1、实验五 细胞基因组DNA的制备及其浓度的测定细胞/细菌/酵母基因组DNA小量提取试剂盒 上海莱枫生物科技有限公司(LifeFeng)教室准备:1 每间教室各10份(共30份)Buffer CS 150lBuffer CL 300l蛋白酶K 5l无水乙醇 250lDNA吸附柱-C30 1只收集管 3只Buffer WAG 500lBuffer WB1 1000lTBS(pH7.4) 11mlTE(pH8.0) 50l0.3ml抽提缓冲液 2.5ml胰RNase(10mg/ml) 5l蛋白酶K(20mg/ml) 15lTrisCl平衡酚(pH8.0) 3ml平衡酚/氯仿(等体积混匀) 6ml无水乙
2、醇 7ml70乙醇 1.5mlddH2O 100500l20、100、1000ml加样枪*320、100、1000ml Tip枪头*2一次性手套*2胶头*2洗耳球*1镊子*1卷纸*1废液盆*1废物桶*1饭盒:15ml塑料离心管*510ml移液管*7大口径滴管*5滴管*31.5ml Eppendorf管*22 每间教室各1份(共2份)低温15ml离心机*1低温1.5ml离心机*137水浴锅(内有15ml离心管架*20孔)5070水浴锅(内有15ml离心管架*20孔)讲台上:饭盒(内含15ml塑料离心管、10ml移液管、大口径滴管、滴管、1.5ml Eppendorf管*若干备用)10、20、10
3、0、1000ml加样枪*410、20、100、1000ml Tip枪头*3ddH2O(与分装时用的为同一瓶)*1瓶TBSTE抽提缓冲液胰RNase(10mg/ml)蛋白酶K(20mg/ml)TrisCl平衡酚(pH8.0)平衡酚/氯仿(等体积混匀)无水乙醇70乙醇911室准备:第二周用1cm光径、500l/1000l石英比色杯*8ddH2O洗瓶*175酒精洗瓶*1紫外分光光度计*1ddH2O(与分装时用的为同一瓶)*1瓶废液盆*1卷纸*11.5ml Eppendorf管*35备注:周二(4.20) 基础医学班共10组,需HL60细胞11瓶周五(4.23) 硕士班共20组,需HL60细胞21瓶试
4、剂配制:1TBS(Tris缓冲盐溶液):NaCl 8gKCl 0.2g 溶于800ml ddH2O,用HCl调pH值至7.4,加ddH2O定容至1L,Tris碱 3g 分装后15磅20分钟高压灭菌,室温保存。2TE(pH8.0):10mM TrisCl(pH8.0);1mM EDTA(pH8.0)1M Tris(pH8.0) 10ml 0.5M EDTA(pH8.0) 2ml 加ddH2O至1L。3抽提缓冲液(不含胰RNA酶):10mM TrisCl(pH8.0);0.1M EDTA(pH8.0);0.5 SDS1M Tris(pH8.0) 1ml0.5M EDTA(pH8.0) 20ml 加
5、ddH2O至100ml。10 SDS 5ml41TAE:0.04M Tris-乙酸;0.001M EDTA50TAE 20mL,加水定容至1L51M Tris(pH8.0):121.1g Tris碱溶于800ml ddH2O中,加入浓HCl 42ml调节pH值至8.0,溶液冷至室温后方可最后调定pH值,加ddH2O定容至1L,分装后高压灭菌。60.5M EDTA(pH8.0):186.1g EDTA-2Na2H2O加入800ml ddH2O中,磁力搅拌器剧烈搅拌,用NaOH(约需20g)调节溶液的pH值至8.0,加ddH2O定容至1L,分装后高压灭菌。710 SDS:10g电泳级SDS溶于90ml ddH2O中,加热至68助溶,加入几滴浓HCl调节溶液的pH值至7.2,加ddH2O定容至100ml,备用。850TAE:242g Tris碱57.1ml冰乙酸 加ddH2O定容至1L。100ml 0.5M EDTA(pH8.0)