1、 第十四章第十四章生物药物质量控制分析方法验证生物药物质量控制分析方法验证1第十四章第十四章 生物药物质量控制分析方法验证生物药物质量控制分析方法验证一、概述一、概述二、生物学测定常用方法二、生物学测定常用方法 三、方法的来源三、方法的来源四、分析方法四、分析方法五、分析方法的验证五、分析方法的验证六、综合分析六、综合分析2中国中国美国美国英国英国鉴别方法鉴别方法化学反应显色法，化学反应显色法，红外吸收图谱比对红外吸收图谱比对法，硫酸盐的鉴别法，硫酸盐的鉴别反应反应化学反应显色法化学反应显色法硫酸盐的鉴别反应硫酸盐的鉴别反应薄层色谱法薄层色谱法化学反应显色法化学反应显色法硫酸盐特征反应硫酸盐特
2、征反应检测项目检测项目酸度，酸度，溶液澄清度溶液澄清度与颜色与颜色，硫酸盐，硫酸盐，有关物质，有关物质，干燥失干燥失重重，可见异物，不，可见异物，不溶性微粒，异常毒溶性微粒，异常毒性，细菌内毒素，性，细菌内毒素，无菌。无菌。PH值（值（4,5-7.0）干燥失重干燥失重溶液检查：溶液溶液检查：溶液S、溶液溶液外观外观pH溶液溶液S的的pH（4.5-7.0）甲醇（气相色谱）甲醇（气相色谱）含量测定含量测定照抗生素微生物检照抗生素微生物检定法（通则定法（通则1201)测测定。定。色谱色谱法法色谱色谱法法链霉素链霉素3一、概述一、概述n保证药品保证药品安全、有效、质量可控安全、有效、质量可控是药品研发
3、和是药品研发和评价应遵循的基本原则，其中，对药品进行评价应遵循的基本原则，其中，对药品进行质质量控制量控制是保证药品安全有效的基础和前提。是保证药品安全有效的基础和前提。n方法验证的目的方法验证的目的是判断采用的是判断采用的分析方法分析方法是否是否科科学、合理，学、合理，是否能有效控制是否能有效控制产品产品的内在质量。的内在质量。4生物药品质控生物药品质控n生物药品质控中采用的方法包括生物药品质控中采用的方法包括理化分析方法理化分析方法和生物学测定方法和生物学测定方法。n一般要使用一般要使用动物、细胞或生物分子动物、细胞或生物分子，因此对于，因此对于生物学测定生物学测定的判断标准可适当灵活掌握
4、的判断标准可适当灵活掌握n对于对于定量测定方法定量测定方法应尽可能减少方法的变异，应尽可能减少方法的变异，验证的结果仍应能证明该方法具有相当的验证的结果仍应能证明该方法具有相当的准确准确性和可靠性性和可靠性，并应以能够有效控制产品质量为，并应以能够有效控制产品质量为基本标准。基本标准。5二、二、生物学测定常用方法 生物学测定系指生物学测定系指采用生物学方法，以反映被测采用生物学方法，以反映被测物的生物学特性为目的的测定方法。物的生物学特性为目的的测定方法。6（一）、酶反应试验（一）、酶反应试验 是指在体外能促进酶分子的活化或本身具是指在体外能促进酶分子的活化或本身具备酶的活性，通过底物的变化检
5、测酶活性。主备酶的活性，通过底物的变化检测酶活性。主要用于酶、辅酶、激酶、激活剂、抑制剂等的要用于酶、辅酶、激酶、激活剂、抑制剂等的活性测定。这类方法的变异相对较小，结果比活性测定。这类方法的变异相对较小，结果比较准确。较准确。7（二）、结合试验（二）、结合试验 是基于产品与某种物质的结合特性而设计是基于产品与某种物质的结合特性而设计的试验，如的试验，如免疫结合试验免疫结合试验。目前主要用于生物。目前主要用于生物制品的鉴别。由于在结合试验中测定的分子不制品的鉴别。由于在结合试验中测定的分子不一定都具有生物活性，所以一般不用作制品的一定都具有生物活性，所以一般不用作制品的活性（或效力）测定。这类
6、方法的变异也相对活性（或效力）测定。这类方法的变异也相对较小。较小。8（三）、细胞测定试验（三）、细胞测定试验 是指产品可以是指产品可以诱导细胞产生可测定的应答诱导细胞产生可测定的应答，如细胞增殖、聚集、分化、死亡、迁移或产，如细胞增殖、聚集、分化、死亡、迁移或产生特定的化学物质等。细胞测定试验一般能较生特定的化学物质等。细胞测定试验一般能较好地反映制品的生物学活性，常用于各种好地反映制品的生物学活性，常用于各种生物生物制品的活性（效力）测定制品的活性（效力）测定。与上述两类方法相。与上述两类方法相比，这类方法的变异较大。与使用传代细胞相比，这类方法的变异较大。与使用传代细胞相比，使用原代细胞
