1、血型与交叉配血血型与交叉配血主要内容：w红细胞血型概述红细胞血型概述w抗体检查和鉴定抗体检查和鉴定w交叉配血方法交叉配血方法w日常工作中问题对策日常工作中问题对策血型的发现血型的发现w 1900年，奥地年，奥地利科学家利科学家兰德兰德斯坦纳斯坦纳红细胞红细胞血清血清凝集凝集不凝集不凝集遇到遇到红细胞抗原红细胞抗原w 血型系统血型系统（Blood group systemsBlood group systems）29 24529 245w 血型集合血型集合（ Blood group collectionsBlood group collections）6 126 12w 血型系列血型系列（ser
2、iesseries）：）： 低频率系列（低频率系列（700 series700 series，low-incidence low-incidence antigens) 33 antigens) 33 高频率系列高频率系列 (901 serise,high-incidence (901 serise,high-incidence antigens) 12 antigens) 12Rh血型系统w DuDu比正常比正常D D阳性细胞抗原弱，但一旦输给阳性细胞抗原弱，但一旦输给RhRh阴性的受血者后，自然有免疫产生抗阴性的受血者后，自然有免疫产生抗D D的可的可能。同时能。同时DuDu型人者接受型人
3、者接受RhRh阳性的细胞后，也阳性的细胞后，也有可能产生抗有可能产生抗D D抗体。抗体。 w 作为供血者，作为供血者，DuDu型归类为型归类为RhRh阳性，阳性， 作为受血者作为受血者DuDu型归类为型归类为RhRh阴性者。阴性者。红细胞抗体红细胞抗体(1)w 预期抗体预期抗体：若已知红细胞：若已知红细胞ABOABO血型，按血型，按 LandsteinerLandsteiner s s法则可预知的法则可预知的ABOABO血型血型 抗体，即抗抗体，即抗-A-A和抗和抗-B-B。 预期抗体也叫做规则抗体预期抗体也叫做规则抗体w 意外抗体意外抗体：抗：抗-A-A或抗或抗-B-B以外的抗体。在以外的抗
4、体。在ABOABO亚型亚型 中，变异的抗中，变异的抗-A-A1 1或某种抗或某种抗-B-B等抗体，等抗体， 也称为意外抗体。也称为意外抗体。 意外抗体过去也叫做不规则抗体意外抗体过去也叫做不规则抗体红细胞抗体红细胞抗体(2)w 天然抗体天然抗体：没有可察觉的抗原刺激，而机体对抗原免：没有可察觉的抗原刺激，而机体对抗原免疫应答的产物。天然抗体多为疫应答的产物。天然抗体多为IgMIgM抗体，能与含有相应抗体，能与含有相应抗原的红细胞结合，在盐水介质中出现肉眼可见的凝集抗原的红细胞结合，在盐水介质中出现肉眼可见的凝集反应，所以也叫盐水抗体。反应，所以也叫盐水抗体。IgMIgM抗体的最适反应温度为抗体
5、的最适反应温度为0-250-25。w 免疫抗体免疫抗体：抗原刺激机体而产生的。免疫抗体多为：抗原刺激机体而产生的。免疫抗体多为IgGIgG抗体，在盐水介质中只能致敏含有相应抗原的红细胞，抗体，在盐水介质中只能致敏含有相应抗原的红细胞，但不产生凝集，需要采用抗球蛋白搭桥、酶处理细胞或但不产生凝集，需要采用抗球蛋白搭桥、酶处理细胞或聚凝胺介导等方法，才能产生凝集反应。聚凝胺介导等方法，才能产生凝集反应。IgGIgG抗体的最抗体的最适反应温度为适反应温度为3737。免疫血液学的传统方法免疫血液学的传统方法w 凝集实验和溶血实验凝集实验和溶血实验w 玻片法玻片法/ /试管法试管法/ /微孔板法微孔板法
6、w 抗人球实验抗人球实验在抗原抗体反应中的去离子和低离子在抗原抗体反应中的去离子和低离子盐水凝集法：盐水凝集法：例如，例如，ABOABO血型鉴定试验血型鉴定试验 包括玻片法、试管包括玻片法、试管 法和微孔法法和微孔法但灵敏度相对较低，只在但灵敏度相对较低，只在一些基层医院血库使用一些基层医院血库使用低离子强度盐水法：低离子强度盐水法： 通过降低介质溶液离子通过降低介质溶液离子强度，减少红细胞膜外围的强度，减少红细胞膜外围的离子云，促进红细胞凝集，离子云，促进红细胞凝集，因而其灵敏度有所提高。因而其灵敏度有所提高。聚凝胺试验聚凝胺试验w 原理原理：聚凝胺是一种高价阳离子季胺盐多聚物，聚凝胺是一种
