥
3、后，其红颜色不变；o吸附作用吸附作用：染液中分散的色素粒子进入被染物质的粒子间隙内，染液中分散的色素粒子进入被染物质的粒子间隙内，由于分子的引力作用，色素粒子被吸附而染色，也由于各种蛋白由于分子的引力作用，色素粒子被吸附而染色，也由于各种蛋白质或胶体有不同的吸附面，因此可以吸附不同的粒子，也就是说质或胶体有不同的吸附面，因此可以吸附不同的粒子，也就是说对粒子的吸附有选择性，即有的容易被某些物质吸附，有的则不对粒子的吸附有选择性，即有的容易被某些物质吸附，有的则不容易吸附。容易吸附。染色原理染色原理化学作用化学作用o化学作用的主要理论根据是染色剂的性质可分为酸性、碱性和中化学作用的主要理论根据是
4、染色剂的性质可分为酸性、碱性和中性染色剂，而动、植物的细胞内性染色剂，而动、植物的细胞内般也可区分为酸性般也可区分为酸性(阴离子阴离子)和碱性和碱性(阳离子阳离子)部分。当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳部分。当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳离子时，就能与细胞的阴离子离子时，就能与细胞的阴离子(酸件部分酸件部分)较牢固地结合，当酸较牢固地结合，当酸性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳离性染色剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳离子子(碱性部分碱性部分)较牢固地结合。较牢固地结合。o例如，细胞核，尤其是核内的染色质，主要由核酸组成，是酸性例如，细胞核，尤其是核内的
5、染色质，主要由核酸组成，是酸性的组成成分故和碱性染色剂的组成成分故和碱性染色剂(苏木精苏木精)的亲和力很强，易于着的亲和力很强，易于着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红、曙红伊红、曙红)的亲和的亲和力很大，易于着色。力很大，易于着色。常用染色剂分类常用染色剂分类 o按按染料的化学性质染料的化学性质可分为可分为 ：碱性染料：碱性染料 、酸性染料、酸性染料 、直接染料、直接染料 、媒染、媒染染料染料 、中性染料；、中性染料；o根据根据染料的来源染料的来源可分为：可分为：天然染料天然染料（此类染色剂是从动、植物体中提取（此类染色剂是从动、植物体中提取的，为
6、天然产物，产量少。目前常用的有苏木精、洋红、地衣红和靛蓝的，为天然产物，产量少。目前常用的有苏木精、洋红、地衣红和靛蓝等）和等）和合成染料合成染料（全是由芳香环或具有芳香性的杂环化合物所构成。最（全是由芳香环或具有芳香性的杂环化合物所构成。最早是由煤焦油蒸馏产物合成而得的，所以又称为煤焦油染料）。早是由煤焦油蒸馏产物合成而得的，所以又称为煤焦油染料）。o根据根据染料的用途染料的用途可分为：可分为：细胞核染色剂细胞核染色剂（用于细胞核的染色剂有天然染（用于细胞核的染色剂有天然染色剂的苏木精、洋红以及合成染色剂中的番红、结品紫、硫堇、甲苯胺色剂的苏木精、洋红以及合成染色剂中的番红、结品紫、硫堇、甲
7、苯胺蓝、甲基绿、美蓝、孔雀绿和焦油紫等）、蓝、甲基绿、美蓝、孔雀绿和焦油紫等）、细胞质染色剂细胞质染色剂（用于细胞质（用于细胞质的染色剂有合成染色剂中的曙红、亮绿、橘黄的染色剂有合成染色剂中的曙红、亮绿、橘黄G G、酸性品红、苦味酸和、酸性品红、苦味酸和水溶性苯胺蓝等）和水溶性苯胺蓝等）和脂质染色剂脂质染色剂（用于显示脂质的染色剂有合成染色剂（用于显示脂质的染色剂有合成染色剂中的苏丹中的苏丹IIIIII、苏丹、苏丹IvIv、硫酸尼罗蓝及油红等）。、硫酸尼罗蓝及油红等）。一、实验目的一、实验目的o 掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求；掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求；o 学习和掌握番红学习和掌
