1、细菌的接种及细菌的接种及注意事项注意事项灭菌接种环灭菌接种环 1.要充分灭菌接种环，以免污染其标本。2.要适当冷却再取标本，以免带不出标本中的菌种。取标本取标本 1.蘸取标本时应适量，以免标蘸取标本时应适量，以免标本太少漏检。本太少漏检。2.液体标本，如尿液，应注意液体标本，如尿液，应注意混匀。混匀。接种接种1.细菌的接种方法有很多，如平板划线法、斜面接种法、穿刺接种法，等等。但我们用的最多的是：平板划线法意义指把混杂在一起的微生物，用接种环在平板培养基表面，通过分区划线，稀释得到较多的独立分布的单个菌落，即将样本在固体培养基表面多次做由点到线稀释而达到分纯的目的。一区：所占区域大约是平板面一
2、区：所占区域大约是平板面积的积的1/51/4二区：由一区向二区：由一区向二区带出三四条二区带出三四条平行线平行线三区：由二区引出三四次，但三区：由二区引出三四次，但 三区面积最大三区面积最大CO2在细菌培养中在细菌培养中的意义的意义 1有些细菌在初次分离培养时，需要有些细菌在初次分离培养时，需要5 5-10-10的的CO2CO2。因为。因为细菌在生长过程中能够分解培养细菌在生长过程中能够分解培养基中的某些含氮物质产生氮，对该菌有杀灭作基中的某些含氮物质产生氮，对该菌有杀灭作用，而用，而CO2能中和细菌产生的氮，以减少对细能中和细菌产生的氮，以减少对细菌的毒性。如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、牛菌的
3、毒性。如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、牛布鲁菌等。布鲁菌等。2.为细菌提供碳源，促进细菌的生长。如肺炎为细菌提供碳源，促进细菌的生长。如肺炎链球菌，草绿色链球菌。链球菌，草绿色链球菌。在细菌室的培养箱上有一个在细菌室的培养箱上有一个CO2的的开关，为什么要用开关，为什么要用CO2呢？呢？常见细菌的鉴别及其特点常见细菌的鉴别及其特点阳性球菌 葡萄球菌-金黄色葡萄球菌金葡特点是人类化脓性感染最常见的病原菌，是人类化脓性感染最常见的病原菌，可以引起局部感染，也可以引起全身感可以引起局部感染，也可以引起全身感染。染。血浆凝固酶，阳性。血浆凝固酶，阳性。血平板上呈黄色菌落，大而凸起，表血平板上呈黄色菌落，大
4、而凸起，表 面光滑，有面光滑，有溶血环。溶血环。G+阳性球菌，葡萄状排列，无芽孢，无阳性球菌，葡萄状排列，无芽孢，无荚膜。荚膜。1.2.3.4.葡萄球菌-表面葡萄球菌表葡特点正常存在于人体皮肤、黏膜表面，多正常存在于人体皮肤、黏膜表面，多见于院内感染，如体内异物留置，静见于院内感染，如体内异物留置，静脉导管等脉导管等血浆凝固酶，阴性血浆凝固酶，阴性表葡形态同金葡相似，但是为白色、表葡形态同金葡相似，但是为白色、扁平菌落，无溶血环扁平菌落，无溶血环1.2.3.3.链球菌 常见的链球菌主要有化脓性链球菌、草绿常见的链球菌主要有化脓性链球菌、草绿色链球菌、肺炎链球菌色链球菌、肺炎链球菌。根据抗原结构
5、不同可以把链球菌分为根据抗原结构不同可以把链球菌分为A A、B B、C C、D D等二十个群，但对人类有致病性的等二十个群，但对人类有致病性的大多数属于大多数属于A A群，少量属于群，少量属于B B群。群。根据在血平板上溶血分为以下三种：根据在血平板上溶血分为以下三种：甲型（甲型（型）溶血性链球菌，又称草绿色型）溶血性链球菌，又称草绿色链球菌，菌落周围有草绿色溶血环，致病力弱，链球菌，菌落周围有草绿色溶血环，致病力弱，是条件致病菌。是条件致病菌。乙型（乙型（型）溶血性链球菌，产生强烈的型）溶血性链球菌，产生强烈的溶血毒素，在血平板上可使菌落周围出现溶血毒素，在血平板上可使菌落周围出现2 24m