7、高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减小，能引起面的负电荷，使红细胞之间距离减小，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝聚。如果是抗正常红细胞可逆性的非特异性凝聚。如果是抗体致敏的红细胞，加入中和液后，凝集不可逆；体致敏的红细胞，加入中和液后，凝集不可逆；无抗体致敏的红细胞，加入中和液后，凝集解无抗体致敏的红细胞，加入中和液后，凝集解散。散。w 程序程序：按试剂盒说明书操作。：按试剂盒说明书操作。聚凝胺凝集法：聚凝胺凝集法： 通过多聚季氨盐溶液提供大量正电荷来中通过多聚季氨盐溶液提供大量正电荷来中和红细
8、胞表面负电荷，减少红细胞间的排斥，和红细胞表面负电荷，减少红细胞间的排斥，促进红细胞凝集，其灵敏度有较大提高。此方促进红细胞凝集，其灵敏度有较大提高。此方法目前在国内使用较多。（法目前在国内使用较多。（Rh,DuffyRh,Duffy）抗人球试验抗人球试验 - 检测检测 IgG抗人球试验：抗人球试验： 在盐水凝集法或低离在盐水凝集法或低离子强度盐水法的基础上，子强度盐水法的基础上，加入抗人球蛋白抗体，通加入抗人球蛋白抗体，通过抗人球蛋白抗体的特异过抗人球蛋白抗体的特异性桥连作用，促进红细胞性桥连作用，促进红细胞的凝集。可分为直接和间的凝集。可分为直接和间接抗人球试验。接抗人球试验。 K, k,
9、 Fya, K, k, Fya, Fyb, JKa, JKb, Kpa, Kpb, Fyb, JKa, JKb, Kpa, Kpb, S, s, Lua, Lub S, s, Lua, Lub间接抗人球蛋白试验间接抗人球蛋白试验(IAT)(IAT)w 经典经典IATIATw LISS-IAT:LISS-IAT:试管法试管法 卡卡w PEG-IATPEG-IATw 酶酶IATIATw 聚凝胺聚凝胺IATIAT经典经典IATIAT 程序程序：2 2滴血清、滴血清、1 1滴滴2-5%2-5%的红细胞，的红细胞，3737孵育孵育45-6045-60分钟，生理盐水洗涤分钟，生理盐水洗涤3 3遍遍后倾倒上
10、清液，控干，加后倾倒上清液，控干，加2 2滴抗人球蛋白滴抗人球蛋白试剂，离心后判读结果。用抗体致敏的试剂，离心后判读结果。用抗体致敏的红细胞检测试验结果的正确性红细胞检测试验结果的正确性。LISS-IATw 原理原理：通过降低红细胞周围的离子氛，使抗体易于接通过降低红细胞周围的离子氛，使抗体易于接近抗原，促进抗体在更短的时间内致敏红细胞，再使用近抗原，促进抗体在更短的时间内致敏红细胞，再使用抗人球蛋白试剂，使被致敏的红细胞产生凝集抗人球蛋白试剂，使被致敏的红细胞产生凝集w 程序程序：2 2滴血清、滴血清、1 1滴滴2-5%2-5%的红细胞，加的红细胞，加2-42-4滴滴LISSLISS液后液后
11、混匀，混匀，3737孵育孵育1515分钟，离心观察细胞的凝集情况，用分钟，离心观察细胞的凝集情况，用生理盐水洗涤生理盐水洗涤3 3遍后倾倒上清液，控干，加遍后倾倒上清液，控干，加2 2滴抗人球蛋滴抗人球蛋白试剂，离心后判读结果。白试剂，离心后判读结果。 PEG-IATw 原理原理：PEG（聚乙二醇）是一种水溶性的中性多聚体，当含有抗原与相应抗体的溶液中加入PEG时，由于空间排斥效应作用，使溶液中的抗体饱和度提高，加速溶液中的抗原-抗体复合物的形成。w 程序程序：2滴血清、1滴2-5%的红细胞，加4滴PEG溶液后混匀，37孵育15分钟，生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂，离
12、心后判读结果。微柱凝胶技术微柱凝胶技术( (卡卡) )w原理原理：微管内有凝胶颗粒和试剂。凝胶颗粒具有分子筛作用，离心后，不凝集的红细胞通过全程进入微管底部，而凝集的红细胞则悬浮停留在颗粒中。w程序程序：按厂家说明操作 反应原理反应原理 微柱凝胶免疫反应的本质是红细胞凝集试验，也可称之微柱凝胶血凝微柱凝胶免疫反应的本质是红细胞凝集试验，也可称之微柱凝胶血凝试验（试验（Microcolumn Gel Heamagglutination AssayMicrocolumn Gel Heamagglutination Assay，MGHAMGHA）在微柱凝胶）在微柱凝胶管中，红细胞和相应抗体结合后，形
13、成红细胞凝集团块。在一定离心力下，管中，红细胞和相应抗体结合后，形成红细胞凝集团块。在一定离心力下，该凝集团块位于胶表面或胶中；而红细胞未和相应抗体结合，仍为分散的该凝集团块位于胶表面或胶中；而红细胞未和相应抗体结合，仍为分散的红细胞，在同样的离心力下，红细胞沉降到微柱管尖底部。红细胞，在同样的离心力下，红细胞沉降到微柱管尖底部。4+ 红细胞复合物（凝集）位于凝胶表面红细胞复合物（凝集）位于凝胶表面3+ 大部分红细胞复合物位于凝胶表面，少部分位于凝胶中部大部分红细胞复合物位于凝胶表面，少部分位于凝胶中部2+ 大部分红细胞复合物位于凝胶中部，少部分位于凝胶中上部大部分红细胞复合物位于凝胶中部，少
