1、1.硫氰酸钾光度法 原理 在酸性溶液中，三价铁离子与硫氰酸根离子作用，生成血红色的硫氰酸铁。溶液颜色的深浅与铁离子的浓度成正比，于485nm波长处测溶液的吸光度，与标准曲线比较进行定量。仪器试剂1）仪器 可见分光光度计。2）试剂 200g/L硫氰酸钾溶液；20g/L过硫酸钾溶液；硫酸；1mg/mL铁标准贮备液；10g/mL铁标准工作液。操作步骤1）样品处理。2）标准曲线绘制。3）测定。结果计算100Vm10Vm)(w161Fe式中 w（Fe）样品中铁的质量分数（%）；m1 测定时扣除空白后样液中铁的含量（g）；V1 测定时吸取样液的体积（mL）；V 样品溶液的体积（mL）；m 样品的质量（g）
2、。注意事项1）加入过硫酸钾作为氧化剂，以防止三价铁转变为二价铁。2）硫氰酸铁稳定性差，如时间稍长，红色便会逐渐消退，因此应在规定时间内完成比色。3）随硫氰酸根浓度增加，Fe3+可与之形成FeSCN2+，直至Fe(SCN)63-等一系列化合物，溶液颜色由橙黄色至血红色，影响测定，因此应严格控制硫氰酸钾的用量。2.原子吸收分光光度法 原理 样品用干法灰化处理后，以稀盐酸溶解灰分，制成溶液，直接喷入原子吸收分光光度计，在波长248.3nm处测吸光度，并计算铁含量。仪器试剂1）仪器 原子吸收分光光度计。2）试剂 0.1mol/L盐酸；6mol/L盐酸；1mg/mL铁标准贮备液；100g/mL铁标准工作
3、液。操作步骤1）样品处理；2）标准曲线绘制；3）测定。结果计算10010)Fe()Fe(6mVw式中 w（Fe）样品中铁的质量分数（%）；（Fe）测得扣除空白后样品溶液中铁的质量浓度（g/mL）；V 样品溶液的体积（mL）；m 样品的质量（g）。原理 样品用干法处理后，以稀盐酸溶解灰分，制成溶液，直接喷入原子吸收分光光度计，在波长213.8nm处测吸光度，与标准系列比较定量。仪器试剂1）仪器 原子吸收分光光度计。2）试剂 盐酸；0.5mg/L锌标准贮备液；10g/mL锌标准工作液。操作步骤1）样品处理；2）标准曲线绘制；3）测定。结果计算1.原子吸收分光光度法 100m10V)()(w6ZnZ
4、n式中 w（Zn）样品中锌的质量分数（%）；（Zn）测得扣除空白后样液中锌的质量浓度（g/mL）；V 样液的体积（mL）；m 样品的质量（g）。（1）样品处理 湿法处理；干法处理 2.双硫腙比色法式中 w（Zn）样品中锌的质量分数；m 1 测定时扣除空白后样液中锌的质量（g）；V1 样品溶液的体积（mL）；V2 测定用样品溶液的体积（mL）；m 样品的质量（g）。m 1 V 110-6w（Zn）=m V 2试样处理后导入火焰光度计中，经火焰原子化后，测定钾的发射强度。钾的发射波长为766.5nm。其发射强度与它的含量成正比，与标准系列比较定量。1.原理(2）结果计算 仪器 所用玻璃仪器均以硫酸
5、-重铬酸钾洗液浸泡数小时，再用洗衣粉充分洗刷后，用自来水反复冲洗，最后用去离子水冲洗晾干或烘干，方可使用。1）实验室常用玻璃仪器：高型烧杯（250mL）、电热板（10003000W）。2）火焰光度计 试剂1）硝酸；2）高氯酸；3）混合酸消化液：硝酸+高氯酸=4+1；4）钾标准储备液；5）钾标准使用液。2.仪器试剂3.操作步骤 试样处理 测定 测定条件：波长：766.5nm；空气压力：0.4105Pa；燃气的调整以火焰不出现黄火焰为准。以钾含量对应浓度的发射强度绘制标准曲线。1000100)(0mfVccX式中 X 试样中元素的含量（mg/100g）；c 测定用试样液中元素的浓度（由标准曲线查出
