1、微生物的实验室培养1.微生物的实验室培养1（2017江苏二模）下列有关菌种保藏的叙述中，错误的是（）A频繁使用的菌种，可用斜面培养基保藏在4的冰箱中B临时保藏菌种的培养基不需要定期更换C长期保藏的菌种，需要降低代谢和变异发生概率D长期保藏菌种时，可各取l mL灭菌甘油和培养菌液混合后保存在冷冻箱中2（2017南通模拟）某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理下列叙述正确的是（）A灭菌后的培养基要冷却到室温后才能倒平板B本研究适宜采用稀释涂布平板法进行接种C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D培养时要将培养皿倒置是防止空气中杂菌污染3（2019秋南京期中）下面不符合微生物培养基配制原则的是
2、（）A配制培养基时，要注意各种营养物质的浓度和比例B任何培养基都不能没有有机物C培养基的PH要适宜D异养微生物的培养基至少要有一种有机物4（2020江苏二模）“渥堆”是普洱茶生产过程中的一道特殊工序，是形成普洱茶品质特征最关键的一步。在“渥堆”过程中，曲霉、青霉、酵母菌、细菌等微生物的活动使茶叶所含茶多酚等成分发生了一系列复杂的物理、化学变化，促使了普洱茶甘滑、醇厚和陈香等良好品质特征的形成。请回答下列问题：（1）牛肉膏蛋白胨培养基可用于“渥堆”茶样中细菌的分离，其中的牛肉膏、蛋白胨可为细菌生长主要提供 。配好的培养基常用 法灭菌。接种培养后可根据 颜色、形态、大小等特征及菌体革兰染色情况、细
3、胞形态特征等进行初步鉴定。（2）图1为“渥堆”茶样分离出的某种微生物亚显微结构示意图，可根据图中 （填序号）结构判断其肯定不是细菌。（3）茶多酚中的儿茶素（C）有一定的抗菌作用，但作用较弱。研究人员用稀土离子 Yb3+对儿茶素（C）进行化学修饰，形成配合物Yb3+C，并探究其抗菌效果。将金黄色葡萄球菌制成菌悬液，分别加入等量的C、Yb3+和一定浓度的Yb3+C，测定24h内金黄色葡萄球菌存活数量变化（用A600值表示，数值越大，表示细菌数量越多），结果如图2所示。由图可以看出， 能最有效缩短灭菌时间。研究人员利用透射电镜观察了各组金黄色葡萄球菌细胞内的超微结构，结果显示：（a）未加抗菌剂：细菌
4、菌体较小，其细胞质分布均匀；（b）C处理：细胞壁和细胞膜等结构不光滑，略显粗糙；（c）Yb3+处理：细胞质出现较明显的固缩及空泡化现象；（d）Yb3+C处理：细胞壁及细胞膜等结构发生破裂，细胞质出现了严重的固缩及空泡化现象。由此可见，儿茶素（C）作用的主要位点是 ，推测Yb3+C具有更强抗菌作用的机理是 。5（2019扬州期末）微生物絮凝剂不仅具有絮凝沉降废水的作用，同时具有自身降解的能力，是一类无毒、安全、环保、不造成二次污染的絮凝剂。科研人员通过生物技术筛选稳定、高效的微生物絮凝剂产生菌。请回答问题：（1）将取自玉米地的土壤，加入 制成菌液，将菌液接种到培养基中进行富集培养，再通过 法接种
5、到固体培养基，数天后，挑选出生长较好、表面光滑带黏性的单个菌落，分别接种到液体培养基中继续培养。（2）测定初选菌落对高岭土悬液的絮凝效果，挑选出 的菌株，通过测定该菌株基因序列，与产絮凝剂菌株系统发育进化树进行比对，确定为酱油曲霉。（3）为进一步确定起主要絮凝作用的是菌体细胞还是菌体释放到发酵上清液中的物质，分别测定发酵液中不同成分对高岭土悬液的絮凝效果，结果如图1。其中D组的作用是排除 。实验结果表明 。（4）为研究微生物絮凝剂对生活污水中有机物去除效果的影响因素（有机物污染程度用生化需氧量COD表示），科研人员又进行了如下实验。i向生活污水中加入4mL微生物絮凝剂，均分为多组，pH值分别调
