1、富血小板血浆的临床应用 唐唐 都都 医医 院院 穆穆 士士 杰杰02目 录21 富血小板血浆概念Part 1 富血小板血浆发展历史Part 2 富血小板血浆制备方法Part 3 富血小板血浆成分特点Part 4 富血小板血浆临床应用及研究Part 5概 念22富血小板血浆富血小板血浆凝胶 Platelet-rich plasma,PRP Platelet-rich plasma gel,PRG全血通过梯度离心分全血通过梯度离心分层后得到的富含血小层后得到的富含血小板的血浆部分，它含板的血浆部分，它含有多种较丰富的生物有多种较丰富的生物活性因子。活性因子。PRP被凝血酶等激活被凝血酶等激活物激活
2、后形成的胶冻物激活后形成的胶冻状物，它具有完整的状物，它具有完整的三维结构和良好的组三维结构和良好的组织相容性的纤维蛋白织相容性的纤维蛋白支架。支架。PRP发展历史23Harkedeng 首次分离制备出PRP，将其用于心外科手术后患者，取得良好的疗效。Okuda等发现血浆中提取的富血小板血浆含多种生长因子。Hood等在PRP中加入凝血酶和钙离子，提出了PG概念，将其所形成的凝胶状物质用于组织修复。Whitman率先将自体PRP用于口腔颌面外科手术修补骨组织。PRP制备方法 根据血液成分在离心过程中的沉降速率不同来提取。无统一标准，都需两次离心。全自动制备法、手工制备法。24影 响 PRP血小板
3、抗凝剂抗凝剂离心力离心力离心时间离心时间离心次数离心次数凝胶激活剂凝胶激活剂浓 度活 性回收率PRP制备方法 全自动法（血浆分离置换法）利用血成分分离耗材分离制备得到血小板血浆。自动化程度高、血小板纯度浓度高25PRP制备方法 手工制备法 都为两步法，但离心力、离心时间略有不同。初次200g离心10min,二次1200g离心10min,制备PRP中血小板计数约为全血6.17倍，效果较好。（血液离心后分3层：由下至上-红细胞层、血小板浓缩物层、贫血小板血浆层）用中间层再次分离。26PRP成分特点27PRP纤维蛋白白细胞高浓度血小板其它PRP成分特点 血小板 成人：平均195*109/L，PRP约
4、为全血3-17倍。血小板结构图 生理性止血-通过黏附反应作用起到初期止血功能。组织修复-通过黏附于血管壁和插入内皮细胞之间来修复血管内皮，保持其完整性。调控炎症和免疫反应-通过调节其表面粘附及表面受体的表达来实现，如介导白细胞作用。28PRP成分特点-血小板29凝血酶凝血酶血小板源性生长因子转化生长因子胰岛素样生长因子表皮生长因子血管内皮细胞生长因子成纤维细胞生长因子血小板在凝血酶激活后聚集，由颗粒释放生长因子（GF），可与目标受体上的结合激活诱导蛋白再生过程，如细胞增殖、基质形成、骨形成、胶原蛋白合成等。血小板血小板PRP成分特点-血小板 血小板源性生长因子（PDGF）一种促细胞分裂蛋白，第
5、一个被发现存在于血小板中，是趋化作用最强的骨生长因子之一。可促进血管生成、活化巨噬细胞，刺激成纤维细胞、血管平滑肌细胞、神经胶质细胞等中胚层细胞的增殖和活性，210PRP成分特点-血小板 转化生长因子-（TGF-）以旁分泌或自分泌方式作用于成纤维细胞、骨髓干细胞、成骨前体细胞和破骨细胞。TGF免疫染色图 参与体内多种炎症反应和组织修复，促进细胞外基质分泌，提高成纤维细胞增殖能力，刺激胶原蛋白1和纤维连接蛋白的生物合成以及骨基质的沉积，抑制破骨细胞形成和骨吸收发生。211PRP成分特点-血小板 胰岛素样生长因子（IGF）作用：趋化成纤维细胞，刺激蛋白质合成。刺激骨细胞增殖、分化，促进软骨和骨基质