6、）（g/mL）；c0 试剂空白液中元素浓度（由标准曲线查出）（g/mL）；V 试样液定容体积（mL）；f 试样液稀释倍数；m 试样的质量（g）。4.结果计算与钾的测定相同。钠发射波长589nm。1.原理 仪器 与钾的测定相同。2.仪器试剂 试剂1）硝酸；2）高氯酸；3）混合酸消化液：硝酸+高氯酸=4+1；4）钠标准储备液；5）钠标准使用液。3.操作步骤4.结果计算 试样处理 与钾的测定相同。测定 测定条件：波长589nm，空气压力0.4105Pa，燃气的调整以火焰中不出现黄火焰为准。以钠含量对应浓度的发射强度绘制标准曲线。与钾的测定相同。试样经湿法消化后，导入原子吸收分光光度计中，经火焰原子化
7、后，镁吸收285.2nm的共振线，其吸收强度与它的含量成正比，与标准系列比较定量。1.原理 仪器 1）实验室常用设备；2）原子吸收分光光度计。试剂1）盐酸；2）硝酸；3）高氯酸4）混合酸消化液：硝酸+高氯酸=4+1；5）0.5mol/L硝酸溶液；6）镁标准溶液；7）镁标准使用液。2.仪器试剂 试样处理 测定 3.操作步骤4.结果计算1000100)(0mfVccX式中 X 样品中元素的含量（mg/100g）；c 测定用样品液中元素的浓度（由标准曲线查出，g/mL）；c0 试剂空白液中元素浓度（由标准曲线查出，g/mL）；V 样品液定容体积（mL）；f 样品液稀释倍数；m 样品的质量（g）。1.
8、EDTA滴定法 原理 钙与氨羧络合剂能定量地形成金属络合物，其稳定性较钙与指示剂所形成的络合物为强。在适当的pH值范围内，以氨羧络合剂EDTA滴定，在达到当量点时，EDTA就从指示剂络合物中夺取钙离子，使溶液呈现游离指示剂的颜色（终点）。根据EDTA络合剂用量，可计算钙的含量。试剂1）6mol/L盐酸溶液；2）2mol/L氢氧化钠溶液；3）10g/L氰化钾溶液；4）0.05mol/L柠檬酸钠溶液；5）0.01mol/L EDTA溶液。06538.0)(25500)EDTA(0VVmc式中 c(EDTA)EDTA标准溶液的浓度（mol/L）；m 称取基准锌的质量（g）；V 标准消耗EDTA溶液的
9、体积（mL）；V0 空白试验消耗EDTA溶液的体积（mL）。操作步骤 1）样品处理;2）测定。结果计算 钙（mg/100g）=100VVm40M)VV(120式中 V0 空白滴定消耗EDTA标准溶液的体积（mL）；V1 样品处理液的体积（mL）；V2 用于滴定的样品液体积（mL）；V 样品消耗EDTA标准溶液的体积（mL）；M EDTA标准溶液的摩尔浓度（mol/L）；m 样品质量（g）；40 为1mol EDTA溶液1mL相当于钙的毫克数。原理 样品经处理后，在酸性溶液（pH3.54.5）中，用草酸铵沉淀草酸钙，然后以稀硫酸溶解，用高锰酸钾标准溶液滴定草酸离子，间接地求出钙的含量。试剂1）草
10、酸铵饱和溶液；2）盐酸溶液（1+1）；3）盐酸溶液（1+3）；4）氨水溶液（1+1）；5）氨水溶液（1+50）；6）5g/L甲基红指示剂；7）硫酸；8）0.05mol/L高锰酸钾标准溶液。2.高锰酸钾滴定法06700.0)()KMnO51(014VVmc式中 c 高锰酸钾标准溶液的物质的量浓度（mol/L）；m 草酸钠的质量（g）；V1 高锰酸钾标准溶液的用量（mL）；V0 空白试液高锰酸钾标准溶液的用量（mL）；0.06700 1/2草酸钠分子的摩尔质量（kg/mol）。1）样品处理；2）测定 操作步骤 结果计算1002005010100004.20)()Ca(601mVVcw式中 w（Ca
