1、第六章第六章 临床临床生物化学检验的方法与试剂盒生物化学检验的方法与试剂盒 全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）右江民族医学院右江民族医学院医学医学检验检验学院学院 王太重王太重1全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒教学目标与要求教学目标与要求v掌握掌握:临床生物化学检验方法的分级、标准物质的分级；临床生物化学检验方法的分级、标准物质的分级；
2、临床生物化学检验方法和标准物质之间的关系；临床临床生物化学检验方法和标准物质之间的关系；临床生物化学检验的方法学评价；量值溯源的概念、内容生物化学检验的方法学评价；量值溯源的概念、内容和措施；试剂盒的性能指标与评价。和措施；试剂盒的性能指标与评价。v熟悉熟悉:试剂盒的质量标准；临床生物化学检验方法的试剂盒的质量标准；临床生物化学检验方法的选择与性能判断。选择与性能判断。v了解了解:临床生物化学检验方法的建立；临床生物化学检临床生物化学检验方法的建立；临床生物化学检验试剂盒的分类和特点；临床生物化学检验试剂盒的验试剂盒的分类和特点；临床生物化学检验试剂盒的制备。制备。2全国高等医药院校医学检验专
3、业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒目录目录 临床生物化学检验方法与标准物质临床生物化学检验方法与标准物质 1临床生物化学检验临床生物化学检验方法学评价与性能判断方法学评价与性能判断 2临床生物化学检验的试剂盒临床生物化学检验的试剂盒 3临床生物化学检验的量值溯源临床生物化学检验的量值溯源 4小结与展望小结与展望5返回总目录返回总目录3全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二
4、版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第一节第一节临床生物化学检验方法与标准物质临床生物化学检验方法与标准物质 一一、检验方法与标准物质的分级、检验方法与标准物质的分级 二、常规方法的选择二、常规方法的选择 三、方法的建立三、方法的建立4全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒1.决定性方法决定性方法（definitive method）指准确度最指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现
5、产高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法。生误差的原因或在某些方面不够明确的方法。(一）方法的分级一一、检验方法与标准物质的分级、检验方法与标准物质的分级 5全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒2.参考方参考方法法（reference method）指准确度指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差与重复测定的随机误差相比可以少，系
6、统误差与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性及较宽的忽略不计，有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。分析范围。(一）方法的分级6全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒3.常规方常规方法法（routine method）指性能指标指性能指标符合临床或其他目的的需要，有足够的精密符合临床或其他目的的需要，有足够的精密度、准确度、特异性和适当的分析范围，而度、准确度、特异性和适当的分析范围，而且经济实用。且经济实用。
7、(一）方法的分级7全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒 根据国际标根据国际标准化委员（准化委员（ISO）的权威解释：具有）的权威解释：具有一种或几种理化性质已经充分确定的特性，用以一种或几种理化性质已经充分确定的特性，用以校准仪器、评价测量方法或给材料赋值的一种材校准仪器、评价测量方法或给材料赋值的一种材料或物质，称为料或物质，称为参考物质参考物质（reference material，RM）。）。国内多称为标准物质、标准物、标准品
8、。国内多称为标准物质、标准物、标准品。(二二)标准物质的分级标准物质的分级8全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒 参考物质参考物质包括校包括校准物质准物质(calibration material，calibrator，校准物，校准物)和正确性质控物质和正确性质控物质(trueness control material)。校准物校准物是指在校准函数中其值被用作自变量的参是指在校准函数中其值被用作自变量的参考物质，用于对测量系统校准或
