1、急性毒性实验终结版急性毒性实验终结版急性毒性试验急性毒性试验l实验目的及意义：实验目的及意义：确定受试物的半数致死剂量确定受试物的半数致死剂量LD50/LC50、观、观察受试物所致的急性中毒症状及其毒性作用特点，察受试物所致的急性中毒症状及其毒性作用特点，为进一步的毒性试验提供重要的参考依据。为进一步的毒性试验提供重要的参考依据。急性毒性试验的染毒方式可有多种，包括急性毒性试验的染毒方式可有多种，包括经经口、经呼吸道、经皮及注射染毒方式口、经呼吸道、经皮及注射染毒方式等。等。急性毒性实验终结版2经口急性毒性试验（经口急性毒性试验（LD50）l试验目的试验目的 学习急性毒性试验的学习急性毒性试验
2、的实验设计实验设计原则原则 熟练掌握熟练掌握经口灌胃经口灌胃染毒操作技术染毒操作技术 掌握掌握LD50计算方法计算方法和和急性毒性分级标准急性毒性分级标准l试验内容试验内容 动物选择和性别鉴定动物选择和性别鉴定 称重、编号和随机分组称重、编号和随机分组 小鼠经口灌胃操作技术小鼠经口灌胃操作技术 毒性症状观察、毒性症状观察、LD50计算和毒性分级计算和毒性分级急性毒性实验终结版3受试物剂量选择受试物剂量选择 对于一种新的化学物质，剂量选择可参照同系物对于一种新的化学物质，剂量选择可参照同系物的毒性或文献资料加以估计，先用少量动物以组距的毒性或文献资料加以估计，先用少量动物以组距较大的一系列剂量进
3、行预实验，找出粗略的致死剂较大的一系列剂量进行预实验，找出粗略的致死剂量范围，然后再设计出正式实验剂量组量范围，然后再设计出正式实验剂量组受试物配制受试物配制本次试验所用的受试物是本次试验所用的受试物是80的敌敌畏的敌敌畏(DDVP)原液。原液。按照事先设计的剂量分别稀释配制为几种不同浓度的按照事先设计的剂量分别稀释配制为几种不同浓度的受试物溶液，而各个剂量组的动物均给予相同单位体受试物溶液，而各个剂量组的动物均给予相同单位体重体积的受试化学物。重体积的受试化学物。急性毒性实验终结版5剂量剂量mg/kg 原液量原液量(g)原液量原液量(ml)定容量定容量(ml)原液量原液量(ml)36.44
4、0.1139 0.0813 50 0.0948 51.02 0.1594 0.1139 50 0.1327 71.43 0.2232 0.1594 50 0.1858 100 0.3125 0.2232 50 0.2603 140 0.4375 0.3125 50 0.3642 196 0.6125 0.4375 50 0.5099敌敌畏（敌敌畏（DDVP）配制：（组距）配制：（组距1.4，给药量，给药量0.2ml/10g）（4）（25 ）急性毒性实验终结版6灌胃操作灌胃操作将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者，使动物的上消将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者，使动物的上消化道固定成一直线化道
5、固定成一直线毒性作用毒性作用/中毒症状和动物死亡情况观察中毒症状和动物死亡情况观察高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即刻密切观高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即刻密切观 察。观察和记录中毒症状及出现的时间，死亡数量和时间及察。观察和记录中毒症状及出现的时间，死亡数量和时间及死亡前的特征。按照实验结果，填写急性毒性实验记录表。死亡前的特征。按照实验结果，填写急性毒性实验记录表。中毒的症状观察：中毒的症状观察：兴奋、流涎、肌震颤、抽搐、管状尾、兴奋、流涎、肌震颤、抽搐、管状尾、呼吸减慢、呼吸困难、四肢无力、站立不稳、大小便失禁、呼吸减慢、呼吸困难、四肢无力、站立不稳、大小便失禁、大剂量侧