7、的方法变异更大。比，使用原代细胞的方法变异更大。9（四）、动物试验（四）、动物试验 是指以整体动物为试验材料检测制品生物学是指以整体动物为试验材料检测制品生物学活性（或效力）的试验方法，如动物保护力试验活性（或效力）的试验方法，如动物保护力试验，一般用于，一般用于疫苗的效力疫苗的效力测定。由于动物实验的成测定。由于动物实验的成本高、周期长和变异大，所以一般仅用于成品检本高、周期长和变异大，所以一般仅用于成品检定。对于某些治疗用的制品，由于其作用机理或定。对于某些治疗用的制品，由于其作用机理或本身化学性质的原因，难以建立体外测活的方法本身化学性质的原因，难以建立体外测活的方法，也可以采用动物试验
8、方法测定，但由于这类方，也可以采用动物试验方法测定，但由于这类方法的法的变异一般相对较大变异一般相对较大，在进一步的研究中应尽，在进一步的研究中应尽可能以体外法代替。可能以体外法代替。10n 鉴于一种测定方法仅能反映制品某一方面的特鉴于一种测定方法仅能反映制品某一方面的特性，且方法的变异一般较大，为更好控制产品质性，且方法的变异一般较大，为更好控制产品质量，必要时需量，必要时需同时采用多种方法同时采用多种方法进行测定。进行测定。11三、方法的来源（种类）三、方法的来源（种类）根据质控分析方法的来源，可将方法分为根据质控分析方法的来源，可将方法分为两大类，即两大类，即标准方法和非标准方法标准方法
9、和非标准方法。原则上，。原则上，对于各类方法均需进行验证，但依方法来源的对于各类方法均需进行验证，但依方法来源的不同对于验证的要求有所不同。不同对于验证的要求有所不同。12（一）、标准方法（或正式方法、法定方法）（一）、标准方法（或正式方法、法定方法）一般是指一般是指已有国家标准的质控方法已有国家标准的质控方法，WHO推荐的质控方法也可作为重要参考。此推荐的质控方法也可作为重要参考。此类方法在被确定为标准方法前已经过了适当类方法在被确定为标准方法前已经过了适当的验证。的验证。采用此类方法前，也应对该方法进行适采用此类方法前，也应对该方法进行适当的验证当的验证,如进行专属性和精密度的验证，以如进
10、行专属性和精密度的验证，以便证明在实际的使用条件下该方法也是适用便证明在实际的使用条件下该方法也是适用的。的。13（二）、非标准方法（二）、非标准方法 1、标准方法的替代方法、标准方法的替代方法 此类方法系指由申报者提出的可取代标准此类方法系指由申报者提出的可取代标准方法的替代方法。申报者在决定采用此类方法方法的替代方法。申报者在决定采用此类方法时应持慎重的态度，并需提供时应持慎重的态度，并需提供表明新方法等同表明新方法等同于或优于原方法的依据以及全面的验证资料于或优于原方法的依据以及全面的验证资料，包括两种方法的比较性资料。包括两种方法的比较性资料。14 2、来自参考文献的方法、来自参考文献
11、的方法 是指在专业杂志或著作上发表并介绍的方是指在专业杂志或著作上发表并介绍的方法，一般要认真对待此类方法，并需进行全面法，一般要认真对待此类方法，并需进行全面的验证。应说明参考文献的出处，附原文及译的验证。应说明参考文献的出处，附原文及译文。文。15 3、自己建立的方法、自己建立的方法 对于某些产品，尤其是创新性产品来讲，对于某些产品，尤其是创新性产品来讲，由于缺少可参考的方法，通常需要自己建立一由于缺少可参考的方法，通常需要自己建立一种新的分析方法，对于这类方法需进行全面而种新的分析方法，对于这类方法需进行全面而严格的验证。严格的验证。16四、分析方法四、分析方法 生物药品质控分析方法的准
