1、2022-10-31第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析第六章芳酸类非甾体抗第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析炎药物的分析第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析1 芳酸类药物概述：分类与共性2 芳酸类药物分析方法简介3 总结与练习第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析n炎症（inflammation）是具有血管系统的活体组织对外源性或内源性损伤因子所发生的一种机体的防御性反应。病理变化为局部组织的变质（alteration）、渗出（exudation）和增生（proliferation），临床表现为红、肿、热、痛和功能障碍。n抗炎药物通过抑制炎症因子产生或释放，降低过于强烈的炎症反应，减轻发热疼痛症状，防止功能
2、障碍等不良反应的发生。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析n临床常用的抗炎药物分为两大类：甾体类抗炎免疫药（steroid anti-inflammatory-immunity drugs，SAIDs）：主要作用于皮质激素受体（cortisol receptors），但长期使用可产生依赖性和严重的副作用。非甾体抗炎药非甾体抗炎药（nonsterodial anti-inflammatory drugs，NSAIDs）：无皮质激素样副作用，是临床上广泛使用的治疗各种急慢性炎症的基础用药。其作用机理主要通过抑制环氧化酶（cyclooxygenase，COX）活性，阻断花生四烯酸（arachidonic
3、 acid，AA）代谢形成前列腺素（PGs），抑制由前列腺素引起的炎症反应，从而发挥解热、镇痛和抗炎的作用。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析公元前公元前400400年年，希波克拉底Hippcrates，描述了从柳树干提取的某种物质可以用来治疗发热、疼痛以及由于劳损引起的剧痛。公元前公元前15001500年年，古埃及人便发现“柳树皮可以止痛（风湿，关节炎）”。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析18971897年，霍夫曼研制了高纯度乙酰水杨酸，年，霍夫曼研制了高纯度乙酰水杨酸，并为自己父亲治好了多年的风湿病。并为自己父亲治好了多年的风湿病。(艾兴格艾兴格林林)1899
4、1899年，阿司匹林（年，阿司匹林（aspirinaspirin）问世。此后）问世。此后被广泛用于解热、镇痛及抗风湿治疗。被广泛用于解热、镇痛及抗风湿治疗。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 乙 酰 水 杨 酸第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析乙 酰 水 杨 酸药物化学药物化学药剂学药剂学药物分析药物分析第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析n阿司匹林，1898年首次合成。n阿司匹林类非甾体抗炎药的作用机制，1971年Vane团队发现。nCOX-1,1976年首次提纯。nCOX-2,1991年被发现。n根据作用机制分为传统非甾体抗炎药物（水杨酸类、吡唑酮类、芳基烷酸类、苯并噻嗪类）、选择性COX-2抑制
5、剂、新型非甾体抗炎药三部分。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析1.11.1水杨酸类水杨酸类1 芳酸类药物概述：分类与共性水杨酸水杨酸 Salicylic Acid阿司匹林阿司匹林 Aspirin 双水杨酯双水杨酯 Salsalate 二氟尼柳二氟尼柳 Diflunisal羧基与COX的精氨酸120（Arg-120）的胍基形成离子对，是保持活性的必要结构。羧基与羟基的位置若从邻位移到间位或对位，活性则消失。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析1.21.2芳基烷酸类芳基烷酸类芳基乙酸类芳基乙酸类吲哚乙酸类吲哚乙酸类吲哚美辛吲哚美辛 Indometacin 第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析芳基丙酸类芳基丙
