1、生化生化PBL组员：12021/6/10HIV感染的实验室诊断技术感染的实验室诊断技术 1.HIV分离及培养2.HIV抗体检测 3.HIV抗原检测4.HIV核酸检测 5.流式细胞检测22021/6/101.HIV分离及培养分离及培养优点：病毒培养是检测HIV感染最精确的方法，特异性强，不会出现假阳性。通过培养外周血单个核细胞进行HIV诊断，对于确认抗原/抗体检测不确定的个体和阳性母亲的新生儿是否感染HIV有重要意义。缺点：敏感性差，很少用于窗口期检测。32021/6/102.HIV抗体检测抗体检测酶联免疫吸附试验（ELISA）颗粒凝集试验(PA）快速试剂(rapid test，RT)42021
2、/6/10酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ELISA）固相固相血清标本血清标本酶标记酶标记物物固相固相血清标本血清标本YYYYYYYYYYYYYYYY第一、二第一、二代代第三代第三代第四代第四代52021/6/10颗粒凝集试验颗粒凝集试验(PA）原理为将纯化的HIV抗原连接到红色明胶颗粒上制成致敏颗粒，当加入的检测标本中含有HIV抗体时，即可发生肉眼可见的凝集反应。优点操作简便，适合于小型实验室的HIV日常筛查工作，也可与ELISA方法配合用于筛查阳性标本的复检试验。62021/6/103.HIV抗原检测抗原检测用ELISA检测P24抗原，在HIV感染早期尚未出现抗体时，血中就有该抗原存在
3、。由于P24量太少，阳性率通常较低。现有用解离免疫复合物法或浓缩P24抗原，来提高敏感性。HIV-lp24抗原的阳性结果只能作为感染的辅助诊断，必须经确认试验确诊，p24抗原阴性也不能排除HIV感染的可能性。72021/6/104.HIV核酸检测核酸检测 HIV核酸的核酸的定性定性检测检测 HIV核酸的核酸的定量定量检测检测 生物芯片生物芯片检测检测82021/6/10HIV核酸的核酸的定性定性检测检测方法原位杂交、RNA印迹、DNA印迹、多聚酶链反应(PCR)、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)等，以PCR和RT-PCR最为常用。92021/6/10HIV核酸的核酸的定量定量检测检测1.RT
4、-PCR2核酸序列扩增实验(NASBA)3.分枝DNA信号扩大系统(bDNA)为4荧光实时PCR102021/6/10多聚酶链式反应多聚酶链式反应(PCR)(PCR)主要用于检测血浆中主要用于检测血浆中HIVHIV的的RNARNA含量，目前主要用于预测母亲将含量，目前主要用于预测母亲将HIVHIV传染给胎儿的可传染给胎儿的可能性以及新生儿的能性以及新生儿的HIVHIV感染状况。此外，尚可用于判感染状况。此外，尚可用于判断病人的预后及监测抗病毒治疗的效果。断病人的预后及监测抗病毒治疗的效果。RT-PCR112021/6/10这种实验过程是在温度控制下进行的，一个这种实验过程是在温度控制下进行的，
5、一个变性变性-复性复性-延伸延伸的过程就是一个的过程就是一个PCRPCR循环。循环。PCRPCR就是在合就是在合适条件下的这种循环的不断重复；延伸的产物经第适条件下的这种循环的不断重复；延伸的产物经第二循环变性，亦与引物互补，作为引物引导二循环变性，亦与引物互补，作为引物引导DNADNA合成合成的新模板；因此，第二循环后延伸的模板由第一循的新模板；因此，第二循环后延伸的模板由第一循环的环的4 4条增为条增为8 8条，依此类推，以后每一个循环后的条，依此类推，以后每一个循环后的模板均比前一个循环增加模板均比前一个循环增加1 1倍。倍。特点：特点：特异性强、敏感性高、快速、简便、对起始特异性强、敏