6、生成。212PRP成分特点-血小板 表皮生长因子（EGF）新生血管重要的诱导因子。可促进创口愈合、参与血管生成。刺激内皮细胞有丝分裂和细胞迁移。还可增加血管通透性。213PRP成分特点-血小板 血管内皮细胞生长因子（VEGF）是高度保守的同源二聚体糖蛋白。二条分子量各为24kDa的单链以二硫键组成二聚体。能直接作用于血管内皮细胞促进血管内皮细胞增殖，增加血管通透性。诱导内皮细胞的增生和迁移，启动血管生成反应。214PRP成分特点-血小板 成纤维细胞生长因子（FGFs）参与血管形成、损伤愈合和胚胎发育等过程，是关节软骨细胞最具显著效应的有丝分裂刺激原和形态原之一。215PRP成分特点-白细胞 白
7、细胞：参与机体免疫和防御功能 帮助机体清除局部病原体、增强抗感染能力；帮助机体清除局部坏死组织，加快组织修复。受血小板分泌生长因子趋化，本身可分泌生长因子直接参与组织修复。216PRP成分特点-其它 其它成分如：纤维连接蛋白（FN）血小板反应蛋白（TSP）骨连接蛋白（ON）玻璃体连接蛋白（VN）对伤口感染、促进组织修复及增加新生血管内膜的形成发挥重要作用。217PRP218 优点一 优点二来源丰富、取材方便、操作简单、价格低廉具有自源性，不会出现免疫排斥反应，没有异体移植传播疾病风险PRP219 优点三 优点四含高浓度多种生长因子，且比例接近正常人，具备最佳协同效应，（避免单一因子不能良好诱导
8、创面愈合）PRP凝胶具有极好粘附性，使用时可较好的黏附在创面上而不流失，避免损失，保证局部较高的生长因子浓度。PRP220 优点五 优点六因含有较多的白细胞和单核细胞，可起到防止感染作用。避免了异体和人工合成组织的致畸危险，同时各种因子表达良好，避免了诱导肿瘤形成的可能。PRP临床应用及研究221骨缺损修复骨缺损修复软骨损伤修复软骨损伤修复预防骨感染预防骨感染急性创面急性创面慢性难愈合伤口慢性难愈合伤口皮肤脂肪组织液化皮肤脂肪组织液化急性运动损伤急性运动损伤慢性运动损伤慢性运动损伤颌骨相关疾病颌骨相关疾病牙周病牙周病上颌窦手术上颌窦手术烧伤整形科烧伤创面烧伤创面脂肪移植脂肪移植皮肤组织再生皮肤
9、组织再生骨科运动损伤普外科口腔颌面外科222口腔颌面外科223实验方法：l将患者因正畸拔出的患牙传代培养，取第5代细胞作为试验用牙周膜成纤维细胞来源；l人病牙制成1mm厚根片；2次离心法制备PRP；观察不同浓度PRP（A组10%、B组15%、C组20%、D组30%、对照组无PRP）l对人牙周膜成纤维细胞在脱矿的病变牙根表面附着情况及胶原形成情况。研究一研究一224结论：PRP可促进牙周细胞在病变牙根表面的附着，其中20%浓度最佳。PRP可促进牙周细胞外基质胶原的形成。口腔颌面外科相关研究225Whitman用PRP联合骨移植治疗骨缺损获得成功。Suba等应用磷酸三钙复合PRP治疗犬牙槽骨缺损，
10、发现PRP可明显促进骨再生。Lekovic研究发现PRP能促进牙槽骨再生。张丽等的研究证实PRP联合植骨术治疗牙周邻面骨缺损效果优于单纯植骨术。Philippart等将PRP混合物充填于上颌窦中，6个月组织学观察显示有活跃的骨新生活动。Rodrignez等在上颌窦区植入PRP及种植体，移植成功率达92.9%，表明PRP可加快骨再生速度，提高骨再生质量。颌骨相关研究牙周病上颌窦 手术226骨 科227研究二方法：l选择股骨干骨不连、骨缺损2需行骨移植治疗的40例患者，随机分为实验组(脱蛋白牛松质骨+PRP)及对照组(脱蛋白牛松质骨)，每组20例。l术后7和1、2、3、6、12个月定期摄线片检查，
11、参照Lane-Sandhu的线评分标准评分,并比较两组骨痂灰度、愈合情况及愈合速度。228研究二结果：如表1（线评分标准）评分，在伤口愈合天数及伤口引流量上，实验组明显少于对照组。如表2、3在术后实验组的成骨率、成骨速率明显高于对照组，说明PRP有较好的促进骨缺损修复的作用。骨科相关研究229Marx等发现复合等发现复合PRP的移植骨修复速度比单纯用移植骨修复快的移植骨修复速度比单纯用移植骨修复快1.62-2.16倍。倍。Bielecki等用等用PRP经皮注射治疗骨不连取得良好疗效。经皮注射治疗骨不连取得良好疗效。Drengk等研究显示等研究显示PRG作为细胞支架能明显促进软骨细胞遇见作为细胞