6、酸类布洛芬布洛芬 Ibuprofen 酮洛芬酮洛芬Ketoprofen 萘普生萘普生Naproxen 第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析邻氨基苯甲酸类邻氨基苯甲酸类（灭酸类）（灭酸类）甲酚那酸甲酚那酸 Mefenamic Acid双氯芬酸钠双氯芬酸钠Diclofenac Sodium邻氨基苯乙酸类邻氨基苯乙酸类第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 1.1.酸性：酸性：SA(PKa2.95)SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.49)ASA(PKa3.49)、双水杨酯均有酸性。布、双水杨酯均有酸性。布 洛芬等洛芬等由于羧基并未与苯环相连，结构上属于芳环取由于羧基并未与苯环相连，结构上属于芳环取代代
7、 的脂肪酸，酸性较弱的脂肪酸，酸性较弱。多数。多数有游离的羧基有游离的羧基，可用，可用NaOH 直接滴定测定其含量。直接滴定测定其含量。2.溶解性溶解性:均为白色结晶粉末。除钠盐略溶于水，其余几乎不均为白色结晶粉末。除钠盐略溶于水，其余几乎不 溶或微溶。溶或微溶。3.UV和和IR光谱特性：光谱特性：分子结构中具有苯环分子结构中具有苯环,有有UV和和IR特征吸收。特征吸收。4.邻羟基苯甲酸特性：邻羟基苯甲酸特性：与与FeCl3生成紫色配合物。生成紫色配合物。5.水解特性：水解特性：酯键易水解。酯键易水解。ASA、双水杨酯及其制剂应检查游、双水杨酯及其制剂应检查游离离 水杨酸。水杨酸。6.基团或元
8、素特征：基团或元素特征：双氯芬酸钠含有双氯芬酸钠含有Cl，可用于鉴别反应。酮，可用于鉴别反应。酮 洛芬的二苯甲酮结构可与苯肼缩合显色。洛芬的二苯甲酮结构可与苯肼缩合显色。主要理化性质主要理化性质第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析1.31.3苯并噻嗪甲酸类（昔康类）苯并噻嗪甲酸类（昔康类）吡罗昔康吡罗昔康 Piroxicam 美洛昔康美洛昔康 Meloxicam 第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚 Paracetamol 其他类其他类尼美舒利尼美舒利 Nimesulide 磺酰苯胺类磺酰苯胺类（选择性（选择性COX-2COX-2抑制剂）抑制剂）第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析
9、主要理化性质主要理化性质 1.1.酸性：酸性：具有酰胺结构，无明显酸性。具有酰胺结构，无明显酸性。2.溶解性溶解性:均为结晶粉末。除对乙氨基酚略溶于水，均为结晶粉末。除对乙氨基酚略溶于水，其余几乎不溶。其余几乎不溶。酚羟基特性：酚羟基特性：与与FeCl3生成显色配合物。吡罗昔康生成显色配合物。吡罗昔康与美洛昔康的烯醇式羟基与美洛昔康的烯醇式羟基 也具有酚羟基性质。也具有酚羟基性质。水解特性：水解特性：酰胺键可发生水解反应，用于鉴别与含酰胺键可发生水解反应，用于鉴别与含量测定。量测定。基团或元素特征：基团或元素特征：对乙氨基酚具有潜在芳伯胺基，对乙氨基酚具有潜在芳伯胺基，可发生重氮偶合反应显色。
10、美洛昔康含有二价硫，可发生重氮偶合反应显色。美洛昔康含有二价硫，经高温生成硫化氢使醋酸铅试纸显黑色。经高温生成硫化氢使醋酸铅试纸显黑色。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 一、与三氯化铁反应一、与三氯化铁反应 含有酚羟基药物可与含有酚羟基药物可与FeClFeCl3 3反应；能与反应；能与FeClFeCl3 3反应反应不不 一定一定含酚羟基含酚羟基.第二节第二节 鉴别试验鉴别试验Ar-OH+FeCl3紫堇色铁配位化合物紫堇色铁配位化合物pH46第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析直接反应直接反应 水杨酸在中性或弱酸性条件下，与水杨酸在中性或弱酸性条件下，与FeClFeCl3 3生成生成紫堇色配位化合物
11、，强酸条件下配合物可分解。紫堇色配位化合物，强酸条件下配合物可分解。二氟尼柳溶于乙醇后，与二氟尼柳溶于乙醇后，与FeClFeCl3 3反应呈深紫色。反应呈深紫色。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 双水杨酯在双水杨酯在NaOH中煮沸后中煮沸后FeClFeCl3 3 反应，成紫色。反应，成紫色。2.水解或分解后与三氯化铁反应水解或分解后与三氯化铁反应ASAASA水解成水解成SASA后与后与FeClFeCl3 3 反应，成紫堇色。反应，成紫堇色。对乙酰氨基酚水溶液与对乙酰氨基酚水溶液与FeClFeCl3 3生成蓝紫色配位化合物，生成蓝紫色配位化合物，吡罗昔康显玫瑰红色，美洛昔康显淡紫红色。吡罗昔康显