6、卧以致死亡大剂量侧卧以致死亡。急性毒性实验终结版7改进寇氏法是利用剂量对数与死亡率呈改进寇氏法是利用剂量对数与死亡率呈S型曲线而设计型曲线而设计的方法，又称的方法，又称Karber法或平均致死量法。本法要求每个染法或平均致死量法。本法要求每个染毒剂量组动物数要相同，各剂量组组距呈等比级数，死亡毒剂量组动物数要相同，各剂量组组距呈等比级数，死亡率呈正态分布，最低剂量组死亡率呈率呈正态分布，最低剂量组死亡率呈80%。LD50计算（改良寇氏法）计算（改良寇氏法）急性毒性实验终结版8根据实验动物中毒症状、死亡时间、特征根据实验动物中毒症状、死亡时间、特征和和LD50，按受试物种类，分别参照相应的经口，
7、按受试物种类，分别参照相应的经口急性毒性分级标准进行评定，判断该受试物的毒急性毒性分级标准进行评定，判断该受试物的毒性大小及毒性特征。性大小及毒性特征。毒性分级及结果评定毒性分级及结果评定急性毒性实验终结版9 健康成年小鼠若干只（按每组健康成年小鼠若干只（按每组56人，每组人，每组10只动物，只动物，各半）、各半）、50 ml容量瓶容量瓶(每组每组1个个)、加样器（、加样器（200l、1000l）、加样枪头、）、加样枪头、DDVP原液、原液、1 ml玻璃注射器、灌玻璃注射器、灌胃针头（每组胃针头（每组2套）、棉签、染液、套）、棉签、染液、LD50记录纸、小鼠笼记录纸、小鼠笼（每组（每组2个）、
8、电子天平（个）、电子天平（2台）、搪瓷托盘（每组一个）、台）、搪瓷托盘（每组一个）、受试物、苦味酸酒精饱和液、受试物、苦味酸酒精饱和液、0.5%品红溶液或其它染色品红溶液或其它染色剂。剂。实验课所需准备的试剂和材料：实验课所需准备的试剂和材料：急性毒性实验终结版10经呼吸道急性毒性试验（经呼吸道急性毒性试验（LC50）l实验目的实验目的学习静式呼吸道染毒操作方法学习静式呼吸道染毒操作方法 学习测定和计算学习测定和计算LC50的试验步骤和方法。的试验步骤和方法。l实验原理（染毒方式）实验原理（染毒方式）呼吸道吸入染毒可分为两种方式，一种是动式呼吸道吸入染毒可分为两种方式，一种是动式吸入，一种是静
9、式吸入。吸入，一种是静式吸入。急性毒性实验终结版11静式呼吸道吸入染毒：静式呼吸道吸入染毒：优点：设备简单、操作方便、消耗受试物少、适用于小动物优点：设备简单、操作方便、消耗受试物少、适用于小动物 接触易挥发液接触易挥发液 态化合物的急性毒性研究。态化合物的急性毒性研究。缺点：受试物浓度难维持恒定，而且实验动物有经皮吸收的缺点：受试物浓度难维持恒定，而且实验动物有经皮吸收的 可能。可能。动式吸入：动式吸入：优点：能即时补入新鲜空气和排出污浊空气，氧分压，二氧优点：能即时补入新鲜空气和排出污浊空气，氧分压，二氧 化碳分压，温度、湿度，受试物浓度保持恒定。化碳分压，温度、湿度，受试物浓度保持恒定。
10、缺点：设备复杂，消耗受试物多、易污染环境缺点：设备复杂，消耗受试物多、易污染环境急性毒性实验终结版12染毒柜内受试物浓度的计算染毒柜内受试物浓度的计算注意单位！注意单位！急性毒性实验终结版13l试剂和材料试剂和材料 实验动物及器材实验动物及器材 健康成年小鼠若干只，（每组健康成年小鼠若干只，（每组10只，只，各各半），小鼠笼（每组半），小鼠笼（每组2个）。静式吸入染毒柜个）。静式吸入染毒柜6个、个、吸管、动物秤、记录纸。吸管、动物秤、记录纸。试剂试剂 受试物（易挥发液体，苯（原液）、苦味酸受试物（易挥发液体，苯（原液）、苦味酸酒精饱和液、酒精饱和液、0.5%品红溶液或其他染色剂。品红溶液或其他