12、支架能明显促进软骨细胞遇见充质干细胞的增生和向软骨细胞分化。充质干细胞的增生和向软骨细胞分化。Wu等认为等认为PRP可以作为软骨细胞的载体，治疗关节软骨缺损。可以作为软骨细胞的载体，治疗关节软骨缺损。Bielecki的研究显示血小板的研究显示血小板-白细胞凝胶在体外可抑制金葡、大肠白细胞凝胶在体外可抑制金葡、大肠杆菌生长，提示杆菌生长，提示PRP可作为可作为“生物抗菌制剂生物抗菌制剂”。骨缺损修复软骨损伤修复预防骨 感染230运动医学231研究三方法：患者11例跟腱有炎症19处，每次制备患者自体PRP2ml行跟键周围注射。每周1次，5次为1个疗程，治疗期间患者停用一切药物及其他的药物辅助治疗。
13、患者随访3一8个月，平均6个月，观察疗效。结果：跟腱有炎症的地方19处，治疗后痊愈5处，显效13处，治疗有效率94.74%。结论：PRP对跟腱炎疗效肯定，是一种安全有效的方法。运动损伤相关研究232急性运动损伤Sanchez的研究发现应用PRP患者在关节活动度、功能恢复及术后并发症方面均优于单纯修复患者。耿震的研究表明PRP在改善肌腱愈合质量的同时也加速了愈合进程。Radice的研究显示，应用髌韧带进行前交叉韧带重建时应用PRP，可将韧带成熟时间从12个月缩短到3.6个月。Sanchez等报道肌肉拉伤运动员在超声波引导下局部注射PRGF后，功能恢复时间明显缩短，且运动训练后未出现肌肉纤维化现象
14、。运动损伤相关研究233慢性运动损伤Mishra通过对难治性肱骨外上髁炎患者注射PRP发现，只有非激活状态并同时含有浓缩血小板和白细胞的PRP有效。Barrett发现慢性跖腱膜炎患者在B超引导下局部注射PRP治疗效果好。王虎等的研究表明，和类固醇比PRP治疗跟痛症取得了良好疗效。Kon E等用PRP和透明质酸盐对照注射入膝关节治疗骨性关节炎，发现其疗效优于传统的透明质酸盐。234普外科235研究四方法：抽取难愈合伤口患者静脉血，与氯化钙、凝血酶混合后制成PRP凝胶敷于患者创面，凡士林纱布填塞。每7天换1次，3次一疗程。评估治疗后伤口变化情况。236研究四结果：29例患者在三次使用PRP后伤口明
15、显缩小，大部分坏死组织清除，组织色泽红润血供良好，无明显渗液和脓液。3例效果不明显。治疗3个月：10例伤口完全愈合，形成瘢痕组织；11例创面覆盖率75%，9例50%-75%，2例50%；治愈率31.2%，显效率93.8%。结论：PRP修复慢性难愈合伤口是一种有效、实用的治疗方法。普外科相关研究237Bhanot S的研究指出，PRP可加速表皮化生长，减轻创伤后局部肿胀和疼痛，减少术后伤口渗出。Man D将PRP凝胶用于皮瓣移植术，发现血管创出血被凝胶封闭，提高了手术成功率。Carter CA等用PRP修复马小腿伤口发现，PRP加快上皮细胞增殖，促进伤口胶原合成以及血管再生。郭彦杰等应用PRP创
16、面内注射治疗下肢慢性难愈合伤口，疗效显著。夏江霓等对慢性溃疡患者应用PRP凝胶治疗，发现PRP能更好的促进伤口处肉芽组织形成。Giorgio研究认为PRP可激发细胞增殖分化和微血管的形成，增强局部组织自我修复能力，从而有利于切口愈合。刘晓韬的研究显示，应用PRP注入脂肪液化切口深部的患者愈合时间明显减少，提示PRP可以减轻疼痛、术后出血，减少术后并发症。急性创面 慢性难愈合伤口手术切口脂肪液化238烧伤整形科239研究五方法：10只裸鼠随机选择一侧背部皮下组织作为PRP组(0.5 mL人颗粒脂肪+0.1 mLPRP)受区，一侧作为对照组(0.5 mL 人颗粒脂肪+0.1 mL 磷酸盐缓冲液)受
