1、复习题姓名：_一、单选题1下列一般不作为基因工程中运载体上的标记基因的是A抗性基因B发光基因C产物具有颜色反应的基因D贮藏蛋白的基因2在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是A用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸B用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体C将重组DNA分子导入烟草原生质体D用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞3基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶的识别序列和切点是GGATCC，限制酶的识别序列和切点是GATC。根据下图示判断下列操作正确的是A目的基因和质粒均用限制酶切割B目的基因和质粒均用限制酶切割C质粒用
2、限制酶切割，目的基因用限制酶切割D质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割4在基因工程中，科学家所用的“剪刀”、“针线”和“载体”分别是指（ ）A大肠杆菌病毒、质粒、DNA连接酶B噬菌体、质粒、DNA连接酶C限制酶、RNA连接酶、质粒D限制酶、DNA连接酶、质粒5荧光原位杂交可用荧光标记的特异DNA片段为探针，与染色体上对应的DNA片段结合，从而将特定的基因在染色体上定位，如下图所示。下列相关说法错误的是ADNA酶随机切开的是核苷酸之间的磷酸二酯键B合成标记的DNA探针所需原料是脱氧核糖核苷酸C荧光探针与染色体共同煮沸，DNA双链中氢键断裂，形成单链D图中两条姐妹染色单体最多可以形成2条荧光标记
3、的DNA片段6研究发现“渐冻症”的病因之一是由于运动神经元中D丝氨酸分解酶基因发生变异，导致D丝氨酸分解酶功能降低，进而使激活神经的D丝氨酸增加并蓄积，破坏了运动神经元的正常功能，引起肌肉萎缩，以下设想不能起到治疗作用的是()A植入正常的神经干细胞B将变异的D丝氨酸分解酶基因替换C注射能够提高D丝氨酸分解酶活性的药物D注射药物提高肌肉细胞上化学递质受体的灵敏性7下列有关利用生物技术培育作物新品种的相关操作叙述正确的是A用限制酶识别目的基因并进行连接B用光学显微镜观察目的基因是否导入C培养外植体的培养基需进行高压蒸汽灭菌D利用平板划线法在培养基上接种外植体8为达到相应目的，必须通过分子检测的是（
4、 ）A携带链霉素抗性基因受体菌的筛选B产生抗甲胎蛋白抗体的杂交瘤细胞的筛选C转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定D21三体综合征的诊断9为增强玉米抗旱性，研究者构建含有某微生物抗旱基因E的重组质粒，用农杆菌转化法转入玉米幼胚组织细胞中，获得抗旱的转基因玉米。下列相关叙述不正确的是A提取该微生物mRNA反转录为cDNA，通过PCR可获得大量目的基因B将重组质粒置于经CaCl2处理的农杆菌悬液中，可以获得转化的农杆菌C用农杆菌转化法将E基因转入玉米幼胚组织细胞需要严格进行无菌操作D用E蛋白的抗体进行抗原-抗体杂交，可在个体水平检测转基因玉米的抗旱性状10科学家将编辑基因的分子工具构建到靶向侵染心肌细胞的
