1、临床应用临床应用n辅助判断急性白血病的细胞类型辅助判断急性白血病的细胞类型n辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断（诊断（FeFe、NAPNAP等）等） FABFABALLALL（急性淋巴细胞白血病）（急性淋巴细胞白血病）L1L1、L2L2、L3L3AMLAML（急性髓细胞白血病）（急性髓细胞白血病） M0 M0 急性粒细胞白血病（微分化型）急性粒细胞白血病（微分化型） M1 M1 急性粒细胞白血病（未成熟型）急性粒细胞白血病（未成熟型） M2 M2 急性粒细胞白血病（部分成熟型）急性粒细胞白血病（部分成熟型） M3 M3 急性早幼粒细胞白血病急性早幼粒细胞白血病 M
2、4 M4 急性粒单核细胞白血病急性粒单核细胞白血病 M5 M5 急性单核细胞白血病急性单核细胞白血病 M6 M6 急性红白血病急性红白血病 M7 M7 急性巨核细胞白血病急性巨核细胞白血病细胞化学染色的基本步骤细胞化学染色的基本步骤固定固定显示显示复染复染保持细胞结构及化学成分不变，并使血保持细胞结构及化学成分不变，并使血膜在染色、冲洗过程中不易脱落损坏膜在染色、冲洗过程中不易脱落损坏形成稳定的有色沉淀，显示出被检形成稳定的有色沉淀，显示出被检测的化学物质测的化学物质既能显示细胞结构又能清楚地看出细既能显示细胞结构又能清楚地看出细胞化学染色结果胞化学染色结果细胞化学染色的种类细胞化学染色的种类
3、n过氧化物酶染色（过氧化物酶染色（POX)POX)、苏丹黑染色、苏丹黑染色（SBB)SBB)n过碘酸过碘酸- -雪夫反应（雪夫反应（PASPAS）又称糖原染色）又称糖原染色n酯酶染色酯酶染色n酸性磷酸酶染色（酸性磷酸酶染色（ACP)ACP)n铁染色铁染色n中性粒细胞碱性磷酸酶染色（中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAPNAP）过氧化物酶染色过氧化物酶染色Peroxidase stain, POX染色原理（四甲基联苯胺法）染色原理（四甲基联苯胺法）H2O2溶酶体颗粒溶酶体颗粒中的中的H2OO2四甲基联苯胺四甲基联苯胺O2联苯胺蓝联苯胺蓝联苯胺蓝亚硝基铁氰化钠联苯胺蓝亚硝基铁氰化钠O2蓝色物质蓝色物质（
4、沉淀）（沉淀）正常血细胞的染色反应正常血细胞的染色反应粒细胞系统粒细胞系统原粒（可为阴性）分叶（阳性程原粒（可为阴性）分叶（阳性程度逐渐增强）度逐渐增强）嗜酸阳性最强嗜酸阳性最强嗜碱阴性嗜碱阴性单核细胞系统单核细胞系统阴性或弱阳性（颗粒少而阴性或弱阳性（颗粒少而细）细）其他血细胞其他血细胞阴性阴性临床意义临床意义1.ALL：原始细胞的POXPOX阳性3%3%2.2.在多数的M1、绝大部分M2和M3中，原始细胞的阳性率大于85%，M3呈强阳性；M4和M5时，原单有时可呈弱阳性，但绝大多数的原单是POX阴性。M6，原粒和幼稚粒细胞是POX阳性，幼红细胞是POX阴性。M7，血小板POX的活性只能在超
5、微结构上证实。POX染色的临床应用染色的临床应用POXPOX染色是辅助诊断急性白血病细胞染色是辅助诊断急性白血病细胞类型类型首选、最重要首选、最重要的细胞化学染色，的细胞化学染色，主要用于急性白血病的鉴别诊断。主要用于急性白血病的鉴别诊断。 急性粒细胞白血病时，其原、幼细急性粒细胞白血病时，其原、幼细胞呈阳性反应，以胞呈阳性反应，以APL APL 反应最强反应最强; ;急性急性单核细胞白血病时，原幼细胞呈弱阳单核细胞白血病时，原幼细胞呈弱阳性反应性反应 ALLALL时呈阴性反应时呈阴性反应原粒原粒单核单核淋巴淋巴早幼早幼晚幼晚幼中幼中幼过氧化物酶染色过氧化物酶染色( peroxidase( p