6、到19，将温度设定为该菌最适生活温度30，培养后取样测定COD去除率。结果见图2。ii调节生活污水pH值为7，均分为多组，分别加入不同剂量的微生物絮凝剂，将温度设定为30，培养后取样测定COD去除率。结果见图3。 由结果可知，COD去除效果最佳的条件是 。上述实验结论不严谨，请从实验设计中寻找原因 。6（2019秋苏州期末）某养鸡场出现大量疑似沙门氏菌（SM）病，利用氨苄西林、强力霉素等常用抗生素治疗后，鸡的死亡率没有明显降低。为此，研究人员开展了下列实验。请分析回答：（1）过程中，须将接种环进行 处理后，从病死鸡的肝脏、小肠、盲肠等处采集内容物，接种到肉汤培养液培养24h。（2 ）过程中，将
7、蘸取的肉汤培养液利用 法接种、培养24h后，根据 的颜色、大小、形状等特征进行初步鉴定，挑选出基本符合沙门氏菌特征的单个菌落再接种培养备用。（3）研究人员取定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片；分别选用多种抗生素，按照不同抗生素治疗量的比例配制药液，浸泡等量小纸片，干燥后备用；取沙门氏菌，用生理盐水制备成悬液后，取适量菌悬液均匀涂布在平皿上；取不同抗生素处理的小纸片贴在平皿上，培养24h后，测量每种小纸片周围出现的透明圈直径（mm），如下表：药物名称林可霉素强力霉素 阿奇霉素恩诺沙星氨芐西林头孢克洛阿米卡星小纸片169722.51015.520小纸片21175.51971018小纸片3
8、88526.591921在治疗沙门氏菌病时，应首选 种药物。（4）为了探索治疗沙门氏菌病的新途径，研究人员选用健康的3日龄鸡，每组10只，尝试利用SDZ噬菌体进行试验，研究方案如下表：组别ABCD注射生理盐水（L）200100注射SDZ噬菌体（L）100100注射沙门氏菌液（L）100一段时间后检测各组鸡的存活数依次为10只、10只、4只、9只。请分析：设置B组的目的主要是为了说明 ，C组应注射 。本实验说明 ，且 可以避免因长期使用抗生素而产生 。2.纯化大肠杆菌1（2018春沭阳县期中）下列关于斜面接种目的描述中，错误的是（）A菌种转移B扩大培养菌种C保存纯净菌种D获得单个菌落2（2016
9、春兴庆区校级期末）下列不属于菌落特征的是（）A菌落的形状B有无荚膜C菌落的大小D隆起程度3（2020春苏州期末）大肠杆菌是寄生于人肠道内的一种细菌，其代谢产物能与染料伊红美蓝反应而使菌落呈紫黑色。测定水样是否符合饮用水的卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的总数。滤膜法的大致流程如图1所示。请回答下列问题： （1）据题意分析，图中培养基除了加入 为大肠杆菌生长繁殖提供营养物质外，还需添加 和伊红美蓝。（2）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵，本实验中所使用的培养皿等玻璃器皿的常用灭菌方法有 。（3）在无菌操作条件下，将10mL待测水样加入到90mL无菌水中，稀释后的菌液通过滤膜法测得伊红美蓝培
10、养基上的菌落数平均为124个，紫黑色菌落数平均为29个，推测1L待测水样中的大肠杆菌总数约为 个。（4）若饮用水中大肠杆菌超标，可引发多种感染。为了研究不同浓度的甲抗生素对A、B两种大肠杆菌的抑菌效果，做如下实验。取稀释后的A、B两种大肠杆菌菌液少许，分别与溶化并冷却至45左右的培养基混匀后倒平板各5个；待平板凝固后，在每个平板中央的培养基里各打一个直径为3mm的孔，并在孔中分别加入不同浓度的甲抗生素在适宜条件下培养一段时间，可在孔的周围观察到一圈清晰区，按图2所示测量清晰区的直径，数据如表。甲抗生素浓度/g/mL5.07.510.015.020.0清晰区直径/mmA大肠杆菌581317B大肠