5、病毒中，通过尾部静脉注射到成年小鼠体内，成功编辑线粒体DNA。该研究让耳聋、癫痫、肌无力等线粒体遗传病迎来治愈的希望。下列说法错误的是（ ）A线粒体基因的遗传遵循分离定律和自由组合定律B线粒体DNA的突变可能会导致能量代谢障碍C侵染心肌细胞的病毒在该研究中作为载体起作用D该项研究中雌性小鼠后代心脏功能仍然未能改善11下列黏性末端属于同一种限制酶切割而成的是 ABCD12甲、乙是严重危害某二倍体观赏植物的病害。研究者先分别获得抗甲、乙的转基因植株，再将二者杂交后得到F1，结合单倍体育种技术，培育出同时抗甲、乙的植物新品种，以下对相关操作及结果的叙述，错误的是A将含有目的基因和标记基因的载体导入受
6、体细胞B通过接种病原体对转基因的植株进行抗病性鉴定C调整培养基中植物激素比例获得F1花粉再生植株D经花粉离体培养获得的若干再生植株均为二倍体13用不同的化学试剂可以鉴某些物质，医学上常用一些化学试剂进行疾病的辅助诊断。下列关于一些试剂诊断疾病的分析中不正确的是选质化学试剂诊断疾病检测原理检测对象A基因探针白血病DNA分子杂交癌基因B斐林试剂糖尿病与斐林试剂显色反应尿液葡萄糖C双缩脲试剂肾炎与双缩脲试剂显色反应尿液蛋白质D单克隆抗体乙型肝炎抗体与抗原基因特异性结合血液乙肝病毒AABBCCDD14生物学研究中，下列做法不可行的是A用红、绿荧光染料标记膜蛋白研究细胞膜的流动性B以叶绿体作为标志物观察
7、胞质环流（细胞质流动）C通过标记基因筛选导入目的基因的受体细胞D用3H标记的胸腺嘧啶研究基因的表达过程15微生物常被用于基因工程中。下列相关叙述正确的是（ ）A从耐热的细菌中获取PCR所需的DNA连接酶B大肠杆菌、酵母菌等是基因工程常用的载体C作为载体的DNA分子需具有合成抗生素的基因D常利用土壤农杆菌将目的基因导入植物细胞16下列结构或物质中，组成单位相同的一项是（）A胰岛素、纤维素B质粒、基因C生长激素、生长素D糖原、抗体17下列过程中不需要采用植物组织培养技术的一项是（）A植物体细胞杂交得到番茄马铃薯杂种植株B切取草莓幼苗的茎尖，获得脱毒的草莓苗C秋水仙素处理萌发的种子得到多倍体植株D培
8、育转基因植物得到抗棉铃虫的棉花植株18科研人员利用胚胎干细胞培育转基因羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如图，下列说法不正确的是A过程取供体囊胚的内细胞团培养胚胎干细胞，原理是细胞增殖B过程利用的人凝血因子IX基因可以从人的基因组文库中获取C过程中通过选择培养基，可筛选出含有目的基因的胚胎干细胞D凝血因子IX只在乳腺细胞中表达，原因是其他细胞不含有该基因19玉米是我国的主要农作物之一，雌雄同株异花，是一种非常理想的遗传学实验材料。下面叙述中正确的是A在同一穗玉米上结出200个子粒，它们的基因型应该是完全相同的B玉米作为遗传学实验材料的优势在于后代子粒多，有利于统计
9、分析C受雨天影响受粉不足时，通过生长素处理培育无子果实可减少损失D利用基因工程将植酸酶转入玉米细胞内，可获得转基因植酸酶玉米20下列相关叙述正确的是APCR技术的原理是碱基互补配对原则B受精作用过程中发生了基因自由组合C等位基因的本质区别在于遗传信息不同D噬菌体侵染细菌的实验证明DNA是主要的遗传物质21下列相关叙述正确的是A单克隆抗体具有无限增殖、灵敏度高等特点B用刚果红染色法鉴定尿素分解菌的分解能力C用CaCl2溶液处理大肠杆菌使其处于感受态D采用基因工程技术培育出白菜甘蓝新品种22下列关于各种与基因工程有关酶的叙述，不正确的是ADNA连接酶只能连接黏性末端BPCR反应中的酶需要在PH稳定
10、的缓冲液中发挥作用C目的基因的运载体上至少有一个限制性核酸内切酶的切割位点D逆转录酶以脱氧核糖核苷酸为原料，以RNA为模板合成互补DNA23如图所示，两个核酸片段在适宜条件下，经过X酶的催化作用，发生下列变化，则X酶是 ADNA连接酶BRNA聚合酶CDNA聚合酶D限制性核酸内切酶24下列关于蛋白质工程的叙述，不正确的是A蛋白质工程是对蛋白质分子的直接改造B基因工程是蛋白质工程的关键技术C蛋白质工程获取的是自然界不存在的蛋白质D实施蛋白质工程的前提条件是了解蛋白质结构和功能的关系25下列关于限制性核酸内切酶的叙述错误的是A能在特定的位点切割DNA分子B能任意切割DNA，从而产生大量的DNA片段C