9、对材料赋值。考物质，用于对测量系统校准或对材料赋值。正确性质控物质正确性质控物质在国内多称为质控物、质控品、在国内多称为质控物、质控品、控制物，是用于评价一种测量系统的测量偏差的控制物，是用于评价一种测量系统的测量偏差的参考物质。参考物质。(二二)标准物质的分级标准物质的分级9全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒根根据据ISO，较高级别的参考物质分成以下两级：，较高级别的参考物质分成以下两级：1一级标准品（原级参考物）一级标准品（原
10、级参考物）是一种稳定而均一的是一种稳定而均一的物质，它的数值已由决定性方法确定，或由高度准物质，它的数值已由决定性方法确定，或由高度准确的若干方法确定，所含杂质也已经定量，属于有确的若干方法确定，所含杂质也已经定量，属于有证参考物质证参考物质(certified reference material，CRM)，附，附有有证书。证书。(二二)标准物质的分级标准物质的分级2二级标准品（次级参考物）二级标准品（次级参考物）它它的示值必须用一级的示值必须用一级标准品和参考方法并由训练有素的、能熟练掌握参标准品和参考方法并由训练有素的、能熟练掌握参考方法的操作者确定。在发达国家的二级标准品通考方法的操作
11、者确定。在发达国家的二级标准品通常是常是CRM。10全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒国际临床化学国际临床化学与检验医学联合会（与检验医学联合会（IFCC）提出：）提出：选择临床常规方法应具有选择临床常规方法应具有实用性实用性和和可靠性可靠性两方面两方面的要求的要求。至于某一项具体分析方法所应具有的性至于某一项具体分析方法所应具有的性能标准，可由临床化学家根据采用这一试验的目能标准，可由临床化学家根据采用这一试验的目的决定。的决定
12、。二、常规方法的选择二、常规方法的选择（一）常规方法的选择原则（一）常规方法的选择原则11全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒1.实用性实用性 一般应具备微量快速，便于急诊；费用低一般应具备微量快速，便于急诊；费用低廉；应用安全。廉；应用安全。2.可靠性可靠性 一般具有较高的精密度和准确度，以及较一般具有较高的精密度和准确度，以及较大的检测范围。精密度即变异系数（大的检测范围。精密度即变异系数（CV）一般应小）一般应小于于5%。准确
13、度是指测定值与。准确度是指测定值与“真值真值”的符合程度，一的符合程度，一般偏差系数应小于般偏差系数应小于5%。（一）常规方法的选择原则（一）常规方法的选择原则12全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒1.查阅文献与现场考查查阅文献与现场考查 根据方法选择的要求对已发根据方法选择的要求对已发表的各种检测方法进行比较与检验，确定哪些方法表的各种检测方法进行比较与检验，确定哪些方法有充分的科学根据及真实有充分的科学根据及真实 的使用价值。
14、有条件时通的使用价值。有条件时通过实验室之间交流，最好是现场考查。过实验室之间交流，最好是现场考查。（二）常规方法的选择程序（二）常规方法的选择程序 2.确定候选方法确定候选方法 经初步选定的方法称为候选方法。经初步选定的方法称为候选方法。候选方法确定后，要熟悉该法的原理、性能指标候选方法确定后，要熟悉该法的原理、性能指标及相应的条件等。及相应的条件等。13全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒三、方法的建立三、方法的建立（一）确定性
15、能目标与反应原理（一）确定性能目标与反应原理（二）选择材料和反应条件（二）选择材料和反应条件14全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒1.确定性能目标确定性能目标 根据建立方法的目的，在建立根据建立方法的目的，在建立方法之前，设计可以接受的性能目标，包括不方法之前，设计可以接受的性能目标，包括不精密度、不准确度、线性范围。方法的性能目精密度、不准确度、线性范围。方法的性能目标是方法建立的基础，也是判断建立方法是否标是方法建立的基础，也
16、是判断建立方法是否成功的标准。成功的标准。（一）确定性能目标与反应原理（一）确定性能目标与反应原理15全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒2.选择反应原理选择反应原理 临床生物化学检验方法按其传临床生物化学检验方法按其传统分类可分为光谱法、层析法、电泳法、酶法、统分类可分为光谱法、层析法、电泳法、酶法、电化学法、分子生物学和免疫化学法等，这些方电化学法、分子生物学和免疫化学法等，这些方法的建立首先要根据其技术的原理和被测物质的法的建