6、eroxidase，POX )POX ) 苏丹黑染色苏丹黑染色Sudan black, SBB苏丹黑染色苏丹黑染色原理：原理：SBBSBB能溶解于细胞内的含脂结构，能溶解于细胞内的含脂结构，使脂类物质显示出来，呈棕黑色或深使脂类物质显示出来，呈棕黑色或深黑色。黑色。正常细胞的染色反应同正常细胞的染色反应同POXPOX染色。染色。临床评价临床评价 POXPOX染色特异性高于染色特异性高于SBBSBB染色染色 SBBSBB染色敏感性高于染色敏感性高于POXPOX染色染色过碘酸过碘酸- -雪夫反应雪夫反应( (糖原染色）糖原染色）Periodic acid-Schiff reaction, PAS染
7、色原理（染色原理（PAS）乙二醇基（多糖类物质中）乙二醇基（多糖类物质中）过碘酸过碘酸双醛基无色品红双醛基无色品红紫红色化合物紫红色化合物正常血细胞的染色反应正常血细胞的染色反应粒细胞系统粒细胞系统原粒（可为阴性）分叶（阳性原粒（可为阴性）分叶（阳性 程度逐渐增强）程度逐渐增强）嗜酸胞质呈红色，颗粒不着色嗜酸胞质呈红色，颗粒不着色嗜碱反之嗜碱反之红细胞系统红细胞系统 阴性阴性单核细胞系统单核细胞系统 原单（可为阴性），原单（可为阴性）， 其他阳性其他阳性正常血细胞的染色反应正常血细胞的染色反应淋巴细胞系统淋巴细胞系统大多数阴性，少数阳性。大多数阴性，少数阳性。巨核细胞系统巨核细胞系统 巨核细胞
8、和血小板阳性，阳性反应巨核细胞和血小板阳性，阳性反应的程度随细胞的发育成熟而增强。的程度随细胞的发育成熟而增强。临床意义临床意义红细胞系统疾病红细胞系统疾病 红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）；某些幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）；某些红系良性疾病如缺铁贫、巨幼贫等阴性。红系良性疾病如缺铁贫、巨幼贫等阴性。白细胞系统疾病白细胞系统疾病 ALLALL：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗颗粒或：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗颗粒或块状）块状） 急粒：少数原粒呈阳性，阳性细颗粒状急粒：少数原粒呈阳性，阳性细颗粒状 急单：可呈阳性，阳性
9、细颗粒状急单：可呈阳性，阳性细颗粒状PASPAS临床意义临床意义AML-M6幼红细胞呈阳性反应MA幼红细胞呈阴性反应ALLAML-M6AML-M6 PAS(+)AML-M5M5 PAS(+)AML-M7M7 PAS(+)PAS染色的应用染色的应用鉴别淋巴系统增生的性质：鉴别淋巴系统增生的性质： 凡恶性增生时凡恶性增生时PASPAS反应多呈强阳性反应，反应多呈强阳性反应，见于急、慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤等。见于急、慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤等。鉴别红系增生的性质：鉴别红系增生的性质： 凡恶性增生者，凡恶性增生者， 如红血病、红白血病如红血病、红白血病其原、幼红细胞多其原、幼红细胞多 呈强阳性反
10、应；增生呈强阳性反应；增生性贫血、巨幼贫，性贫血、巨幼贫， PASPAS多为阴性。多为阴性。有助于巨核细胞白血病的诊断有助于巨核细胞白血病的诊断酯酶染色酯酶染色-醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色(-NAE)(-NAE) 原理原理 -醋酸萘酚醋酸萘酚 PH中性中性 -醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶 -萘酚萘酚+重氮盐重氮盐(坚牢蓝坚牢蓝B) (黑色或灰黑色黑色或灰黑色) 正常血细胞的染色反应正常血细胞的染色反应单核细胞、粒细胞、淋巴细胞（均可单核细胞、粒细胞、淋巴细胞（均可+ +）仅单核细胞的阳性可被氟化钠抑制仅单核细胞的阳性可被氟化钠抑制(NaF抑制率抑制率50%)。NaF抑制率抑制率=抑制前的阳性