12、玫瑰红色，美洛昔康显淡紫红色。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析二、缩合反应酮洛芬具有二苯甲酮结构，在酸性条件下可与二硝基苯肼缩合生成橙色偶氮化合物。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 三、重氮化三、重氮化-偶合反应偶合反应 凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物均可反应。凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物均可反应。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 1.1.直接反应直接反应 对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠 2.2.水解后反应水解后反应 对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚具有潜在芳伯氨基具有潜在芳伯氨基 3.3.甲芬那酸甲芬那酸与与对对-硝基苯重氮盐硝基苯重氮盐在在NaOHNaOH介质中介质
13、中偶合偶合产产 生生橙红色橙红色。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 +K+K2 2CrCr2 2O O7 7 深蓝色深蓝色 棕绿色棕绿色 甲芬那酸甲芬那酸 +H+H2 2SOSO4 4 黄色黄色 绿色绿色荧光荧光四、氧化反应四、氧化反应 +H+H2 2SOSO4 4+K+K2 2CrCr2 2O O7 7 紫色紫色 吲哚美辛吲哚美辛 +HCl+NaNO+HCl+NaNO2 2 绿色绿色 黄色黄色第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 双水杨酯双水杨酯在在NaOHNaOH下煮沸水解后，加下煮沸水解后，加HClHCl生成生成SASA沉淀，沉淀，沉淀在醋酸铵试液中可溶解。沉淀在醋酸铵试液中可溶解。五、水解
14、反应五、水解反应第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 1.测定测定max ；min。（布洛芬及美洛昔康制剂）（布洛芬及美洛昔康制剂）例如：布洛芬用例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制备溶液制备0.25mg/ml；max：265nm,273nm;min：245nm,271nm。2.测定测定max。例如：双氯芬酸钠，例如：双氯芬酸钠，20g/ml max =276nm；吡罗昔康片，吡罗昔康片，max =243nm，334nm。3.在在max 处测定一定浓度供试液的吸收度处测定一定浓度供试液的吸收度A。例如：甲酚那酸，例如：甲酚那酸，20g/ml 在在max =279nm，350nm;A=0.690.7
15、4 与与 0.560.60。六、紫外吸收光谱法六、紫外吸收光谱法第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 4.在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收度度 比值法）比值法）例如：二氟尼柳例如：二氟尼柳 20g/ml;A251/A315 =4.24.6 再例如：甲芬那酸再例如：甲芬那酸14g/ml;A278280/A348352 =1.151.30 第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析七、红外吸收光谱法七、红外吸收光谱法水杨酸的红外吸收图谱37002900cm-1N-H、O-H1660cm-1C=O1610,15701480,1440C=C775cm-1Ar-H第六章
16、芳酸类非甾体抗炎药物的分析33002300cm-1O-H1760,1690cm-1Ar-H1610,1570,1480,1460cm-1C=C775cm-11310,1230,1180cm-1C-O阿司匹林的红外吸收图谱C=O第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析n二氟尼柳胶囊的鉴别：以GF254为固定相，正己烷-二氧六环-冰醋酸（85:10:5）为展开剂，254nm检视。n美洛昔康制剂：以三氯甲烷-甲醇-二乙胺（60:5:7.5）为展开剂。七、薄层色谱法七、薄层色谱法八、八、HPLCHPLC法法第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析离子对色谱法（paired ion chromatography，PIC