11、每一种限制性核酸内切酶只能识别特定的核苷酸序列D同一种酶切割不同的DNA分子可产生互补配对的黏性末端26下列关于核酸分子杂交和抗原抗体杂交的叙述，正确的是（ ）A核酸分子杂交是指两条脱氧核苷酸链的杂交B抗原抗体杂交的原理为碱基互补配对原则C核酸分子杂交可检测目的基因的存在和转录D抗原抗体杂交常以目的基因产物作抗体27科学家为提高玉米中赖氨酸含量，计划将天冬氨酸激酶的第352位的苏氨酸变为异亮氨酸，将二氢吡啶二羧酸合成酶中104位的氨基酸由天冬氨酸变为异亮氨酸。为此，操作正确的是A直接改造上述两种蛋白质的空间结构B对指导上述两种酶蛋白合成的mRNA进行改造C利用诱变育种技术促使上述两种酶蛋白的基
12、因突变D利用基因工程技术，对控制上述两种酶蛋白的基因进行改造28下图为转基因抗冻番茄培育过程的示意图。（其中ampr为抗氨苄青霉素基因）下列叙述正确的是 A可同时选用限制酶PstI、Sma I对含目的基因的DNA进行切割B过程中，可直接将过程得到的产物注入受体细胞C过程需要用到纤维素酶和果胶酶，以便获得并培养活的原生质体D过程中，若利用探针在试管苗细胞内检测到目的基因，则转基因成功29基因工程是在DNA分子水平上进行设计操作的，在基因工程操作的基本步骤中，一定不进行碱基互补配对的是A利用PCR技术扩增目的基因B目的基因与运载体的黏性末端结合C抗原-抗体杂交检测目的基因表达DDNA探针检测受体细
13、胞的目的基因30SPL蛋白是植物中广泛存在的一类调控基因转录的分子。不同植物的SPL蛋白结构不同，但均有一个大约由80个氨基酸构成的结构相同的功能区，可识别并结合到某些基因的特定区域。SPL基因最初是从植物花序cDNA文库中得到的。下列相关叙述正确的是ASPL是80个氨基酸构成的蛋白质BSPL基因能在花序细胞中表达CSPL可催化特定基因的翻译过程DSPL在不同绿色植物中功能差异较大31下列生物学过程中体现了细胞全能性的是（ ）A转基因小麦的种子发育成小麦幼苗B胚胎干细胞经诱导分化成神经细胞C杂交瘤细胞在培养基中无限增殖D经体细胞杂交获得白菜-甘蓝杂种植株32用人的生长激素基因制成DNA探针检测
14、下列物质，能形成杂交分子的是 人脑垂体细胞的DNA 人下丘脑细胞的mRNA人脑垂体细胞的mRNA 人下丘脑细胞的DNAABCD33下列各项结果中通过基因工程实现的是A白菜和甘蓝细胞融合形成的杂种细胞中同时含有白菜和甘蓝基因B将人生长激素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得产生人生长激素的菌株C把雄性动物体细胞核移植到雌性动物去核卵母细胞中培养出新个体DR型肺炎双球菌与S型肺炎双球菌的DNA混合培养后获得S型菌株34土壤农杆菌含有一个大型的Ti质粒，在侵染植物细胞的过程中，其中的T-DNA片段转入植物的基因组。若想用基因工程手段获取抗旱植株，以下分析不合理的是A若用Ti质粒作为抗旱基因的载体，目的
15、基因的插入位置应该在T-DNA片段内，且要保证复制起始点和用于转移T-DNA的基因片段不被破坏B将重组Ti质粒导入土壤农杆菌中时，可以用钙离子处理细菌C用含有重组Ti质粒的土壤农杆菌感染植物细胞后，可通过植物组织培养技术得到具有抗旱基因的植物D若能在植物细胞中检测到抗旱基因，则说明该基因工程项目获得成功35下列关于“基因探针”的叙述，正确的是A基因探针既可以检测某一特定的DNA，也可检测RNAB基因探针是一小段具有随机脱氧核苷酸序列的单链DNAC基因探针既可以检测核酸分子，又可以检测特定的蛋白质D基因探针以其双链形式发挥作用，其放射性和荧光标记便于检测36下列关于基因工程的叙述，错误的是A目的