6、m4mm的无色透明溶血环。的无色透明溶血环。丙型（丙型（r-）链球菌，菌落周围无溶血环，又）链球菌，菌落周围无溶血环，又叫不溶血性链球菌，通常不致病。叫不溶血性链球菌，通常不致病。肺炎链球菌菌落特点菌落特点：在血平板上：在血平板上0.51.5mm,灰白色半透灰白色半透明，表面光滑，扁平，明，表面光滑，扁平，周围环绕草绿色溶血环，周围环绕草绿色溶血环，培养放置培养放置24h以上的菌落，以上的菌落，还会因为产生自溶酶的还会因为产生自溶酶的作用，而致菌落中央塌作用，而致菌落中央塌陷而边缘隆起，呈脐窝陷而边缘隆起，呈脐窝状。状。肺炎链球菌、群、群的区分肺炎链球菌、群、群的区分：pt试验试验抑菌环抑菌环
7、14,鉴定为肺链鉴定为肺链杆菌肽试验杆菌肽试验群群CAMP试验试验B群群Opt实验杆菌肽实验11葡萄球菌与链球菌的鉴别：1.涂片涂片革兰染色，葡萄球菌呈葡萄串样，链球菌呈链状。2M-H试验当染片不能区别时，接种到M-H平板，长成菌落之后，可挑单个菌落做触酶试验，+是葡萄球菌，是链球菌。肠球菌肠球菌属特点：肠球菌属特点：+，成圆球形或椭圆形，单，成圆球形或椭圆形，单个，成对，或短链，均可。个，成对，或短链，均可。在血平板上可形成灰白色不透明表面光滑，在血平板上可形成灰白色不透明表面光滑，0.51.0mm大小的菌落，可有溶血现象。大小的菌落，可有溶血现象。以粪肠球菌和屎肠球菌为常见：阿拉伯糖阿拉伯
8、糖 山梨醇山梨醇屎肠球菌屎肠球菌 阳性阳性 阴性阴性粪肠球菌粪肠球菌 阴性阴性 阳性阳性 阴性杆菌 大肠杆菌：G-杆菌，有鞭毛、菌毛，无芽胞。菌落23mm,圆形凸起，灰白湿润，光滑半透明，边缘整齐。某些菌落可产生有透明溶血环。鲍曼不动杆菌菌落特点菌落特点：较大菌落、凸起、灰白色黏液型、相邻菌落容易发生融合可挑出长丝状细丝肺炎克雷伯杆菌肺炎克雷伯杆菌变形杆菌迁徙生长迁徙生长菌落特点菌落特点：G-，两边钝圆，有明显的多形性，呈球形或丝状，无芽胞无荚膜，有鞭毛，运动活泼。普通变形杆菌和奇异变形杆菌的大多数菌株呈迁徙扩散生长，迅速弥漫。波纹状薄膜布满整个培养基表面。嗜麦芽假单胞菌菌落特点：菌落特点：G
9、-杆菌，细长略杆菌，细长略弯曲。不透明，弯曲。不透明，灰黄色菌落，在灰黄色菌落，在血平板上可产生血平板上可产生氨味。本菌氧化氨味。本菌氧化酶阴性，与大多酶阴性，与大多数假单胞菌不同。数假单胞菌不同。在普通琼脂培养基在普通琼脂培养基上能产生水溶性绿上能产生水溶性绿色素，使整个培养色素，使整个培养基变为绿色基变为绿色l菌落灰绿色、半透菌落灰绿色、半透明、大而扁平、表明、大而扁平、表面湿润、边缘不齐；面湿润、边缘不齐；有金属光泽；有生有金属光泽；有生姜样芳香气味；菌姜样芳香气味；菌落周围有宽大的兰落周围有宽大的兰绿色透明溶血环。绿色透明溶血环。铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌在巧克力平板上生长，菌落为灰白色，扁平，半透明的小菌落卫星现象：当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌一起培养时，靠近葡萄球菌菌落附近可见到流感嗜血杆菌菌落较大，远离葡萄球菌的菌落较小，称为卫星现象。