12、确性和可靠性生物药品质控分析方法的准确性和可靠性与技术方法本身（包括方法的原理和方法的技与技术方法本身（包括方法的原理和方法的技术特点等）密切相关，一种系统的完整的分析术特点等）密切相关，一种系统的完整的分析方法应包括：方法应包括：17（一）、分析方法的原理（一）、分析方法的原理 （二）、供试品（二）、供试品 应说明如何取样，包括每次测定时取样的数量、如何应说明如何取样，包括每次测定时取样的数量、如何取用（单支或多支混合）等。取用（单支或多支混合）等。（三）、测试用仪器及参数（三）、测试用仪器及参数（四）、测试用试剂（四）、测试用试剂 列出所有测试用的试剂和规格，并说明其来源。如果某列出所有测
13、试用的试剂和规格，并说明其来源。如果某些试剂为自制或对采购的试剂进行了加工处理，则应详述些试剂为自制或对采购的试剂进行了加工处理，则应详述制备或处理过程。制备或处理过程。18（五）、标准品或参考品的配备（五）、标准品或参考品的配备（六）、供试品的配备（六）、供试品的配备：（七）、测试过程（七）、测试过程 按实验步骤详述整个实验过程，说明关键步骤的实验条件。按实验步骤详述整个实验过程，说明关键步骤的实验条件。（八）、计算（八）、计算 尽可能以表格的形式显示所获取的数据，说明数据的处理方尽可能以表格的形式显示所获取的数据，说明数据的处理方法，提供计算公式，并说明计算方法的出处及采用依据。法，提供计
14、算公式，并说明计算方法的出处及采用依据。（九）、结果报告（九）、结果报告：说明结果报告的形式：说明结果报告的形式（十）、判定标准：提供判定标准，说明判定标准的制定依据。（十）、判定标准：提供判定标准，说明判定标准的制定依据。19五、分析方法的验证五、分析方法的验证 质控分析方法的验证就是根据方法的需要质控分析方法的验证就是根据方法的需要测定该方法的测定该方法的专属性、准确性、精密度、线性、专属性、准确性、精密度、线性、范围、检测限度、定量限度、耐用性范围、检测限度、定量限度、耐用性等几个指等几个指标中的一个或几个，用于不同检测目的的试验标中的一个或几个，用于不同检测目的的试验方法需进行不同参数
15、的测定，下表为各种检测方法需进行不同参数的测定，下表为各种检测方法通常需测定的参数。方法通常需测定的参数。2021（一）专属性（一）专属性专属性专属性系指在其他成分（如系指在其他成分（如杂质、降解物、辅料等）杂质、降解物、辅料等）可能存在下，采用的分析可能存在下，采用的分析方法能够准确测定被分析方法能够准确测定被分析物质的特性的能力。物质的特性的能力。通常通常鉴别、杂质检查、鉴别、杂质检查、含量测定含量测定方法中均应考察方法中均应考察其专属性。其专属性。如采用的方法不够专属，如采用的方法不够专属，应采用多个方法予以补充。应采用多个方法予以补充。221、鉴别反应鉴别反应n专属性专属性试验要求证明
16、能与试验要求证明能与可能共存的物质可能共存的物质或或结构结构相似化合物相似化合物区分，需确证含被分析物的样品区分，需确证含被分析物的样品呈正呈正反应反应（可与已知对照物比较），而不含被测成分（可与已知对照物比较），而不含被测成分的样品呈的样品呈负反应负反应，以及，以及结构相似结构相似或组分中的有关或组分中的有关化合物，也应呈负反应。化合物，也应呈负反应。232、杂质检查、杂质检查 作为作为纯度检查纯度检查，所采用的分析方法应确保，所采用的分析方法应确保可可检出被分析物中杂质的含量检出被分析物中杂质的含量，如有关物质、重金，如有关物质、重金属、残留溶剂等。因此杂质检查要求分析方法有属、残留溶剂等
17、。因此杂质检查要求分析方法有一定的专属性。一定的专属性。24n杂质可获得杂质可获得:可向供试品中加入一定量的杂质，证明杂质与可向供试品中加入一定量的杂质，证明杂质与共存物质能得到分离和共存物质能得到分离和检出检出，并具适当的准确度与，并具适当的准确度与精密度。精密度。n杂质或降解产物不能获得杂质或降解产物不能获得:将供试品用强光照射，高温，高湿，酸、碱水将供试品用强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化的方法进行破坏（制剂应考虑辅料的影解及氧化的方法进行破坏（制剂应考虑辅料的影响），比较破坏前后检出的杂质个数和量。必要时响），比较破坏前后检出的杂质个数和量。必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，