16、基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物B载体上的抗性基因有利于促进目的基因的表达C遗传机理的揭示和生物技术的进步催生了基因工程D生物共用一套遗传密码，人胰岛素基因能在大肠杆菌中表达出人胰岛素37下图是基因工程主要技术环节的一个基本步骤，这一步需用到的工具是 ADNA连接酶和解旋酶BDNA聚合酶和RNA聚合酶CDNA聚合酶和限制性核酸内切酶D限制性核酸内切酶和DNA连接酶38下列关于基因工程应用的叙述，正确的是ADNA分子杂交技术可用于基因诊断B一种基因探针能检测水体中的各种病毒C真核基因不能用来进行原核生物的遗传改良D基因治疗就是把有缺陷的基因诱变成正常基因39美国农业部指导农民在种植转基因农
17、作物时，要求农民在转基因农作物的行间种植一些普通的非转基因农作物，供害虫取食，这种做法的主要目的是A保护物种多样性B保护害虫的天敌C减缓害虫抗性基因频率增加的速率D维持农田生态系统中的能量流动40下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。不正确的是：A利用两种不同限制酶处理，能避免抗虫基因的DNA片段自身环化B可用氯化钙处理农杆菌，有助于促进重组Ti质粒转化到农杆菌细胞中C用农杆菌侵染植物细胞，重组Ti质粒整合到植物细胞的染色体上D用植物组织培养技术培养，具有抗虫性状的植株产生了可遗传变异二、实验题41研究者取野生型小鼠（I+I-）的胚胎干细胞转入胚胎干细胞，用含新霉素抗性基因替换I+基因的外显
18、子2片段使其变为失去功能的I-基因，再将突变的胚胎干细胞移回野生型小鼠胚胎，培育出带突变基因（I-）的杂合子小鼠。用此杂合体小鼠与野生型小鼠进行杂交实验，并通过DNA分子杂交技术检测小鼠的基因型，结果如图b。（1）检测小鼠的基因型，需根据_序列设计DNA分子探针。根据杂交实验结果推测，I基因的功能是与_有关。（2）分析系谱图_（能/不能）判断I+、I-基因的显、隐性，理由是_。（3）只有突变基因来自_（父本/母本）时，杂合子小鼠才表现出发育迟缓，由此推测来自_的I基因在体细胞中不表达。（4）为验证以上推测，提取小鼠体细胞的总RNA，检测Actin基因（编码细胞骨架蛋白）和新霉素基因的RNA，请
19、将支持推测的实验结果填入下表i、ii、iii处。（能检测到用“+”表示，检测不到用“-”表示）野生型小鼠突变基因来自父本的杂合子小鼠突变基因来自母本的杂合子小鼠Actin基因的RNA+新霉素抗性基因的RNAi_ii_iii_（5）若人类的某种遗传病以此种方式遗传，用常规的基因诊断能否确定胎儿是否发病？如果能请说明理由；如果不能，请提出一种确诊胎儿是否发病的检测方案。_ 。42近年来研究发现，H5亚型禽流感能突破种间屏障感染人类。因此，在流感疫苗开发中考虑对人流感和禽流感主要亚型进行共预防具有重要意义。科研人员针对人流感病毒H3以及禽流感病毒H5进行了相关研究。（1）H蛋白是构成流感病毒的主要成
20、分，可以作为_制成疫苗，接种到小鼠体内，使小鼠产生_免疫。（2）研究人员利用p质粒构建p-H5/H3共表达的重组质粒（如下图）。设计思路是：获得H5基因和H3基因，先将H5基因整合到p质粒（仅含有Nhe和Xho酶切位点）上，再将H3基因插入，获得重组质粒。为达到实验目的，需要在目的基因两端引入酶切位点，在H5基因两端需要引入_酶切位点。（3）为研究共表达重组质粒的免疫效果，研究人员在第0、21和35天给实验组小鼠注射一定浓度的重组质粒p-H5/H3，对小鼠进行免疫；对照组处理是_。分别测定实验组和对照组的抗体含量。随着免疫次数的增加，实验组小鼠体内针对H5和H3的抗体浓度迅速增加，说明p-H5
