1、1背景知识1临床产前筛查与诊断方法2无创产前基因检测3主要内容简介具体操作流程41NIPT项目介绍专题知识8/18/20232 背景知识12NIPT项目介绍专题知识8/18/20233名称名称病因病因发病率发病率常染色体常染色体唐氏综合征唐氏综合征21-321-3体体1/600-8001/600-800Edward Edward 综合征综合征18-318-3体体1/3500-80001/3500-8000PatauPatau综合征综合征13-313-3体体1/7000-200001/7000-20000性染色体性染色体TurnerTurner综合征综合征XOXO1/2500-5000(1/25
2、00-5000()克氏综合征克氏综合征XXYXXY1/1000(1/1000()XXXXXX综合征综合征XXXXXX1/1/1 1000(000()常见染色体疾病3NIPT项目介绍专题知识8/18/20234唐氏综合征(Downs syndrome)又称“21-三体综合征”或“先天愚型”，主要是由于细胞中多出一条21号染色体所导致的疾病。正常人核型唐氏综合征核型唐氏综合征概述4NIPT项目介绍专题知识8/18/20235l 典型面容l 先天性智力低下、精神迟钝l 心脏、消化系统、五官的发育异常l 骨骼及肌肉发育不全，肌肉无力，身材矮小唐氏综合征临床表现5NIPT项目介绍专题知识8/18/202
3、36 多发畸形：多发畸形：容貌特殊，枕骨突出，95%以上伴有心脏畸形，胸骨过短，手指重叠、扭曲等；发育障碍：发育障碍：新生儿常为过期生产，对声响反应微弱，骨骼和肌肉发育不良；存活困难：存活困难：一半以上胎死腹中，20%新生儿存活超过两个月，只有5-10%能够存活一年以上。6爱德华氏综合征（T18）临床特点6NIPT项目介绍专题知识8/18/20237 严重畸形：严重畸形：患儿的畸形和临床表现要比21三体性严重得多，颅面、脑和内脏畸形非常普遍。前额、前脑发育缺陷，如无嗅脑，心室或心房间隔缺损，多囊肾等；智力障碍：智力障碍：程度严重，存活较久的患儿还有癫痫样发作；存活时间短：存活时间短：45%的患
4、儿在出生后一个月内死亡，90%在6个月内死亡，存活至3岁者少于5%，平均寿命为130天。7帕陶氏综合征（T13）临床特点7NIPT项目介绍专题知识8/18/20238根据2004年我国卫生部妇幼保健与社区卫生司的调查结果，每一新发唐氏病例给家庭带来的直接经济负担是39.0万元。每年政府支出约80亿元用于患儿的医疗和社会救济。给家庭带来巨大的心理压力和精神痛苦，多数患者容易受到歧视，特殊教育的接受水平普遍偏低，缺乏生活自理能力和社会适应能力，生存质量极差。8唐氏综合征（T21）对家庭和社会的危害8NIPT项目介绍专题知识8/18/20239遗传因素：家族遗传生物因素：自身免疫疾病，病毒感染；物理
5、因素：妊娠时放射线照射，放射性尘埃；化学因素：药物、农药、工业毒物、食品添加剂；随着孕妇年龄增加，唐氏综合征患病率显著升高；唐氏综合征发病机理 唐氏综合征患病几率与人种、生活水准等没有直接联系，任何夫妻，各个年龄段的孕妇，均有怀唐氏儿的几率。9NIPT项目介绍专题知识8/18/202310临床产前筛查与诊断方法210NIPT项目介绍专题知识8/18/202311产前筛查：产前筛查：采用采用简便、可行、无创简便、可行、无创的检查方法，的检查方法，对对发病率高、病发病率高、病情严重情严重的遗传性疾病或先天畸形等在分娩前进行检查，检出子代具的遗传性疾病或先天畸形等在分娩前进行检查，检出子代具有出生缺
6、陷高风险的人群。有出生缺陷高风险的人群。筛查出可疑者再进一步确诊筛查出可疑者再进一步确诊，是防止出，是防止出生缺陷的重要步骤。生缺陷的重要步骤。产前诊断：产前诊断：又称宫内诊断或出生前诊断，是通过直接或间接地方法又称宫内诊断或出生前诊断，是通过直接或间接地方法对孕期胎儿性别及健康进行检测，防止具有严重遗传病、智力障碍对孕期胎儿性别及健康进行检测，防止具有严重遗传病、智力障碍及先天畸形的患儿出生。及先天畸形的患儿出生。产前筛查产前筛查&产前诊断的定义产前诊断的定义11NIPT项目介绍专题知识8/18/202312l 产前筛查:采用简便、可行、无创的检查方法，对发病率高、病情严重的遗传性疾病或先天