17、）nRPIC是把离子对试剂加至极性流动相中，被分析的样品离子在流动相中与离子对试剂生成不荷电的中性离子对，从而增加了样品离子在非极性固定相中的溶解度，使分配系数增加，改善分离效果。n分配系数与离子对试剂的碳链长度及被分离组分的极性有关。分配系数越大，保留时间越长。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 流动相 固定相B+H BH+RSO3Na RSO3-+Na+(PICB)中性离子对中性离子对 BH+.RSO3-BH+.RSO3-第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析常用离子对试剂n通常所选用离子对试剂的电荷应与被分离样品的电荷相反。nPICB：用于分离碱类或带正电荷的物质，常用带负电荷的烷基磺酸钠，如庚
18、烷磺酸钠（PICB7）。nPICA：用于分离酸类或带负电荷的物质，常用带正电荷的季铵盐，如四丁基氢氧化铵、十六烷基三甲基溴化铵。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析离子抑制色谱（ion suppression chromatography，ISC）n在反相色谱中，通过调节流动相的PH或利用同离子效应，抑制样品组分的解离，增加它在固定相中的溶解度，以达到分离有机弱酸、弱碱的目的的技术。n适用于3.0-7.0的弱酸及7.0-8.0的弱碱，对于小于3.0的酸及大于8.0的碱，应采用离子对色谱或离子交换色谱。n常用抑制剂：弱酸（乙酸）、弱碱（氨水）、缓冲盐（磷酸盐、乙酸盐）第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析
19、PIC与ISC区别n分离机制不同 ISC使组分保持分子状态，抑制离子是组分自身离子；PIC是形成不荷电离子对，抑制离子是外来的。n分离对象范围不同 ISC适用有机弱酸、弱碱、两性化合物；PIC适用更广泛些。nISC简便，比PIC经济，但重复性较差。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查阿司匹林及水杨酯合成路线阿司匹林及水杨酯合成路线第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析一、一、ASAASA中特殊杂质的检查中特殊杂质的检查 1.游离水杨酸检查游离水杨酸检查 利用利用SA可与可与FeCl3呈色，用比色法检查。呈色，用比色法检查。Chp2010采用1%冰醋酸甲醇溶液制备供试
20、品，防止阿司匹林水解，采用HPLC法，ODS反相色谱柱反相色谱柱，以乙腈乙腈-四氢呋四氢呋喃喃-冰醋酸冰醋酸-水（水（20:5:5:70）为流动相，检测波长为303nm，外标法以峰面积计算SA不得过不得过0.1%。药典规定ASA片、肠溶片、肠溶胶囊、泡腾片及栓剂限度检查SA，分别为0.3%、1.5%、1.0%、3.0%和3.0%。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析一、一、ASAASA中特殊杂质的检查中特殊杂质的检查 1.1.有关物质有关物质 合成原料合成原料苯酚及其他合成副产物。苯酚及其他合成副产物。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析Chp采用HPLC法检查。使用ODS色谱柱，以检查游离水杨酸的流
21、动相为A，乙腈为B，梯度洗脱，波长为276nm。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 甲芬那酸是以邻甲芬那酸是以邻-氯苯甲酸和氯苯甲酸和2，3-二甲基苯胺在二甲基苯胺在Cu的催化下的催化下 缩合而成，因此成品药物中要检查缩合而成，因此成品药物中要检查铜盐铜盐及及有关物质有关物质。分光光度法：利用分光光度法：利用Cu 2+与与Na-DDC呈色后测定呈色后测定A 1.铜盐检查法铜盐检查法 原子吸收分光光度法：原子吸收分光光度法：BP（2000）2.有关物质的检查有关物质的检查 主要检查的是主要检查的是2,3-二甲基苯胺，二甲基苯胺，Chp采用采用GC 法，法，限度为限度为0.01%。二、甲芬那酸中特殊
22、杂质的检查二、甲芬那酸中特殊杂质的检查第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析三、二氟尼柳中有关物质的检查三、二氟尼柳中有关物质的检查合成路线合成路线Chp分别采用分别采用TLC（正相）和（反相）（正相）和（反相）HPLC法法，以以自身对照法自身对照法检查检查有关物质有关物质A和和B。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析四、萘普生中有关物质的检查四、萘普生中有关物质的检查合成路线合成路线Chp采用采用HPLC法。采用杂质对照品法。法。采用杂质对照品法。检出杂质峰检出杂质峰面积不得大于对照杂质峰面积（面积不得大于对照杂质峰面积（0.1%），其他杂质峰），其他杂质峰面积不得大于对照杂质面积不得大于对照杂质I峰