14、部分位于凝胶中上部1+ 红细胞复合物位于凝胶中下部红细胞复合物位于凝胶中下部 与同一卡中阴性管结果对照，如与阴性结果有差别，即为与同一卡中阴性管结果对照，如与阴性结果有差别，即为 红细胞完全沉积在凝胶管尖底部红细胞完全沉积在凝胶管尖底部完全溶血完全溶血 凝胶和液体无凝集或未凝集的红细胞，液体出现透明清澈红色凝胶和液体无凝集或未凝集的红细胞，液体出现透明清澈红色不完全溶血不完全溶血 残留红细胞在胶表面、胶中或胶底部，液体出现透明清澈红色残留红细胞在胶表面、胶中或胶底部，液体出现透明清澈红色混合凝集混合凝集 红细胞复合物位于凝胶表面和凝胶底部红细胞复合物位于凝胶表面和凝胶底部反应强度反应强度现象及
15、说明现象及说明 完全完全 不完全不完全 混合凝集混合凝集 抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验(Coombs(Coombs试验试验) )w 直接抗人球蛋白试验直接抗人球蛋白试验(DAT)(DAT) 检测红细胞是否在体内被抗体或补体致敏,用于检测自身免疫溶血性贫血、药物引起的溶血、新生儿溶血病、溶血性输血反应w 间接抗人球蛋白试验间接抗人球蛋白试验(IAT)(IAT) 在体外抗体致敏红细胞,用于抗体筛选和鉴定、交叉配血、血型鉴定酶试验酶试验w 原理原理：蛋白水解酶可将红细胞表面的多肽链打断，使：蛋白水解酶可将红细胞表面的多肽链打断，使多肽链带负电荷的唾液酸也一起离开红细胞表面，减少多肽链带负电荷的唾液酸
16、也一起离开红细胞表面，减少了红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之间的距离，容了红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之间的距离，容易产生凝集反应易产生凝集反应w 程序程序：2 2滴血清、滴血清、1 1滴滴2-5%2-5%红细胞，加入红细胞，加入2 2滴酶，滴酶，3737孵孵育育1515分钟，离心看结果。分钟，离心看结果。 注：酶会破坏一些抗原结构，如注：酶会破坏一些抗原结构，如M M、N N、FyFya a、FyFyb b 等等影响输血效果的免疫血清学问题影响输血效果的免疫血清学问题w 速发型输血后溶血反应速发型输血后溶血反应血管内溶血血管内溶血主要原因主要原因: : ABOABO血型不和血型不和w
17、迟发型输血后溶血反应迟发型输血后溶血反应 血管外溶血血管外溶血主要原因主要原因: : 针对红细胞抗原的同种抗体针对红细胞抗原的同种抗体 血型抗原的同种免疫血型抗原的同种免疫红细胞抗原免疫强弱依次为红细胞抗原免疫强弱依次为RhRh（DE C c e ）、 KellKell、DuffyDuffy、Kidd Kidd 传统方法的局限性传统方法的局限性w不利于标准化管理不利于标准化管理w重复性较差重复性较差w要求操作者的经验丰富要求操作者的经验丰富w难以实现自动化操作难以实现自动化操作凝胶凝集试验 凝胶凝集试验 - 原理 (1)w 通过离心使红细胞被挤过装有过滤介质的小柱通过离心使红细胞被挤过装有过滤
18、介质的小柱w 凝集的红细胞被阻挡在小柱中过滤介质的顶部或凝集的红细胞被阻挡在小柱中过滤介质的顶部或中央，中央， 而未凝集的红细胞则到达小柱的底部而未凝集的红细胞则到达小柱的底部w 血型或血型或AHGAHG试剂被加入到过滤介质试剂被加入到过滤介质w 由于红细胞和血清成分以不同的速度通过小柱由于红细胞和血清成分以不同的速度通过小柱（重力加速度不同），从而消除了血清中未结合（重力加速度不同），从而消除了血清中未结合的球蛋白中和的球蛋白中和AHGAHG的可能性，因而，在抗人球试的可能性，因而，在抗人球试验中，不用清洗红细胞验中，不用清洗红细胞凝胶凝集试验 凝胶抗人球试验新技术新技术卡式检测法：卡式检测
19、法： 19861986年法国年法国Dr.Yves LappierreDr.Yves Lappierre发明了用于分离凝发明了用于分离凝集红细胞的凝胶卡式检测法。经过不断改进和临床的集红细胞的凝胶卡式检测法。经过不断改进和临床的大量应用，目前在发达国家已作为大量应用，目前在发达国家已作为临床常规的红细胞临床常规的红细胞血型血清学检测新技术血型血清学检测新技术。 1994 1994年凝胶卡式检测法用于临床常规的红细胞血年凝胶卡式检测法用于临床常规的红细胞血型血清学检测，已得到美国型血清学检测，已得到美国FDAFDA权威机构的认证。权威机构的认证。凝胶酶试验酶法：酶法： 利用木瓜酶或菠萝酶来破坏红细