21、/H3免疫后诱导小鼠产生了针对H5和H3的_免疫。（4）研究人员分离了实验组小鼠的脾脏淋巴细胞，分别加入_进行特异性刺激，发现p-H5/H3免疫后T淋巴细胞增殖明显，且产生了大量的干扰素，说明免疫后诱导小鼠产生了_免疫。（5）科研人员研制的p-H5/H3 DNA疫苗与传统疫苗相比具有的优点是_（至少写出两点）。43铁硫簇是一种氧化还原蛋白，它参与电子传递、基因表达和调控等重要过程。嗜热杆菌铁硫簇中有三种关键蛋白SufB、SufC、SufD，为研究三种蛋白能否相互作用，科研人员做了下面的研究。（1）微生物培养过程中，若实验室保存的嗜热杆菌被大肠杆菌污染，可将菌种接种到LB细菌通用培养基上后，_，
22、将嗜热杆菌筛选出来。（2）提取嗜热杆菌基因组作为体外扩增的_，加入_种不同的引物，扩增出蛋白SufB、SufC、SufD的基因，作为目的基因。（3）为获得sufBC融合基因，需要选择图1中的_端，使其带上相同的酶切位点后，利用_获得sufBC融合基因。（4）图2中将构建好的重组质粒sufBC-PET28a导入受体细胞X。受体细胞最好选择_(酵母菌或大肠杆菌）。（5）筛选含有目的基因的受体细胞X扩大培养，并诱导其表达融合蛋白SufBC。将融合蛋白与固体基质相连，再加入SufD蛋白，混合摇匀，然后洗去未结合的SufD蛋白。最后将固体基质上的蛋白洗脱下来进行电泳，结果如图3所示，这说明_。三、非选择
23、题44下图1表示某细菌的抗除草剂基因的部分片段，其中a、b、c分别表示该基因片段中特定的碱基对。图2表示该细菌细胞内DNA自我复制及控制多肽合成的过程。请分析回答：（1）图2所示遗传信息的传递方向是 。在真核细胞内，核基因控制的该过程发生在同一场所的是 （选填序号）。过程的产物分子中只有一条单链是新合成的，因此这种合成方式被称为_ 。过程需要催化。完成时，一般在一条mRNA上会结合多个核糖体，其意义是 。（2）基因突变是由于 ，导致基因结构的改变。若图1中基因位点a的碱基对变为，位点b的碱基对变为，位点c的碱基对变为，则其中位点 的突变对生物性状表现无影响，其原因是_。（3）若将此抗除草剂基因
24、转入大豆根细胞中，欲检测转基因是否成功，应将转入目的基因的细胞培养在含 的全营养固体培养基中。抗除草剂基因能在大豆细胞中表达说明 。45藏红花素是藏红花中的主要活性成分，具有抗肿瘤、抗氧化、抗高血压、抗动脉粥样硬化和抗抑郁等多种药理作用。2019年7月，中科院天津生物所研究员利用大肠杆菌合成藏红花素方面取得进展。下图为藏红花素合成过程图，请回答有关问题：（1）图中靶DNA片段是从基因文库中获取，基因组文库与cDNA文库的主要区别是_。（2）在藏红花植株内获得靶DNA分子后用PCR技术扩增目标片段，基本原理是_，Taq酶催化 DNA 子链的延伸方向为 53，应选择与模板结合的引物是（填字母）_。
25、若向反应体系加入 a 个靶 DNA 分子，经 4 次循环获得目标 DNA 片段所占的比例_。（3）为保证目的基因在大肠杆菌中能够表达，构建好的重组质粒应含有以下_部分（请选择）。目的基因 引物 标记基因 启动子 终止子 终止密码子 起始密码子 复制原点（4）上述过程中，大肠杆菌成为生产藏红花素的细胞工厂。基因工程中用原核生物作为受体细胞的优点是_。（5）检测目的基因是否发挥功能的第一步是_，检测方法是分子杂交技术，若出现杂交带，则表明成功，具体操作过程为_。46科研人员用基因工程技术构建拟南芥突变体库，并研究光信号（远红光）控制拟南芥种子萌发时下胚轴生长的分子机制。（1）拟南芥突变体库的构建过