11、杆菌5791419由表中数据可知，甲抗生素对A、B大肠杆菌的增长都有抑制作用，但 大肠杆菌对甲抗生素敏感性较强。判断依据是 。为了更准确地说明清晰区的出现是因为甲抗生素的作用，本实验还需增设一组在上述平板孔内加入 作为对照。本实验需将上述接种后的平板与 在相同条件下培养，以检查培养基灭菌是否合格以及培养过程中是否受到杂菌污染。3.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1（2018春沭阳县期中）采用涂布平板菌落计数法时，将待测土壤样品1g溶于水，经过反复稀释至108g/mL，取1mL稀释液涂布并选择培养分离，计数菌落平均数为50个，那么1g该土壤样品中含有的菌数为（）A5109B5108C5108D5
12、1092（2015江苏模拟）在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落下列有关叙述，出现科学性错误的是（）A甲同学出现这种结果的原因可能是由于土样不同，也可能是操作过程出了问题B可以将甲同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对照，以证明培养基是否受到污染C将其他同学用与甲同学一样的土壤进行实验，如果结果与甲同学一致，则可以证明甲 同学无误DB、C选项的实验思路都遵循了实验的对照原则3（2020广陵区校级模拟）MICP技术（微生物诱导碳酸钙沉积技术），通过向岩土中注入某种微生物以及胶结液（尿素和氯化钙溶液），利用该
13、微生物将尿素水解为铵离子和碳酸根离子，碳酸根离子与钙离子形成碳酸钙晶体，从而将岩土原位固化。某研究人员对该种微生物进行了分离并在最适生长条件（温度35，摇床转速200r/min）下测定了其生长曲线，结果如图。 （注：OD600为样品中蛋白质核酸的浓度，用此指标来代表细菌浓度）（1）不同微生物培养对pH、氧气、特殊应用物质的要求往往不同，培养巴氏芽孢杆菌的培养基的pH值往往 （“高于”“低于”或“等于”）培养霉菌的pH值。微生物接种的方法很多，最常用的并且可以用来分离纯化计数的是 。此研究中巴氏芽孢杆菌能合成脲酶，从而将尿素分解。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 指示剂，培养某种细菌后，如果PH
14、升高，指示剂将变红，可以初步鉴定该细菌能够分解尿素。（2）某研究人员筛选到能高效降解尿素的细菌培养基成分如下表所示，此培养基能否用于植物组织培养 ，理由是 。KH2PO4 Na2HPO4 MgSO47H2O 葡萄糖 尿素琼脂 1.4g2.1g0.2g10g1g15g将上述物质溶解后，用自来水定容到1000mL将上述物质溶解后，用自来水定容到1000mL（3）研究初期，需将土样置于选择培养液中培养24h，目的是 。此研究过程中的摇床转速为200r/min，推测培养巴氏芽孢杆菌过程中需要使用摇床的原因 。（4）通常在培养末期细菌的数量会显著减少，但实验人员实际测得的细菌浓度（OD600）下降较慢，
15、最可能的原因是 。4（2020春扬州期末）幽门螺杆菌是栖息在胃黏膜的螺旋形的革兰氏阴性菌（革兰氏阴性菌对万古霉素、两性霉素B等抗生素不敏感），能产生有较强活性的脲酶，该酶能催化热稳定性低的尿素分解为氨和二氧化碳。因为胃液的强酸性，早期人们都认为没有细菌能在极酸的胃液中生存，1983年，澳大利亚科学家马歇尔“以身试菌”，提出幽门螺杆菌是胃炎、十二指肠溃疡或胃溃疡的主要致病菌，这一发现使这些疾病的诊断和根治迎来了曙光。请根据上述资料回答下列问题：（1）如图1中最可能代表幽门螺杆菌的结构模式图的是 （填写字母）。（2）提取胃炎患者的 稀释液，分离得到幽门螺杆菌并统计其数量，分离时可将稀释液样品接种在