11、）样品中钙的质量分数；c 高锰酸钾标准溶液的的物质的量的浓度（mol/L）；V1 滴定样液所耗高锰酸钾标准溶液的体积（mL）；V0 滴定空白所耗高锰酸钾标准溶液的体积（mL）；m 样品的质量（g）；20.04 1/2钙原子的摩尔质量（g/mol）。3.原子吸收分光光度法 原理 样品经处理后制备成溶液，以镧作释放剂，将溶液喷入原子吸收仪器的火焰中，在钙的特征线波长422.7nm处测量钙的吸收，其吸收量与含量成正比，与标准系列比较定量。仪器试剂1）仪器 原子吸收分光光度计。2）试剂 盐酸；100g/L镧溶液；1mg/mL钙标准贮备液；100g/mL钙标准工作液。操作步骤 1）样品处理；2）标准曲线
12、绘制；3）测定。结果计算10010)Ca()Ca(6mVw式中 w（Ca）样品中钙的质量分数（%）；（Ca）扣除空白后样品溶液中钙的质量浓度（g/mL）；V 样品溶液的体积（mL）；m 样品的质量（g）。1.钼蓝比色法 试剂1）钼酸铵溶液；2）2.5%氯化亚锡甘油溶液；3）磷酸盐标准溶液。仪器 可见分光光度计。操作步骤1）样品处理 ；2）标准曲线绘制；3）测定。结果计算磷酸盐（PO43-，mg/kg）=100100012VVmC式中 C 从标准曲线上查出相当于磷酸盐的标准量（g）；V1 样品处理液的总体积（mL）；V2 测定时取用样品处理液的体积（mL）；m 样品质量（g）。2.喹钼柠酮质量法
13、 试剂1）盐酸；2）硝酸；3）钼酸钠；4）柠檬酸；5）喹啉；6）丙酮；7）喹钼柠酮试剂；8）无水硫酸钠或无水硫酸钾；9）无水硫酸铜；10）浓硫酸。仪器1）50mL凯氏烧瓶；2）烘箱。操作步骤1）样品处理；2）测定。结果计算 式中 G1 沉淀物和砂芯坩埚的质量（g）；G2 砂芯坩埚的质量（g）；V 吸取样品处理液的体积（mL）；m 样品的质量（g）；0.03207 磷钼酸喹啉换算为五氧化二磷的系数。五氧化二磷（%）=10050003207.0)(21VmGG1.苯芴酮比色法 原理 在酸性介质中，四价锡离子与苯芴酮生成微溶性的橙红色络合物，在保护性胶体存在下与标准系列进行比较定量。加入抗坏血酸、酒
14、石酸作为隐蔽铁离子等的干扰。仪器试剂1）仪器 分光光度计。2）试剂 100g/L酒石酸溶液；5g/L动物胶 硫酸溶液（1+9）；10g/L抗坏血酸溶液；0.03%苯芴酮溶液；锡标准溶液。操作步骤1）样品处理；2）标准曲线的绘制。结果计算锡（mg/kg）=1000wc式中 c 从标准曲线中查出相当于锡的标准量（mg）；w 吸取的样品溶液相当于样品的重量（g）。2.原子吸收分光光度法 原理 样品在在碘化钾溶液中用苯直接萃取进行无火焰原子吸收法测定，求出样液中锡含量。仪器试剂1）仪器 原子吸收分光光度计，附石墨炉原子化器和锡空心阴极灯。2）试剂：4mol/L碘化钾溶液 锡标准溶液 操作步骤1）样品处
15、理。2）测定。测定条件：分析线234.0nm，狭缝0.7nm，灯电流15mA，用氘灯作背景校正。而温度程序是干燥100，升温3s，保持20s；灰化600，升温2s，保持30s；原子化2300，升温1s，保持5s，氩气流中断；净化2400，升温1s，保持3s。3）标准曲线的绘制。结果计算 注意事项1）样液中微量的锑、砷、铅等不影响测定。2）加入柠檬酸目的使与锡生成络合物而使四价锡稳定。3）苯层中呈紫红色是碘析出之故，在样液萃取前加入亚硫酸钠饱和溶液还原碘，可以消除碘的干扰。wc锡（mg/kg）=式中 c 从标准曲线中查出相当于锡的标准量（g）；w 所取样液相当于样品的量（g）。原理 锰的化合物在
