1、微生物实验四微生物实验四微生物实验四微生物实验四l实验内容l录像：鸡胚接种、真菌l示教：四体、病毒 衣原体（chlamydia）是一类严格在 真核细胞内寄生，有独特发育周期，能通过细菌滤器 的 原核细胞型微生物。生物学特性 介于细菌与病毒之间。类似病毒：严格的活细胞内寄生。类似于细菌：两种类型核酸（DNA 和RNA）；具有类似于革兰阴性菌的细胞结构；二分裂繁殖，有 独特的发育周期；对多种抗生素敏感。有核糖体，有数种代谢活动性的酶。衣原体一、生物学性状1.发育周期 在衣原体的发育周期中可观察到两种颗粒形态。（1）感染型 原体（elementary body,EB）：小而致密，普通光学显微镜下勉强
2、可见，是发育成熟的衣原体，具有高度感染性。（2）无感染型 始体或网织体（reticulate body，RB）：为衣原体在宿主细胞内的 繁殖形式。大而疏松，没有感染性。衣原体在宿主细胞内增殖后所形成的网织体和子代原体的空泡，称为 包涵体（inclusion body），经染色后在光镜下可观察到。包涵体的形态、位置以及染色性对衣原体具有鉴别意义。2、培养特性 不能在人工培养基上生长，严格细胞内寄生，在鸡胚卵黄囊中繁殖3、抵抗力 不强，对热敏感，耐低温，对红霉素、四环素、利福平等敏感4、致病因素 a.吸附 b.内毒素样物质 c.外膜蛋白 阻止溶酶体和吞噬体融合，抗吞噬表位突变，逃避免疫反应衣原体：
3、包涵体（Giemsa染色）沙眼衣原体：在眼结膜上皮细胞质内、核旁堆积形成包涵体，呈桑椹状或帽状。四体二、致病性 沙眼生物变种：3 种疾病 1、沙眼：目前 致盲的第一位病因 眼 眼，眼 手 眼传播共同特点：专性 活细胞内寄生，以二分裂法繁殖。含 DNA 和 RNA 两种核酸。呈多形性，主要为球杆状，革兰染色阴性，大小介于细菌与病毒之间。大多为人畜共患病原体，节肢动物为传播媒介，也可兼为寄生宿主或储存宿主。对多种抗生素敏感。立克次体四体四体-立克次体立克次体1.1.斑疹伤寒立克次体斑疹伤寒立克次体-人虱、鼠蚤人虱、鼠蚤2.2.斑点热立克次体斑点热立克次体-蜱蜱3.3.恙虫病东方体恙虫病东方体-恙螨
4、恙螨4.Q4.Q热立克次体热立克次体-蜱蜱5.5.战壕热立克次体战壕热立克次体-虱虱恙虫病立克次体l观察观察感染细胞内的恙虫感染细胞内的恙虫病病立克次体立克次体：注意在单核细注意在单核细胞浆内靠近细胞核旁边胞浆内靠近细胞核旁边，有成堆的紫蓝色的球杆状有成堆的紫蓝色的球杆状的立克次体的立克次体Giemsa染色四体外斐反应（Weil-Felix reaction）（1）定义：变形杆菌 X 菌株的菌体抗原代替相应的立克次体抗原（具有 共同抗原），以检测人或动物血清中有无相应的抗体。（2）本质：非特异性交叉凝集试验（3）作用：辅助诊断立克次体病（4）意义：抗体效价超过1 1：160 或双份血清抗体效价
5、增加4 倍以上支原体油煎蛋样菌落无细胞壁、多形性，能在无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物四体油煎蛋样菌落（2）不同点螺旋体（spirochete）是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状，运动活泼的 原核细胞型 微生物。生物学的地位介于细菌与原虫之间，结构和生物学性状与细菌相似，有细胞壁、原始核质、二分裂繁殖 和 对抗生素等药物敏感 等；螺旋体广泛分布于自然界和动物体内，仅少数（疏螺旋体属、密螺旋体属、钩端螺旋体属）对人和动物致病。螺旋体螺旋体的分类螺旋体的分类三种螺旋体示意图名称 螺旋数 规则程度 其他特点 举例疏螺旋体 3-10 不规则 回归热疏螺旋体 伯氏疏螺旋体密螺旋体 8-14 规则
6、，细密 两端尖 梅毒螺旋体钩端螺旋体 规则，更细密 两端钩状 问号状钩端螺旋体螺旋数目48个，呈不规则弯曲。疏螺旋体四体密螺旋体梅毒螺旋体 螺旋体细长，有8-14个致密而规则的小螺旋，两端尖直。Fontana镀银染色法四体垂直传播即母婴传播，指病原体由亲代传至子代，包括经生殖细胞传播、妊娠期经胎盘传播、分娩期经产道传播、围生期传播及产后经哺乳传播。传染性大，破坏性小传染性大，破坏性小传染性小，破坏性大 有菌免疫/传染性免疫：即梅毒螺旋体感染的个体对梅毒螺旋体的再感染有抵抗力，若梅毒螺旋体被清除，免疫力也随之消失。钩端螺旋体 镀银染色法四体传播途径 接触疫水或污染的土壤；带菌动物 多为隐性感染，
