1、,类风湿关节炎自身抗体谱,北京协和医院风湿免疫科,类风湿关节炎 (Rheumatoid Arthritis, RA),慢性、对称性、多关节炎症为主要表现的系统性疾病 主要损伤关节滑膜、软骨、骨，也可侵犯浆膜、肺、心脏、血管等,China (0.36%),女性多发，男女发病率之比为1:3左右 40岁-60岁间发病最常见 多认为是环境和遗传因素相互作用的结果 RA的发病率在自身免疫性结缔组织病中列首位 高的致畸致残率,发病两年内即可出现不可逆的骨关节破坏,类风湿关节炎概述,RA诊断的生物标志及进展,遗传标志物: HLA-DR4 炎性标志物: 抗血管紧张素转化酶,补体活化产物,血浆淀粉样变蛋白 组织
2、破坏特异性标志物: 透明质酸, 型胶元 自身抗体: RF ， APF ，AKA ， anti-CCP ，anti-Sa anti-MCV, anti-RA33， anti-Bip ，MMP 3 等,类风湿关节炎诊断,早期RA多数只有关节炎的表现，缺乏影像学的支持 不少其他疾病早期也表现为关节炎 类风湿因子（RF）并非RA的特异性抗体,类风湿关节炎诊断,新增了抗CCP抗体及血清炎症指标 新标准可对一个以上关节炎进行早期诊断，因此能及时应用改变病情抗风湿药物(DMARD)和生物制剂治疗，可提高疗效并改变RA的预后。,类风湿因子 （ Rheumatoid Factor，RF）,兔抗体致敏绵羊红细胞凝
3、集,该现象与抗球蛋白抗体有关,因与RA有关而命名为RF,1987年RA ACR诊断标准之一,绵羊红细胞 兔抗体 致敏绵羊红,致敏绵羊红 患者血清 绵羊红凝集,RF靶抗原,变性IgG IgG重链恒定区C末端即Fc段,RF致病机制,致病机制： 诱导加重循环免疫复合物（CIC）介导疾病进展,RF+变性IgG+CIC中的抗原 -增强抗原亲和力 变性IgG+RF+变性IgG -诱导CIC形成,补体活化 抗感染免疫 骨质破坏,RF检测方法,半定量 定量,RF检测方法,假阳性-ELISA检测IgG型/IgA型RF,F(ab)2标记二抗,RF检测方法,假阴性-隐性类风湿因子（HRF）,与变性IgG结合形成复合
4、物，活性被隐蔽，常规方法检测不出的类风湿因子 部分研究认为早期RA的RF亲和力较强，表现为HRF，晚期亲和力下降，表现为RF,检测方法：解聚诱导助剂，抗原抗体亲和层析,RF临床意义,RF RA,RA诊断的灵敏度60%，特异性80%,RF临床意义,RF阳性预示RA处于更具侵袭性和破坏性的进程 高滴度IgM型与RA病情活动度和关节外损伤相关 IgA型滴度与疾病活动度相关，预警和诊断RA特异性较好 IgG型滴度与血沉和握力相关,疾病活动性评估：,TNF阻断药物(Rituximab，tocilizumab)，,治疗：,RF,RF检测结果,抗瓜氨酸蛋白/肽抗体 （anti-citrullinated p
5、roteins antibodies，ACPA）,靶抗原为瓜氨酸蛋白或多肽的抗体 抗核周因子抗体（anti-perinuclear factor antibodies, APF） 抗角蛋白抗体（anti-keratin antibodies, AKA） 抗环瓜氨酸肽抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibody, anti-CCP) 抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(Anti-mutated citrullinated vimentin antibody,anti-MCV) .,抗瓜氨酸蛋白/肽抗体 （anti-citrullinated proteins
6、 antibodies，ACPA）,发病机制 致病机制不明 遗传：HLA，PTPN22等与RA发病相关的基因改变常出现于ACPA阳性的RA患者 环境：因吸烟等与RA发病相关的环境也常伴随ACPA阳性表现 临床意义 ACPA阳性RA患者病情较严重 ACPA阳性对于未分化关节炎等发展为RA有重要提示意义,1964年，APF，诊断RA的灵敏度50%，特异性90%,1979年，AKA，诊断RA的灵敏度50%，特异性90%,APF AKA,1964年，APF，诊断RA的灵敏度50%，特异性90%,1979年，AKA，诊断RA的灵敏度50%，特异性90%,1993年，AKA靶抗原为聚角蛋白微丝蛋白(Fil
