1、第第5050课时课时 植物的组织培养技术及植物的组织培养技术及 DNADNA和蛋白质技术和蛋白质技术1.1.人参是一种名贵中药人参是一种名贵中药 材，其有效成分主要是人参皂材，其有效成分主要是人参皂苷。利用细胞培养苷。利用细胞培养 技术生产人参皂苷的大致流程如下：技术生产人参皂苷的大致流程如下：请回答：请回答：（1 1）配制诱导愈伤组织的固体培养基）配制诱导愈伤组织的固体培养基, ,分装后要进行分装后要进行 。接种前，要对人参根进行接种前，要对人参根进行 。（2 2）用于离体培养的根切块，叫做）用于离体培养的根切块，叫做 。培养。培养几天后发现少数培养基被污染，若是有颜色的绒毛几天后发现少数培
2、养基被污染，若是有颜色的绒毛状菌落，属于状菌落，属于 污染；若是有光泽的黏液状污染；若是有光泽的黏液状菌落，属于菌落，属于 污染。污染。（3 3）用少量）用少量 酶处理愈伤组织，获取单细酶处理愈伤组织，获取单细胞或小细胞团，在液体培养基中进行悬浮培养，可胞或小细胞团，在液体培养基中进行悬浮培养，可有效提高人参皂苷合成量。有效提高人参皂苷合成量。（4 4）人参皂苷易溶于水溶性（亲水性）有机溶液，）人参皂苷易溶于水溶性（亲水性）有机溶液，从培养物干粉中提取人参皂苷宜选用从培养物干粉中提取人参皂苷宜选用 方法，方法，操作时应采用操作时应采用 加热。加热。解析解析 (1)(1)灭菌是指用强烈的物理或化
3、学的方法，杀灭菌是指用强烈的物理或化学的方法，杀死物体内外的一切微生物，包括芽孢和孢子。消毒死物体内外的一切微生物，包括芽孢和孢子。消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。在组织培养过或内部一部分对人体有害的微生物。在组织培养过程中要防止杂菌的污染，需要对固体培养基进行灭程中要防止杂菌的污染，需要对固体培养基进行灭菌，对人参根进行消毒。菌，对人参根进行消毒。（2 2）用于离体培）用于离体培养的离体的植物组织或器官（根切养的离体的植物组织或器官（根切块）称为外植体。单个或少数微生物细胞生长繁殖块）称为外植体。单个
4、或少数微生物细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一后，会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团，这就是菌落。我们可以定形态构造的子细胞集团，这就是菌落。我们可以根据菌落的特征判断微生物的种类。霉菌的菌落较根据菌落的特征判断微生物的种类。霉菌的菌落较大，肉眼可见许多毛状物，呈棕色、青色等，细菌大，肉眼可见许多毛状物，呈棕色、青色等，细菌菌落常表现为湿润、黏稠，有光泽。菌落常表现为湿润、黏稠，有光泽。（3 3）果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁和胞）果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的细胞壁和胞间层，使愈伤组织分离。间层，使愈伤组织分离。（4 4）人参皂苷溶于水
5、溶性有机溶剂，可以用萃取法）人参皂苷溶于水溶性有机溶剂，可以用萃取法从培养物干粉中提取。萃取时要采用水浴加热，这从培养物干粉中提取。萃取时要采用水浴加热，这是因为有机溶剂都是易燃物，用明火加热容易引起是因为有机溶剂都是易燃物，用明火加热容易引起燃烧、爆炸。燃烧、爆炸。 答案答案 （1 1）灭菌）灭菌 消毒消毒 （2 2）外植体）外植体 真菌（霉菌）真菌（霉菌）细菌细菌 （3 3）果胶）果胶 （4 4）萃取）萃取( (浸取浸取) ) 水浴水浴2.2.下图是月季花药离体培养产生花粉植株的两种途下图是月季花药离体培养产生花粉植株的两种途 径，请据图回答有关问题：径，请据图回答有关问题： （1 1）选
6、用的材料合适与否是成功诱导出花粉植株）选用的材料合适与否是成功诱导出花粉植株 的重要因素，一般来说选用的重要因素，一般来说选用 期的花粉可提期的花粉可提 高成功率。选择花粉时，一般要通过高成功率。选择花粉时，一般要通过 来来 确定花粉是否处于合适的发育期，这时需要对花确定花粉是否处于合适的发育期，这时需要对花粉的细胞核进行染色，常用的染色剂是粉的细胞核进行染色，常用的染色剂是 。（2 2）上图中花药经脱分化产生胚状体还是愈伤组）上图中花药经脱分化产生胚状体还是愈伤组 织主要取决于培养基中织主要取决于培养基中 。（3 3）胚状体与愈伤组织在结构上的主要区别在于）胚状体与愈伤组织在结构上的主要区别