16、酸性条件下，以银离子作催化剂，被过硫酸铵氧化，生成紫红色的高锰酸盐，颜色的深浅与锰离子的含量成正比，可以比色求出样品中锰的含量。仪器试剂1）仪器 可见分光光度计。2）试剂 锰标准溶液；过硫酸铵(NH4)2S2O8；锰试剂。操作步骤1）样品处理；2）标准曲线绘制；3）测定。结果计算1.过硫酸铵比色法锰（mg/kg）=1000wc式中 c 从标准曲线查出相当于锰的标准量（mg）；w 比色时所取样品的重量（g）。2.原子吸收分光光度法 原理 同镁的测定。锰吸收279.5nm的共振线。仪器试剂1）仪器 实验室常用设备；原子吸收分光光度计。2）试剂 盐酸；硝酸；高氯酸；混合酸消化液；0.5mol/L硝酸
17、溶液；锰标准溶液；锰标准使用液。操作步骤1）样品处理；2）测定。结果计算 1000100)(0mfVccX式中 X 样品中锰的含量（mg/100g）；c 测定用样品液中锰的浓度（由标准曲线查出）（g/mL）；c0 试剂空白液中锰浓度（由标准曲线查出）（g/mL）；V 样品液定容体积（mL）；f 样品液稀释倍数；m 样品的质量（g）。1.二乙氨基二硫代甲酸钠（DDTC）比色法 10010)Cu(261VmVmw1式中 w（Cu）样品中铜的质量分数（%）；m1 测定用扣除空白后样液中铜的质量（g）；m 样品的质量（g）；V1 样品溶液的总体积（mL）；V2 测定用样品溶液的体积（mL）。2.原子吸
18、收分光光度法 仪器试剂1）仪器 原子吸收分光光度计。2）试剂 硝酸（1+1）;1mg/mL铜标准贮备液;10g/mL铜标准工作液。操作步骤1）样品处理；2）标准曲线绘制；3）测定。测定条件：分析线波长324.8nm，灯电流3mA，狭缝宽度0.5nm，空气流量8.0L/min，乙炔流量1.8L/min。结果计算10010)Cu()Cu(6mVw式中 w（Cu）样品中铜的质量分数（%）；（Cu）扣除空白后样液中铜的质量浓度（g/mL）；V 样品溶液的体积（mL）；m 样品的质量（g）。1.双硫腙比色法 原理 在酸性介质中（pH12）中，低价汞和有机汞被氧化成高价汞，双硫腙与高价汞反应生成橙红色的双
19、硫腙汞络盐，溶于四氯化碳有机溶剂，进行比色测定。仪器试剂1）仪器 分光光度计；消化装置。2）试剂 硝酸；硫酸；400g/L氯化亚锡；吸收液；200g/L盐酸羟胺溶液；双硫腙-四氯化碳溶液（70%透光率）；汞标准溶液 ；1mol/L硫酸溶液 ；四氯化碳（优级纯）。操作步骤1）样品处理；2）标准曲线绘制；3）测定。结果计算10010)Hg(61mmw式中 w（Hg）样品中汞的质量分数（%）；m1 扣除空白后样品液中汞的质量（g）；m 样品的质量（g）。2.冷原子吸收法 原理 在强酸性溶液中，用氯化亚锡将汞离子还原为汞，以氮气或干燥清洁空气为载体，将汞吹出。汞蒸气在波长253.7nm处有强烈的吸收，
20、据此进行测定，与标准系列比较定量。仪器试剂1）仪器 测汞仪；消化装置；汞蒸气发生器；抽气装置。2）试剂 硝酸；硫酸；300g/L氯化亚锡溶液；无水氯化钙；5mol/L混合酸；0.1g/mL汞标准溶液。操作步骤 1）样品处理。2）标准曲线绘制。3）测定。图4-1 汞蒸气发生器 结果计算1001001010)Hg(61mmw式中 w（Hg）样品中汞的质量分数；m1 扣除空白后样品中汞的质量（g）；m 样品的质量（g）。1.双硫腙比色法操作步骤1）样品处理；2）标准曲线绘制；3）测定。结果计算10010)Pb(261VmVmw1式中 w（Pb）样品中铅的质量分数（%）；m1 测定扣除空白后样液中铅的
21、质量（g）；V1 样品溶液总体积（mL）；V2 测定用样品溶液体积（mL）；m 样品质量（g）。2.原子吸收分光光度法 原理 样品经处理后，制备成溶液，用甲基异丁基酮和碘化钾溶液萃取后，直接喷入火焰进行原子化，在283.3nm处测吸光度，与标准系列比较定量。仪器试剂1）仪器 原子吸收分光光度计。2）试剂 0.1mol/L盐酸；1mol/L碘化钾溶液；50g/L抗坏血酸溶液；硝酸-高氯酸（2+1）；甲基异丁基酮（MIBK）；铅标准溶液；操作步骤1）样品处理；2）标准曲线绘制；3）测定。结果计算10010)Pb()Pb(6mVw式中 w（Pb）样品中铅的质量分数（%）；（Pb）扣除空白后样液中铅的