17、区。于植入后10、90d处死后取出移植物进行大体形态观察、体积测定及组织学检测。240研究五结果：术后90dPRP组移植物存留量明显多于对照组，且周围血供更丰富，触之质地较柔软，更接近正常脂肪组织。在术后10、90d，PRP组存留体积均大于对照组。241研究五脂肪移植物组织结构观察（苏木精-伊红染色，X100）对照组 PRP组10d90d结果：术后10、90d PRP组脂肪细胞均维持较好形态，细胞间隙保持较好，仅有少量脂肪空泡形成。对照组移植90d后组织结构较混乱，大量结缔组织及脂肪空泡形成，部分出现坏死，仅少量细胞能够维持正常的形态。242研究五结果：定量比较发现，在各时间点，PRP组均比对
18、照组具有更多正常脂肪细胞面积及微血管数量，比对照组具有更少脂肪空泡面积，说明PRP明显改善了移植脂肪组织的组织学质量。243烧伤整形科相关研究Nalbonesi等应用PRP成功治疗了14例因接受面部整形手术导致皮肤和软组织损伤的患者。Hum等研究发现，局部注射PRP疗效明显优于抗生素软膏好湿性敷料，可使伤口愈合率超过80%。黄云严的将PRP凝胶用于治疗60例面部二度烧伤创面，发现在伤后早期使用PRP凝胶可使创面愈合速度加快、愈合率提高，减少瘢痕形成。244其它245研究六方法：健康大耳白兔10只双侧面神经上颊支横断后置入硅胶神经再生导管(自制)，采用双侧自身对照，随机分为实验侧和对照侧。实验侧
19、注入PRP，对照侧注入生理盐水；8周后进行相关检测分析评价面神经恢复再生情况。246研究六247结果：面神经损伤后8周兔实验侧及对照侧均能引出清晰稳定的面神经复合动作电位，面神经损伤兔实验侧动作电位潜伏期明显短于对照侧，而波幅则高于对对照侧，说明PRP能促进面神经功能的恢复。研究六248研究六结果：显微图像分析也表明，面神经损伤后8周实验组有髓轴突数目，直径及面积明显高于对照组。表明发生面神经损伤后，早期应用PRP有利于面神经的修复和再生。249研究七方法：离心法分离兔全血获得PRP。采用5%PRP作用于兔角膜基质细胞，CCK-8(细胞增殖-毒性检测试剂盒)法检测 PRP促角膜基质细胞增殖的作
20、用。PRP与凝血酶激活剂以 9:1的比例制备富血小板凝胶，对制备的富血小板凝胶进行组织形态学、对角膜基质细胞的作用、黏附性、生物相容性等多方面观察与评价。250结果：培养后测定3组细胞吸光度OD值可见，对照组OD值随培养时间延长而不增加，增殖基本停滞;PRP组增加速度较FBS组及对照组快。表明，PRP与 FBS一样具有促角膜基质细胞增殖的作用。研究七251结果：组织学切片HE染色发现，制备的富血小板凝胶呈典型的多孔性结构，凝胶内大量的纤维交织，呈有序排列，形成支架，角膜基质细胞接种在富血小板凝胶表面培养后可见凝胶表面形成复层基质细胞，并长入凝胶内。说明角膜基质细胞在富血小板凝胶内生长状态良好，
21、提示未来以富血小板凝胶为载体重建角膜基质层的应用前景。研究七252研究八方法：收集128例诊断为度症状性宫颈内膜移位患者，随机分为自体PRP注射组（实验组）和微波组（对照组）。阴道镜评估宫颈糜烂区愈合情况，应用Kirby-Baue抑菌圈试验评价PRP的抗菌性能，采用LIVE/DEAD BacLight死活菌试剂盒检测生物膜中细菌活力。富血小板血浆治疗症状性宫颈内膜移位的研究253研究八结果：62例PRP组患者中40例治愈、20例显效，总有效率为96.8%；60例微波治疗患者中31例治愈、17例显效，总有效率80.0%。术后创面愈合时间：PRP宫颈创面愈合速度（5.3 2.1 周）较微波组（7.9 2.8 周）显著加快。PRP 组治疗相关的不良反应（阴道分泌物及出血等）显著低于微波组.结论：PRP 具有很好的耐受性和安全性，对治疗症状性宫颈内膜移位具有良好的应用前景。存在问题2544如何将PRP更好的与传统的骨再生方式结合。123国内无统一标准，需要建立高效稳定的PRP制备方法。血小板在体外易受外源性刺激而被破坏或活化。激活剂牛凝血酶和氯化钙，伴随凝血因子抗体的形成。255