7、aggrin),1995年，证实AKA和APF的靶抗原大体一致,1998年，AKA和APF 主要识别聚角蛋白微丝蛋白瓜氨酸表位,2000年，瓜氨酸环化，第一代CCP，诊断RA的灵敏度68%，特异性96%。,背景,APF检测方法：IIF,阳性细胞数 小于2个为阴性 2-5个为可疑 大于5个为APF阳性,口腔黏膜上皮细胞，20倍,AKA检测方法：IIF,阳性：角质层有连续的线状、 点片状绿色荧光,阴性：角质层为暗红色,鼠食管中下三分之一，20倍,APF与AKA的临床意义,AKA在巨大细胞动脉炎、曼蚊血吸虫病中检出率约为50% APF和AKA在RA中早期诊断、疗效监测和预后评估中的作用被CCP取代,
8、APF,APF检测结果,AKA,AKA检测结果,anti-CCP背景,PAD 肽酰基精氨酸亚氨酶,anti-CCP检测方法与性能比较,anti-CCP：酶联免疫吸附法；电化学发光,CCP2滴度与构象分布相关 RF(-)RA中CCP3中CCP阳性检出率高于CCP2,anti-CCP检测方法与性能比较,anti-CCP：酶联免疫吸附法；电化学发光,电化学发光： 自动化、需血少、时间短 灵敏度、特异性与CCP3相仿,未结合 标记抗原,抗CCP 抗体,抗CCP 抗体检测结果：非常满意,抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体 (Anti-mutated citrullinated vimentin antibody
9、,anti-MCV),抗MCV抗体,抗MCV抗体常用检测方法为酶联免疫吸附法,1968年，非球形红细胞溶血性贫血研究中首次认识GPI GPI基因位于19号染色体，全长40kb，蛋白分子量60kD 拥有多个同种异构体，其结构都极其相似 广泛分布，肝、肌、骨、脑、肺的酶活性最高,葡萄糖-6-磷酸异构酶 （Glucose 6-phosphate isomerase，GPI）,GPI的生理功能,细胞内 糖酵解，糖异生的关键酶,细胞外 神经白细胞素，促进一些神经元的生长； 成熟因子，诱导人类髓系白血病细胞的分化； 自分泌因子，刺激细胞迁移； 细胞因子，促使B细胞成熟，分泌抗体,自身抗原 诱导产生自身抗体
10、,GPI在类风湿关节炎中的意义,血清（ELISA法） RA组较其他风湿病组和健康人明显升高 诊断：灵敏度80%，特异性为70% 活动性评价：活动组较非活动组明显升高 其他：与RA患者关节肿胀、关节疼痛、RF阳性率和 抗CCP抗体阳性率相关 对RA的诊断及活动判断有很大的临床价值。,类风湿关节炎自身抗体研究进展,抗Ra33抗体 (hnRNP A2) 1989年Hassfeld等用免疫印迹法在RA患者的血清中检测到 靶抗原为相对分子量为33KD的核酸蛋白 在RA患者中的阳性率报道不一，敏感性在3545，特异性可达90，在SLE和MCTD等病中也有较低阳性率 可出现在早期不典型（RF阴性）的RA患者
11、中。RF和ACPA均阴性时，RA33常提示病情缓和,类风湿关节炎自身抗体研究进展,抗型胶原（type II collagen）抗体 靶抗原为型胶原蛋白 可存在于88的RA患者的血清中，且在早期RA患者中的阳性率高于晚期的RA患者 抗Bip抗体 靶抗原为内质网免疫球蛋白结合蛋白 分子量68KD RA患者中其敏感性和特异性分别为73和71，在早期的RA患者中分别为66和65，因此抗Bip抗体对RA的早期诊断有很重要的意义 在RF antiCCP APF AKA等抗体阴性RA患者中有很高阳性率,类风湿关节炎自身抗体研究进展 基质金属蛋白酶3 （ matrix metalloproteinase,mmp3 ）,类风湿关节炎自身抗体研究进展 基质金属蛋白酶3 （ matrix metalloproteinase,mmp3 ）,蛋白水解酶 发病机制 破坏胶原和蛋白多糖，使软骨细胞依赖生存的细胞外基质 发生异常降解导致软骨退变。 Mmp3 是炎症性标记物 国外文献报道 : 早期RA患者血清MMP-3水平显著高于正常人 MMP-3含量与ESR、CRP呈正相关 MMP一3水平与关节放射学评估分数关节功能评定正相关 MMP-3水平预测半年至1年内出现关节破坏的指标,谢谢!,
