1、 （课前准备）第37讲 考点二 基因工程的基本操作理解基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞和目的基因及其表达产物的检测鉴定等步骤。【展示目标】【教学过程】1.据图回答问题。据图回答问题。(1)从图中可以看出，目的基因是从图中可以看出，目的基因是 ，使用的载体是，使用的载体是 ，将基因，将基因表达载体导入受体细胞的方法是表达载体导入受体细胞的方法是 。(2)请写出两种检测目的基因请写出两种检测目的基因是否表达的方法：是否表达的方法：。BtBt毒蛋白基因毒蛋白基因 TiTi质粒质粒 农杆菌转化法农杆菌转化法 抗原抗原抗体杂交法、用棉叶饲喂棉铃虫抗体
2、杂交法、用棉叶饲喂棉铃虫2.(2020高考江苏卷改编)如果已知一小段如果已知一小段DNA的序列，可采用的序列，可采用PCR的方法，简捷地分析出已知序列两侧的方法，简捷地分析出已知序列两侧的序列，具体流程如下图的序列，具体流程如下图(以以EcoR 酶切为例酶切为例)：请据图回答问题：请据图回答问题：(1)步骤步骤用的用的EcoR 是一种是一种_酶，它通过识别特定的酶，它通过识别特定的_切割特定位点。切割特定位点。(2)步骤步骤用的用的DNA连接酶催化相邻核苷酸之间的连接酶催化相邻核苷酸之间的3羟基与羟基与5磷酸间形成磷酸间形成_；PCR循环中，升温到循环中，升温到95 是为了获得是为了获得_；耐
3、高温的；耐高温的DNA聚合聚合酶的作用是催化酶的作用是催化_。(1)(1)限制性内切核酸限制性内切核酸(或限制或限制)核苷酸序列核苷酸序列(2)(2)磷酸二酯键磷酸二酯键DNADNA单链单链以以DNADNA为模板的为模板的DNADNA链的延伸链的延伸(3)若下表所列为已知的若下表所列为已知的DNA序列和设计的一些序列和设计的一些PCR引物，步骤引物，步骤选用选用的的PCR引物必须是引物必须是_(从引物从引物中选择，填编号中选择，填编号)。(4)对对PCR产物测序，经分析得到了片段产物测序，经分析得到了片段F的完整序列。下列的完整序列。下列DNA单链序列中单链序列中(虚线处省虚线处省略了部分核苷
4、酸序列略了部分核苷酸序列)，结果正确的是，结果正确的是_。A5AACTATGCGAGCCCTT3B5AATTCCATGCTGAATT3C5GCAATGCGTTCGGGAA3D5TTGATACGCCGAGTAC3(3)(3)(4)B(4)B任务二：长句填空1在培育有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是_。22017高考全国卷，T38(2)改编以mRNA为材料可以获得DNA，其原理是_32017高考江苏卷，T33(4)改编PCR扩增时，复性温度的设定是成败的关键。复性温度过高会破坏_的碱基配对。复性温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但_的引物需要设定更高的退火温度。答案：感染
5、植物，将目的基因转移到受体细胞中在逆转录酶的作用下，以mRNA为模板按照碱基互补配对的原则可以合成DNA引物与模板GC含量高4为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要用_进行检测目的基因是否已插入，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是_52017高考全国卷，T38(3)若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是(答出两点即可)_将培育的烟草幼苗栽培于含有一定盐的土壤中，观察该烟草植株的生长状态PCR技术目的基因无复制原点；目的基因无表达所需的启动子1春季是疱疹性咽峡炎流行的季节，这种常见病是由柯萨奇病毒引起的，除了检测患者体内的抗体，还可以通过RTP