26、程如下。将插入了氨苄青霉素抗性基因的T-DNA与农杆菌在液体培养基中振荡培养，获得转化液。将转化液稀释后对野生型拟南芥进行转化，继续培养拟南芥植株并收获其种子，再将种子放入含有_的培养基中培养筛选出能正常萌发的种子，命名为F1代种子, F1代种子因插入了含有氨苄青霉素抗性基因的T-DNA导致DNA分子发生了_这一分子结构上的变化。下面是利用F1种子构建纯合突变体库的流程图。将每株F1植株所结种子（F2代种子）单株存放，用中的方法筛选F2代种子，表现为正常萌发和不能正常萌发比例约为_时，F1植株为单拷贝插入（只有一个位点插入T-DNA）的杂合转基因植株用同样的方法筛选出单株F2。植株所结种子（F
27、3代种子），若都能正常萌发，则F3植株为纯合转基因植株；F3自交得到F4代种子即为纯合突变体库。（2）将上述突变体库中的种子置于远红光条件下培养，挑选出拟南芥种子萌发时下胚轴明显变长的甲、乙、丙三个突变体植株。将甲、乙、丙分别与野生型杂交，其后代种子在远红光下培养，萌发时均表现为下胚轴长度与野生型无明显差异，说明3株突变均为_突变。将甲和乙杂交得到种子在远红光下培养，萌发时下胚轴长度与甲和乙两株相比均无明显差异。请在图画出甲、乙突变基因与其以及对应的染色体的关系_（甲的基因用A或a、乙的基因用B或b表示）。将甲和丙杂交得到种子在远红光下培养，萌发时表现为_则可推测甲和丙的突变基因为非等位基因。
28、（3）科研人员还获得了甲和丙的双突变体，并在远红光条件下培养，测定其种子萌发时下胚轴的长度，结果如下图。有人提出了下面两种种子萌发时基因调控下胚轴生长的示意图（A、a表示甲的相关基因；D、d表示丙的相关基因）。 为验证上述两种推测是否正确，进行了下列实验。已知A基因控制A蛋白的合成，D基因控制D蛋白的合成。研究发现远红光下，D蛋白进核后才能调控种子萌发时下胚轴的生长。将绿色荧光蛋白基因与D基因启动子连接，分别转入野生型和突变体甲，将其幼苗在黑暗处理4天，再在远红光处理30分钟，发现两种转基因植株细胞核中均出现绿色荧光且强度无明显差异。该实验结果说明_分别提取黑暗条件和远红光条件下野生型和突变型
29、甲的细胞质和细胞核蛋白，得到D蛋白的电泳结果如下图。上述结果表明，在远红光条件下，磷酸化D蛋白只在_拟南芥植株的_中大量积累，由此推测_（图1、图2）更为合理。47科技文阅读P53蛋白1979年，人们发现了p53蛋白，认为它是SV病毒的癌蛋白。随后，人们又发现野生型的p53蛋白并非癌蛋白，而是抑癌蛋白，这种认知的反转是因为编码P53的TP53基因容易发生突变，真正致癌的是突变型P53。P53是怎样发挥作用的？p53蛋白有很多与细胞凋亡或细胞周期调控过程有关的靶基因。p53蛋白的真正功能是一种转录因子，在细胞处于应激状态时可被诱导表达，通过与这些基因内部或上游的p53反应元件相结合，激活这些基因
30、的转录，最终使细胞停滞于G1期；并与复制因子A相互作用，参与DNA的复制与修复；如果修复失败，P53蛋白即启动程序性死亡（凋亡）过程诱导细胞自杀，阻止有癌变倾向的突变细胞的生成，从而防止细胞癌变。细胞是怎样调节P53蛋白的活性，使其能够准确发挥抑癌作用的？要研究某蛋白活性最常用的方法是找到与该蛋白发生相互作用的其它蛋白，而在众多p53蛋白的“把关人”蛋白中最重要就是MDM2蛋白。MDM2蛋白能够与p53蛋白紧密结合，通过多种方式（如促使P53降解）抑制其生物学活性；而后来发现MDM2基因居然是受p53蛋白调控的靶基因，结果就是p53蛋白诱导MDM2蛋白表达，然后MDM2蛋白促进p53蛋白降解，
