1、以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦如何看抗体检测结果及抗体检测应用如何看抗体检测结果及抗体检测应用隋海亮隋海亮2014年年7月月5日日文档密级：内部公开文档密级：内部公开以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦1一、猪瘟一、猪瘟ELISAELISA原理原理 阻断（竞争）阻断（竞争）ELISAELISA抗体抗原加入样品洗涤+酶标记物洗涤+底物蓝色淡蓝色终止读数阻 断（竞争）ELISA 原理例如：CSFV-Ab、PRV-gI、PRV-gB以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦2猪瘟疫苗的免疫评估猪瘟疫苗的免疫评估关注两点关注两点p 阳性率：阳性率：猪瘟抗体（阻断率（猪瘟抗体（阻断率（Blocking）40%
2、，判为阳性结果；，判为阳性结果；30%Blocking40%，判为可疑结果；，判为可疑结果；Blocking30%，判为阴性结，判为阴性结果）；果）；免疫合格率：阻断率（免疫合格率：阻断率（Blocking）50%的，即为免疫合格。免的，即为免疫合格。免疫合格的比例即为免疫合格率。疫合格的比例即为免疫合格率。以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦3p 变异系数：变异系数：Coefficient of Variation(CV)Coefficient of Variation(CV)变异系数计算的是平均个体的变化，以平均滴度的背离的百分数来表变异系数计算的是平均个体的变化，以平均滴度的背离的百分数来
3、表示示 公式如下公式如下 标准偏差（标准偏差（STDEVSTDEV）CV=X 100%CV=X 100%平均阻断率平均阻断率 CV40%,显示了群内猪只有一个均衡的、相似反应显示了群内猪只有一个均衡的、相似反应 CV60%,显示了群内猪只滴度反应变化高于正常估计值显示了群内猪只滴度反应变化高于正常估计值以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦4猪瘟检测的应用猪瘟检测的应用p 免疫评估：免疫评估：商品猪：猪瘟商品猪：猪瘟二免后后4-6周周，要求：阳性率，要求：阳性率 80%,CV40%种猪群（公猪和母猪）：猪瘟免疫后种猪群（公猪和母猪）：猪瘟免疫后4-6周，要求周，要求：免：免疫合格率疫合格率80%（
4、严格一点，要（严格一点，要90%）,CV40%后备猪（全群检测）：进入隔离舍后后备猪（全群检测）：进入隔离舍后1-2周、进入配种周、进入配种舍前舍前1个月（个月（6-6.5月龄），要求：月龄），要求：Blocking 40%，阴性猪补打疫苗，阴性猪补打疫苗，3周后复检，不合格淘汰。周后复检，不合格淘汰。以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦5猪瘟检测的应用猪瘟检测的应用p 仔猪首免日龄的确定：仔猪首免日龄的确定：选选30-60头仔猪，日龄和体重相近，每窝头仔猪，日龄和体重相近，每窝1-2头，确认头，确认没有野毒感染的风险，不接种猪瘟疫苗没有野毒感染的风险，不接种猪瘟疫苗连续采血：出生后连续采血：出
5、生后7天、天、14天、天、21天、天、28天、天、35天、天、42天检测抗体水平天检测抗体水平 要求：要求：CSFAb Block30%仔猪占仔猪占20%-40%时为首免时为首免日龄日龄(依据感染压力和平均阻断率而定依据感染压力和平均阻断率而定)。以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦6二、蓝耳二、蓝耳ELISAELISA原理原理 间接间接ELISAELISA抗体抗原加入样品洗涤+酶标记物洗涤+底物蓝色无色终止读数间 接 ELISA 原理以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦7结果判断结果判断p 结果判定：蓝耳抗体（结果判定：蓝耳抗体（S/P0.4S/P0.4，判为阳性结果；，判为阳性结果；S/P0.