7、畸形等在分娩前进行检查，检出子代具有出生缺陷高风险的人群。筛查出可疑者再进一步确诊，是防治出生缺陷的重要步骤。唐氏综合征产前筛查与诊断12NIPT项目介绍专题知识8/18/202313胎儿颈项透明层（NT）NT13NIPT项目介绍专题知识8/18/202314 是指先天性疾病或遗传性疾病在胎儿期的诊断，是利用非侵入性或侵入性手段对胎儿进行的特异性检查，以便在早孕期或中孕期对异常胎儿作出诊断，及时治疗或处理。方法方法有创有创/无创无创孕周孕周描述描述绒毛活检术有创10131%3%流产率99%检出率羊膜腔穿刺术有创16210.5%1%流产率99%检出率经腹脐静脉穿刺术有创20280.5%1%流产率
8、99%检出率优点：核型分析可以作为产前诊断的金标准。优点：核型分析可以作为产前诊断的金标准。缺点：损伤性；存在流产、宫内感染等风险缺点：损伤性；存在流产、宫内感染等风险,对医生的技术要求高，工作效率很难对医生的技术要求高，工作效率很难 提高。提高。产前诊断产前诊断14NIPT项目介绍专题知识8/18/2023产前诊断方法产前诊断方法15绒毛穿刺取样绒毛穿刺取样（chorionic villus sampling,CVS）羊水穿刺羊水穿刺（amniocentesis）脐带穿刺脐带穿刺（pencutaneous umbilical blood sampling,PUBS）15NIPT项目介绍专题知
9、识8/18/2023绒毛活检术10-13周周绒毛组织绒毛组织20mg（细胞培养或生（细胞培养或生化检查）化检查）适用：高龄孕妇和高危孕妇孕早适用：高龄孕妇和高危孕妇孕早期诊断。期诊断。干扰：胎盘嵌合体干扰：胎盘嵌合体流产率流产率1%-3%其他风险：胎儿肢体发育缺陷等其他风险：胎儿肢体发育缺陷等1616NIPT项目介绍专题知识8/18/2023羊膜腔穿刺术16-21周周20mL羊水（细胞培养或其他检测）羊水（细胞培养或其他检测）适用：高龄孕妇和高危孕妇孕中适用：高龄孕妇和高危孕妇孕中期诊断期诊断干扰：母血污染干扰：母血污染流产风险流产风险0.5%-1%其他风险：羊水泄露、母体血管其他风险：羊水泄
10、露、母体血管损伤、宫内感染等损伤、宫内感染等1717NIPT项目介绍专题知识8/18/2023经腹脐静脉穿刺术20-28周周脐血脐血1-2ml，只需培养，只需培养48h适用适用:高龄孕妇和高危孕妇孕晚高龄孕妇和高危孕妇孕晚期诊断期诊断干扰：母血污染干扰：母血污染胎死宫内、早产率胎死宫内、早产率0.5%-1%其他风险：穿刺失败、胎儿心动其他风险：穿刺失败、胎儿心动影响等影响等1818NIPT项目介绍专题知识8/18/202319在产前筛查和产前诊断之间缺少一个技术补充，它要具在产前筛查和产前诊断之间缺少一个技术补充，它要具有产前诊断的高准确性，同时又具有安全、简便、无创有产前诊断的高准确性，同时
11、又具有安全、简便、无创的特点的特点-基因水平基因水平方法方法侵入性侵入性孕周孕周技术特点技术特点产前筛查产前筛查孕妇外周血生化筛查孕妇外周血生化筛查非侵入性非侵入性11-13+614-20+65%假阳性率，假阳性率，40%漏诊漏诊*超声颈部透明带超声颈部透明带非侵入性非侵入性11-13+65-10%假阳性率，假阳性率，技术要求高技术要求高产前诊断产前诊断绒毛取样绒毛取样侵入性侵入性10-13+61-5%流产率流产率羊水穿刺羊水穿刺侵入性侵入性16-210.5-1%流产率流产率脐静脉血穿刺脐静脉血穿刺侵入性侵入性20-281-2流产率流产率产前筛查和诊断的方法对比19NIPT项目介绍专题知识8/