31、两者之间形成了一个负反馈环路。得益于此环路，在非应激细胞中的p53蛋白的活性，一直维持在较低的基础水平；当细胞面临各种致瘤刺激信号时，某些物质（如抑癌因子ARF）与MDM2蛋白相结合或者MDM2蛋白的含量减少，从而“解放”了p53蛋白，抑制作用减弱，p53蛋白就会被活化，发挥抑癌作用。肿瘤细胞中P53蛋白结构异常，所以目前利用P53治疗癌症的思路之一是基因疗法，即将正常的P53基因导入癌症患者体内，使其复制表达，杀灭肿瘤细胞；另一个思路是重建P53蛋白的活性，如开发出一种小分子物质，它可以与突变的p53蛋白发生相互作用，促使该突变蛋白改变构象，恢复正常功能，但是这类药物只可以用于携带有p53突
32、变基因的患者。问题：（1）、结合文中内容，请说明突变的P53蛋白致癌的原因是什么？_（2）、结合基因工程的操作技术，尝试说明怎样利用P53蛋白进行基因治疗？_（3）结合文中内容，说明没有发生P53基因突变的癌症病人，应该怎样治疗？_48有些婴儿由于体内缺乏足够的乳糖酶，无法消化牛奶中的乳糖，导致喝奶后会产生一些不良反应，如腹泻等。科研人员利用体细胞克隆和转基因技术成功培育了含有乳糖分解酶基因的奶牛拉克斯牛，过程如下图所示。请据图回答问题：（1）培育过程包含三次细胞培养。培养细胞时，需在培养基中加入适量的_以补充合成培养基中缺乏的物质。培养所需的气体主要有_。此外，当出现接触抑制时要用_处理，然
33、后继续分瓶培养。（2）要获得乳糖分解酶基因，必须要用限制酶切割。在图中的、两个酶切位点，常常选用不同的限制酶进行酶切，这样做的优点是_。在用PCR技术对该基因扩增前，要设计_种引物，设计引物序列的主要依据是_。与细胞内DNA的复制相比，PCR过程中需要的酶是_。（3）过程、中，能证明动物细胞核具有全能性的过程是_。49苏云金杆菌（Bt）能产生具有杀虫能力的毒蛋白如图是转Bt毒蛋白基因植物的培育过程示意图（amp为抗氨苄青霉素基因），表示过程请据图作答：（1）由Hind酶切后，得到的DNA片段的末端碱基序列是_（2）将图中所示的DNA用Hind、BamH完全酶切后，产生_种DNA片段，过程可获得
34、_种重组DNA如果只用BamH酶切，目的基因与质粒连接后可获得_种重组DNA（3）该过程中Bt毒蛋白基因插入Ti质粒后，不应影响质粒的_A复制 B转录 C碱基对的数量D抗性基因的表达（4）用农杆菌的Ti质粒作运载体，目的是_筛选含重组DNA的农杆菌，培养基中应添加_（5）生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是_50细胞内具有多种miRNA对基因表达有重要的调节作用，研究人员利用基因编辑技术建立miRNA-301a（某种miRNA）基因敲除的小鼠模型，用于研究miRNA-301a的调节功能。请回答相关问题：（1）下图为miRNA形成和发挥作用的过程简图，据图可知miRNA基因通
35、过_形成前体miRNA，然后经过_过程形成miRNA，miRNA通过_调控翻译过程。（2）构建miRNA基因敲除的小鼠。其作用机制如下图所示。注：gRNA与Cas9蛋白结合后可以切割DNA取miRNA基因：根据miRNA基因序列设计并合成_，然后通过_技术扩增得到miRNA基因。同理构建gRNA的模板DNA。构建基因表达载体：利用_酶构建如下图所示的基因表达载体。通过体外转录获得miRNA-gRNA，再将miRNA-gRNA与Cas9混合后采用显微注射技术注入小鼠_中。（3）经上述操作获得的8只小鼠称为F0代。经过限制酶剪切后电泳检测小鼠miRNA基因敲除情况如下图所示。F0代小鼠检测其中5号