11、率抑制前的阳性率/ /积分积分- -抑制后的抑制后的 抑制前的阳性率抑制前的阳性率/ /积分积分 100%100% -NAE-NAE对诊断急性白血病的作用对诊断急性白血病的作用酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色Acid phosphatase, Acid phosphatase, ACPACPACPACP染色的临床意义染色的临床意义铁染色铁染色Ferric stain染色原理（染色原理（Fe染色）染色） 铁铁+ +亚铁氰化钾亚铁氰化钾 酸性环境酸性环境 亚铁氰化铁（蓝色）亚铁氰化铁（蓝色）正常血细胞的染色反应正常血细胞的染色反应正常人骨髓中的铁主要存在于骨髓小正常人骨髓中的铁主要存在于骨髓小粒及幼红
12、细胞中，分为细胞外铁和细胞粒及幼红细胞中，分为细胞外铁和细胞内铁。内铁。细胞外铁：骨髓小粒的巨噬细胞中细胞外铁：骨髓小粒的巨噬细胞中细胞内铁细胞内铁: 中幼红细胞、晚幼红细胞中幼红细胞、晚幼红细胞 及红细胞中及红细胞中 铁粒幼红细胞铁粒幼红细胞-含铁颗粒的中、晚幼含铁颗粒的中、晚幼红细胞红细胞 铁粒红细胞铁粒红细胞-含铁颗粒的红细胞含铁颗粒的红细胞细胞外铁的观察细胞外铁的观察低倍镜观察骨髓小粒中的铁，阳性结果呈弥散性、颗低倍镜观察骨髓小粒中的铁，阳性结果呈弥散性、颗粒状、小珠状或块状蓝色。粒状、小珠状或块状蓝色。细胞内铁的观察细胞内铁的观察5353环形铁粒幼细胞环形铁粒幼细胞参考范围：参考范围
13、： 细胞外铁细胞外铁： （+ +）（）（+） 细胞内铁：铁粒幼红细胞细胞内铁：铁粒幼红细胞12% 12% 44%44%，以，以型为主，少数为型为主，少数为型，无型，无环形铁粒幼红细胞及铁粒红细胞。环形铁粒幼红细胞及铁粒红细胞。临床意义临床意义MDS中性粒细胞碱性磷酸酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色Neutrophilic alkaline phosphatase NAP染色原理（染色原理（NAP染色）染色） Kaplow Kaplow偶氮偶联法：偶氮偶联法：中性粒细胞中性粒细胞胞质中的碱性磷酸酶在胞质中的碱性磷酸酶在PH9.6PH9.6的碱性的碱性条件下能水解磷酸奈酚钠底物，生条件下能水解磷酸奈
14、酚钠底物，生成奈酚，后者与偶氮盐偶联形成不成奈酚，后者与偶氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀定位于胞质中的酶溶性的有色沉淀定位于胞质中的酶活性处。（活性处。（紫黑色颗粒紫黑色颗粒） 钙钙- -钴法：钴法：红色颗粒红色颗粒正常血细胞的染色反应正常血细胞的染色反应NAP主要存在于中性成熟粒细胞（包主要存在于中性成熟粒细胞（包括中性杆状核粒细胞和中性分叶核粒细括中性杆状核粒细胞和中性分叶核粒细胞）胞浆内，故中性成熟粒细胞胞浆呈胞）胞浆内，故中性成熟粒细胞胞浆呈阳性，其他细胞基本呈阴性。阳性，其他细胞基本呈阴性。参考范围：参考范围： 阳性率阳性率40%40%； NAPNAP积分值为积分值为303013013
15、0分。分。临床意义临床意义NAPNAP积分增加：积分增加： 细菌性感染细菌性感染( (包括类白血病反应）、再生障包括类白血病反应）、再生障碍性贫血、某些骨髓增殖性疾病、慢性粒细胞白碍性贫血、某些骨髓增殖性疾病、慢性粒细胞白血病（加速期、急变期）、急性淋巴细胞白血病、血病（加速期、急变期）、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、恶性淋巴瘤、骨髓转移癌、慢性淋巴细胞白血病、恶性淋巴瘤、骨髓转移癌、肾上腺糖皮质激素及雄激素治疗后等。肾上腺糖皮质激素及雄激素治疗后等。NAPNAP积分下降：积分下降： 慢性粒细胞白血病（慢性期）、急性粒细胞慢性粒细胞白血病（慢性期）、急性粒细胞白血病、阵发性睡眠性血红蛋白尿、骨髓增生异白血病、阵发性睡眠性血红蛋白尿、骨髓增生异常综合症、恶性组织细胞病等。常综合症、恶性组织细胞病等。NAP染染色色的的应应用用CML类白类白谢谢大家谢谢大家HAVE A GOOD DAY!