18、进行色谱峰纯可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行色谱峰纯度检查度检查。253、含量测定、含量测定n含量测定目的含量测定目的是得到样品中被分析物的是得到样品中被分析物的含量含量或或效价效价的准确结果。的准确结果。n在杂质可获得的情况下在杂质可获得的情况下，对于主成分含量测定可，对于主成分含量测定可在在供试品中加入杂质或辅料供试品中加入杂质或辅料，考察测定结果是否受干，考察测定结果是否受干扰，并与未加杂质和辅料的试样比较测定结果。扰，并与未加杂质和辅料的试样比较测定结果。26n在杂质或降解产物不能获得的情况下，在杂质或降解产物不能获得的情况下，可采用可采用另另一个经验证一个经验证了的或了的或药典药
19、典方法进行比较，比对两种方法进行比较，比对两种方法测定的结果。也可采用方法测定的结果。也可采用破坏性试验（破坏性试验（强光照强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化），得到含射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化），得到含有杂质或降解产物的试样，有杂质或降解产物的试样，用两种方法进行含量用两种方法进行含量测定比较测定结果测定比较测定结果。必要时进行色谱峰纯度检查，。必要时进行色谱峰纯度检查，证明含量测定成分的色谱峰中不包含其他成分。证明含量测定成分的色谱峰中不包含其他成分。27（二）准确度（二）准确度n准确度系指准确度系指用该方法测定的结果与真实值或认可的用该方法测定的结果与真实值或认可的参考值之间接
20、近的程度。有时也称真实度。一般以参考值之间接近的程度。有时也称真实度。一般以回收率（）表示。回收率（）表示。n一定的准确度为定量测定的必要条件，因此涉及到一定的准确度为定量测定的必要条件，因此涉及到定量测定的检测项目均需要验证准确度，如含量测定量测定的检测项目均需要验证准确度，如含量测定、杂质定量试验等。定、杂质定量试验等。28n准确度应在规定的范围内建立。该指标的验准确度应在规定的范围内建立。该指标的验证一般以证一般以回收率回收率试验来进行，试验设计需考试验来进行，试验设计需考虑在规定范围内，虑在规定范围内，制备制备3 个不同浓度个不同浓度的样品，的样品，各测定各测定3 次，即测定次，即测定
21、9 次，报告已知加入量次，报告已知加入量的回收率（）或测定结果平均值与真实值的回收率（）或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。之差及其可信限。（二）准确度（二）准确度29回收率回收试验可在几份相同试样中加入适量待测组分的纯品，以相同条件进行测定，按下式计算回收率：回收率添加组分试样测定值原试样测定值/组分添加量回收率越高则认为方法越可靠。30 1、含量测定、含量测定 原料药原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。法测定的结果进行比较。制剂制剂可用含已知量被测
22、物的各组分混合物进可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。行测定。（二）准确度（二）准确度31 2、杂质定量试验、杂质定量试验 杂质的定量试验可向原料药或制剂中加入杂质的定量试验可向原料药或制剂中加入已已知量杂质知量杂质进行测定。进行测定。如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较，如药典标准定结果与另一成熟的方法进行比较，如药典标准方法或经过验证的方法。方法或经过验证的方法。当杂质的光谱与主成分的光谱相似，则可采用当杂质的光谱与主成分的光谱相似，则可采用原料药的响应因子近似计算杂质含量（自身对照原料药的响应因子近似计算杂质含量