12、18/202320无创产前基因检测320NIPT项目介绍专题知识8/18/2023一 无创技术的理论基础与检测原理二 技术开发进程与临床实践2121NIPT项目介绍专题知识8/18/2023理论基础孕妇外周血中存在胎儿DNA2222NIPT项目介绍专题知识8/18/2023胎儿胎儿DNADNA的来源和特点的来源和特点来源：来源：1 胎儿细胞通过胎盘渗透到母血中，被 母体免疫系统破坏，胎儿DNA残留下来；2 胎儿细胞凋亡；3 胎盘滋养层细胞的凋亡基本特点：基本特点：1 含量有一定的变化规律。妊娠第4周开 始可检出胎儿游离DNA，随着孕周增加 而增加，存在个体差异，平均浓度7.5%；2 分娩后短时
13、间内消失，平均半衰期为 16.3min(4-30min)，2h就无法检出，前次妊娠情况不影响再次妊娠检测结果；3 DNA片段较小，平均166bp左右。常规技 术很难检测 图1 临床试验数据浓度随孕周变化趋势 （内部数据）23NIPT项目介绍专题知识8/18/2023无创染色体非整倍体：不同检测技术比较24NIPT项目介绍专题知识8/18/2023理论模型（基于测序的无创检测）母亲母亲Chr 21Chr 21：95952=1902=190母体外周血中母体外周血中Chr 21=190+10=200Chr 21=190+10=200 以21-三体为例：100 DNA单位/毫升血浆。其中，95个单位来
14、源于母亲，5个单位来源于胎儿 通过大规模并行测序，获得分布在每条染色体上的真实的核酸片段数通过大规模并行测序，获得分布在每条染色体上的真实的核酸片段数量，经过计数与比较：量，经过计数与比较：正常胎儿正常胎儿 或者或者 21-21-三体胎儿三体胎儿 正常胎儿正常胎儿 Chr 21Chr 21：5 52=102=10 母亲母亲Chr 21Chr 21：95952=1902=190 21-21-三体胎儿三体胎儿 Chr 21Chr 21：5 53=153=15母体外周血中母体外周血中Chr 21=Chr 21=190+190+15=20515=20525NIPT项目介绍专题知识8/18/202326
15、26已知参照序列已知参照序列 （Chr 21#.）测序获得的 核酸片段 （reads)测序数据比对示意图测序数据比对示意图26NIPT项目介绍专题知识8/18/2023真实测序数据展示荧光信号-碱基序列（数字信号）Instrument PC Analysis PC/cluster27NIPT项目介绍专题知识8/18/2023国际应用进展（基于测序的无创DNA检测）国际、国内同类型临床应用研究显示：基于测序的无创DNA检测技术，对于 T21、T18、T13，均具有极高的检出率与准确性28NIPT项目介绍专题知识8/18/2023一 无创技术的理论基础与检测原理二 技术开发进程与临床实践2929N
16、IPT项目介绍专题知识8/18/202330检测技术概述检测技术概述 胎儿染色体非整倍体无创胎儿染色体非整倍体无创DNADNA检测检测 （NIFTYNIFTY）：）：通过采集5 ml孕妇外周血，提取其中游离DNA并采用第二代高通量测序技术进行测序，通过生物信息分析，得出胎儿患“染色体非整倍体”的风险率。技术定位：技术定位：高精度产前筛查方法30NIPT项目介绍专题知识8/18/2023 检测流程检测流程现场咨询与知情同意现场咨询与知情同意是血浆分离 血浆游离DNA测序 随访/常规诊断(绒毛膜穿刺、羊水穿刺等)3131NIPT项目介绍专题知识8/18/2023提取血浆提取血浆DNADNA测序测序
17、定位定位覆盖深度统计覆盖深度统计覆盖深度Cov-chrN =参考序列染色体N上有效测序片段总数 样品染色体N上有效测序片段总数AACGT-AACGT-CGATA-CGATA-TAGGC-TAGGC-ATCGC-ATCGC-生物信生物信息比对息比对Chr6Chr6Chr18Chr18ChrXChrXChr21Chr21Chr7Chr7Chr13Chr13Chr11Chr11ChrYChrY50bp50bp统计值计算统计值计算(t-(t-值值,L-,L-值值)确认胎儿是否为确认胎儿是否为T21,T18,T13T21,T18,T13测试样本ChrN的关联t-Score样本的覆盖深度参考样本的修正覆盖