23、面积的峰面积的2倍，杂质总面积不倍，杂质总面积不得大于对照主成分面积（得大于对照主成分面积（0.5%）。）。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析五、对乙氨基酚中氨基酚和对氯五、对乙氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺的检查苯乙酰胺的检查取对氨基酚适量，精密称定，加溶剂甲醇-水4：6制成每1ml中含20mg的溶液，作为供试品溶液；另取对氨基酚对照品和对乙酰氨基酚对照品适量，精密称定，加上述溶剂溶解并制成每1ml中含对氨基酚1ug和对乙酰氨基酚20ug的混合溶液，作为对照品溶液。照HPLC法试验。用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠8.95g，磷酸二氢钠3.9g，加水溶解至1000ml，
24、加10%四丁基氢氧化铵溶液12ml）-甲醇90：10为流动相。检测波长为245nm，柱温为40度，理论板数不低于2000，分离度应符合要求。L=VC/S第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 一、酸碱滴定法一、酸碱滴定法（一）直接滴定法（一）直接滴定法 基于本类药物基于本类药物-COOH；可用碱直接滴定，如；可用碱直接滴定，如 ASA的含量测定，其原理如下：的含量测定，其原理如下：第四节第四节 含量测定含量测定1.原理：原理：2.条件：条件：在中性乙醇中，以酚酞作指示剂；摩尔比为在中性乙醇中，以酚酞作指示剂；摩尔比为1:1。3.应应用：用：多国药典用于双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬多国药典用于双水
25、杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测定；测定；USP和和BP还用于甲芬那酸的测定。还用于甲芬那酸的测定。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析（二）水解后剩余滴定法（二）水解后剩余滴定法 ASA含量测定含量测定原理：原理：条件：条件：水溶液水溶液 注意事项：碱液在受热时易吸收二氧化碳，生成碳酸盐，使酸回滴体积减少，使结果偏高，故需在相同条件下进行空白实验。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析具体试验：具体试验：I 份份NaOHI 份份NaOHVVOVo-V相当于相当于ASA消耗消耗 硫酸的硫酸的ml数数ASA%=(Vo V)FT/W 100%第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析（三）两步滴定法（三）两步滴定法AS
26、A片的含量测定片的含量测定第一步为中和第一步为中和ASA +NaOHASA-Na +H2O水解产物水解产物SA+NaOHSA-Na+H2O酸性稳定剂酸性稳定剂+NaOH中性盐中性盐第二步为水第二步为水 解与测定解与测定2NaOH+H2SO4 Na2SO4+2H2O（剩余）第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析从阿司匹林结构出发，试述其片剂的鉴别方法，特殊杂质水杨酸的检查方法以及其含量测定方法,包括原理、操作要点（限容量分析法，需写出反应方程式）。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 n取本品20片（1.4801g）标示量25mg/片,每份12片（0.8908g），（约相当于阿司匹林0.3g）研细，计算平
27、均片重。置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml，振摇使阿司匹林溶解加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液(0.1 mol/L)至溶液显粉红色（约耗NaOH 20mL），再精密加氢氧化钠滴定液(0.1 mol/L)40mL。置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷（凉水冲冷）至室温，用硫酸滴定液(0.05 molL)滴定（约消耗18-19mL）至粉红色消失，并将滴定结果用空白实验校正。每l ml氢氧化钠滴定液(0.1 molL)相当于18.02mg的C9H8O4。nCH2SO4=0.05716mol/L;Vs=18.86mL;V0=33.24mL n中国药典（2005）规定，本品含阿