7、不发病，但肾中可长期带菌，尿中持续排菌 污染水源和土壤，人因接触污染的水或土壤而受感染。病毒 Virus病毒检测与培养方法v细胞培养病毒在敏感细胞内增殖引起细胞病变 （CPE细胞病变效应；包涵体）v动物接种选用敏感动物及适宜部位接种 （乙脑病毒小白鼠脑内）v鸡胚接种孵化9-12天的鸡胚，接种鸡胚不同部位 （流感病毒尿囊腔）正常细胞（细胞排列整齐，界线清晰）病变细胞（细胞排列紊乱，界线不清，有些细胞已脱落）细胞变圆、胞质颗粒增多、聚集、融合、坏死、溶解或脱落，形成包涵体等包涵体：胞浆、胞核内出现的圆形或椭圆形异常染色斑块狂犬病毒包涵体内基小体Negri body狂犬病防治原则：（1）感染源管理：
8、做好登记、动物预防接种，一旦咬人，隔离观察 10 d，未发病可解除隔离；若发病则处死，取脑观察内基小体；（2）处理伤口：立即用 20%皂水或清水反复冲洗伤口，再用 70%酒精及碘伏涂擦；（3）被动免疫：高效价抗狂犬病病毒血清注射；（4）主动免疫：狂犬病潜伏期一般较长，人被咬伤后 24h 内接种灭活疫苗预防发病，兽医、动物管理员和野外工作者等高危人群应用疫苗预防感染内基小体：在易感动物或人的中枢神经细胞中增值时，可在细胞质内形成嗜酸性、圆形或椭圆形包涵体病毒培养：动物接种敏感的实验动物：常用小白鼠、田鼠、豚鼠、敏感的实验动物：常用小白鼠、田鼠、豚鼠、家兔及猴等家兔及猴等合适的接种途径：口服、滴鼻
9、、注射（皮内、合适的接种途径：口服、滴鼻、注射（皮内、脑内、皮下、腹腔或静脉）脑内、皮下、腹腔或静脉）病毒培养：鸡胚接种部位：鸡胚绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔、部位：鸡胚绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔、卵黄囊卵黄囊鉴定：病毒增殖，鸡胚发生异常变化或羊鉴定：病毒增殖，鸡胚发生异常变化或羊 水、尿囊液出现红细胞凝集现象水、尿囊液出现红细胞凝集现象意义：常用于痘类病毒等的分离培养意义：常用于痘类病毒等的分离培养注射部位避开胚体及大血管鸡胚接种鸡胚在照蛋灯下标出气室和接种点，接种点一定要避开胚体和大血管。用碘酒及酒精在标记处消毒，用打孔器按先气室后接种点的顺序打孔。用注射器倾斜插入鸡胚23毫米，注入病毒0.
10、2毫升。用溶化石蜡按先接种点后气室的次序封口。注意：三组接种无色液体，三组接种有色液体。鸡胚置孵箱培养72小时后收获。真菌真菌真菌，是一种真菌，是一种真核生物真核生物。真菌的细胞壁没有。真菌的细胞壁没有粘肽主要成分是粘肽主要成分是甲壳素甲壳素（又叫（又叫几丁质、甲壳几丁质、甲壳素、壳多糖素、壳多糖），有典型核结构和细胞器（又），有典型核结构和细胞器（又与植物相似）。与植物相似）。医学真菌主要分医学真菌主要分:皮肤丝状菌：皮肤丝状菌：皮肤癣菌（霉菌）皮肤癣菌（霉菌）深部真菌：深部真菌：白色念珠菌、新生隐球菌白色念珠菌、新生隐球菌 真菌单细胞真菌 圆形或卵圆形 酵母菌(yeast)多细胞真菌 菌丝
11、和孢子 丝状菌(filamentous fungus)交织成团 或霉菌(mold)二相性(dimorphic)形态和培养新生隐球菌新生隐球菌 Cryptococcus neoformans 单细胞真菌，荚膜荚膜（墨汁负染墨汁负染）主要以孢子 出芽方式 繁殖，称为 芽生孢子。芽生孢子长到一定大小时脱离母体形成一个成熟的孢子。新生隐球菌新生隐球菌 Cryptococcus neoformans单细胞真菌，沙保沙保培养基培养基白假丝酵母菌白假丝酵母菌 Candida albicans单细胞真菌，革兰染色阳性假丝白假丝酵母菌白假丝酵母菌 Candida albicans单细胞真菌，沙保培养基白假丝酵母
12、菌白假丝酵母菌 Candida albicans厚膜孢子厚膜孢子白假丝酵母菌 Candida albicans条件致病菌条件致病菌鹅口疮鹅口疮菌丝（菌丝（hypha）：菌丝是由成熟的孢子在环境合适的条件下长出的芽管并进一步延伸呈丝状。孢子：孢子：由生殖菌丝产生的一种繁殖繁殖体体，一条生殖菌丝可以形成多个孢子，孢子能发芽并发育成菌丝体，故孢子是真菌的繁殖体多细胞真菌孢子（孢子（sporespore）真菌的繁殖结构，一条菌丝可产生多个孢子真菌的繁殖结构，一条菌丝可产生多个孢子有性孢子：有性孢子：同一菌体或不同菌体上的2个细胞融合经减数分裂形成无性孢子：无性孢子：菌丝上的细胞分化或出芽生产，不发生细胞融合。病原性真菌大多形成无性孢子大分生孢子大分生孢子 macroconidia1.生殖菌丝末端膨大收缩而成2.体积较大，内分隔成多个细胞呈梭状、棍棒状或梨状3.大小、细胞数和颜色是鉴定的重要依据真菌形态真菌形态1.皮肤丝状菌孢子：皮肤丝状菌：皮肤丝状菌：菌落菌落酵母菌落癣菌菌落皮肤丝状菌：所致皮肤丝状菌：所致疾病疾病头癣脚癣体癣股癣