6、CR技术进行明确诊断，该技术的基本流程如下图所示，下列叙述错误的是()A该技术要避免RNA酶和外源DNA的污染BPCR技术中三组不同的温度设置目的不同C该技术还可用于检测目的基因的表达水平D该技术中需用到的酶有逆转录酶、解旋酶、耐高温的DNA聚合酶等D2(不定项)(2021辽宁省适应性考试模考)菊花是一种双子叶植物，易感桃蚜。桃蚜不但直接影响植物生长，还是多种植物病毒的传播媒介。雪花莲凝集素基因GNA的表达产物能有效抑制桃蚜生长。某科研团队运用农杆菌转化法获得了转GNA基因菊花。下列有关叙述正确的是()A受体细胞可以选择菊花叶片细胞或桃蚜细胞B将目的基因GNA插入Ti质粒的TDNA上构建表达载
7、体C菊花外植体产生的酚类化合物能吸引农杆菌移向受体细胞D应用抗虫接种实验，检测转基因菊花对桃蚜的抗性及抗性的程度BCD3.(不定项)(2021山东泰安一模)B基因存在于水稻基因组中，仅在体细胞和精子中正常表达，在卵细胞中不转录。为研究B基因表达对卵细胞的影响，设计并完成了下图实验来获取能够在卵细胞中表达B基因的转基因植株。下列关于该实验的叙述，正确的是()AB基因在水稻卵细胞中不转录，可能是B基因的启动子在卵细胞中无法启动转录B可利用水稻体细胞和精子中的RNA构建cDNA文库，从中获得B基因中编码蛋白的序列C过程在培养基中应加入卡那霉素以检测TDNA是否整合到水稻细胞染色体DNA上D在鉴定和筛
8、选转基因植株时，可以检测加入荧光素的该植株卵细胞中是否发出荧光ABD【归纳总结】1PCR技术和DNA复制的比较2基因表达载体的构建3目的基因的检测与鉴定1(2020滕州市模拟)研究人员利用农杆菌侵染水稻叶片，经组培、筛选最终获得了一株水稻突变体。利用不同的限制酶处理突变体的总DNA、电泳；并与野生型的处理结果对比，得到如图所示放射性检测结果。(注：TDNA上没有所用限制酶的酶切位点)对该实验的分析错误的是()A检测结果时使用了放射性标记的TDNA片段作探针B该突变体产生的根本原因是TDNA插入到水稻核DNA中C不同酶切显示的杂交带位置不同，说明TDNA有不同的插入位置D若野生型也出现杂交带，则
9、实验样本可能被污染，检测结果不准确2(2020山东等级考)水稻胚乳中含直链淀粉和支链淀粉，直链淀粉所占比例越小糯性越强。科研人员将能表达出基因编辑系统的DNA序列转入水稻，实现了对直链淀粉合成酶基因(Wx基因)启动子序列的定点编辑，从而获得了3个突变品系。(1)将能表达出基因编辑系统的DNA序列插入Ti质粒构建重组载体时，所需的酶是_，重组载体进入水稻细胞并在细胞内维持稳定和表达的过程称为_。(2)根据启动子的作用推测，Wx基因启动子序列的改变影响了_，从而改变了Wx基因的转录水平。与野生型水稻相比，3个突变品系中Wx基因控制合成的直链淀粉合成酶的氨基酸序列_(填“发生”或“不发生”)改变，原
10、因是_。(3)为检测启动子变化对Wx基因表达的影响，科研人员需要检测Wx基因转录产生的mRNA(Wx mRNA)的量。检测时分别提取各品系胚乳中的总RNA，经_过程获得总cDNA。通过PCR技术可在总cDNA中专一性地扩增出Wx基因的cDNA，原因是_。限制性内切核酸酶和DNA连接酶RNA聚合酶与启动子的识别和结合逆转录引物是根据Wx基因的一段已知的碱基序列设计合成的(引物能与Wx基因的cDNA特异性结合)不发生编码直链淀粉合成酶的碱基序列中不含启动子转化(4)各品系Wx mRNA量的检测结果如图所示，据图推测糯性最强的品系为_，原因是_。品系3品系3的Wx mRNA最少，控制合成的直链淀粉合成酶最少，直链淀粉合成量最少，糯性最强3使用PCR仪的具体实验操作顺序应为()设计好PCR仪的循环程序按配方准备好各组分用微量移液器在微量离心管中依次加入各组分进行PCR反应离心使反应液集中在离心管底部ABC D