36、为野生型，M为标准物）F0代中_号为基因敲除小鼠，经过基因测序后选择_与敲除碱基对数目最多的4号小鼠杂交，产生F1代小鼠。用限制酶剪切后电泳检测F1代小鼠如图1所示。从F1中选出4号和5号个体杂交产生F2代小鼠，然后用同种方法检测F2代小鼠结果如上图2所示，最终确定F2代中_号小鼠为miRNA基因敲除纯合子小鼠。试卷第21页，总21页本卷由系统自动生成，请仔细校对后使用，答案仅供参考。参考答案1D2A3C4D5D6D7C8B9D10A11D12D13D14D15D16B17C18D19B20C21C22A23A24A25B26C27D28A29C30B31D32C33B34D35A36B37D
37、38A39C40C41I基因外显子2和新霉素抗性基因 个体发育（发育速度与体型大小） 不能 杂合子小鼠既有体型正常的，又有发育迟缓、体型瘦弱的，无法判断性状的显、隐性，所以也无法判断I+、I-基因的显、隐性 父本 母本 一、 +、 一 不能， 检测胎儿细胞的RNA或蛋白质（合理即可） 42抗原 特异性 Nhe、 Cla和Xho 将小鼠分三组，在第0、21和35天分别改为注射等量相同浓度的p质粒、p-H5、p-H3进行免疫 体液 H5流感病毒或H3流感病毒 细胞 能实现两种病毒共预防；不具有“减毒”疫苗的危险性（或“安全性更好”）；生产成本低；稳定性好、便于保存 43高温培养 模板 6 b、c
38、限制酶和DNA连接酶 大肠杆菌 SufBC融合蛋白和SufD蛋白有相互作用（这一作用较弱） 44(1) 半保留复制RNA聚合酶 提高翻译的效率(短时间内合成大量蛋白质)(2)DNA碱基序列改变(DNA碱基对的增加、缺失和替换) c 一种氨基酸可以有多个密码子(一种氨基酸不止一个密码子)(3)除草剂 生物共用一套遗传密码45基因组文库有启动子、内含子（或cDNA文库中没有启动子、内含子） DNA 复制 引物 B、引物 E 1/4 繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少 检测目的基因是否转录出 mRNA 从转基因生物中提取出 mRNA，用标记的目的基因做探针与 mRNA 杂交 46氨苄青霉素 碱基对
39、的增加 3：1 隐性 下胚轴长度与野生型无明显差别 A蛋白不参与远红光条件下D蛋白向核内的转移 野生型 细胞核 图1 47突变的P53蛋白空间结构改变，不能与靶基因相应结构结合，导致无法激活基因转录，从而无法合成调控蛋白；而这些靶基因本来是调控细胞凋亡或细胞周期过程，突变的P53使得细胞脱离正常周期无限增殖；或者无法修复损伤的DNA，不能使具有癌变倾向的突变细胞凋亡，即会导致癌症的发生。 首先获取P53蛋白基因，（如PCR方法，或逆转录法构建cDNA文库），找到适宜的载体，如改造好的腺病毒；构建基因表达载体，形成重组病毒，并导入离体培养的人体细胞中，将确认表达P53蛋白的细胞输回人体，监测治疗
40、效果。 没有发生P53基因突变的病人可以通过开发破坏MDM2p53负反馈环路的药物，如药物可减少MDM2蛋白(P53的调节蛋白）的含量，从而释放P53蛋白，使其活性恢复，发挥治疗作用。 48动物血清 O2和CO2 胰蛋白酶 避免了目的基因和载体酶切后产生的黏性末端发生任意连接 2 乳糖分解酶基因两端的部分核苷酸序列 热稳定DNA聚合酶 49 4 2 2 ABD 利用农杆菌Ti质粒的TDNA，将Bt毒蛋白基因整合到植物细胞染色体DNA上 氨苄青霉素 降低害虫种群中抗Bt毒蛋白基因的基因频率的增长速率 50转录 剪切、酶切、解旋（剪切、酶切过程必须有） 与mRNA结合阻止核糖体移动 引物 PCR 限制酶和DNA连接酶 受精卵 1234678号 野生型（或5号） -1号和-5号 答案第3页，总3页