22、质量浓度（g/mL）；V 测定时样液的体积（mL）；m 样品的质量（g）。沙门氏菌属属于肠杆菌科中的埃希氏菌族，沙门氏菌属的形态特 征是革兰氏阴性杆菌，无芽孢，无荚膜，大多数有动力、周生鞭毛。由沙门氏菌引起的疾病统称沙门氏菌病。食品沙门氏菌检验首先使用增菌培养法，然后进行分离培养，最后进行鉴定，作出判定。操作步骤：前增菌和增菌；分离；生化试验。志贺氏菌属属于肠杆菌科中的埃希氏菌族。志贺氏菌属的细菌通称痢疾杆菌，志贺氏菌属包括志贺氏痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌、鲍氏痢疾杆菌、宋内氏痢疾杆菌。志贺氏菌属的形态特征为革兰氏阴性杆菌，长约2m3m,宽0.5m0.7m。无芽孢，无荚膜，无鞭毛，不运动，有菌毛。
23、DNA的G+C为4953克分子%（Tm法）。志贺氏菌属的培养和生化反应特征是需氧或兼性厌氧，营养要求不高，能在普通培养基上生长，形成中等大小半透明的光滑型菌落。宋内氏痢疾杆菌菌落透明度差，常出现扁平的粗糙菌落。志贺氏菌属的细菌与沙门氏菌及其他肠道杆菌相比，对理化因素抵抗力较低，对酸较敏感，必须使用含有缓冲剂的培养基。含有高浓度的胆汁的培养基能抑制某些痢疾菌株生长。日光直接照射30min、506010min即被杀死，1%石炭酸中15min30min即被杀死。在适当湿度时能耐低温，在冰块中可存活三个月左右。因志贺氏菌在食品中的存活时间较短，所以检验时首先使用增菌培养基，然后再分离。在选择培养基上可
24、较厚地均匀涂抹，以增加检出的机会。葡萄球菌属属于微球菌科，根据生化性状和色素的不同，将葡萄球菌分为葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生性葡萄球菌三种。葡萄球菌属的形态特征是革兰氏阳性球菌，无鞭毛及芽孢，一般不形成荚膜。细菌繁殖时呈多个平面的不规则分裂，堆积成葡萄串状排列。在脓汁或液体培养基中生长，常呈双球或短链状排列，易被误认为链球菌。葡萄球菌属的培养和生化反应特征是营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适宜生长温度为37，最适宜pH为7.4，耐盐性强，在含100g/L150g/L的氯化钠培养基中生长，在氯化钠肉汤培养基中经37、24h培养后，呈均匀混浊生长。链球菌属于链球菌科，根据
25、溶血能力，将链球菌分为三类：甲型（型）溶血性链球菌；乙型（）溶血性链球菌；丙型（）链球菌。链球菌的形态特征是革兰氏阳性，呈球形或卵圆形，细胞在一个平面上分裂成成对或成链状排列，不形成芽孢，无鞭毛，不运动，大多数链球菌在幼龄培养时可见到由透明质酸形成的荚膜，继续培养时由于自身产生的透明质酸酶而使该荚膜消失。链球菌的培养和生化反应特征是营养要求较高，普通培养基中生长不良，在加有血液、血清、腹水等培养基中生长良好。需氧或兼性厌氧。最适宜生长温度为37，pH为7.47.6。在血清肉汤中易形成长链。管底呈絮状沉淀。在血琼脂平板上，形成灰白色、半透明或不透明、表面光滑、有乳光、直径为0.5mm0.75mm的圆而突起的微小菌落。通过二磷酸己糖途径发酵葡萄糖，主要产生右旋乳酸（同型发酵），接触酶阴性。链球菌的抵抗力不强，60、30min即被杀死。乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素和磺胺都很敏感。