23、（自身对照法）。并应明确单个杂质和杂质总量相当于主成法）。并应明确单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比（）或是面积比（）。分的重量比（）或是面积比（）。3233（三）精密度（三）精密度 精密度系指精密度系指在规定的测试条件下，同一均质样在规定的测试条件下，同一均质样品，经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接品，经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度（离散程度）。近程度（离散程度）。该指标目的是考察分析方法在不同的时间、操该指标目的是考察分析方法在不同的时间、操作人员、试验室下，所得结果的作人员、试验室下，所得结果的重现性和重复性重现性和重复性。涉及涉及定量测定的项目定量测定的项目考
24、察方法的精密度。考察方法的精密度。34 精密度一般用偏差、标准偏差或精密度一般用偏差、标准偏差或相对相对标准偏差标准偏差表示。取样测定次数应有统计学表示。取样测定次数应有统计学意义，至少用意义，至少用6次结果进行评价。次结果进行评价。精密度可以从三个层次考察：精密度可以从三个层次考察：重复性、重复性、中间精密度、重现性。中间精密度、重现性。（三）精密度（三）精密度351、重复性、重复性n重复性系指重复性系指在在同样的操作同样的操作条件下，在条件下，在较短时间较短时间间间隔内，由隔内，由一个分析人员一个分析人员测定所得结果的精密度。测定所得结果的精密度。n重复性测定重复性测定可在规定范围内，至少
25、用可在规定范围内，至少用9 次测定结次测定结果进行评价，如制备果进行评价，如制备3 个不同浓度的样品，各测个不同浓度的样品，各测定定3 次，或采用同次，或采用同一批样品一批样品（把被测物浓度当作（把被测物浓度当作100），用至少测定），用至少测定6 次的结果进行评价。次的结果进行评价。362、中间精密度、中间精密度n中间精密度系指中间精密度系指在同一试验室，由于试验室内部在同一试验室，由于试验室内部条件改变，如时间、分析人员、仪器设备、测定条件改变，如时间、分析人员、仪器设备、测定结果的精密度。结果的精密度。n验证设计方案中的变动因素一般为验证设计方案中的变动因素一般为日期、分析人日期、分析人
26、员、设备员、设备。37天数天数操作者操作者仪器（或色谱仪器（或色谱柱）柱）第一天第一天AABB第二天第二天ABBA第三天第三天AB(或或A)BB(或或A)383、重现性、重现性n指不同实验室之间不同分析人员测定结果的精密指不同实验室之间不同分析人员测定结果的精密度。度。n当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。试验。39（四）线性（四）线性 线性系指线性系指在设计的范围内，检测结果与试样中被分析物在设计的范围内，检测结果与试样中被分析物的浓度（量）直接呈线性比例关系的能力。的浓度（量）直接呈线性比例关系的能力。线性是定量测定的基础，涉及定量测定
27、的项目，如杂质定线性是定量测定的基础，涉及定量测定的项目，如杂质定量试验和含量测定均需要验证线性。量试验和含量测定均需要验证线性。做法做法:可用一可用一贮备液贮备液经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列经精密稀释，或分别精密称样，制备一系列被测物质浓度系列进行测定，被测物质浓度系列进行测定，至少制备至少制备5 个浓度。以测得的个浓度。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性.40（五）范围（五）范围n范围系指范围系指能够达到一定的准确度、精密度和线性，能够达到一定的准确度、精密度和线性，测试方法适用的试样中被分析物的高低限浓度或量