6、4S/P0.4，判为阴性结果），判为阴性结果）免疫猪群免疫猪群 0.40.4S/PS/P2.52.5；对于过高抗体种猪，隔离饲养；对于过高抗体种猪，隔离饲养，2 2周后周后采血检测，若抗体处于上升趋势的种猪则淘汰采血检测，若抗体处于上升趋势的种猪则淘汰 非免疫猪群非免疫猪群 S/PS/P值值0.4 0.4 淘汰或隔离饲养淘汰或隔离饲养以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦8应用应用p 公猪公猪 季度性监测全部公猪季度性监测全部公猪，一年，一年4次次 要求：要求：S/P2.5公猪暂停使用公猪暂停使用(1-2个月个月)或或PCR确认感染状态确认感染状态 p 母猪母猪 季度性季度性监测母猪监测母猪 要求
7、：要求：S/P应主要在应主要在2.5 S/P 0.4(90%母猪抗体在免疫后转阳母猪抗体在免疫后转阳)p 后备母猪和后备公猪后备母猪和后备公猪 在在引进种群前引进种群前1个月，全群监测个月，全群监测 要求：要求：S/P2.5和和S/P0.4暂停引入繁殖群暂停引入繁殖群以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦9应用应用p 动态检测动态检测 4周龄、周龄、10周龄猪群，每次周龄猪群，每次20-30样本样本 主要是：分析蓝耳感染状态，判断猪群是否稳定，主要是：分析蓝耳感染状态，判断猪群是否稳定，(对于不稳定群体对于不稳定群体,延延迟转群或免疫等迟转群或免疫等)，如果，如果S/P2.5的比例超过的比例超过5
8、%，则判断该场蓝耳不稳定，则判断该场蓝耳不稳定，有感染；没有则稳定。，有感染；没有则稳定。以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦10三、伪狂犬三、伪狂犬p 伪狂犬伪狂犬gEgE：结果成立条件：阴性对照平均值：结果成立条件：阴性对照平均值-阳性对照平阳性对照平均值必须大于或等于均值必须大于或等于0.30.3；否则试验无效。；否则试验无效。p 判定结果：如果判定结果：如果S/NS/N值低于或等于值低于或等于0.600.60，样品应判定为阳，样品应判定为阳性；如果性；如果S/NS/N值大于值大于0.700.70，样品应判为阴性；处于，样品应判为阴性；处于0.60.70.60.7的样品判定为可疑，间隔两周
9、时间可重新检测。的样品判定为可疑，间隔两周时间可重新检测。伪狂犬病毒伪狂犬病毒gE片段片段gB片段片段疫苗病毒片段疫苗病毒片段以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦11猪群猪群PRV感染状况的普查感染状况的普查p 采样要求采样要求 公猪群：全部采样公猪群：全部采样 生产母猪群：随机采样生产母猪群：随机采样30个样本个样本 15周龄后的生长猪（母源抗体消失）：随机采样周龄后的生长猪（母源抗体消失）：随机采样20-30个样本个样本p 检测方法检测方法 IDEXX PRV gI ELISA S/N0.6 阳性，阳性，S/N0.7阴性阴性0.6S/N0.7 隔离隔离2周后重复检测周后重复检测p 普查结果分
10、析：普查结果分析：低感染群：种猪阳性率低感染群：种猪阳性率10%以下，可做净化以下，可做净化 高感染群：种猪阳性率高感染群：种猪阳性率10%以上，低于以上，低于30%，可做净化；高于，可做净化；高于30%，通过疫苗控制，来稳定猪群，通过疫苗控制，来稳定猪群以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦12伪狂犬疫苗的免疫评估伪狂犬疫苗的免疫评估针对阴性场针对阴性场p 商品猪群商品猪群免疫疫苗后免疫疫苗后4-6周，随机采样周，随机采样20-30份份要求：要求：gE抗体检测全部为阴性；抗体检测全部为阴性；gB抗体检测阳性率抗体检测阳性率95%以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦13p 伪狂犬的评级标准：伪狂犬的
11、评级标准：伪狂犬伪狂犬gE抗体全阴性，则为阴性场抗体全阴性，则为阴性场 伪狂犬伪狂犬gE抗体阳性，但检测抗体阳性，但检测15周龄猪，周龄猪，gE抗体转阴，则为阳性抗体转阴，则为阳性稳定场稳定场 伪狂犬伪狂犬gE抗体阳性，但检测抗体阳性，但检测15周龄猪，周龄猪，gE抗体阳性率达到抗体阳性率达到20%以上，则为阳性不稳定稳定场以上，则为阳性不稳定稳定场 以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦14应用应用净化净化p 母猪群母猪群,公猪群公猪群(全部全部)过去过去6-12个月没有使用个月没有使用全病毒灭活苗或非全病毒灭活苗或非gE基因缺失弱毒疫苗基因缺失弱毒疫苗 若若S/N0.6 则淘汰（对于怀孕母猪则
12、淘汰（对于怀孕母猪:可以先隔离可以先隔离,产后产后2周淘汰）周淘汰）;若若0.6S/N0.7 淘汰或隔离淘汰或隔离2周后重复检测周后重复检测,阳性者淘汰阳性者淘汰;间隔间隔6,126,12个月重复检测全群个月重复检测全群,若前后若前后两次两次检测全部为检测全部为阴性阴性，则后续，则后续检测不需要全群采样检测不需要全群采样,可以按季度检测可以按季度检测:每群随机采样每群随机采样15-2015-20份份;若季度检测时出现若季度检测时出现阳性阳性猪只猪只,其其所在猪舍所在猪舍则需要全部检测则需要全部检测,阳性淘阳性淘汰汰以人为本以人为本 以正兴邦以正兴邦15p 商品群商品群 随机抽样检测（如随机抽样检测（如5 5周、周、1515周龄猪）或设立非免疫的哨兵周龄猪）或设立非免疫的哨兵猪（非免疫猪）猪（非免疫猪）:20-30:20-30头头/批作为哨兵猪（监测批作为哨兵猪（监测PRVgEPRVgE和和PRVgBPRVgB抗体抗体,评估但不涉及淘汰）评估但不涉及淘汰）以人为本 以正兴邦