17、立首先要根据其技术的原理和被测物质的物理化学性质来确定。其中大部分是紫外可见物理化学性质来确定。其中大部分是紫外可见分光光度法，遵守郎伯比耳定律。分光光度法，遵守郎伯比耳定律。（一）确定性能目标与反应原理（一）确定性能目标与反应原理16全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒1.材料选择材料选择 根据方法的性能目标和反应原理选择根据方法的性能目标和反应原理选择材料，选择材料时应该注意纯度和结构，临床生物材料，选择材料时应该注意纯度和结构
18、，临床生物化学检验所用原料的纯度应在分析纯及其以上等级，化学检验所用原料的纯度应在分析纯及其以上等级，用作酶促反应底物的材料应注意其立体异构用作酶促反应底物的材料应注意其立体异构体，如体，如葡萄糖用作葡萄糖氧化酶的底物时，应选择分析纯葡萄糖用作葡萄糖氧化酶的底物时，应选择分析纯-D-葡萄糖。另外还应审核材料供应商的资质和材葡萄糖。另外还应审核材料供应商的资质和材料的生产合格证料的生产合格证。（二）选择材料和反应条件（二）选择材料和反应条件17全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方
19、法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒2.选择反应条件选择反应条件（二）选择材料和反应条件（二）选择材料和反应条件测定测定波长波长反应体系的反应体系的pH反应的温度和时间反应的温度和时间 试剂组份浓度试剂组份浓度 18全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒（1）选择合适的测定波长）选择合适的测定波长 一般选择产物或底一般选择产物或底物的最大吸收波长物的最大吸收波长作为测定波长，以作为测定波长，以可获得最大灵敏度。可获得最大灵敏
20、度。图图6-1 BCP法测定清蛋白光吸收曲线法测定清蛋白光吸收曲线19全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒 （2）反应体系的）反应体系的pH 对于酶促反应，反应体系的对于酶促反应，反应体系的pH一般应是酶促反应的一般应是酶促反应的最适最适pH，同时应兼顾酶、底物和产物的稳定性。，同时应兼顾酶、底物和产物的稳定性。（3）反应的温度和时间）反应的温度和时间 终点法选择在实时反应吸光度曲线的平坦期；速率终点法选择在实时反应吸光度曲线的平坦
21、期；速率法选择在零级反应期。法选择在零级反应期。（4）试剂组份浓度）试剂组份浓度 最适组份浓度为造成最大吸光度变化的最低浓度。最适组份浓度为造成最大吸光度变化的最低浓度。20全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒一、精密度评价一、精密度评价二、准确度评价二、准确度评价三、线性评价三、线性评价四、回收试验四、回收试验第二节方法学评价与性能判断第二节方法学评价与性能判断21全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规
22、划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒精密度精密度是规定条件下独立测定结果之间的符是规定条件下独立测定结果之间的符合程度合程度.精密度精密度的的评价采用重复性评价采用重复性试验试验 一、精密度评价一、精密度评价（一）目的与判断标准（一）目的与判断标准（二）评价前准备和评价步骤（二）评价前准备和评价步骤（三）统计分析（三）统计分析22全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章
23、临床生物化学检验的方法与试剂盒重复性试验的目的是测定候选方法的随机误差。重复性试验的目的是测定候选方法的随机误差。指标是变异系数指标是变异系数CV、标准差，、标准差，CV越小越小，精密度越好，反之则差，故称其为不精精密度越好，反之则差，故称其为不精密度。密度。一、精密度评价一、精密度评价（一）目的与判断标准23全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒全国临床检验操作规程（第三版）给出了美全国临床检验操作规程（第三版）给出了美国国会国国会
24、1988年临床实验室修正案（年临床实验室修正案（clinical laboratory improvement amendment，CLIA88）推荐的常规）推荐的常规化学分析项目的化学分析项目的允许误差（允许误差（EA）（表（表6-1）一般情况下，一般情况下，EA是是CLIA88推荐的可接受性能的推荐的可接受性能的1/4，不同的医学决定水平（不同的医学决定水平（Xc）有不同的）有不同的EA1.推荐标准推荐标准 24全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化