8、握番红-固绿及苏木精固绿及苏木精-伊红双重染伊红双重染色方法。色方法。二、实验材料及用品二、实验材料及用品o 实验材料实验材料：上周已切和贴好的植物叶片、小鼠：上周已切和贴好的植物叶片、小鼠肝脏的切片肝脏的切片o 实验用具实验用具：盖玻片、染色缸、镊子、显微镜。：盖玻片、染色缸、镊子、显微镜。o 实验药品实验药品：梯度酒精、：梯度酒精、二甲苯二甲苯+100%+100%酒精酒精 、二甲苯、苏木精染色液、二甲苯、苏木精染色液、1%1%伊红水溶液、伊红水溶液、1%1%番番红水溶液、红水溶液、1%1%固绿固绿95%95%酒精溶液、加拿大树胶。酒精溶液、加拿大树胶。三、实验步骤（三、实验步骤（1）番红番
9、红-固绿固绿二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯+100%酒精酒精100%AL95%AL80%AL70%AL50%AL蒸馏水蒸馏水1%番红水溶液番红水溶液水洗水洗50%80%70%95%1%固绿固绿95%酒精溶液酒精溶液95%100%二甲苯二甲苯+100%酒精酒精二甲苯二甲苯树胶封藏树胶封藏脱蜡脱蜡复水复水染色染色脱水脱水对染对染脱水脱水透明透明封藏封藏10min10min5min5min5min5min5min5min5min10min10min10min10min10-60s洗一下洗一下5min5min5min1.5-2h三、实验步骤（三、实验步骤（2）苏木精苏木精-伊红（伊红（HE）二甲
10、苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯+100%AL100%AL95%AL80%AL70%AL50%AL蒸馏水蒸馏水苏木精染色液苏木精染色液水洗水洗氨水中氨水中“蓝蓝化化”1%伊红水溶液伊红水溶液蒸馏水漂洗蒸馏水漂洗70%AL80%AL95%AL100%AL二甲苯二甲苯+100%AL二甲苯二甲苯树胶封藏树胶封藏脱蜡脱蜡复水复水染色染色对染对染脱水脱水透明透明封藏封藏10min10min5min5min5min5min5min5min5min3-4s5min，换几次，换几次3min过一下过一下5min5min5min5min5min20min5min，换几次，换几次染色时注意的几个问题染色时注意的几个
11、问题o 应根据材料的结构、性质、观察目的来选择染色方法应根据材料的结构、性质、观察目的来选择染色方法 ；o 材料从溶液中取出放入染色液时，此两种溶液的浓度必材料从溶液中取出放入染色液时，此两种溶液的浓度必须相同须相同 ；o 作二重染色时，应先染碱性染作二重染色时，应先染碱性染 料，后染酸性染料；料，后染酸性染料；o 染色宁可深一点，不要浅一点染色宁可深一点，不要浅一点 ；o 作分色用的酸、碱溶液必须彻底洗净；作分色用的酸、碱溶液必须彻底洗净；o 制成的片子不要置于阳光下，以免褪色。制成的片子不要置于阳光下，以免褪色。封片注意事项封片注意事项o 切片透明后封藏前材料上要保持二甲苯不挥发，如已干，
12、切片透明后封藏前材料上要保持二甲苯不挥发，如已干，则可再滴加少许二甲苯；则可再滴加少许二甲苯；o 封片时万一树胶量过少，可在盖玻片有空隙的地方，再封片时万一树胶量过少，可在盖玻片有空隙的地方，再滴注少量树胶使其慢慢布满盖玻片。滴注少量树胶使其慢慢布满盖玻片。四、实验结果四、实验结果o一张符合要求的切片应该是：平整、透明、染色足够，颜色鲜艳一张符合要求的切片应该是：平整、透明、染色足够，颜色鲜艳且分明、封片时没有气泡、树胶不外溢、镜检时细胞结构清晰。且分明、封片时没有气泡、树胶不外溢、镜检时细胞结构清晰。o苏木精苏木精-伊红（简称伊红（简称 HE HE）染色中：苏木精使细胞核显深紫）染色中：苏木
13、精使细胞核显深紫色，伊红使细胞质显粉红色；色，伊红使细胞质显粉红色；o番红番红-固绿染色中：番红可将木质化细胞壁红色，角质化细胞固绿染色中：番红可将木质化细胞壁红色，角质化细胞壁粉红色，栓化细胞壁黄褐色，染色体、核仁、中心体染红色；壁粉红色，栓化细胞壁黄褐色，染色体、核仁、中心体染红色；固绿将纤维素细胞壁染成绿色，细胞质染成淡绿色。固绿将纤维素细胞壁染成绿色，细胞质染成淡绿色。五、作业五、作业o 实验完毕，每人交玻片两张，用铅笔在载玻实验完毕，每人交玻片两张，用铅笔在载玻片上写上材料名称及自己的姓名和日期；片上写上材料名称及自己的姓名和日期；o 实验报告（姓名和日期）。实验报告（姓名和日期）。