16、以 为唯一氮源的固体培养基上。欲得到预期的实验结果，接种过程用到的实验器材（见图2）有 （填写字母）。（3）为研究培养幽门螺杆菌所需的气体条件，某研究小组利用半固体培养基（琼脂含量3.5g/L）对幽门螺杆菌进行培养。图3代表微生物可能出现的四种生长状态。若培养微生物是醇母菌，则 号试管代表其生长状态，若号试管代表幽门螺杆菌的生长状态，则培养幽门螺杆菌的气体最适条件应为下列选项中的 。A纯氧B90%N2、10%CO2C无菌空气D5%O2、85%N2、10%CO2（4）将上述实验分离纯化得到的幽门螺杆菌进行扩大培养，采用布氏肉汤基础培养液进行培养，培养液中需加入混合抗生素（包括万古霉素、两性霉素B
17、等），其目的是 。（5）目前13C呼气检测是诊断幽门螺杆菌感染的方法之一。其做法是：让病人口服一定量的13C尿素，约30分钟后检测待检者呼出的气体中是否含有13CO213C尿素呼吸检测的原理是患者消化道细胞内 （填“有”或“无”）脲酶活性，若呼出的气体中含有13CO2，则为 的代谢产物。（6）幽门螺杆菌导致的胃溃疡等疾病可通过同时服用多种抗生素根除。研究小组将浸有相同浓度不同种类的抗生素圆纸片置于幽门螺杆菌培养基表面，37培养4周，实验结果如图4所示。其中圆纸片A、B分别浸过抗生素A和抗生素B，圆纸片C浸过抗生素A、B的混合物。实验中圆纸片D用作实验对照，实验表明 。5（2020春连云港期末）
18、巴氏芽孢杆菌是一类具有较高脲酶活性、能够分解尿素的细菌，广泛分布在土壤、堆肥及污水中。研究人员拟从土壤样品中分离该类细菌，如图1所示为操作流程，表示操作步骤。回答下列问题：（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的 ，及时对培养基分装，并进行 灭菌。（2）步骤富集培养所使用的培养基按用途来分应为 培养基，步骤的主要目的是 。（3）在步骤的培养基中加入 试剂，根据培养基颜色变化来鉴定是否为尿素分解菌。（4）若用该方法培养设置了3个培养皿，菌落数分别为166个、160个、163个，则可以推测富集培养后的菌液中每毫升含细菌数为 个，运用这种方法统计的结果往往较实
19、际值 。（5）纯化菌种时为了得到单一菌落，常采用的接种方法有平板划线法和 。如图2为平板划线法的部分操作步骤，其中正确的是 （填选项）。A步骤中倒入培养基后立即盖上培养皿盖B步骤操作时不需要在酒精灯火焰旁进行C步骤中接种环只需第一次划线前灼烧处理D将接种后的图4平板放入培养箱中培养时无需倒置4.分解纤维素的菌1（2017春秀峰区校级期中）下列关于纤维素分解菌分离实验的说法不正确的是（）A通常采用刚果红染色法筛选纤维素分解菌B从土壤中分离含量较多的微生物时，选择培养可以省略C该实验用到选择和鉴别培养基D在用刚果红染色法中，若将微生物培养在事先加入刚果红的培养基上，出现透明圈的菌落即所需菌种2（2
20、019江苏）下列关于产纤维素酶菌分离及运用的叙述，不合理的是（）A筛选培养基中应含有大量的葡萄糖或蔗糖提供生长营养B可从富含腐殖质的林下土壤中筛选产纤维素酶菌C在分离平板上长出的菌落需进一步确定其产纤维素酶的能力D用产纤维素酶菌发酵处理农作物秸秆可提高其饲用价值3（2018亭湖区校级模拟）（多选）刚果红染色时，加入刚果红应在（）A制备培养基时B倒平板时C涂布时D长出菌落时4（2019春锡山区校级期末）用某种纤维素酶催化纤维素水解的实验来探究温度对酶活性的影响，得到如图所示的实验结果，回答下列问题：（1）纤维素酶能够催化纤维素水解成 ，该产物可与 试剂在加热时生成砖红色沉淀。（2）该实验中以 作