25、学检验的方法与试剂盒表表6-1 CLIA88推荐的允许误差推荐的允许误差(部分部分)分分析项目析项目决定水平（决定水平（Xc）可接受性能可接受性能允许误差（允许误差（EA）氯氯(Cl)90 mmol/L5%1.1110 mmol/L5%1.4总胆红素总胆红素(TBIL)17.1 25mol/L6.841.71342.1 mol/L20%17.1总钙总钙(Ca)1.71 mmol/L0.2490.0622.69 mmol/L0.2490.0623.24 mmol/L0.2490.06225全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验
26、（第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒1.96s EA，可以初步接受，进一步判断见后述的，可以初步接受，进一步判断见后述的方法性能判断。方法性能判断。其依据是其依据是95%的随机误差值为的随机误差值为1.96 s。2.普通标准普通标准26全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒1.评价前准备评价前准备 对于评价对象和评价方案均应熟悉。对于评价对象和评价方案均应熟悉。试验用试剂应是同批
27、次配制，或同一批号试验用试剂应是同批次配制，或同一批号的商品试剂盒和参考物，仪器也应处于良好的商品试剂盒和参考物，仪器也应处于良好的工作状态。的工作状态。（二）评价前准备和评价步骤（二）评价前准备和评价步骤27全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒1.评价前准备评价前准备 试验用样品一般选择试验用样品一般选择2个（亦可更多），一个个（亦可更多），一个在参考范围或在医学决定水平附近，另一个为异在参考范围或在医学决定水平附近，另一个为异常
28、值，被测物在疾病时增高者用高值，降低者用常值，被测物在疾病时增高者用高值，降低者用低值；试验样品的介质应与临床样品一致，并应低值；试验样品的介质应与临床样品一致，并应妥善保存，应保证在整个试验过程中稳定。妥善保存，应保证在整个试验过程中稳定。先作一个初步的批内精密度测定，如果批内精先作一个初步的批内精密度测定，如果批内精密度不符合生产厂家规定的质量标准，则联系厂密度不符合生产厂家规定的质量标准，则联系厂家对仪器进行修理或保养，直到批内精密度符合家对仪器进行修理或保养，直到批内精密度符合生产厂家规定的质量标准才能进行下面的试验。生产厂家规定的质量标准才能进行下面的试验。（二）评价前准备和评价步骤
29、（二）评价前准备和评价步骤28全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒批内精密度计算公式如下（教材式6-1）：CV批内批内（%）=nXxi1)(22nXXnsii100 xs（二）评价前准备和评价步骤29全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒2.评价步骤 2.评价步骤评价步骤用
30、用2个样品每天测定个样品每天测定2批，批间测定间隔不得少于批，批间测定间隔不得少于2h，每批测定均作，每批测定均作2份，至少共测定份，至少共测定20天。天。每批测定至少做一个质控。每批测定至少做一个质控。（二）评价前准备和评价步骤30全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒原始实验数据整理表原始实验数据整理表1（三）统计分析1.数据整理数据整理31全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验
31、临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒中间计算结果表中间计算结果表32全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒IXXAii2)(I1i221式中式中 I=总天数（总天数（20）=第第 i天第天第1批测定的平均值批测定的平均值 =第第 i天第天第2批测定的平均值批测定的平均值A批间变异估计值批间变异估计值1iX2iX（三）统计分析2.统计计算统计计算 首先计算参数首先
32、计算参数A、B和和Sr，然后计，然后计算批内、批间、算批内、批间、天间和总变异系天间和总变异系数。数。33全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒式中式中=第第 i天全部测定的平均值天全部测定的平均值=测定总均值测定总均值 B=天间变异估计值天间变异估计值 1)(I1i2IXXBiiXX（三）统计分析ISr4)X-(XI1i21j2ijij211ijX式中式中J =每天测定的样品数（共每天测定的样品数（共2个）个）=第第 I天内样品天内
33、样品J的第一次测定结果的第一次测定结果 =第第I天内样品天内样品J的第二次测定结果的第二次测定结果 Sr批内标准差批内标准差 2ijX34全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒式中式中:Srr批间标准差批间标准差;Sdd天间标准差天间标准差2222rrrSAS2222ABSdd（三）统计分析CV批内（%）=1002XSr100X2rrS100X2ddSCV批间（%）=CV天间（%）=CV总（%）=100222XSSSrddrr35全国