7、在于 愈伤组织的细胞排列疏松无规则，是一种高度愈伤组织的细胞排列疏松无规则，是一种高度 的的 薄壁细胞。胚状体与薄壁细胞。胚状体与 发发 育形成的胚有类似的结构，即具有胚芽、胚轴和育形成的胚有类似的结构，即具有胚芽、胚轴和 胚根。胚根。（4 4）无菌技术也是成功诱导出花粉植株的重要因素，）无菌技术也是成功诱导出花粉植株的重要因素，请说明下列各项需要消毒，还是需要灭菌。请说明下列各项需要消毒，还是需要灭菌。培养基，培养基，培养皿，培养皿，接种环，接种环，花蕾，花蕾，实验实验操作者的双手，操作者的双手，三角锥形瓶。三角锥形瓶。 ( (填编号填编号) )需要灭菌需要灭菌, , （填编号）需（填编号）
8、需要消毒。要消毒。（5 5）试管苗移栽到土壤前，通常要进行壮苗处理，）试管苗移栽到土壤前，通常要进行壮苗处理，应如何壮苗？应如何壮苗？ 。解析解析 （1 1）并不是任何时期的花粉都可以培养产生）并不是任何时期的花粉都可以培养产生愈伤组织或胚状体，只有花粉发育到一定时期对离愈伤组织或胚状体，只有花粉发育到一定时期对离体的刺激才最敏感。对大多数植物而言，单核中期体的刺激才最敏感。对大多数植物而言，单核中期至晚期的花粉最容易形成花粉胚或花粉愈伤组织。至晚期的花粉最容易形成花粉胚或花粉愈伤组织。在培养花药之前，通常用醋酸洋红染色制片法制片在培养花药之前，通常用醋酸洋红染色制片法制片镜检以确定花粉发育时
9、期镜检以确定花粉发育时期。（。（2 2）花药培养产生花粉）花药培养产生花粉植株一般有两种途径：其一是花药中的花粉通过胚植株一般有两种途径：其一是花药中的花粉通过胚状体阶段发育为小植株；其二是花药中花粉在诱导状体阶段发育为小植株；其二是花药中花粉在诱导培养基上先形成愈伤组织，再诱导其分化成植株。培养基上先形成愈伤组织，再诱导其分化成植株。两种途径并无绝对界限，主要取决于培养基中的激两种途径并无绝对界限，主要取决于培养基中的激素种类及其浓度配比。素种类及其浓度配比。（3 3）愈伤组织是一团高度液）愈伤组织是一团高度液泡化的薄壁细胞，植物组织培养得泡化的薄壁细胞，植物组织培养得到的胚状体与正到的胚状
10、体与正常受精卵发育成的胚均有胚芽、胚常受精卵发育成的胚均有胚芽、胚根和胚轴。根和胚轴。（4 4）灭菌是用理化方法杀死环境中所有的微生物灭菌是用理化方法杀死环境中所有的微生物细胞、芽孢和孢子。消毒是杀死物体表面的病原细胞、芽孢和孢子。消毒是杀死物体表面的病原微生物。在微生物培养过程中通常对培养基、培微生物。在微生物培养过程中通常对培养基、培养皿、接种环、三角锥形瓶，进行灭菌处理；对养皿、接种环、三角锥形瓶，进行灭菌处理；对花蕾、实验操作者的双手进行消毒处理。花蕾、实验操作者的双手进行消毒处理。答案答案 （1 1）单核）单核 镜检（显微镜观察）镜检（显微镜观察） 醋酸洋红醋酸洋红（2 2）激素的种
11、类及其浓度配比）激素的种类及其浓度配比（3 3）液泡化）液泡化 正常受精卵（或受精卵）正常受精卵（或受精卵）（4 4） （5 5）将试管苗移栽到经消毒过的培养基中生活一）将试管苗移栽到经消毒过的培养基中生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中3.3.下图为下图为“DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定”的实验装置，请的实验装置，请 回答问题。回答问题。（1 1）实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血，）实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血， 主要原因是鸡血细胞液中主要原因是鸡血细胞液中 含量较高。含量较高。（2 2）在图）在图A A所示的实验步骤中加蒸馏水所示
