1、2.2 2.2 动物细胞工程动物细胞工程1PPT学习交流植物细胞植物细胞A A植物细胞植物细胞B B去掉细胞壁去掉细胞壁原生质体原生质体A A原生质体原生质体B B原生质体融合原生质体融合融合的原生质体融合的原生质体再生出细胞壁再生出细胞壁杂种细胞杂种细胞脱分化脱分化再分化再分化愈伤组织愈伤组织杂种植株杂种植株植物体细胞杂交过程植物体细胞杂交过程2PPT学习交流A A细胞细胞B B细胞细胞人工诱导人工诱导1 1、动物、动物细胞融合的概念细胞融合的概念杂交细胞杂交细胞 动物细胞融合（也动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指称细胞杂交）：是指两两个或多个细胞个或多个细胞融合形成融合形成一个一个单核细胞
2、单核细胞的过程。的过程。一、动物细胞融合一、动物细胞融合3PPT学习交流细胞膜的流动性细胞膜的流动性灭活病毒、灭活病毒、PEGPEG、电激等、电激等融合后的细胞进行有丝分裂，融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞形成完整的杂交细胞诱导的手段？诱导的手段？融合后细胞的类型？融合后细胞的类型？ABAB杂种细胞遗传物质杂种细胞遗传物质有什么特点？有什么特点？AAAA、ABAB、BB(BB(未融合未融合A A和和B)B)含两种生物的遗传物质含两种生物的遗传物质2 2、动物细胞融合过程、动物细胞融合过程原理原理: :4PPT学习交流2 2、动物细胞融合过程、动物细胞融合过程 为什么灭活的为什么灭活
3、的病毒能作诱导剂病毒能作诱导剂？灭活丧失感染性灭活丧失感染性保留融合活性保留融合活性5PPT学习交流3 3、动物、动物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术的意义和应用6PPT学习交流比较比较项目项目细胞融合细胞融合的原理的原理细胞融合的方法细胞融合的方法 诱导手段诱导手段用途用途植物体植物体细胞杂细胞杂交交细胞膜的细胞膜的流动性和流动性和细胞的全细胞的全能性能性纤维素酶、纤维素酶、果胶酶果胶酶去除去除细胞壁细胞壁后诱后诱导原生质体导原生质体融合融合离心、电刺离心、电刺激、振动、激、振动、聚乙二醇聚乙二醇克服远源克服远源杂交不亲杂交不亲和，和，获得获得杂种植株杂种植株动物细动物细胞融合胞融合细胞
4、膜的细胞膜的流动性流动性用用胰蛋白酶胰蛋白酶使细胞分散使细胞分散后诱导细胞后诱导细胞融合融合除应用植物除应用植物细胞杂交手细胞杂交手段外，段外，还有还有灭活病毒灭活病毒获得杂种细获得杂种细胞、胞、制备制备单克隆抗单克隆抗体体4 4、比较动、植物细胞杂交技术、比较动、植物细胞杂交技术7PPT学习交流1 1、能使动物细胞融合的特有的诱导因子是、能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 （ ）A.A.离心离心 B.B.灭活的病毒灭活的病毒 C.C.电刺激电刺激 D.D.振动振动2 2、融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（、融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（ ）A.A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息具有
5、原来两个或多个细胞的遗传信息 B.B.能无限增殖能无限增殖 C.C.可形成新个体可形成新个体 D.D.培养过程会贴壁培养过程会贴壁3 3、动物细胞融合的作用中最重要的是（、动物细胞融合的作用中最重要的是（ ）A.A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 B.B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.C.培育新物种培育新物种 D.D.生产杂种细胞生产杂种细胞 B BB BA A8PPT学习交流抗体：抗体：能够与抗原发生特能够与抗原发生特异性结合的异性结合的免疫球蛋白免疫球蛋白。能能产生抗体产生抗体的细胞是的细胞是浆细浆细胞（即效应胞（即效应B B细胞）。细胞）。二、单克隆抗体二、单克隆抗体9PPT学
6、习交流抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法抗原抗原 反复注射动物反复注射动物从动物的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的缺点：该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度体的特异性差、灵敏度低。低。10PPT学习交流读下面一段资料，读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B B细胞细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B B细胞只细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的
7、分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个单一抗体，必须用单个B B细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。1 1、单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念单克隆单克隆抗体：抗体：单个单个B B细胞细胞( (浆细胞浆细胞) )克隆产生的克隆产生的化学性质单一、特异性强化学性质单一、特异性强的抗体的抗体11PPT学习交流提示提示1 1：对：对B B细胞进行细胞培养可行吗？细胞进行细胞培养可行吗？提示提示2 2：我们所学的哪种细胞是可以无限：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？增殖的？问题：问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计
8、一个方案。一个方案。2 2、单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备12PPT学习交流一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术设计方案：设计方案：动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆单克隆抗体抗体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞又能大量增殖的细胞13PPT学习交流为什么给小鼠注射特定的为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？抗原蛋白？ 会有几种融合方式？会有几种融合方式？ 杂交瘤细胞是如何筛选出杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？来的？有何特点？ 是否所
