1、2024-3-301第五章第五章 中药指纹图谱中药指纹图谱Rb1+Re+Rg1:(A)0.94%;(B)0.52%;(C)0.24%;(D)0.03%DAContent:-Rb1 0.5%;-Re 0.16%;-Rg1 0.28%Total:0.94%min010203040506070mAU-1000100200300400500600ImporatorinIsoimporatorin 11 Oxypeucedanin 10 13 cnidilin 12 7 9 1 2 3 4 5 6 8 ABABSharp contrast of crude drug and slices for dec
2、oction of Paeoniae Radix(白芍)with different contents of active glycosides respectively.Paeoniflorin-sulphite0102030405060-1000-500050010001500 min mAUpaeoniflorinB-07-3B-07-14B-07-3B-07-14Forsythiaside AForsythin 123青翘Immature Lianqiao老翘 mature Lianqiao老翘（无种子）Mature Lianqiao（without seeds)2024-3-3010
3、2010版药典丹参提取物指纹图谱版药典丹参提取物指纹图谱原儿原儿茶醛茶醛迷迭迷迭香酸香酸丹酚丹酚酸酸B2024-3-3011 中药经适当处理后，采用一定的分析中药经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药特征的手段，得到的能够标示该中药特征的共有峰的图谱。共有峰的图谱。中药指纹图谱的含义（掌握）中药指纹图谱的含义（掌握）2024-3-3012中药指纹图谱的特性中药指纹图谱的特性（掌握）（掌握）稳定性（重现性）稳定性（重现性）整体性（模糊性）整体性（模糊性）特征性特征性在规定的方法与条件下，不同的操作者和在规定的方法与条件下，不同的操作者和不同的实验室应能重复不同的实验室应能重复能反
4、映中药能反映中药有效部位所有效部位所含大部分成含大部分成分的种类，分的种类，或指标成分或指标成分的全部的全部能特征地区能特征地区分中药的真分中药的真伪与优劣伪与优劣2024-3-3013指纹图谱研究的主要目的指纹图谱研究的主要目的 对中药质量标准的补充和提高。对中药质量标准的补充和提高。控制原料、中间体、成品的一致性，控制原料、中间体、成品的一致性，控制工艺，减少批间差异。控制工艺，减少批间差异。min01020304050mAU02004006008001000120014001600 DAD1 B,Sig=254,16 Ref=360,100(SQ012-0201.D)cmin010203
5、04050mAU020040060080010001200 DAD1 B,Sig=254,16 Ref=360,100(SQ013-0301.D)cmin01020304050mAU0100200300400500600700 DAD1 B,Sig=254,16 Ref=360,100(SQXD010901.D)cmin01020304050mAU0100200300400500600700 DAD1 B,Sig=254,16 Ref=360,100(SQ011-0101.D)c2024-3-3015指纹图谱中应包含的信息 对于中药材和中药饮片：种的共性，用药部位的对于中药材和中药饮片：种的共
6、性，用药部位的共性，产地的个性，采收期、炮制方法的个性信共性，产地的个性，采收期、炮制方法的个性信息。息。对于半成品和中药制剂：原药材（甚至辅料）的对于半成品和中药制剂：原药材（甚至辅料）的信息；工艺信息等。信息；工艺信息等。药效信息：药效信息药效信息：药效信息。2024-3-3016色谱技术色谱技术光谱技术光谱技术UVIR波谱技术波谱技术MS NMRX-射线衍射法射线衍射法分子生物学技术分子生物学技术TLCHPLC,LC/MSGC,GC/MSHPCE,CE/MS色谱指纹图谱色谱指纹图谱二、指纹图谱研究手段二、指纹图谱研究手段薄层色谱2024-3-3018TLC举例：区分不同品种2024-3-
7、3019TLC举例：监控工艺高效液相色谱2024-3-30212024-3-3022IIIIII诃诃 子子小诃子小诃子大诃子大诃子绒毛诃子绒毛诃子诃子指纹图谱GC HPCE2024-3-3024肉桂油的气相色谱指纹图谱肉桂油的气相色谱指纹图谱2024-3-30252024-3-30262024-3-3027独活独活GC指纹图谱指纹图谱羌活羌活GC指纹图谱指纹图谱高效液相色谱小蓟丁酮提取物的红外小蓟丁酮提取物的红外指纹图谱指纹图谱2024-3-3031中药指纹图谱中药指纹图谱供试品溶液供试品溶液10批以上中药批以上中药图谱信息图谱信息固定产地、采收期固定产地、采收期和加工炮制的中药和加工炮制的中
8、药中药未中药未知检品知检品预处理预处理不同产地、采收期不同产地、采收期和加工炮制的中药和加工炮制的中药评价标准评价标准药效学试验药效学试验代表性代表性均一性均一性选择测试条件选择测试条件方法建立考察方法建立考察测定图谱参数测定图谱参数图谱分析图谱分析相关性相关性图图谱谱评评价价图谱测试、相似度评价图谱测试、相似度评价方法检验方法检验2024-3-30322024-3-3033Reference fingerprint2024-3-30342024-3-30352024-3-30362024-3-30372024-3-30382024-3-30392024-3-30402024-3-3041流动
9、相流动相 1 1流动相流动相 2 2流动相流动相 3 32024-3-304215202530352032102362543652024-3-30432024-3-3044表表3 3 川芎指纹图谱稳定性试验相似度计算结果（川芎指纹图谱稳定性试验相似度计算结果（n=5n=5）S1S2S3S4S5对照指纹图谱S11.0000.9970.9950.9950.9970.998S20.9971.0000.9980.9970.9960.999S30.9950.9981.0000.9980.9910.999S40.9950.9970.9981.0000.9900.999S50.9970.9960.9910.