28、测试方法适用的试样中被分析物的高低限浓度或量的区间。的区间。n范围通常用与分析方法的测试结果相同的单位（如范围通常用与分析方法的测试结果相同的单位（如百分浓度）表达。百分浓度）表达。n涉及到定量测定的检测项目均需要对范围进行验证，涉及到定量测定的检测项目均需要对范围进行验证，如含量测定、含量均匀度、溶出度或释放度、杂质如含量测定、含量均匀度、溶出度或释放度、杂质定量试验等。定量试验等。411、含量测定含量测定 范围应为测试浓度的范围应为测试浓度的80100或更宽。或更宽。2、杂质、杂质 杂质测定时，范围应根据初步实测，拟订出规杂质测定时，范围应根据初步实测，拟订出规定限度的定限度的20。如果含
29、量测定与杂质检查同时测。如果含量测定与杂质检查同时测定，用面积归一化法，则线性范围应为杂质规定限定，用面积归一化法，则线性范围应为杂质规定限度的度的-20至含量限度（或上限）的至含量限度（或上限）的+20。（五）范围（五）范围42（六）检测限（六）检测限n检测限系指检测限系指试样中的被分析物能够被检测到的最试样中的被分析物能够被检测到的最低量，但不一定要准确定量。低量，但不一定要准确定量。n该验证指标的意义该验证指标的意义在于考察方法是否在于考察方法是否具备灵敏具备灵敏的的检测能力。因此对杂质限度试验，需证明方法具检测能力。因此对杂质限度试验，需证明方法具有足够低的检测限，以保证需要控制的杂质
30、被测有足够低的检测限，以保证需要控制的杂质被测出。出。43 1、直观法、直观法 直观评价可以用于直观评价可以用于非仪器分析非仪器分析方法，也可方法，也可用于仪器分析方法。用于仪器分析方法。检测限的测定是通过对一检测限的测定是通过对一系列已知浓度系列已知浓度被被分析物的样品进行分析，并以能分析物的样品进行分析，并以能准确（或被可准确（或被可靠）地检测被测物的最小量或最低浓度靠）地检测被测物的最小量或最低浓度来建立。来建立。（六）检测限（六）检测限44 2、信噪比法、信噪比法 用于能用于能显示基线噪音显示基线噪音的分析方法，即把已知的分析方法，即把已知低低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号浓度
31、试样测出的信号与空白样品测出的信号进行进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比为一般以信噪比为3：1 或或2：1 时相应的浓度或注时相应的浓度或注入仪器的量确定检测限。入仪器的量确定检测限。其他方法其他方法有基于工作曲线的斜率和响应的标准有基于工作曲线的斜率和响应的标准偏差进行计算的方法等。偏差进行计算的方法等。（六）检测限（六）检测限45（七）定量限（七）定量限 定量限系指定量限系指试样中的被分析物能够被试样中的被分析物能够被定量测定量测定的最低量定的最低量，其测定结果应具有一定的准确度和，其测定结果应具有一定的准确度和精密度。精密
32、度。常用信噪比法确定定量限。一般以常用信噪比法确定定量限。一般以信噪比为信噪比为10：1 时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。46 1、直观法、直观法 直观评价可以用于非仪器分析方法，也可直观评价可以用于非仪器分析方法，也可用于仪器分析方法。定量限一般通过对一系列用于仪器分析方法。定量限一般通过对一系列含有已知浓度被测物的样品进行分析，在准确含有已知浓度被测物的样品进行分析，在准确度和精密度都符合要求的情况下，来确定被测度和精密度都符合要求的情况下，来确定被测物能被物能被定量的最小量定量的最小量。（七）定量限（七）定量限47 2、信噪比法、信噪比法 用于能显
