1、国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库王 虎 副教授BOD5测定稀释与接种法关键技术水环境监测水环境监测国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库1.1.稀释与接种法稀释与接种法概述概述（1）方法依据：）方法依据：见水中-五日生化需氧量（BOD5）的测定-稀释与接种法（HJ 505-2009）；（2）适用对象：）适用对象：适用于地表水、工业废水和生活污水的BOD5测定；（3）检出与测定限：）检出与测定限：检出限0.5 mg/L，测定限6 6000 mg/L。2BODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库2.2.稀释与接种法原理
2、稀释与接种法原理 BOD5是指水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（201）的暗处培养5d分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度DO1和DO2，则：BOD5（mg/L）=DO1DO2稀释：有机物含量过高（BOD56 mg/L）的样品需适当稀释后测定；接种：不含或含微生物少的工业废水（如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存废水和氯化处理废水等）应接种后测定BOD5以引进能分解废水中有机物的微生物。驯化接种：废水含有剧毒物质，或所含有机物难以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解时，应将驯化后的微生物引入水样中进行接种。3BODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教
3、育水环境监测与治理专业教学资源库3.3.稀释稀释水制备水制备（1）纯水曝气：）纯水曝气：取一定量不含氯或氯胺物质的三级纯水于520 L的玻璃瓶中，在(201)水温下曝气1 h，使其DO值达到8 mg/L以上。（2）加营养盐：）加营养盐：临用前，向每升水中加入氯化钙溶液（27.6g/L）、氯化铁溶液（0.15g/L）、硫酸镁溶液（11.0g/L）和磷酸盐缓冲液(pH=7.2)各1.0 ml，混匀，使其pH=7.2、BOD50.2 mg/L，20保存。（3）氧平衡：）氧平衡：使用前需在(201)下开口放置1 h（防止稀释水的氧过饱和）。（4）使用限时：）使用限时：制备好的稀释水应在24 h内使用，
4、剩余的稀释水应弃去。4BODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库3.3.接种接种水制备水制备（1）生活污水：采集COD300 mg/L、TOC 100 mg/L的未受工业废水污染的生活污水适量，室温下放置一昼夜，取上清液使用。（2）表土浸出液：取100g生长植物的花园或农田表层土壤于2L的烧杯中，加入1L水，混匀后静置10min，取上清液使用。（3）含城镇污水的河水或湖水：室温下静置24h，上清液备用。（4）污水处理厂出水：二沉池出水。（5）购买微生物接种物质：接种液的配制和使用参见其说明书。5BODBOD5 5测定稀释与接种法
5、关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库4.4.驯化驯化接种水制备接种水制备（1）天然驯化：待测工业废水排污口下游38km处地表水水样。（2）人工驯化：取中和或经适当稀释后废水连续曝气，每天加入少量该种废水，同时加入少量生活污水，使适应该种废水的微生物大量繁殖。培养38d后，当水中出现大量的絮状物时，表明微生物已繁殖，其上清液作接种液。6BODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库5.5.接种接种稀释水制备稀释水制备（1）制备方法：取适量接种液加于稀释水中混匀，于（201）的环境中备用，要求当天配
6、制当天使用。（2）接种液用量：依来源不同而异，一般每1000mL稀释水中加入城市生活污水或污水处理厂出水110 ml，而加入河水或湖水10100 ml。（3）水质指标：配制好的接种稀释水pH=7.2，BOD51000 ml；（2）密封于棕色玻璃瓶的水样应在04的暗处运输和保存，并于24 h内尽快分析；（3）24 h内不能分析的水样应冷冻保存，分析前样品需解冻、均质化和接种。8BODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库7.BOD7.BOD5 5水样预处理水样预处理（1）调节pH：测定前要用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节pH值至68。（