12、的实验步骤中加蒸馏水20 20 mLmL的的 目的是目的是 ，通过，通过 图图B B所示的步骤取得滤液所示的步骤取得滤液, ,再在滤液中加入再在滤液中加入2 2 mol/Lmol/L 的的NaClNaCl溶液的目的是溶液的目的是 ； 图图C C所示实验步骤中加蒸馏水的目的是所示实验步骤中加蒸馏水的目的是 。（3 3）为鉴定实验所得丝状物的主要成分是）为鉴定实验所得丝状物的主要成分是DNADNA， 可滴加可滴加 溶液，结果丝状物被染成绿色。溶液，结果丝状物被染成绿色。（4 4）a a试管为对照组，试管为对照组，b b试管为实验组。试管为实验组。a a试管现象试管现象 ；b b试管现象试管现象。在
13、沸水中加热的目的是在沸水中加热的目的是 ，同时，同时说明说明DNADNA对高温有较强的对高温有较强的 。a a试管在实验中的作用是试管在实验中的作用是 。b b试管中溶液颜色的变化程度主要与有关试管中溶液颜色的变化程度主要与有关 。解析解析 “DNADNA粗提取与鉴定粗提取与鉴定”的实验材料选用鸡血细的实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血，主要原因是胞液，而不用鸡全血，主要原因是DNADNA主要储存于主要储存于细胞核内，而不在血浆内，使用鸡血细胞液提高材细胞核内，而不在血浆内，使用鸡血细胞液提高材料中的细胞数量和料中的细胞数量和DNADNA含量，从而可以保证实验提含量，从而可以保证实验提取到的
14、取到的DNADNA数量。图数量。图A A、B B、C C所示为本实验的三个所示为本实验的三个关键步骤。图关键步骤。图A A通过添加蒸馏水，通过添加蒸馏水，血细胞与蒸馏水相血细胞与蒸馏水相混合而使血细胞处于极低浓度的溶液中，细胞因大混合而使血细胞处于极低浓度的溶液中，细胞因大量吸水而导致最终破裂，并量吸水而导致最终破裂，并释放出胞内物。图释放出胞内物。图B B通过通过纱布过滤使血细胞释放出的纱布过滤使血细胞释放出的DNADNA滤入收集的滤液中滤入收集的滤液中（将大量胶状物滤出），再在滤液中加入（将大量胶状物滤出），再在滤液中加入2 mol/L2 mol/L的的NaClNaCl溶液使溶液使DNAD
15、NA的溶解度增加。图的溶解度增加。图C C在在DNADNA浓盐溶浓盐溶液中加入蒸馏水（大量），可使溶液的液中加入蒸馏水（大量），可使溶液的NaClNaCl浓度降浓度降至较底，由于至较底，由于DNADNA在较低浓度的在较低浓度的NaClNaCl溶液中溶解度溶液中溶解度很低（在很低（在0.14 mol/L0.14 mol/L的的NaClNaCl溶液中溶解度最低，浓度溶液中溶解度最低，浓度再变小则再变小则DNADNA溶解度将增大），使溶解度将增大），使DNADNA析出，经过析出，经过滤等手段可以收集到滤等手段可以收集到DNADNA。甲基绿为比较常用的细。甲基绿为比较常用的细胞核染色剂，染色后细胞核中
16、染色体呈绿色，属碱胞核染色剂，染色后细胞核中染色体呈绿色，属碱性染料，可以用来鉴定性染料，可以用来鉴定DNADNA。答案答案 （1 1）DNA DNA （2 2）使血细胞吸水涨破，放出）使血细胞吸水涨破，放出DNA DNA 使滤液中的使滤液中的DNADNA溶于浓盐溶液溶于浓盐溶液 使使DNADNA析出析出 （3 3）甲基绿）甲基绿 （4 4）溶液不变蓝溶液不变蓝 溶液溶液变蓝变蓝 加快颜色反应速度加快颜色反应速度 耐受性耐受性 对照对照加入加入DNADNA（丝状物）的多少（丝状物）的多少4.20084.2008年年5 5月月2020日民政部等制订汶川大地震遇难人日民政部等制订汶川大地震遇难人
17、员遗体处理意见指出，无法确认遇难者身份的，员遗体处理意见指出，无法确认遇难者身份的， 由公安部门提取可供由公安部门提取可供DNADNA检验的检材以便事后检验的检材以便事后 身份辨认。事后的遗体辨认可借助于身份辨认。事后的遗体辨认可借助于DNADNA杂交杂交 技术，即从遗体细胞与死者家属提供的死者生技术，即从遗体细胞与死者家属提供的死者生 前生活用品中分别提取前生活用品中分别提取DNADNA，然后借助，然后借助DNADNA杂杂 交技术对遗体进行确认。据此回答：交技术对遗体进行确认。据此回答： （1 1）为了确保辨认的准确性，需要克隆出较多）为了确保辨认的准确性，需要克隆出较多 的的DNADNA样