20、胞表面的唾液酸，利用木瓜酶或菠萝酶来破坏红细胞表面的唾液酸，使细胞膜表面失去电荷，减少红细胞间的排斥；同时暴使细胞膜表面失去电荷，减少红细胞间的排斥；同时暴露某些隐蔽抗原，增强凝集反应。主要用于一些不完全露某些隐蔽抗原，增强凝集反应。主要用于一些不完全抗体的检测。抗体的检测。凝胶凝集试验 - 原理(2)w 标准化的孵育时间标准化的孵育时间w 标准化的离心时间标准化的离心时间w 标准化的判读标准化的判读 - - 消除主观因素对弱反应结消除主观因素对弱反应结果的判读果的判读w 结果稳定保存结果稳定保存凝胶试验应用于血型血清学凝胶试验应用于血型血清学w 血型实验室中的一次革命血型实验室中的一次革命w
21、 在全世界许多发达国家已被公认为是常规在全世界许多发达国家已被公认为是常规免疫血液学实验的免疫血液学实验的“金标准金标准”。 19901990年，卡式检测法的发明人年，卡式检测法的发明人Dr. Yves LapierreDr. Yves Lapierre等用等用低离子强度盐水法（试管法）、聚凝胺试验（试管法）和低离子强度盐水法（试管法）、聚凝胺试验（试管法）和卡式检测法（凝胶）研究了卡式检测法（凝胶）研究了400400例已知抗体的样本。血清与例已知抗体的样本。血清与细胞的比例是按照试管法标准配置。结果为：细胞的比例是按照试管法标准配置。结果为：卡式检测法检出卡式检测法检出359359例（检出率
22、为例（检出率为90%90%）低离子强度盐水法检出低离子强度盐水法检出243243例（检出率为例（检出率为61%61%）聚凝胺试验检出聚凝胺试验检出301301例（检出率为例（检出率为75%75%）凝胶试验应用于血型血清学凝胶试验应用于血型血清学结果判断模式结果判断模式凝胶试验应用于血型血清学凝胶试验应用于血型血清学临床输血技术规范w 明确规定部分病人应做明确规定部分病人应做“抗体筛选抗体筛选”检检测，第四章第测，第四章第1717条：条：“凡遇以下情况凡遇以下情况必须必须按按全国临床检验操作规程全国临床检验操作规程有关规定做有关规定做抗体筛选试验：抗体筛选试验：1 1、交叉配血不合的；、交叉配血
23、不合的； 2 2、对有输血史、妊娠史或短期内需接受多次对有输血史、妊娠史或短期内需接受多次输血者。输血者。为什么要开展输血前的“抗体筛选”检查 1 1、目前已知红细胞有、目前已知红细胞有2626个抗原系统（确个抗原系统（确认认2121个，如个，如ABOABO、RhRh、MNMN、LWLW、MNSMNS、JKJK等），等），500500多种抗原（确认多种抗原（确认200200多种）。红多种）。红细胞抗原的多样性决定了抗体的多样性，细胞抗原的多样性决定了抗体的多样性，检测抗检测抗A A、抗、抗B B、抗、抗D D（ABOABO血型、血型、RhRh血型）血型）可确保绝大多数病人的输血安全，但仍不可确
24、保绝大多数病人的输血安全，但仍不能避免因血型不合（能避免因血型不合（ABOABO、RhRh血型以外）血型以外）而引发的溶血。而引发的溶血。2 2、临床有的病人出现慢性（迟缓性）溶血反应，易忽视、临床有的病人出现慢性（迟缓性）溶血反应，易忽视或引不起临床医师重视。或引不起临床医师重视。 （理论上讲，成年人每输（理论上讲，成年人每输1U1U的浓缩红细胞，在不丢失、的浓缩红细胞，在不丢失、不被破坏（溶血）的前提下，应能提升不被破坏（溶血）的前提下，应能提升Hb5-10g/L Hb5-10g/L (0.5-1g/dl),(0.5-1g/dl),保持保持15-3015-30天。如果输天。如果输3-4U
25、RBC3-4U RBC，病人，病人HbHb上升不到上升不到10g/L10g/L，或几天后（，或几天后（1 1周内）周内）HbHb仍旧下降到原来仍旧下降到原来水平，甚至更低。这种情况，就要考虑是否有慢性溶血水平，甚至更低。这种情况，就要考虑是否有慢性溶血反应存在。）反应存在。）3 3、有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，获得充、有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，获得充足的时间来选择相配合的血，避免由于寻找不到相合的足的时间来选择相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情的延误。血液而造成患者病情的延误。抗体筛选检查一、什么叫一、什么叫“抗体筛选抗体筛选”检查检查 1 1、不规