21、为因变量；纤维素酶的作用机理是 。（3）若在t1之前，乙组实验温度提高10，那么乙组酶催化反应的速率会 。（4）若在t2时向丙组反应体系中增加底物的量，其他条件保持不变，那么在t3时，丙组产物总量 ，原因是 。（5）若要进一步探究纤维素酶催化该反应的最适温度，请写出你的设计思路： 。 5（2020泰州模拟）某兴趣小组用从不同环境中采集的土壤等进行了“分解纤维素的微生物的分离”实验，实验过程为：土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落，实验结果见下表1： 表1不同土壤微生物对纤维素的分解组别123样品松针腐叶花盆土表层草地土菌料目的菌落类型细菌、真菌细菌
22、霉菌为主透明圈直径+（1）上述实验过程中“选择培养”的目的是 。（2）与30相比，37培养时霉菌类纤维素分解菌生长迅速，菌丝会 其他菌落，对后续菌种的分离造成困扰，因此采用30培养为佳。（3）兴趣小组在鉴别菌种时尝试了两种方案：A先培养微生物，再加入刚果红染色；B直接在加入刚果红的鉴别培养基上培养微生物。结果发现：A方案在漂洗多余刚果红的过程中，易出现菌落浮起被带走的现象，从而造成 ，故选方案B由于刚果红在高温下容易被分解，应在培养基灭菌 （填“前”或“后”）加入。（4）有小组成员根据表1结果中的 ，认为菌料中的目的菌分解纤维素的能力最强，其他成员对此观点提出异议。兴趣小组继续对三组样品进行透
23、明圈直径、菌落直径和酶活力的测定，实验结果如表2：表2不同H/C值纤维素分解菌酶活性的比较组别H（透明圈直径）（单位：cm）C（菌落直径）（单位：cm）H/C值酶活力（U/mL）12.060.484.31.721.680.305.62.432.620.416.42.9你认为将 作为判断纤维素分解菌分解能力大小的依据更合理，其大小与酶活力呈 相关。（5）兴趣小组欲对培养液中的纤维素分解菌进行计数，具体做法是：先在培养基上加入若干质量较轻的小球，然后在平板上滴加一定体积的培养液，盖上培养皿盖后左右摇晃。试分析这样做的目的是 。6（2018春海安县校级期中）进入冬季，部分城市出现严重雾霾，与秸秆野外
24、焚烧有一定关系。为破解秸秆处理瓶颈，微生物专家力图通过微生物降解技术使秸秆能尽快腐烂掉，增加土壤肥力。缓解环境污染。试回答：（1）专家研制的降解秸秆的催腐剂是十余种能分解纤维素的霉菌、细菌和酵母菌的组合。其中 在细胞结构上与其他两者不同。（2）纤维素酶是一种复合酶，其中的葡萄糖苷酶可以将纤维二糖分解为 。（3）微生物专家为从发黑的树干上分离出有分解纤维素能力的高产菌株，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见表）：酵母膏无机盐淀粉纤维素粉琼脂CR溶液水培养基甲+培养基乙+注：“+”表示有，“”表示无。CR（刚果红）能与培养基中纤维素形成红色复合物据表判断，培养基甲 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 ；培养基乙 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 。（4）如图中降解纤维素能力最强的菌株是，筛选时应选择D/d较大的菌株（降解圈直径D、菌落直径d），因为这一指标越大说明 。（5）在分离高产纤维素酶菌种的实验操作中，对获得纯化的纤维素酶高产菌单菌落影响最大的是（ ）A实验所用的孢子来源于多个菌株 B涂布前涂布器未在酒精灯火焰上灼烧灭菌C用已添加纤维素的蔗糖豆芽汁培养基作为选择培养基 D实验操作过程中未打开超净台的过滤风12