18、品。这需借助样品。这需借助PCRPCR技术。使用技术。使用PCRPCR技术技术 的具体实验操作顺序是：的具体实验操作顺序是：按配方准备好各组分按配方准备好各组分 离心使反应液离心使反应液集中在离心管底部集中在离心管底部设计好设计好PCRPCR仪的循环程序仪的循环程序进进行行PCRPCR反应。反应。请写出图中方框的步骤请写出图中方框的步骤: : ，该步操作应特别注意的问题是该步操作应特别注意的问题是 。（2 2）上表所示为分别从死者遗体和死者生前的生）上表所示为分别从死者遗体和死者生前的生活用品中提取的三条活用品中提取的三条相同染色体上的同一区段相同染色体上的同一区段DNADNA单链的碱基序列，
19、根据碱基互补配对情况进行判单链的碱基序列，根据碱基互补配对情况进行判断，断，A A、B B、C C三组三组DNADNA中不是同一人的是中不是同一人的是 。（3 3）为什么从死者体细胞与死者家属提供的其生）为什么从死者体细胞与死者家属提供的其生前生活用品中分别提取的前生活用品中分别提取的DNADNA可以完全互补配对？可以完全互补配对？。解析解析 PCRPCR技术是一种体外迅速扩增技术是一种体外迅速扩增DNADNA片段的技片段的技术，它能以极少量的术，它能以极少量的DNADNA为模板，在几小时内复制为模板，在几小时内复制出上百万份的出上百万份的DNADNA拷贝。这项技术有效地解决了因拷贝。这项技术
20、有效地解决了因为样品中为样品中DNADNA含量太低而难以对样品进行分析研究含量太低而难以对样品进行分析研究的问题，被广泛地应用于遗传疾病的诊断、刑侦破的问题，被广泛地应用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和案、古生物学、基因克隆和DNADNA序列测定等领域。序列测定等领域。DNADNA杂交技术方法是从遗体细胞和死者家属提供的杂交技术方法是从遗体细胞和死者家属提供的死者生前的生活用品中分别提取死者生前的生活用品中分别提取DNADNA，在一定温度，在一定温度下，水浴共热，使下，水浴共热，使DNADNA氢键断裂，双链打开。若两氢键断裂，双链打开。若两份份DNADNA样本来自同一个体，在温
21、度降低时，两份样样本来自同一个体，在温度降低时，两份样本中的本中的DNADNA单链通过氢键连接在一起，若不是来自单链通过氢键连接在一起，若不是来自同一个体，则两份样本中的同一个体，则两份样本中的DNADNA单链在一定程度上单链在一定程度上不能互补，不能互补，DNADNA杂交技术就是通过这一过程对面目杂交技术就是通过这一过程对面目全非的死者进行辨认的。全非的死者进行辨认的。答案答案 （1 1）用微量移液器在微量离心管中依次加入）用微量移液器在微量离心管中依次加入各组分各组分 PCRPCR实验使用的微量离心管、枪头、缓冲实验使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌液以及蒸
22、馏水等在使用前必须进行高压灭菌（2 2）B B、C C （3 3）人体所有体细胞均由一个受精卵有）人体所有体细胞均由一个受精卵有丝分裂产生，其细胞核中均含有相同的遗传物质丝分裂产生，其细胞核中均含有相同的遗传物质5.5.对血红蛋白（对血红蛋白（HbHb）的研究结果表明，血红蛋白实际）的研究结果表明，血红蛋白实际 上是由珠蛋白、原卟琳和二价铁离子（上是由珠蛋白、原卟琳和二价铁离子（FeFe2+2+）所组成）所组成 的结合蛋白质，由的结合蛋白质，由4 4条肽链条肽链各结合一个辅基即血红各结合一个辅基即血红 素，素，O O2 2结结合于合于FeFe2+2+上，血红上，血红蛋白与氧疏蛋白与氧疏松结合形
23、成氧松结合形成氧 合血红蛋白（合血红蛋白（HbOHbO2 2）, ,这这种氧合作用在氧分压高时容种氧合作用在氧分压高时容 易进行，在氧分压低时易于解离。红细胞结合和携易进行，在氧分压低时易于解离。红细胞结合和携 带带O O2 2的过程并不影响的过程并不影响FeFe2+2+，也就是说不会使之氧化，也就是说不会使之氧化 为为FeFe3+3+。FeFe3+3+无携带无携带O O2 2的能力。的能力。COCO与与HbHb的亲和力大的亲和力大 于于O O2 2，结合成，结合成HbCOHbCO后不能分离，致使后不能分离，致使HbHb丧失运输丧失运输 O O2 2和和COCO2 2的机能，这称为一氧化碳中毒