9、有的杂交瘤细胞都是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？能产生专一性抗体？ 如何大规模进行培养得到如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？大量的单克隆抗体？14PPT学习交流BBBB 、B B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （B B、瘤）、瘤）（一选）（一选）选选择性培养基：择性培养基：只有只有杂交瘤杂交瘤细胞细胞才能存才能存活活获得产生相应获得产生相应抗体的抗体的B B细胞细胞（二选）：（二选）：选选能产生所需专能产生所需专一抗体的杂交一抗体的杂交瘤细胞瘤细胞15PPT学习交流单抗制备过程分哪几步？单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母
10、按正确顺序连接起来。顺序是？程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？ 16PPT学习交流3 3、单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用诊断试剂诊断试剂最广泛应用最广泛应用准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，特异性强，灵敏度高，并能大量制备。并能大量制备。17PPT学习交流“生物导弹生物导弹” ” 单克隆抗体药物单克隆抗体药物 单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头主要用于治疗主要用于治疗癌症治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成癌药物，形成“生物导弹生物导弹”，准确杀伤癌变细
11、胞。准确杀伤癌变细胞。18PPT学习交流两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个新细胞一个新细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势单克隆抗体特异性单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势19PPT学习交流1 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是瘤细胞融合的是 （ ） A. A.经过免疫的经过免
12、疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 C. C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 B. B.不经过免疫的不经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D. D.不经过免疫的不经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞2 2、单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的、单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （ ）A. BA. B淋巴细胞淋巴细胞 B BT T淋巴细胞淋巴细胞 C C骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞 DD杂交瘤细胞杂交瘤细胞A ADD20PPT学习交流3 3、用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤、用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（中错误的是（ ）A A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的将抗原
13、注入小鼠体内，获得能产生抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞B B用纤维素酶处理用纤维素酶处理B B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合与小鼠骨髓瘤细胞融合DD筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体培养后提取单克隆抗体B B21PPT学习交流4 4、(1)(1)若若A A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B B细胞是取自细胞是取自小鼠体内的小鼠体内的 细胞，细胞，从小鼠体内提取分离
14、该细从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射胞之前，应给小鼠注射_类物质。类物质。（2）d过程是一个过程是一个_过程，该过程的进过程，该过程的进行常用行常用_或或_的诱导。的诱导。(3)(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 种种类型的类型的C C细胞，因此需用细胞，因此需用_培养基筛选出培养基筛选出D D细细胞用于培养，胞用于培养，D D细胞的名称是细胞的名称是 ，其特点，其特点是是_。效应效应B B抗原抗原细胞融合细胞融合聚乙二醇聚乙二醇选择性选择性 3 3既能无限增殖又能产生特异性抗体既能无限增殖又能产生特异性抗体 杂交瘤细胞杂交瘤细胞灭活的病毒
15、灭活的病毒 22PPT学习交流(4)(4)在培养时通过在培养时通过_分裂方式大量繁殖。分裂方式大量繁殖。D D细胞细胞体外培养需要注意的条件是（要求答体外培养需要注意的条件是（要求答5 5项）项）_。（5 5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是与常规抗体相比，其特点是_。特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 有丝有丝 无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pHpH；适宜的气体环境；适宜的气体环境 23PPT学习交流单抗制备过程分哪几步？单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单
16、克隆抗体制备过请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？ 24PPT学习交流5 5、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，、右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：据图回答：（1 1）该方案能达到预期效果吗？）该方案能达到预期效果吗？ 。原因是。原因是_（2 2）图中为）图中为 过程，过程，常用常用 作为诱导剂。该细胞作为诱导剂。该细胞继承了继承了_，因此，因此不仅能分泌不仅能分泌_，还有还有 本领。本领。（3 3）该方案的目的）该方案的目的不能不能 没有将抗原注入小鼠体内，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生专一抗体的无法获得产生专一抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒 双亲细胞的遗传物质双亲细胞的遗传物质特异性抗体特异性抗体 大量增殖大量增殖制备单克隆抗体制备单克隆抗体25PPT学习交流