33、示基线噪音的分析方法，即把用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般可接受的信噪比是浓度或量。一般可接受的信噪比是10：1。（七）定量限（七）定量限48（八）耐用性（八）耐用性n耐用性系指耐用性系指测定条件发生细小变动时，测定结果测定条件发生细小变动时，测定结果保持不受影响的承受程度。保持不受影响的承受程度。n耐用性主要考察方法本身对于可变试验因素的抗耐用性主要考察方法本身对于可变试验因素的抗干扰能力。开始研究分析方法时，就应考虑
34、其耐干扰能力。开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。用性。如果测试条件要求苛刻，则建议在方法中如果测试条件要求苛刻，则建议在方法中予以写明予以写明。49n典型的变动因素包括：典型的变动因素包括：液相色谱法中液相色谱法中流动相的组成流动相的组成和和pH 值值，不同厂不同厂牌牌或不同批号的同类型色谱柱，柱温、流速等。气或不同批号的同类型色谱柱，柱温、流速等。气相色谱法中载气及流速、不同厂牌或批号的色谱柱、相色谱法中载气及流速、不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，担体、柱温，进样口和检测器温度等。经固定相，担体、柱温，进样口和检测器温度等。经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验，应说明小的变
35、动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效。试验，以确保方法有效。（八）耐用性（八）耐用性50(九）系统适用性试验九）系统适用性试验n对一些仪器测试方法，在进行方法验证时，有必要对一些仪器测试方法，在进行方法验证时，有必要将分析设备、电子仪器与实验操作、被测试样品等将分析设备、电子仪器与实验操作、被测试样品等一起当作完整的系统进行评估。一起当作完整的系统进行评估。n系统适用性是系统适用性是对整个系统进行评估的指标。对整个系统进行评估的指标。51六、综合分析六、综合分析1、有关方法验证评价的一般考虑、有关方法验证评价的一般考虑 总体上，方法验证应围绕验证目的和一般原则来进总体上，方法验证应围
36、绕验证目的和一般原则来进行，方法验证行，方法验证内容的选择内容的选择和和试验设计方案试验设计方案应合理、应合理、充分，验证过程应规范严谨。并非每个分析方法都充分，验证过程应规范严谨。并非每个分析方法都要进行所有内容的验证。要进行所有内容的验证。如如杂质的限度杂质的限度,试验分析方法一般需要验证试验分析方法一般需要验证专属性和专属性和检测限检测限，而对于精密度、线性、定量限等涉及定量，而对于精密度、线性、定量限等涉及定量测定的项目，则一般不需要进行验证。测定的项目，则一般不需要进行验证。522 2、方法验证的整体性、系统性和灵活性、方法验证的整体性、系统性和灵活性.方法验证内容之间相互关联，是一
37、个整体。方法验证内容之间相互关联，是一个整体。例如，对于鉴别项目所需要的专属性，例如，对于鉴别项目所需要的专属性，一般一种分析方法不太可能完一般一种分析方法不太可能完全鉴别被分析物全鉴别被分析物，此时采用两种或，此时采用两种或两种以上分析方法两种以上分析方法可加强鉴别项目的可加强鉴别项目的整体专属性。整体专属性。53 方法验证指标之间存在较多的方法验证指标之间存在较多的关联性关联性，可以相，可以相互补充。互补充。如原料药如原料药含量测定采用容量含量测定采用容量滴定法时，专属性滴定法时，专属性略差，但假如在略差，但假如在杂质检测杂质检测时采用了专属性较强的时采用了专属性较强的色色谱法谱法，则一般认为整个检测方法也具有较强的专属，则一般认为整个检测方法也具有较强的专属性。性。总之，由于实际情况较复杂，在方法验证过程总之，由于实际情况较复杂，在方法验证过程中，具体情况应具体分析，不提倡教条地去进行方中，具体情况应具体分析，不提倡教条地去进行方法验证。法验证。54555657585960