24、即煤气中毒。的机能，这称为一氧化碳中毒即煤气中毒。（1 1）用凝胶色谱法分离血红蛋白时，待）用凝胶色谱法分离血红蛋白时，待 接接 近色谱柱底端时，才用试管收集。血红蛋白因含近色谱柱底端时，才用试管收集。血红蛋白因含 而呈现红色。而呈现红色。（2 2）要使血红蛋白从红细胞中释放出来，可选用的）要使血红蛋白从红细胞中释放出来，可选用的 方法是方法是 。（3 3）红细胞具有运输氧的功能，是因为）红细胞具有运输氧的功能，是因为 。（4 4）亚硝酸盐为强氧化剂，进入人体后，可使血红）亚硝酸盐为强氧化剂，进入人体后，可使血红 蛋白失去运输氧的功能，导致人体组织缺氧，其可蛋白失去运输氧的功能，导致人体组织缺
25、氧，其可 能的原因是能的原因是 。解析解析 用凝胶色谱法分离血红蛋白时，血红蛋白因用凝胶色谱法分离血红蛋白时，血红蛋白因含血红素而呈现红色，待红色区带接近色谱柱底端含血红素而呈现红色，待红色区带接近色谱柱底端时，才用试管收集。将红细胞置于蒸馏水中时，才用试管收集。将红细胞置于蒸馏水中, ,加加40%40%体积的甲苯，搅拌使体积的甲苯，搅拌使红细胞破裂并释放出血红蛋白。红细胞破裂并释放出血红蛋白。红细胞中的血红蛋白与氧在氧分压高时容易结合，红细胞中的血红蛋白与氧在氧分压高时容易结合，在氧分压低时又容易分离。亚硝酸盐可将血细胞中在氧分压低时又容易分离。亚硝酸盐可将血细胞中低铁血红蛋白氧化成高铁血红
26、蛋白，从而使其失去低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，从而使其失去与氧结合的能力。与氧结合的能力。答案答案 （1 1）红色区带）红色区带 血红素血红素 （2 2）将红细胞置于）将红细胞置于蒸馏水中，加蒸馏水中，加40%40%体积的甲苯，搅拌使之破裂并释体积的甲苯，搅拌使之破裂并释放血红蛋白放血红蛋白 （3 3）红细胞中的血红蛋白与氧在氧）红细胞中的血红蛋白与氧在氧分压高时容易结合，在氧分压低时又容易分离分压高时容易结合，在氧分压低时又容易分离 （4 4）亚硝酸盐可使血细胞中低铁血红蛋白氧化成）亚硝酸盐可使血细胞中低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白高铁血红蛋白6.6.PCRPCR（多聚酶链式反应）技术是
27、一项在生物体外（多聚酶链式反应）技术是一项在生物体外 复制特定的复制特定的DNADNA片段的核酸合成技术，下图表示片段的核酸合成技术，下图表示 合成过程，请据图分析回答：合成过程，请据图分析回答：（1 1）A A过程高温使过程高温使DNADNA变性解旋，对该过程的原变性解旋，对该过程的原 理叙述，正确的是理叙述，正确的是 。A.A.该过程用到耐高温的解旋酶破坏氢键该过程用到耐高温的解旋酶破坏氢键B.B.该过程用到限制酶破坏磷酸二酯键该过程用到限制酶破坏磷酸二酯键C.C.该过程不需要解旋酶的作用该过程不需要解旋酶的作用D.D.该过程与人体细胞的过程完全相同该过程与人体细胞的过程完全相同（2 2）
28、C C过程要用到的酶是。这种酶在高温下仍保持过程要用到的酶是。这种酶在高温下仍保持 活性，因此在活性，因此在PCRPCR扩增时可以扩增时可以 加入加入, （需（需 要要/ /不需要）再添加。不需要）再添加。PCRPCR反应除提供酶外，还需要反应除提供酶外，还需要满足的基本条件有满足的基本条件有: : 。（3 3）如果把模板）如果把模板DNADNA的两条链用的两条链用1515N N标记，游离的标记，游离的 脱氧核苷酸不做脱氧核苷酸不做标记，控制标记，控制“9494555572”72”温温 度循环度循环3 3次，则在次，则在形成的子代形成的子代DNADNA中含有中含有1515N N标记的标记的 D
29、NADNA占占 。（4 4）如果模板）如果模板DNADNA分子共有分子共有a a个碱基对，其中含有个碱基对，其中含有 胞嘧啶胞嘧啶m m个，则该个，则该DNADNA复制复制1010次，需要加入胸腺嘧次，需要加入胸腺嘧 啶脱氧核苷酸个啶脱氧核苷酸个 。（5 5）PCRPCR中由碱基错配引起的变异属于中由碱基错配引起的变异属于 。 假设对一个假设对一个DNADNA进行扩增，第一次循环时某一条进行扩增，第一次循环时某一条 模板链上发生碱基错配，则扩增若干次后检测所模板链上发生碱基错配，则扩增若干次后检测所 用用DNADNA的扩增片段，与原的扩增片段，与原DNADNA相应片段相同的占相应片段相同的占