28、司匹林(C9H804)应为标示量的9501050。（三）两步滴定法（三）两步滴定法标示量标示量%=（VO VS)F TW平平 /W /B100%第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析注意事项：n1.中和滴定速度稍快，注意旋摇，防止局部过浓n2.本实验中，中性乙醇对酚酞指示液显中性。n3.阿司匹林在水中微溶，在乙醇中易溶，故选用乙醇为溶剂，且乙醇可抑制阿司匹林的水解。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析（四）、非水溶液滴定法（四）、非水溶液滴定法 吡罗昔康吡罗昔康有吡啶环，显碱性，可在冰醋有吡啶环，显碱性，可在冰醋酸中用高氯酸滴定液滴定。酸中用高氯酸滴定液滴定。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 （一）直接
29、紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法 Chp2010收载收载二氟尼柳、美洛昔康、尼美舒利制剂，对乙酰氨二氟尼柳、美洛昔康、尼美舒利制剂，对乙酰氨基酚及其部分制剂采用此法进行测定。基酚及其部分制剂采用此法进行测定。四、紫外分光光度法四、紫外分光光度法标示量标示量%=AsCRDWARWB100%第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析（二）柱分配色谱（二）柱分配色谱-紫外分光光度法紫外分光光度法 USP(24)采用此法同时测定采用此法同时测定ASA胶囊中胶囊中 ASA和和SA。1.SA的限量测定的限量测定 色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试 品溶液的制备。品溶液的制
30、备。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 2.ASA2.ASA的含量测定的含量测定 色谱柱的制备；对照品溶液的制备；色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试品溶液的制备。供试品溶液的制备。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析供试品液：CHCl3液洗脱液1：CHCl3洗脱液2：HAC-乙醚硅藻土，FeCl3-尿素 玻璃棉硅藻土，Na2CO3供试品液：CHCl3-HCl液洗脱液1：HAC-CHCl3 (1:10)10ml洗脱液2：HAC-CHCl3 (1:100)85ml 1-杂质先洗脱2-SA后洗脱max=306nm AuAs1-杂质先洗脱2-ASA后洗脱 max=280nmASA(mg)=C(Au/As)
31、第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 Ch.P(2010)Ch.P(2010)收载的典型芳酸类非甾体抗炎药收载的典型芳酸类非甾体抗炎药物制剂大多采用离子抑制物制剂大多采用离子抑制-反相反相HPLCHPLC法测定，以外法测定，以外标法计算含量。标法计算含量。反相离子抑制色谱，在流动相中加入冰醋酸，反相离子抑制色谱，在流动相中加入冰醋酸，为了抑制为了抑制ASAASA的解离，进而消除因色谱柱的吸附而的解离，进而消除因色谱柱的吸附而造成拖尾影响，可抑制造成拖尾影响，可抑制ASAASA水解，增加溶液稳定性。水解，增加溶液稳定性。五、五、HPLCHPLC法法第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析ASAASA栓剂的含
32、量测定栓剂的含量测定本品含本品含ASAASA应为标示量的应为标示量的90.0%-110.0%90.0%-110.0%。色谱条件：色谱条件：色谱柱色谱柱ODSCODSC1818；流动相为乙腈：四氢呋喃：冰醋酸：；流动相为乙腈：四氢呋喃：冰醋酸：水水(20:5(20:5：5:70);5:70);检测波长检测波长276nm276nm。系统适用性试验：系统适用性试验：n n 3000;ASA3000;ASA与与SASA与内标物的与内标物的R R 1.51.5具体计算：具体计算：Cx=Ax/ACx=Ax/AR RC CR R 标示量标示量%=W%=W测测/W/W W W平平/标示量标示量100%100%
33、=C =CR R Ax/AAx/AR R D D W W平平/W/W/标示量标示量100%100%第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 nChP2010：取本品5粒，精密称定，置小烧杯中，在40-50度水浴中微温熔融，在不断搅拌下冷却至室温，精密称取适量（约相当于阿司匹林0.1g），置50mL量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液适量，在40-50度水浴中充分振摇使阿司匹林溶解，放冷，用1%冰醋酸的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却1小时，取出，迅速滤过，取续滤液作为供试品储备液。精密量取供试品储备液5mL，置100mL量瓶中，用1%冰醋酸的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取10uL，注入液相色谱仪，