18、深度参考样本的标准差L值 =对数（样品正常可能性值）对数（样品患病可能性值）=技术流程正常正常21-21-三体三体32NIPT项目介绍专题知识8/18/202333普通筛查胎儿患T21、T18 或 T13高风险的孕妇取外周血并编号用NIFTY 来分析胎儿21号、18号和 13号染色体羊水穿刺/核型分析双盲测试双盲测试统计灵敏度和特异性结果分析临床研究（双盲临床研究（双盲)33NIPT项目介绍专题知识8/18/20232023-8-18总数总数孕妇相关信息孕妇相关信息 中位数中位数(岁岁)33 高龄孕妇高龄孕妇(35 岁岁)1217(35.1%)1824 岁岁(例例,%)297(8.6%)252
19、9 岁岁(例例,%)1026(29.6%)3034 岁岁(例例,%)804(23.2%)3539 岁岁(例例,%)960(27.7%)40 岁岁(例例,%)257(7.4%)不详不详(例例,%)120(3.5%)抽血孕周抽血孕周 中位数中位数(周周)19范围范围(周周)6-4012 周周(例例,%)48(1.4%)13-16 周周 (例例,%)132(3.8%)17-20 周周 (例例,%)1677(48.4%)21-24 周周 (例例,%)1256(36.3%)25-28 周周 (例例,%)155(4.5%)29 周周(例例,%)71(2.0%)不详不详 (例例,%)125(3.6%)B超发
20、现染色体异常畸形超发现染色体异常畸形(例例)27(0.8%)唐筛信息唐筛信息 已做已做 高风险高风险 (例例,%)1365(39.4%)已做已做 低风险低风险 (例例,%)232(6.7%)未做未做(例例,%)1867(53.9%)临床研究（双盲临床研究（双盲)34NIPT项目介绍专题知识8/18/202335检出高风险险样本数检出高风险险样本数总例数T21T18T13样本总数（例）3000150519核型分析（例）3000149509假阳性（例）-110假阴性（例）-000检出率-100%100%100%假阳性率-0.035%0.034%0.00%阳性预测值-99.33%98.04%100%
21、假阴性率-0%0%0%阴性预测值-100%100%100%临床研究（双盲临床研究（双盲)35NIPT项目介绍专题知识8/18/202336具体操作流程436NIPT项目介绍专题知识8/18/2023 通过采集5 ml孕妇外周血，提取其中游离DNA采用第二代高通量测序技术进行测序，通过生物信息分析，得出胎儿患“染色体非整倍体”的风险率。检测范围：检测范围：可以用于检测21、18、13等染色体非整倍体。可作为一种产前筛查技术，极低的假阳性率大幅降低创伤性产前诊断比例，缓解临床压力。技术概述技术概述37NIPT项目介绍专题知识8/18/2023381、技术优势：无创：采集5ml孕妇外周血安全：避免胎
22、儿宫内感染或流产早期：12孕周即可检测，最佳孕周（12-24周）准确：采用新一代测序技术，结合生物信息分析无创产前基因检测技术优势38NIPT项目介绍专题知识8/18/202339所有孕周12周的孕妇；（最佳检测孕周：12-24周）适应群体 年龄达35岁或以上的高龄孕妇 拒绝做羊水穿刺者 孕早、中期血清筛查21三体风险临界者（风险临界者（1/300-1/1000),孕早期超声提示胎儿异常 有穿刺禁忌症孕妇(胎盘前置、流产征兆、感染乙肝、HIV、TP等)IVF、习惯性流产及其他原因“珍贵儿”错过有创产前诊断的孕妇检测对象：特别适合群体：39NIPT项目介绍专题知识8/18/202340不能检测双
23、胞胎及以上多胎；不适合检测染色体的微缺失、微重复以及结构异常（嵌合体型、易位型）;孕妇前期接受过异体输血、移植手术、干细胞治疗等，而引入外源DNA，会影响检测结果;孕妇本人为“染色体非整倍体染色体非整倍体”患者患者，不适合进行该项检测；夫妇双方或一方为染色体结构异常者染色体结构异常者不适合进行该项检测；目前局限性40NIPT项目介绍专题知识8/18/2023样本采集、储存及运输样本采集、储存及运输2023-8-184141NIPT项目介绍专题知识8/18/2023标本采集流程标本采集流程孕妇填写知情同意书、孕妇填写知情同意书、送检单并领取保险卡送检单并领取保险卡分离血浆分离血浆孕妇抽血、孕妇抽