7、2）去除余氯：含有少量余氯的水样，应采样后放置12 h，或加入适量亚硫酸钠溶液去除。（3）均质化：含有大量颗粒物样品、需大倍数稀释样品和冷冻保存样品，测定前均需将样品搅拌均匀。（4）除藻类：含大量藻类的样品，测定前要用1.6m滤孔的滤膜过滤。（5）补充营养盐：电导率125S/cm的原水样，需加入适量等体积的四种营养盐溶液，使其电导率大于125S/cm。9BODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库（6 6）调节水温和溶解氧：调节水温和溶解氧：调节水温：测定前应将使待测试样的温度达应到202；调节溶解氧量：调节溶解氧量：测定前试样溶
8、解氧含量过低，需曝气15 min、振摇赶走样品中残留的气泡；若试样中氧过饱和，则样品充满容器2/3体积，用力振荡赶出过饱和氧。10BODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库8.8.稀释稀释倍数确定倍数确定（1）确定原则：）确定原则：使培养过程消耗的溶解氧和培养后剩余的溶解氧均不小于2 mg/L，且剩余的溶解氧含量为培养前的1/32/3最佳。（2）确定方法：）确定方法：根据待测水样的高锰酸盐指数IMn、化学需氧量CODCr或总有机碳TOC 的测定值，按照表1中的BOD5与Imn、CODCr或TOC 的比值R，估计BOD5的期望值；
9、11BODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库8.8.稀释稀释倍数确定倍数确定再根据表2确定稀释因子。当不能准确选择稀释倍数时，一个样品做23个不同的稀释倍数。12BODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库9.9.稀释稀释方法方法（1）取适量稀释水或接种稀释水，于稀释容器中备用；（2）按照确定的稀释倍数，将一定体积的试样或处理后试样用虹吸管注入稀释容器中；（3）再次注入稀释水或接种稀释水至刻度，轻轻混合避免残留气泡，待测定；（4）如果若稀释倍数超过100倍，可进行
10、两步或多步稀释。13BODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库10.10.空白空白试样试样（1）稀释法测定：空白试样为稀释水，需要时每升稀释水中加入2ml丙烯基硫脲硝化抑制剂；（2）稀释接种法测定：空白试样为接种稀释水，必要时每升接种稀释水中加入2 ml丙烯基硫脲硝化抑制剂。14BODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库11.溶解氧测溶解氧测定定（1）碘量法：）碘量法：将处理好的试样充满两个溶解氧瓶中，使试样少量溢出；将一瓶盖上瓶盖、加水封、罩上密封罩，在恒温培养
11、箱中培养5d4 h后测定DO2值；另一瓶于恒温培养箱中15 min后测定DO1值；BOD5=DO1-DO2。15BODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库11.11.溶解氧测定溶解氧测定（2）电化学探头法：电化学探头法：将试样充满一个溶解氧瓶中，使试样少量溢出；测定培养前试样DO1值中；盖上瓶盖、加上水封，在瓶盖外罩上一个密封罩；将试样瓶放入恒温培养箱中培养5 d4 h后测定其DO2值；BOD5=DO1-DO2。（3）空白测试方法与试样相同。16BODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境
12、监测与治理专业教学资源库12.12.结果结果计算计算式中：五日生化需氧量质量浓度，mg/L；1接种稀释水样在培养前的溶解氧质量浓度，mg/L；2接种稀释水样在培养后的溶解氧质量浓度，mg/L；3空白样在培养前的溶解氧质量浓度，mg/L；4空白样在培养后的溶解氧质量浓度，mg/L；f1接种稀释水或稀释水在培养液中所占的比例；f2原样品在培养液中所占的比例 17123412()()ffBODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库13.13.检测检测结果报告结果报告（1）BOD5测定结果以氧的质量浓度（mg/L）报出；（2）如果多个稀释
13、倍数下的测定结果均满足要求，则以这些稀释倍数测定结果的平均值为最终检测结果；（3）测定结果1000 mg/L的以科学计数法报出；（4）报告应注明样品是否经过过滤、冷冻或均质化处理。18BODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库14.14.检测检测质量控制质量控制（1）空白控制：空白控制：每一批样品做两个分析空白试样，稀释法空白每一批样品做两个分析空白试样，稀释法空白试样的测定结果试样的测定结果 0.5 mg/L，非稀释接种法和稀释接种法空白试，非稀释接种法和稀释接种法空白试样的测定结果样的测定结果1.5 mg/L，否则应检查可能的污染来源，否则应检查可能的污染来源；（2）标样控制：每一批样品要求做一个标准样品，即：取每一批样品要求做一个标准样品，即：取20ml葡萄糖葡萄糖-谷氨酸标准溶液于稀释容器，用接种稀释水稀释至谷氨酸标准溶液于稀释容器，用接种稀释水稀释至1000 ml后测定后测定BOD5，结果应在，结果应在180230mg/L，否则应检查接种液、，否则应检查接种液、稀释水的质量稀释水的质量。19BODBOD5 5测定稀释与接种法关键技术测定稀释与接种法关键技术国家职业教育水环境监测与治理专业教学资源库谢 谢！水环境监测水环境监测