34、记录色谱图；另取阿司匹林对照品，精密称定，加1%冰醋酸的甲醇溶液振摇使溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.1mg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 一、血清中一、血清中ASAASA和和SASA浓度的浓度的HPLCHPLC法法 色谱条件：色谱条件：色谱柱为色谱柱为ODS-CODS-C1818(100mm(100mm 4.6mm,5m)4.6mm,5m)流动相为流动相为0.05%0.05%甲酸的乙腈溶液为甲酸的乙腈溶液为A A，40%40%10mmol/L 10mmol/L甲酸铵溶液为甲酸铵溶液为B B，60%60%AS
35、A 178.9-136.8 ASA 178.9-136.8；SA 136.9-92.8SA 136.9-92.8；内标物为内标物为4-ABS 162.9-118.94-ABS 162.9-118.9。血清样品预处理血清样品预处理 血清血清200 l +HCl 50l+不同浓度不同浓度ASA和和SA+内标液内标液 加入乙酸乙酯加入乙酸乙酯600 l涡旋混合涡旋混合1min，离心，离心5min，取上清液，取上清液，氮气吹干，复溶，氮气吹干，复溶，10 l进样。进样。第五节第五节 体内药物分析体内药物分析第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 二、二、HPLCHPLC法测定
36、人血浆中布洛芬含量法测定人血浆中布洛芬含量 色谱条件：色谱条件：色谱柱为色谱柱为Shim-packCLC-ODS(150mm6mm,10m)预柱为预柱为YWG-C18；流动相为甲醇；流动相为甲醇-20mol/L磷酸二氢磷酸二氢 钾冲溶液钾冲溶液(70:30,pH=4.0);流速为流速为1.0ml/min;检测波长为检测波长为221nm；内标物为肉桂酸。；内标物为肉桂酸。样品预处理：样品预处理：取肝素抗凝血浆取肝素抗凝血浆0 0。24ml+24ml+内标液内标液+甲醇甲醇0.5ml,0.5ml,振荡振荡 混匀，离心混匀，离心(1000r/min)15min,(1000r/min)15min,取上
37、清液取上清液10 10 l直直 接进样分析。布洛芬和肉桂酸接进样分析。布洛芬和肉桂酸tR为为5.15和和2.85min。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析回归方程：回归方程：以对照品与内标的峰高比对浓度回归，其回归方程为：以对照品与内标的峰高比对浓度回归，其回归方程为：Y=4.05 10-2C 2.0 10-3,r=0.9999。回收率测定：回收率测定：空白血浆空白血浆+布洛芬对照品高、中、低三种浓度，布洛芬对照品高、中、低三种浓度，按样品处理项下测定，测得平均回收率为按样品处理项下测定，测得平均回收率为99.2 1.6%1.6%。精密度：精密度：日内精密度为日内精密度为RSDRSD1.8%1.
38、8%；日间精密度为；日间精密度为2.8%2.8%。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 1.01.0，1.51.5，2.02.0，3.03.0，4.04.0，6.06.0，8.08.0，10.010.0，12.0h12.0h自肘静脉自肘静脉 取血取血1.5ml1.5ml，肝素抗凝，按，肝素抗凝，按“样品处理方法样品处理方法”项下操作，求算项下操作，求算血血 药浓度，结果见药浓度，结果见P137P137表表6 61 1。试验结果：试验结果：1.1.血浆用甲醇除蛋白后，直接进样，经预柱净化，再进分析柱血浆用甲醇除蛋白后，直接进样，经预柱净化，再进分析柱 回收率高，分析速度快回收率高，分析速度快(6min(6min完成完成)，分离效果好。，分离效果好。2.2.口服一次后口服一次后Tmax=30minTmax=30min90min90min；体内维持；体内维持4h4h6h6h。与文。与文 献报道的结果一致。献报道的结果一致。3.3.本法可用于临床治疗药物浓度检测和药代动力学研究。本法可用于临床治疗药物浓度检测和药代动力学研究。人血浆样品测定：人血浆样品测定：受试者受试者8 8人；给药剂量人；给药剂量600mg600mg，给药后，给药后0.50.5，0.750.752022-10-31第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析