24、血、贴条码贴条码(一一对应）一一对应）寄送样本寄送样本接收样本接收样本1、干冰寄送样本、干冰寄送样本 10公斤公斤/2-3天、天、避免反复冻融避免反复冻融2、每例样本对应、每例样本对应4管血浆。管血浆。孕妇必填基本信息并签名孕妇必填基本信息并签名医生解答疑问医生解答疑问1、采用、采用5mLEDTA抗凝管抗凝管2、条码分别贴送检单、知情同意书、条码分别贴送检单、知情同意书 采血管、采血管、2.0mLEP管管1、48h内离心内离心2、41600g离心离心10min3、416000g离心离心10min1、检查样品是否合格、检查样品是否合格2、录入信息（、录入信息（SOP 双人复核）双人复核）缴费编号
25、原则：编号原则：PDB12+医院代医院代 码码+5位流水号位流水号42NIPT项目介绍专题知识8/18/2023全血样本量：全血样本量：5 mL5 mL采血管：采血管：专用采用管专用采用管样本标识：样本标识：血液采集后，在样本采集管上标标明孕妇姓名、年龄及孕周明孕妇姓名、年龄及孕周。样本保存：常温下保存。样本保存：常温下保存。注意：送检过程中不能冰冻。注意：送检过程中不能冰冻。样本采集样本采集2023-8-184343NIPT项目介绍专题知识8/18/2023检测报告及解释检测报告及解释2023-8-184444NIPT项目介绍专题知识8/18/2023检测报告检测报告正常报告正常报告结果解释
26、结果解释1、低风险：说明胎儿患染色体非整倍体的风险很低，建议继续妊娠并进行常规产检；2、高风险:说明胎儿患某种染色体非整倍体的风险很高，建议进行羊水或者脐血穿刺；3、准确率99%。45NIPT项目介绍专题知识8/18/2023检测报告检测报告延迟报告延迟报告结果解释结果解释1、质控不过关：可能是实验的原因或者样本本身问题，重新进行实验；2、数据波动，值偏高但没达到标准：重新进行实验；3、胎儿浓度低：重新上机。以上情况通过重新实验如果解决不了的话会要求重新抽血。以上情况通过重新实验如果解决不了的话会要求重新抽血。46NIPT项目介绍专题知识8/18/2023其它情况解释其它情况解释1、除、除21
27、、18、13号染色体之外的其它染色体数目号染色体之外的其它染色体数目异常，建议临床医生结合临床经验、异常，建议临床医生结合临床经验、B超结果及其超结果及其它检测结果综合评判，如果也出现其它检测结果异它检测结果综合评判，如果也出现其它检测结果异常（如常（如B超发现畸形等）建议进行羊水或者脐血穿超发现畸形等）建议进行羊水或者脐血穿刺。刺。2、性染色体异常：建议结合临床经验和孕妇的意、性染色体异常：建议结合临床经验和孕妇的意见进行处理。见进行处理。47NIPT项目介绍专题知识8/18/2023基本知识基本知识知情同意书知情同意书/送检单签署送检单签署：需与受检者及其家属作良好沟通，告知该检测的重要性
28、、临床意义及潜在的风险，指导受检者签署知情同意书 2.送检单必填信息送检单必填信息：送检单位、送检医生、送检医生联系电话、采集日期、受检者姓名、年龄、孕周、B超检查结果。3.身份及准备情况核对身份及准备情况核对：仔细核对送检单和受检者的基本信息，确保一致；检查受检者是否按照医嘱准备，并向其解释操作目的以取得配合。4.样本标识样本标识：在采集管上贴上样本唯一条码，并注明受检者姓名等信息，确保与送检单一致。5.血液收集血液收集：外周血5ml，孕妇正常饮食作息。6.血液运输与保存血液运输与保存：常温下保存，不能冰冻送检。7.报告时间报告时间：7个工作日。8.检测费用检测费用：￥2500.0048NIPT项目介绍专题知识8/18/202349签约后，无创产前在医院运行的基本流程图妇产科医生与孕妇沟通确认填写送检单/知情同意书、保险告知书（孕周大于24，填写补充条款）医生开具产前检测单、孕妇缴费抽血（专用管 5ML血液，）护士登记送样49NIPT项目介绍专题知识8/18/2023谢谢 谢！谢！深圳市核子基因科技有限公司地址：深圳市南山区学苑大道1001号南山智园A7栋12楼 网址：http:/