26、则抗体的含义：通常把抗、不规则抗体的含义：通常把抗A A、抗、抗B B以外以外的所有红细胞血型抗体称为不规则抗体。如抗的所有红细胞血型抗体称为不规则抗体。如抗D D、抗抗N N、抗、抗M M、jk-jk-抗体。抗体。 2 2、“抗体筛选抗体筛选”的含义：用具备有临床意义的含义：用具备有临床意义的血型抗原的的血型抗原的O O型红细胞，检测病人血清（含多型红细胞，检测病人血清（含多种抗体）；如果出现聚集现象，则提示病人有种抗体）；如果出现聚集现象，则提示病人有不规则抗体存在，可判为不规则抗体存在，可判为“抗体筛选抗体筛选”阳性。阳性。抗体筛选技术要求w 尽可能多的检测出有临床意义的抗体。尽可能多的
27、检测出有临床意义的抗体。 w 尽可能少的检测出无临床意义的抗体。尽可能少的检测出无临床意义的抗体。 w 尽可能快的完成抗体检测尽可能快的完成抗体检测方法选择：每种方法都有自己的特点，适应于不同范围及情况w 盐水法：可以用于检测干扰盐水法：可以用于检测干扰ABOABO定型的盐水反应定型的盐水反应活性抗体，如：活性抗体，如：MNMN、P P血型抗体。但此方法会检血型抗体。但此方法会检查出无临床意义的抗体，如冷凝集素抗查出无临床意义的抗体，如冷凝集素抗I I及抗及抗IHIH等，而且会漏检等，而且会漏检IgGIgG性质的抗体。性质的抗体。w 低离子聚凝胺法（低离子聚凝胺法（LIP-IATLIP-IAT
28、）：所需试验时间少）：所需试验时间少（3 35 5分钟）、方法灵敏度高，准确性高，但分钟）、方法灵敏度高，准确性高，但无法排除无临床意义抗体的干扰。无法排除无临床意义抗体的干扰。 w 间接抗人球方法：是很灵敏且有效的检测抗体间接抗人球方法：是很灵敏且有效的检测抗体的方法，同时此方法可以有效的避免无临床意的方法，同时此方法可以有效的避免无临床意义抗体的干扰义抗体的干扰。缺点：耗时间长，步骤多。缺点：耗时间长，步骤多。 抗体特异性鉴定w 使用谱细胞确定抗体的特异性，谱细胞一使用谱细胞确定抗体的特异性，谱细胞一般由般由8-168-16种含有不同抗原的种含有不同抗原的O O型红细胞配型红细胞配套组成，
29、根据谱细胞的反应格局一般可以套组成，根据谱细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。鉴定常见的抗体。检测新生儿溶血的“三项试验” 直抗试验：即用直接抗球蛋白试验的方法，检直抗试验：即用直接抗球蛋白试验的方法，检测新生儿红细胞上是否存在免疫抗体。测新生儿红细胞上是否存在免疫抗体。 游离试验：是检测新生儿血清中的血型抗体。游离试验：是检测新生儿血清中的血型抗体。 释放试验：和直抗试验相同，也是检测新生儿释放试验：和直抗试验相同，也是检测新生儿红细胞上的致敏的血型抗体，只是方法不同。红细胞上的致敏的血型抗体，只是方法不同。 交叉配血试验的涵义交叉配血试验的涵义 w 目的：是检查供、受血者血液中是否含有不
30、相合目的：是检查供、受血者血液中是否含有不相合的抗原的抗原 和抗体成分的试验。和抗体成分的试验。 发现发现ABOABO血型鉴定的错误：如将血型鉴定的错误：如将O O型受血者误定为型受血者误定为A A型，当与型，当与A A型献型献血者交叉配血时，病人血清与献血者红细胞即可出现凝集，从而避血者交叉配血时，病人血清与献血者红细胞即可出现凝集，从而避免严重的溶血性输血反应。免严重的溶血性输血反应。 发现不规则凝集素：如含抗发现不规则凝集素：如含抗A1A1不规则凝集素的不规则凝集素的A2A2型血清，与型血清，与A1A1型型献血者红细胞配血时，可出现凝集，这种不规则凝集素一般为冷凝献血者红细胞配血时，可出
31、现凝集，这种不规则凝集素一般为冷凝集素，如效价不高，影响不大。但若为免疫性抗体，集素，如效价不高，影响不大。但若为免疫性抗体，3737条件下效条件下效价较高，就必须选用亚型相同的血液，否则可产生溶血性输血应。价较高，就必须选用亚型相同的血液，否则可产生溶血性输血应。 发现发现ABOABO血型以外的其他抗体：如抗血型以外的其他抗体：如抗P1P1，抗，抗H H等天然抗体和抗等天然抗体和抗D D等等免疫性抗体，虽然输入的血液免疫性抗体，虽然输入的血液ABOABO血型相同，但血型相同，但ABOABO血型以外的其他血型以外的其他抗体存在时，同样可能引起严重的溶血性输血反应。特别是现在许抗体存在时，同样可
