1、划线分离法和涂布分离法的比较划线分离法和涂布分离法的比较项目 划线分离法涂布分离法操作通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面(也是分离纯化的方法)。每一次划线都从上次划线末端开始，目的是获得由单个细菌形成的标准菌落将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落优点可以观察菌落特征，对混合菌进行分离可以计数，可以观察菌落特征缺点 不能计数(1)吸收量较少，较麻烦(2)平板不干燥，效果不好，容易蔓延用途 多用于菌种的纯化(1)多用于筛选菌株(2)用于平板培养基的回收率计
2、数两种分离法的易错点拨(1)在稀释涂布平板操作中，每个步骤都要注意无菌操作，以防培养基被污染，影响实验效果。(2)每一稀释倍数菌液都至少要涂布三个平板，作为实验重复，求平均值，若其中有菌落数与其他实验差距悬殊者，应舍弃该实验数据，不进行统计、计算。(3)平板冷凝后，皿盖上会凝结成水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基中造成污染。易错提醒易错提醒1.微生物的分离和培养是现代生物工程应用中的重要环节。下图甲、乙、丙是大肠杆菌分离和培养过程中部分操作和实验结果示意图，请据图回答有关问题：(1)图甲所示的是制备固体培养基
3、时的实验操作步骤之一，它称为 。(2)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_。倒平板将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生(3)图乙是平板划线法接种操作示意图，正确的操作顺序是AB (用字母和箭头表示)；找出图乙中两处错误的操作：、(用字母表示)。GFECDHC D(4)下图丙是某同学用平板划线法接种后的培养基培养12 h后的实验结果，如果培养基上_，则说明无菌操作基本符合要求。生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点培养基的配制和无菌技术培养基的配制和无菌技术1.培养基的制备(以LB固体培养基
4、为例)计算称量融化灭菌倒平板。2.无菌技术(1)实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等，常用的消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法等，对不同的对象需采用不同的消毒或灭菌方法。(2)微生物培养时获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下内容：对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。为避免周围环境中微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料、用具与周围的物品相接触。3.倒平板操作待培养基冷却至60 左右时，在酒精灯火焰附近
5、倒平板，严格遵循教材上的操作步骤。4.划线分离法划线分离法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。5.涂布分离法先将菌液进行系列稀释，然后涂布平板，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分解成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。(1)图甲是利用 法进行微生物接种，图乙是利用 法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是 和 ；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是 和酒精消毒。2.下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答下列相关问题：划线分离涂布分离接种环玻璃刮刀灼烧灭菌【解析】图甲和图乙分别是划线分离法和涂布分离法，这两种
6、方法所用的接种工具分别是接种环和玻璃刮刀。由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。在微生物培养过程中会产生水，对微生物的生长造成影响，故需要倒置培养。(2)接种操作为什么一定要在酒精灯火焰附近进行？。(3)接种后，在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养？。火焰附近存在着无菌区域避免培养过程产生的水分影响微生物的生长(4)如图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是_(填“图甲”或“图乙”)。图乙微生物的分离技术微生物的分离技术1.微生物的代谢类型(1)根据能否将CO2合成有机物可分为：自养型微生物与异养型微生物。营养类型碳源氮源生长因子自养型微生物CO2、
7、NaHCO3等含碳无机物NH3、铵盐、硝酸盐等一般不需要(2)划分依据：自养型微生物与异养型微生物类型划分的主要依据是能否以无机碳作为生长的主要或唯一碳源，而与氮源无关。自养型微生物以CO2或碳酸盐为主要或唯一碳源进行代谢生长；异养型微生物必须以现成有机物作为碳源进行代谢生长。营养类型碳源氮源生长因子异养型微生物糖类、脂肪酸等铵盐、硝酸盐、蛋白质等有些微生物需要2.选择培养基在微生物培养中的应用(1)在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。在配制选择培养基时，往往要在培养基中加入某种化学物质。例如，当需要酵母菌和霉菌时，可以在培养基中
8、加入青霉素，以抑制细菌和放线菌的生长，从而分离出酵母菌和霉菌；在培养基中加入高浓度的食盐溶液可以抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，可以将金黄色葡萄球菌分离出来。(2)分离某种目的菌株，应根据它对营养和环境的特殊要求，设计合理的选择培养基。(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行 处理。3.在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂(含氮有机化合物)在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明)。稀释(2)要在长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从物理
9、性质、用途方面来看，上述培养皿中培养基的特点是 。(3)在划线培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是 或有氧条件抑制了这些细菌的生长。(4)在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是 ，有透明带菌落利用的氮源主要是 ，据此可筛选目的菌。在无氮固体培养基中添加了该除草剂培养基中缺少这些细菌可利用的氮源氮气该除草剂(5)科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株A和B，然后对突变株A和B进行实验，结果如下表所示：接种的菌种 一般培养基 实验处理及结果A不生长添加营养物质甲，能生长B不生长添加营养物质乙，能生长AB能生长不添加营养物质甲、乙就能生长突变株A不能在一般培养基上生长的原因是_。突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能的原因是_。突变株A缺乏合成营养物质甲所需要的酶 突变株A生长需要的营养物质甲，突变株B可以提供；突变株B生长需要的营养物质乙，突变株A可以提供退退出出