34、高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒二、准确度评价二、准确度评价（一）目的要求（一）目的要求（二）比较前准备和评价步骤（二）比较前准备和评价步骤（三）统计分析（三）统计分析36全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒（一）目的要求（一）目的要求 须具备：须具备：比较试验方法有更好
35、的精密度。比较试验方法有更好的精密度。干扰已知。干扰已知。与候选方法使用相同的计量单位。与候选方法使用相同的计量单位。37全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒1比较前准备比较前准备 试验者应熟悉所用的仪器、试验方法、比较方试验者应熟悉所用的仪器、试验方法、比较方法和评价方案。法和评价方案。试验样品应收集新鲜的正常和异常的临床样品，试验样品应收集新鲜的正常和异常的临床样品，应有足够宽的浓度范围，各浓度应有合适的比例。应有足够宽的浓度范
36、围，各浓度应有合适的比例。如不能及时测定，样品应妥善保存并应在分析物如不能及时测定，样品应妥善保存并应在分析物的稳定期内测定。的稳定期内测定。（二）比较前准备和评价步骤 38全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒2评价步骤评价步骤 样品数至少为样品数至少为40个，每个样品用个，每个样品用2种方法分种方法分别作双份测定，因此样品应有足够的量，如临别作双份测定，因此样品应有足够的量，如临床样品的量太少可将床样品的量太少可将2份含量相近的样
37、品混合。份含量相近的样品混合。每天测定每天测定8个样品，双份测定时第一次按顺序个样品，双份测定时第一次按顺序1，27，8，第二次，第二次8，72，1，共测试，共测试5天。天。（二）比较前准备和评价步骤39全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒表中代码注释：表中代码注释：DXi=|Xi1Xi2|,DYi=|Yi1Yi2|,DXi=|Xi1Xi2|/X DYi=|Yi1Yi2|/YX=（Xi1Xi2）/2Yi=（Yi1Yi2）/2（三）统
38、计分析样品号(i)比较方法（X）试验方法（Y）Xi1Xi2DXiDXiYi1Yi2DYiDYi1401.数据整理见下表数据整理见下表40全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒2.离群点的检查离群点的检查超过下列控制限的数据为离群点数据。超过下列控制限的数据为离群点数据。只有只有1个离群点数据，可直接剔除后进行统计，个离群点数据，可直接剔除后进行统计，如出现如出现2个或以上的离群点，应查找原因后剔除、个或以上的离群点，应查找原因后剔除、
39、补做。补做。（三）统计分析41全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒DXi 超过DX控制限：DX控制限=4DYi 超过DY控制限：DX控制限=4 DXIDXiDX/DYIDYiDY/控制限的计算42全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒 DXi 超过DX控制限：DX控制限=4
40、 DYi 超过DY控制限：D控制限=4 DXIDXiDX/DYIDYiDY/控制限的计算43全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒Eij 超过E控制限：Ei1=1XiYi 1Ei2=22XiYi 402801EijEE控制限控制限=4E控制限的计算44全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验
41、的方法与试剂盒Eij 超过E控制限：Ei1=Ei2=E控制限控制限=4E1/11XiXiYi 2/22XiXiYi402801EijE控制限的计算45全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒3.试验方法试验方法(Y)与比较方法与比较方法(X)相关回归分析相关回归分析22)YYij()XXij()YYij)(XXij(r r0.975 决定系数r20.95，说明两方法的相关性良好。相关系数相关系数r 的计算：的计算：46全国高等医药院校医
42、学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒回归方程的计算：回归方程的计算：2)XXij()YYij)(XXij(bY=a+bXa=（b )YX（三）统计分析47全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒三、线性评价三、线性评价（一）目的要求（一）目的要求（二）评价前准备（二）评价前准备（三）线性评价的