30、。解析解析（1 1）高温所起的作用类似于解旋酶，使双链）高温所起的作用类似于解旋酶，使双链DNADNA变为单链。（变为单链。（2 2）C C过程为过程为PCRPCR技术的延伸阶技术的延伸阶段，当系统温度上升至段，当系统温度上升至7272左右，溶液中的四种脱左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在氧核苷酸在DNADNA聚合酶的作用下合成新的聚合酶的作用下合成新的DNADNA链。链。TaqTaq DNA DNA聚合酶是耐热的，高温下不变性，所以一聚合酶是耐热的，高温下不变性，所以一次性加入即可。（次性加入即可。（3 3）PCRPCR技术遵循半保留复制的特技术遵循半保留复制的特点。经过三次循环，共产生点。经过
31、三次循环，共产生2323个个DNADNA分子，其中有分子，其中有2 2个个DNADNA分子含有分子含有1515N N标记。（标记。（4 4）在一个双链）在一个双链DNADNA分子中，分子中，C+TC+T占碱基总数的一半，故占碱基总数的一半，故T T的数目为的数目为a-ma-m，复制，复制1010次，相当于新增加了次，相当于新增加了2 21010-1-1个个DNADNA分子。分子。故需补充故需补充T T的数目为（的数目为（2 21010-1-1）（）（a-ma-m）。（）。（5 5）基因）基因中的碱基对中的碱基对改变属于基因突变。对一个改变属于基因突变。对一个DNADNA进行扩进行扩增，第一次循
32、环时某一条模板链上发生碱基错配，增，第一次循环时某一条模板链上发生碱基错配，以后按正常配对方式进行扩增，错配链作模板扩增以后按正常配对方式进行扩增，错配链作模板扩增的都是错误的的都是错误的DNADNA分子，分子，原正常链扩增得到的原正常链扩增得到的DNADNA分子都是正常的分子都是正常的DNADNA分子，故若干次后检测所用分子，故若干次后检测所用DNADNA的扩增片段，与原的扩增片段，与原DNADNA相应片段相同的占相应片段相同的占3/43/4。答案答案 （1 1）C C （2 2）TaqTaq DNA DNA聚合酶聚合酶 一次一次 不需要不需要 DNADNA模板，分别与两条模板链相结合的模板
33、，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，同时通过控制温度使两种引物，四种脱氧核苷酸，同时通过控制温度使DNADNA复制在体外反复进行复制在体外反复进行（3 3）25% 25% （4 4）（）（2 21010-1-1）（）（a-ma-m）（）（5 5）基因突变）基因突变75%75%7 7. .红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是 由血红蛋白完成的由血红蛋白完成的, ,血红蛋白的主要功能是携带血红蛋白的主要功能是携带O O2 2 或或COCO2 2，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物 的血液进行实验
34、，来提取和分离血红蛋白，请回的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回 答下列有关问题：答下列有关问题：（1 1）血红蛋白提取和分离的程序可分为四步）血红蛋白提取和分离的程序可分为四步: : 、 、 和和 。（2 2）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中 预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心， 收集血红蛋白溶液。收集血红蛋白溶液。加入柠檬酸钠的目的是加入柠檬酸钠的目的是 。以上所述的过程即是样品处理，它包括以上所述的过程即是样品处理，它包括 、 、收集血红蛋白溶液。、收集血红蛋白溶液。（3 3）收集的血红蛋