10、9901.0000.994对照指纹图谱0.9980.9990.9990.9990.9941.0002024-3-30452024-3-3046注意事项 HPLC和和GC指纹图谱：记录时间一般为指纹图谱：记录时间一般为1小时小时；TLC指纹图谱：须提供从原点至指纹图谱：须提供从原点至溶剂前沿溶剂前沿的图谱；的图谱；光谱方法制定指纹图谱：必须按各种光谱的相应光谱方法制定指纹图谱：必须按各种光谱的相应规定提供全谱。规定提供全谱。对于化学成分类型复杂品种，必要时可建立多张对于化学成分类型复杂品种，必要时可建立多张指纹图谱。指纹图谱。2024-3-3047标定共有指纹峰，确定参照峰标定共有指纹峰，确定参
11、照峰非共有峰总面积不得大于总峰面积的非共有峰总面积不得大于总峰面积的10计算各共有峰的相对保留时间、峰面积比计算各共有峰的相对保留时间、峰面积比给出标准（对照）指纹图谱及数据给出标准（对照）指纹图谱及数据四、指纹图谱分析步骤四、指纹图谱分析步骤2024-3-3048五、指纹图谱的评价五、指纹图谱的评价 要求要求“准确的辨认准确的辨认”而不是而不是“精密的测量精密的测量”；比较供试品与对照品的色谱指纹图谱要求比较供试品与对照品的色谱指纹图谱要求“相相似似”而不是而不是“相同相同”。评价色谱比较的结果，是根据其模糊属性，着评价色谱比较的结果，是根据其模糊属性，着眼于宏观的规律性的特征分析，即着重辨
12、认完眼于宏观的规律性的特征分析，即着重辨认完整色谱的整色谱的“图貌图貌”，而不是求索细枝末节。，而不是求索细枝末节。2024-3-3049 指纹图谱相似度评价指纹图谱相似度评价 直观分析比较：看一看直观分析比较：看一看 量化数据比较：算一算量化数据比较：算一算（重叠率，相似率等）（重叠率，相似率等）计算机辅助相似度评价计算机辅助相似度评价与标准与标准指纹图指纹图谱相比谱相比2024-3-3050重叠率和相似率计算重叠率和相似率计算重叠率=共有峰数2指纹图谱峰数+供试品峰数100%特征指纹峰相似率=指纹图谱中特征指纹峰面积供试品图谱中特征指纹峰面积100%2024-3-3051例：银杏提取物例：
13、银杏提取物EGB761 EGB761中含总黄酮成分中含总黄酮成分24%，萜类内酯，萜类内酯6%，原花青素类原花青素类7.0%，羧酸类成分，羧酸类成分13.0%，儿茶，儿茶素类素类2.0%，非黄酮类苷类，非黄酮类苷类20%，高分子化合，高分子化合物物4.0%，无机物，无机物5.0%，水分溶剂，水分溶剂3.0%，其他，其他3.0%。有害成分银杏酸类有害成分银杏酸类5ppm芦丁芦丁2024-3-3054小结 中药指纹图谱是一种量化的鉴别手段。中药指纹图谱是一种量化的鉴别手段。指纹图谱必须符合整体性、特征性、稳定指纹图谱必须符合整体性、特征性、稳定性、关联性的基本要求。性、关联性的基本要求。指纹图谱与药效相结合才有现实意义。指纹图谱与药效相结合才有现实意义。特征指纹峰的含量测定结合指纹图谱是理特征指纹峰的含量测定结合指纹图谱是理想的质量控制模式。想的质量控制模式。2024-3-3055复习思考题 中药指纹图谱有哪些应用？中药指纹图谱的建立有哪些步骤和程序？如何分析和评价中药指纹图谱？2024-3-3056 中华人民共和国药典2010版 中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)国药管注2000348号 中药、天然药物注射剂基本技术要求国食药监注2007743号参考资料