32、能引起严重的溶血性输血反应。特别是现在许多化验室因为条件的限制不可能对多化验室因为条件的限制不可能对ABOABO及及RHRH（D D）以外的血型全部进）以外的血型全部进行鉴定，全靠交叉配血发现血型的不同和行鉴定，全靠交叉配血发现血型的不同和ABOABO、RHRH（D D）血型以外的）血型以外的其他抗体的存在。其他抗体的存在。程序程序 n查询受血者既往血型检查纪录；查询受血者既往血型检查纪录；n对受血者血样作对受血者血样作ABOABO、RHRH血型鉴定及血型抗体筛选、血型鉴定及血型抗体筛选、抗体鉴定；抗体鉴定；n选择预先进行血型检查的合格供血者作交叉配血试验；选择预先进行血型检查的合格供血者作交
33、叉配血试验；wA.A.主侧配血：受血者血清主侧配血：受血者血清 + + 供血者红细胞供血者红细胞检测对供检测对供者红细胞起反应的抗体；者红细胞起反应的抗体；wB.B.次侧配血：受血者红细胞次侧配血：受血者红细胞 + + 供血者血清供血者血清检测对受检测对受者红细胞起反应的抗体；者红细胞起反应的抗体；wC.C.自身对照：受血者红细胞自身对照：受血者红细胞 + + 受血者血清受血者血清显示自身显示自身抗体、直接抗体、直接Coomb,sCoomb,s阳性红细胞缗钱状凝集（假阳性）以阳性红细胞缗钱状凝集（假阳性）以及在低温下的冷凝集。及在低温下的冷凝集。结果结果 w 交叉配血试验的任何步骤中均不产生交
34、叉配血试验的任何步骤中均不产生溶血溶血和凝集和凝集的结果，供者的血液成分才可发给的结果，供者的血液成分才可发给患者输注。红细胞抗原与相对应的免疫抗患者输注。红细胞抗原与相对应的免疫抗体相遇，在有补体存在就可发生溶血。溶体相遇，在有补体存在就可发生溶血。溶血反应与凝集反应在交叉配血上意义相同，血反应与凝集反应在交叉配血上意义相同，都是抗原抗体反应。都是抗原抗体反应。 溶血的标本不应用作配血。溶血的标本不应用作配血。交叉配血中责任性错误：交叉配血中责任性错误： w 1. 1. 无论是对病人还是工作都要有高度的工作责任感，并严格无论是对病人还是工作都要有高度的工作责任感，并严格按照规程操作。按照规程
35、操作。w 2. 2. 各种器材要干净，干燥（或用等渗盐水洗涤），防止溶血。各种器材要干净，干燥（或用等渗盐水洗涤），防止溶血。w 3. 3. 配血、发血和登记时要仔细核对病人的姓名、病房、床号、配血、发血和登记时要仔细核对病人的姓名、病房、床号、住院号、血型。不要加错血清、红细胞和试剂，防止由于滴管、住院号、血型。不要加错血清、红细胞和试剂，防止由于滴管、吸管、试管的紊乱，而造成被检者之间、血清和红细胞之间的吸管、试管的紊乱，而造成被检者之间、血清和红细胞之间的相互污染。相互污染。w 4. 4. 病人和献血者的血标本必须符合标准，不要长期放在室温病人和献血者的血标本必须符合标准，不要长期放在室
36、温下，以免污染和滋生细菌。等渗盐水必须等渗、新鲜、无微生下，以免污染和滋生细菌。等渗盐水必须等渗、新鲜、无微生物滋生。物滋生。w 5 5 观察结果要仔细，微弱凝集或肉眼观察未凝集的标本，要观察结果要仔细，微弱凝集或肉眼观察未凝集的标本，要用显微镜观察。注意特异性凝集与继发性血液凝固、缗钱状凝用显微镜观察。注意特异性凝集与继发性血液凝固、缗钱状凝集形成的区别。集形成的区别。w 6. 6. 观察结果，要遵守规定时间，冬季要注意保温，避观察结果，要遵守规定时间，冬季要注意保温，避免冷凝集素干扰结果。免冷凝集素干扰结果。w 7. 7. 注意病人的输血史，有无不良反应，女病人要注意注意病人的输血史，有无
37、不良反应，女病人要注意妊娠及分娩史。对反复输血的病人，每取一次配血标本，妊娠及分娩史。对反复输血的病人，每取一次配血标本，不要连用三天以上，更不能供反复多次配血用。因为任不要连用三天以上，更不能供反复多次配血用。因为任何一次输血都有产生抗体的可能，因此前次输血使用过何一次输血都有产生抗体的可能，因此前次输血使用过的配血标本不能代表病人再次输血时体内的情况，所以，的配血标本不能代表病人再次输血时体内的情况，所以，超过三天，应另取病人标本配血。超过三天，应另取病人标本配血。w 8. 8. 登记结果和填发报告要仔细正规，查对无误后，才登记结果和填发报告要仔细正规，查对无误后，才能发出报告。特别要注意
38、不要在配血结果尚未出来时就能发出报告。特别要注意不要在配血结果尚未出来时就已填好报告，防止很忙时将配血试管遗忘在离心机内。已填好报告，防止很忙时将配血试管遗忘在离心机内。w 9. 9. 配血后应将配血标本置冰箱保存，保留至血液输完配血后应将配血标本置冰箱保存，保留至血液输完至少七天后，以备复查。至少七天后，以备复查。假阳性及其控制对策：假阳性及其控制对策： 1. 1. 红细胞缗钱状凝集：红细胞缗钱状凝集：红细胞相互重叠，连接成串，象一串重叠的钱币，又称红细胞相互重叠，连接成串，象一串重叠的钱币，又称串钱状凝集。可由以下原因引起。患者纤维蛋白原升高串钱状凝集。可由以下原因引起。患者纤维蛋白原升高