35、白溶液在透析袋中可以经过透）收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗分离。析，这就是样品的粗分离。透析的目的是透析的目的是 。透析的原理是透析的原理是 。（4 4）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经后经SDS-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。样品纯化的目的是样品纯化的目的是 。血红蛋白有什么特点？血红蛋白有什么特点？ 。这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义？这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义？ 。解析解析 本题主要考查蛋白质分离与鉴定的基本原理及本题主要考查蛋白质分离与鉴定的基本原理及实验
36、流程。分离、提取血红蛋白的实验流程大致是实验流程。分离、提取血红蛋白的实验流程大致是样品处理样品处理粗分离粗分离纯化纯化纯度鉴定四个步骤。柠纯度鉴定四个步骤。柠檬酸钠属于抗凝剂。血红蛋白是红色含铁的蛋白质。檬酸钠属于抗凝剂。血红蛋白是红色含铁的蛋白质。凝胶色谱法分离蛋白质是依据蛋白质的相对分子质凝胶色谱法分离蛋白质是依据蛋白质的相对分子质量大小来进行的。量大小来进行的。答案答案 （1 1）样品处理）样品处理 粗分离粗分离 纯化纯化 纯度鉴定纯度鉴定（2 2）防止血液凝固防止血液凝固 红细胞的洗涤红细胞的洗涤 血红蛋白血红蛋白的释放的释放（3 3）去除相对分子质量较小的杂质去除相对分子质量较小的
37、杂质 透析袋能透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内使小分子自由进出，而大分子则保留在袋内（4 4）通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去白除去 血红蛋白呈现红色血红蛋白呈现红色 在用凝胶色谱法分在用凝胶色谱法分离时可以通过观察颜色来判断什么时期应该收集洗离时可以通过观察颜色来判断什么时期应该收集洗脱液；这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简脱液；这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作化了实验操作8. 8. 血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中成分，负责血液中O O2
38、 2和部分和部分COCO2 2的运输。请根据血的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。红蛋白的提取和分离流程图回答问题。（1 1）将实验流程补充完整）将实验流程补充完整:A:A为为 ，B B为为 。 凝胶色谱法的基本原理是根据凝胶色谱法的基本原理是根据 而达而达 到蛋白质分离的有效方法。到蛋白质分离的有效方法。（2 2）洗涤红细胞的目的是去除）洗涤红细胞的目的是去除 ，洗涤次数过，洗涤次数过 少，无法除去少，无法除去 ；离心速度过高和时间过长；离心速度过高和时间过长 会使会使 一同沉淀，达不到分一同沉淀，达不到分 离的效果。洗涤干净的标志是离的效果。洗涤干净的标志是 。 释放血红蛋白
39、的过程中起作用的是释放血红蛋白的过程中起作用的是 。（3 3）在洗脱过程中加入物质的量浓度为）在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol20 mmol/L/L 的磷酸缓冲液（的磷酸缓冲液（pHpH为为7.07.0）的目的是）的目的是 。如果红色区带。如果红色区带 ，说明色谱柱制作成功。，说明色谱柱制作成功。答案答案 （1 1）血红蛋白的释放）血红蛋白的释放 样品的加入和洗脱样品的加入和洗脱 相对分子质量的大小相对分子质量的大小 （2 2）杂蛋白（血浆蛋白）杂蛋白（血浆蛋白） 血浆蛋白血浆蛋白 白细胞和淋巴细胞白细胞和淋巴细胞 离心后的上清液离心后的上清液中没有黄色中没有黄色 蒸馏水和甲苯蒸馏水和甲苯 （3 3）准确模拟生物）准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的体内的生理环境，保持体外的pHpH和体内的一致和体内的一致 均匀一致的移动均匀一致的移动