11、染色剂。急性毒性实验终结版14l操作步骤操作步骤 选择健康实验动物，称重（精确到选择健康实验动物，称重（精确到0.1g），编号，），编号，随机分组。随机分组。剂量分组剂量分组急性毒性实验终结版15呼吸道吸入染毒：呼吸道吸入染毒：依设计剂量浓度及染毒柜体积，计算需要加入的受试物依设计剂量浓度及染毒柜体积，计算需要加入的受试物量。将量。将5、5共共10只小鼠只小鼠放入静式染毒柜内放入静式染毒柜内加盖加盖（注：每只小鼠每小时所需要的气积为（注：每只小鼠每小时所需要的气积为3L）。将液态受试）。将液态受试物经加药孔加到接物蒸发器（纱布、滤纸、蒸发皿或小型物经加药孔加到接物蒸发器（纱布、滤纸、蒸发皿或小
12、型加热器）上加热器）上开启小电扇，计时开启小电扇，计时观察、记录中毒症状和观察、记录中毒症状和动物死亡情况。染毒结束后，关闭电源，打开盖子，驱走动物死亡情况。染毒结束后，关闭电源，打开盖子，驱走柜内残存的含毒空气，取出动物，存活者归笼继续观察。柜内残存的含毒空气，取出动物，存活者归笼继续观察。（症状：呕吐、昏迷、抽搐、呼吸麻痹而死亡）（症状：呕吐、昏迷、抽搐、呼吸麻痹而死亡）LC50计算：同计算：同LD50 急性毒性实验终结版16 急性毒性试验的观察和记录内容主要包括急性毒性试验的观察和记录内容主要包括4个方面：中个方面：中毒体征及发生过程、死亡情况和时间分布、体重和病理形毒体征及发生过程、死
13、亡情况和时间分布、体重和病理形态学变化。态学变化。观察和记录中毒症状及出现的时间，死亡数量和时间观察和记录中毒症状及出现的时间，死亡数量和时间及死亡前的特征。急性毒性试验观察周期一般为及死亡前的特征。急性毒性试验观察周期一般为14天，天，LD50或或LC50计算时以观察周期内各组动物的总死亡数为依计算时以观察周期内各组动物的总死亡数为依据。根据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官。按照实据。根据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官。按照实验结果，填写急性毒性实验记录表。验结果，填写急性毒性实验记录表。中毒症状和动物死亡情况观察中毒症状和动物死亡情况观察急性毒性实验终结版17l结果评定结果评定/结果
14、评价结果评价 依据实验动物中毒症状、死亡时间、依据实验动物中毒症状、死亡时间、LC50及急性毒作用带，参考相应的急性毒性分级标准，及急性毒作用带，参考相应的急性毒性分级标准，评价毒物的急性毒性强弱，判断该受试物的毒性评价毒物的急性毒性强弱，判断该受试物的毒性大小及其毒性特征。大小及其毒性特征。急性毒性实验终结版18实验报告实验报告l实验动物的种属、品系、性别及来源。实验前动物禁食和实验动物的种属、品系、性别及来源。实验前动物禁食和健康状况。健康状况。l实验动物体重和随机分组情况。实验动物体重和随机分组情况。l受试物的名称、来源、纯度、性状等情况。受试物的名称、来源、纯度、性状等情况。l详细描述
15、实验观察的中毒表现和死亡情况等。详细描述实验观察的中毒表现和死亡情况等。l LD50/LC50的计算方法和结果。的计算方法和结果。l 受试物的毒性分级、分级依据和结果评价。受试物的毒性分级、分级依据和结果评价。急性毒性实验终结版19注意事项注意事项l敌敌畏溶液灌胃前要摇匀敌敌畏溶液灌胃前要摇匀！l注意注意染毒柜密闭染毒柜密闭，保持柜内受试物浓度，防止污染周围环境，保持柜内受试物浓度，防止污染周围环境和影响操作者。和影响操作者。l在染毒结束时，应在通风柜内或通风处开启染毒柜，迅速小在染毒结束时，应在通风柜内或通风处开启染毒柜，迅速小心取出动物，分笼喂养，继续观察心取出动物，分笼喂养，继续观察14天天。（本实验应时间。（本实验应时间关系，只计算关系，只计算1.5小时内的小时内的LC50）l按规定方法按规定方法销毁剩余受试物销毁剩余受试物。l加入苯时，加入苯时，防止滴在染毒柜底部防止滴在染毒柜底部（染毒受检液不能滴漏到染（染毒受检液不能滴漏到染毒柜底），以免被动物舔食，经口进入机体。毒柜底），以免被动物舔食，经口进入机体。l防止被动物咬伤防止被动物咬伤。急性毒性实验终结版20急性毒性实验终结版21