39、或异常蛋白血症（多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症），新或异常蛋白血症（多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症），新生儿脐带血中含有华顿胶，实验室中温度过高、作用时生儿脐带血中含有华顿胶，实验室中温度过高、作用时间太长致水分蒸发、血清浓缩。红细胞缗钱状凝集不是间太长致水分蒸发、血清浓缩。红细胞缗钱状凝集不是抗原抗体反应，不是配血禁忌，如献血者正常，明确是抗原抗体反应，不是配血禁忌，如献血者正常，明确是假凝集后，可以输血。假凝集后，可以输血。 控制对策：多加生理盐水可稀释血液使缗钱状红控制对策：多加生理盐水可稀释血液使缗钱状红细胞散开用高倍显微镜仔细观察红细胞凝集块的形态细胞散开用高倍显微镜仔细观察红细胞凝集块的形
40、态（红细胞未被破坏）察看病人诊断用洗涤后的红细（红细胞未被破坏）察看病人诊断用洗涤后的红细胞配血。胞配血。 2 2. . 冷凝集冷凝集：在较低温度下出现凝集而温度：在较低温度下出现凝集而温度2525时凝时凝集即可消失的凝集称为冷凝集。多数正常人的血清在集即可消失的凝集称为冷凝集。多数正常人的血清在0044时能凝集本人的红细胞，所以又称自身凝集，时能凝集本人的红细胞，所以又称自身凝集，这种冷凝集素的效价一般不超过这种冷凝集素的效价一般不超过1 1：1616，这种凝集是可，这种凝集是可逆的。但一些自身免疫性疾病、非典型性肺炎、病毒逆的。但一些自身免疫性疾病、非典型性肺炎、病毒性肝炎、肝硬化、多发性
41、骨髓瘤、恶性淋巴瘤等疾病性肝炎、肝硬化、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤等疾病患者的血清中，可以出现高效价的冷凝集素且能与本患者的血清中，可以出现高效价的冷凝集素且能与本人及其它各型人的红细胞发生凝集。注意配血报告要人及其它各型人的红细胞发生凝集。注意配血报告要注明有冷凝集现象。注明有冷凝集现象。 控制对策：标本在血清没有完全析出之前不要放入控制对策：标本在血清没有完全析出之前不要放入冰箱可将配血结果置冰箱可将配血结果置3737水浴箱温浴之后看，并反水浴箱温浴之后看，并反复观几次将红细胞用复观几次将红细胞用3737生理盐水洗涤或用生理盐水洗涤或用2Me2Me处处理血清以消除冷凝集素之后进行配血可用自身
42、或兔理血清以消除冷凝集素之后进行配血可用自身或兔红细胞反复吸收放散的方法除去血清中的冷凝集素。红细胞反复吸收放散的方法除去血清中的冷凝集素。 3. 3. 自身免疫性温型抗体：自身免疫性温型抗体： 自身免疫性溶血性贫血的病人血清中可有温型自身抗自身免疫性溶血性贫血的病人血清中可有温型自身抗体。其特点是反应温度在体。其特点是反应温度在3737比室温作用强或相同，能比室温作用强或相同，能凝集自身和其他各型红细胞，病人红细上吸附了这种抗凝集自身和其他各型红细胞，病人红细上吸附了这种抗体，在自身或他人血清中，均可出现凝集。体，在自身或他人血清中，均可出现凝集。 控制对策：可用递增温度（由控制对策：可用递
43、增温度（由22223737 45 45）生理盐水洗涤红细胞后再进行配血。如果最后仍有凝集，生理盐水洗涤红细胞后再进行配血。如果最后仍有凝集，可选用凝集较弱的血与患者输注。缓慢输注，密切观察，可选用凝集较弱的血与患者输注。缓慢输注，密切观察，一旦病人出现反应应立即停止输注。此类病人万不得已一旦病人出现反应应立即停止输注。此类病人万不得已不要输血不要输血, ,可用其他办法替代可用其他办法替代. . 4. 4. 全凝集与多凝集：全凝集与多凝集： 全凝集：人的红细胞都含有全凝集：人的红细胞都含有H H抗原，如果标本被棒状杆菌污染，血抗原，如果标本被棒状杆菌污染，血清中可出现清中可出现H H抗体，这种抗
44、体与含有抗体，这种抗体与含有H H抗原的各型红细胞发生凝集，这抗原的各型红细胞发生凝集，这种血清称为全凝集血清。取多个已知种血清称为全凝集血清。取多个已知O O型血人的红细胞与此怀疑的血清型血人的红细胞与此怀疑的血清作试验，如都能凝集，即可证明为全凝集血清。作试验，如都能凝集，即可证明为全凝集血清。 多凝集：人的红细胞上含有一种无活性的多凝集：人的红细胞上含有一种无活性的T T隐性受体，在实验室中隐性受体，在实验室中某些细菌或细菌产生的酶污染红细胞后可以使某些细菌或细菌产生的酶污染红细胞后可以使T T受体致活，而正常人血受体致活，而正常人血清中多数都含有抗清中多数都含有抗T T抗体，因此这种被