43、样品（三）线性评价的样品（四）单项式线性统计分析（四）单项式线性统计分析（五）多项式线性分析（五）多项式线性分析48全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒线性范围线性范围（linear range）指检测信号与被测）指检测信号与被测物浓度呈线性时的被测物浓度范围。物浓度呈线性时的被测物浓度范围。测量范围测量范围（measuring range，分析范围）指，分析范围）指在允许误差极限内所能检测的被测物浓度范在允许误差极限内所能检测的被
44、测物浓度范围。围。三、线性评价三、线性评价49全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒常规方法应具有较宽的分析范围，至少应包含常规方法应具有较宽的分析范围，至少应包含95的临床样本，包括临床可能出现的高值。的临床样本，包括临床可能出现的高值。太窄后容易导致系统误差。太窄后容易导致系统误差。（一）目的要求50全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六
45、章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒评价前必须：评价前必须：熟悉仪器、评价方案和试剂。熟悉仪器、评价方案和试剂。评价样品的介质应与实际测定的样品相一致，理评价样品的介质应与实际测定的样品相一致，理想的样品是病人的低值或高值样品，这往往不易收想的样品是病人的低值或高值样品，这往往不易收集到，亦可用病人的混合样品加入分析物作为高值集到，亦可用病人的混合样品加入分析物作为高值样品，用正常人样品作为低值样品。低值样品在必样品，用正常人样品作为低值样品。低值样品在必要时可作减量处理：如分析物为酶可以加热，小分要时可作减量处理：如分析物为酶可以加热，小分子化合物可以透析，脂
46、类可用超离心或多价阴离子子化合物可以透析，脂类可用超离心或多价阴离子沉淀。难以收集或处理低值样品时，还可用收集到沉淀。难以收集或处理低值样品时，还可用收集到的高值样品用生理盐水进行系列稀释得到。的高值样品用生理盐水进行系列稀释得到。（二）评价前准备51全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒线性评价应有线性评价应有至少至少5个不同浓度个不同浓度可选择低值和高值样品各一个，可选择低值和高值样品各一个，低值样品为低值样品为1号，高值样品为号
47、，高值样品为5号，号，二者按体积二者按体积3：1混匀为混匀为2号，等份混匀为号，等份混匀为3号，号，1：3混匀为混匀为4号，形成系列评价样品。号，形成系列评价样品。（二）评价前准备52全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒至少至少5个不同浓度的样品（个不同浓度的样品（X），随机排列，每），随机排列，每个样品重复测定个样品重复测定4次（次（Y），因此），因此样品应有足够样品应有足够的量，并且分析要求在当天完成。的量，并且分析要求在当天完
48、成。（二）线性评价样品53全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒样品序号样品序号X1X2X3X4X5制备浓度制备浓度97760142220842746测定浓度测定浓度Y197.5764142520902748测定浓度测定浓度Y297762142220882748测定浓度测定浓度Y396.8760142020852741测定浓度测定浓度Y496.5756141820802735极差极差D=Y1-Y41.0871013Y1 Y20.523
49、20D1=(Y1-Y2)/D0.50.250.430.200Y3-Y40.34256D2=(Y3-Y4)/D0.30.50.290.500.46界限值界限值P0.05=0.765,P0.01=0.889线性评价的测定数据与离群点检查线性评价的测定数据与离群点检查（四）单项式线性统计分析1.数据整理与离群点的检查数据整理与离群点的检查4次重复测定结果由高到低排序，以酶法测定肌酐为例，见表次重复测定结果由高到低排序，以酶法测定肌酐为例，见表6-6：54全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检
50、验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒2.线线性回归分析性回归分析 b=1.0002a=0.00564Y=0.00564+1.0002X（四）单项式线性统计分析55全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒第六章临床生物化学检验的方法与试剂盒3.组内变异试验组内变异试验计算各组内变异均方差（SS组内）：422/)Y(YSS组内（四）单项式线性统计分析56全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验