6、感性高、快速、简便、对起始材料质量要求低等特点。材料质量要求低等特点。122021/6/10 优点优点1.与传统检测抗体的方法相比，其灵敏度和特异性更高，从而对HIV的定量检测提供了有效的手段；2.不依赖于宿主的免疫反应，无须等到免疫系统对HIV产生抗体后才能检定宿主受HIV感染的状态，这有利于对血清阳转以前标本的检测和对阳性母亲所生婴儿的HIV感染的调查；3.对潜伏状态的HIV的检测不依赖于HIV在宿主细胞的生长活性。132021/6/10核酸序列扩增实验核酸序列扩增实验(NASBA)(NASBA)也属目标核酸扩增法，是一种等温扩增系统。原理是通过系统内的混合酶系统(包括逆转录酶、核糖核酸酶
7、H和T7RNA聚合酶)体外模拟逆转录病毒在细胞内的复制过程。优点：该方法对AG各亚型均有较好反应性，能测定各种生物样品，对各种抗凝剂均适用缺点：样品提取和测定反应时要进行大量手工操作，实验内、外误差也相对较大。142021/6/10152021/6/10为什么艾滋病不可为什么艾滋病不可治愈？治愈？162021/6/101.艾滋病病毒进入人体后，会攻击一类免疫细胞T细胞，导致它们遭到完全破坏，免疫系统出现了问题，自然就难以清除病毒了。2.如果艾滋病病毒进入潜伏期，病毒潜伏在免疫细胞中，HIV前病毒整合入宿主细胞基因组中，不发生复制作用，免疫会把HIV忽略不被免疫系统识别，自身免疫无法清除。这也可
8、能导致药物对其无效。172021/6/10而艾滋病病毒可以通过被感染的供体细胞作为媒介在细胞间传播。一旦发现未受感染的靶细胞，供体细胞便将病毒传染给该细胞。182021/6/10 鸡尾酒疗法鸡尾酒疗法原指原指“高效抗逆转录病毒治疗高效抗逆转录病毒治疗”（HAART），），是通过三种或三种以上的抗病毒药物联合使用是通过三种或三种以上的抗病毒药物联合使用来治疗艾滋病。来治疗艾滋病。该疗法把蛋白质抑制剂与多种抗病毒的药物混该疗法把蛋白质抑制剂与多种抗病毒的药物混合使用，从而使艾滋病得到有效的控制。合使用，从而使艾滋病得到有效的控制。192021/6/10 鸡尾酒鸡尾酒治疗方案治疗方案1.基于蛋白酶抑
9、制剂的鸡尾酒基于蛋白酶抑制剂的鸡尾酒 疗法：疗法：1个蛋个蛋白酶抑制剂联合白酶抑制剂联合2个核苷类逆转录酶抑制剂。个核苷类逆转录酶抑制剂。2.基于非核苷类逆转录酶抑制剂的鸡尾酒基于非核苷类逆转录酶抑制剂的鸡尾酒疗法：疗法：1个非核苷类逆转录酶抑制剂，个非核苷类逆转录酶抑制剂，联联合合2个核苷类逆转录酶抑制剂。个核苷类逆转录酶抑制剂。3.三个核苷类逆转录酶抑制剂的鸡三个核苷类逆转录酶抑制剂的鸡 尾酒疗尾酒疗法法 202021/6/10212021/6/10鸡尾酒的局限性主要表现在：鸡尾酒的局限性主要表现在：对对早期艾滋病病人相当有效，但对中晚早期艾滋病病人相当有效，但对中晚期患者的帮助不大，因为这些病人的免疫期患者的帮助不大，因为这些病人的免疫系统已被艾滋病毒不可逆性地破坏了；系统已被艾滋病毒不可逆性地破坏了；此外此疗法的花费也甚高，并非一般人此外此疗法的花费也甚高，并非一般人所能承受。药物治疗非常困难，不仅服用所能承受。药物治疗非常困难，不仅服用方法复杂，有副作用，而且价格昂贵，方法复杂，有副作用，而且价格昂贵，222021/6/10