45、活化了的抗体，因此这种被活化了的T T受体的红细胞能被各受体的红细胞能被各型人的红细胞凝集（新生儿的血清除外）。这种现象称又称为型人的红细胞凝集（新生儿的血清除外）。这种现象称又称为T T凝集现凝集现象。象。T T凝集现象也可偶见于某些有明显细菌感染的病人且多为凝集现象也可偶见于某些有明显细菌感染的病人且多为O O型病人，型病人，其次为其次为A A和和B B型，型，ABAB型病人出现型病人出现T T凝集现象的则未见报道。病人的凝集现象的则未见报道。病人的T T凝集凝集现象具有以下特点：病人的红细胞不被本人的红细胞凝集，冷凝集现象具有以下特点：病人的红细胞不被本人的红细胞凝集，冷凝集的病人血清能
46、凝集自己的红细胞；的病人血清能凝集自己的红细胞；T T凝集在室温较强，凝集在室温较强，3737较弱或消较弱或消失，冷凝集在失，冷凝集在3737消失，在消失，在44最强；病人有感染史，多凝集的表现最强；病人有感染史，多凝集的表现未暂时性的，一般在病愈后即自行消失；血库储存的血液制品出现未暂时性的，一般在病愈后即自行消失；血库储存的血液制品出现全凝时，细菌培养可为阳性；多凝集的凝块较大，但游离红细胞较全凝时，细菌培养可为阳性；多凝集的凝块较大，但游离红细胞较多。多。 控制对策：控制对策：试管、滴管等应经常保持清洁，不被细菌污染如试管、滴管等应经常保持清洁，不被细菌污染如怀疑为全凝集或多凝集，首先用
47、多份怀疑为全凝集或多凝集，首先用多份ABAB型血清加以证明。注意标本型血清加以证明。注意标本的保存，新鲜不被污染。的保存，新鲜不被污染。 5. 5. 类类B B抗原形成抗原形成( (即获得性即获得性B B抗原抗原) )： 某些某些A A型老年癌症患者和肠道革兰氏阴性杆菌（如大肠杆菌型老年癌症患者和肠道革兰氏阴性杆菌（如大肠杆菌O86O86、普通变形杆菌等）感染的病人，其红细胞除能被抗普通变形杆菌等）感染的病人，其红细胞除能被抗A A血清凝集外，血清凝集外，也能与抗也能与抗B B血清发生凝集。血清中仍含有正常的抗血清发生凝集。血清中仍含有正常的抗B B，好像红细胞，好像红细胞获得了一种与获得了一
48、种与B B类似的抗原称为类类似的抗原称为类B B抗原。此类病人可能导致血型抗原。此类病人可能导致血型鉴定错误鉴定错误, ,所以必须要有正反定型才能判定血型所以必须要有正反定型才能判定血型. .交叉配血、输血交叉配血、输血时一定要谨慎。有人认为有些细菌的酶含有乙酰基酶能使特异性时一定要谨慎。有人认为有些细菌的酶含有乙酰基酶能使特异性A A物质末端的物质末端的NN乙酰氨基半乳糖水解成半乳糖。类乙酰氨基半乳糖水解成半乳糖。类B B抗原有以下抗原有以下特点：类特点：类B B与抗与抗B B的反应与正常的反应与正常B B抗原与抗抗原与抗B B的反应弱，一般无溶的反应弱，一般无溶血现象。类血现象。类B B是
49、获得性的，不符合遗传规律，病情好转，类是获得性的，不符合遗传规律，病情好转，类B B就消就消失。类失。类B B与抗与抗B B结合疏松，用红细作吸收放散试验，可放散出大结合疏松，用红细作吸收放散试验，可放散出大量抗量抗B B。类。类B B病人的唾液不含该血型物质。在病人的唾液不含该血型物质。在ABAB血的交叉配血时，血的交叉配血时，如发现主侧凝集，应考虑类如发现主侧凝集，应考虑类B B存在，应重新定血型并检查唾液中存在，应重新定血型并检查唾液中的血型物质。类的血型物质。类B B与多凝集不同，前者只与抗与多凝集不同，前者只与抗B B反应，在反应，在ABAB型血型血清中不凝集，后者与清中不凝集，后者
50、与ABAB型血清中凝集。型血清中凝集。 6. 6. 抗储存红细胞抗体：抗储存红细胞抗体： 红细胞在红细胞在3737储存储存2 2天，在室温室温储存天，在室温室温储存4747天，在天，在44冰箱储存冰箱储存2323个月以后，能与个月以后，能与少数人的血清发生非特异性凝集。这种血清少数人的血清发生非特异性凝集。这种血清中抗体叫做抗储存红细胞抗体，能与酶处理中抗体叫做抗储存红细胞抗体，能与酶处理红细胞发生非特异凝集或溶血，造成交叉配红细胞发生非特异凝集或溶血，造成交叉配血的紊乱。此抗体对输血无影响。血的紊乱。此抗体对输血无影响。 7. 7. 自发性或继发性凝固：自发性或继发性凝固： 这种凝固不是这种
