1、薄层液基细胞术在非妇科标本中的应用 广东省中医院病理科 郑广娟2011年6月前言细胞学方法是肿瘤规范化诊治的第一步，具有方便、简单、可重复等优点。常用方法：传统涂片 液基薄片（液基薄片、LCT）传统制片与液基制片比较液基薄片20%20%标本移至玻片、干固定标本移至玻片、干固定100%100%标本被收集至保存液中、湿固定标本被收集至保存液中、湿固定制片技术不稳定、不能重复制片制片技术不稳定、不能重复制片技术稳定可靠、可以重复技术稳定可靠、可以重复易受血、粘液、炎性物遮盖易受血、粘液、炎性物遮盖去除血、粘液、及大量炎性遮盖物去除血、粘液、及大量炎性遮盖物细胞分布不均匀细胞分布不均匀,易重叠易重叠细
2、胞分布均匀集中细胞分布均匀集中,不易重叠不易重叠镜下观察费时费力镜下观察费时费力,易漏诊易漏诊诊镜下观察省时省力诊镜下观察省时省力,不易漏诊不易漏诊液基薄片在非妇科的运用随着液基薄片在宫颈癌及其癌前病变筛查中的广泛应用，液基薄片检查技术日趋成熟稳定，可制出优质细胞薄层涂片，有效地提高了病变细胞的检出率。但对于非妇科标本，因各种液基细胞学制片技术的不同及标本 的多样性，造成了制片质量不稳定，从而影响了细胞学的诊断。我院应用液基薄片 制作非妇科标本，不断摸索总结，制出了较为满意的液基细胞涂片。2129例液基薄片结果分析1044例标本中用液基薄片检出阳性422例（40.4），以心包积液、尿液、胸水、
3、腹水阳性率为高。1085例乳腺囊液标本中检出阳性134例（12.4%）液基薄片与活检诊断的总符合率超过70分项统计阳性率，液基薄片均高于传统涂片，差异有统计学意义（P0.05）2129例液基薄片判读结果检验例数阳性数阳性率活检对照数相符例数相符率尿液1659457.0%412765.9%胸水33914542.8%291655.2%腹水2318135.1%282071.4%心包积液221672.7%22100%痰与支气管刷检物1996834.2%383078.9%脑脊液12433.3%11100.%其它761418.4%5480.0%合计104442240.4%14410069.4%乳腺1085
4、13412.4%614777.0%传统涂片与液基薄片阳性率比较项目腹水尿痰胸水脑脊液心包液乳腺涂片液基薄片涂片液基薄片涂片液基薄片涂片液基薄片涂片液基薄片涂片液基薄片涂片液基薄片统计数133323170716519421992537339701211622135261085阳性数16881389412768483145243516354134阳性率12.6%35.1%5.4%57.0%6.5%34.2%19.0%42.8%2.9%33.3%30.2%72.7%2.6%12.4%p p值0.050.050.050.050.050.050.05液基标本的采集及处理收集样本收集样本 离心浓缩离心浓缩
5、 振荡混匀振荡混匀 观察外观观察外观 制片制片 不同类型标本处理方法不一粘液（痰液）标本 尿液标本胸腹水标本 针吸标本细胞学标本包埋粘液（痰液）标本处理制片制片 痰：将样本直接收集在保存液中。刷出物：将收集样本用的刷子直接放在保存液中。如样本含粘液较多，可加入1ml DTT（二硫苏糖醇）溶解液将保存液放在振荡仪上，1500-2000转振荡10分钟将样本置离心机上，1500-2000转离心5-10分钟，弃去上清液观察细胞团外观，若仍有肉眼可见粘液或血则加入30ml稀释10倍的DTT重复步骤2-3或用10%的冰醋酸将沉淀物加入保存液中，将保存液瓶静止15分钟后上机制片收集标本收集标本 振荡混匀振荡
6、混匀观察外观观察外观 离心浓缩离心浓缩 痰标本的采集自然咳痰法：病人早晨咳痰之前，应漱口、以避免食物残渣和细菌污染。指导病人深呼吸后用力咳痰，几次重复同样动作，咳出肺深部的痰液吐入标本盒内，立即进行处理。超生波喷雾吸入引痰法：不能自然咳痰的病人，雾化吸入法可以获取较好的痰标本。采用超生波雾化器作气溶胶方法引痰，引痰时，病人张口深吸气，由鼻孔出气。吸入10-15分钟，随时将痰咳入标本容器中，立即送检并进行处理。男，65岁TCT诊断：（痰）考虑为小细胞癌痰活检诊断：（肺）小细胞癌图女，70岁液基薄片诊断：（支气管粘膜刷检物）考虑为腺癌支气管粘膜刷检物活检诊断：（左支气管）低分化腺癌。图尿液标本处理
7、制片制片 将样本置离心机上，以2000r/min,离心10分钟倒去上清液，观察细胞团外观，若有肉眼可见血液则加入30ml红细胞处理液（10%冰醋酸）重复步骤1把沉渣转移到保存液中，振荡保存液5分钟。上机制片观察外观观察外观 离心浓缩离心浓缩 采集注意事项自然排尿 通常取晨起中段尿，怀疑有尿道肿瘤者，收集前段初始尿，膀胱按摩能增加细胞的脱落。输尿管导尿 如怀疑有肾盂或输尿管肿瘤，自然排尿尿内细胞太少而不能诊断或要确定肿瘤的发生部位时，可在膀胱镜下作输尿管导尿，尿量不少于10毫升。女，16岁液基薄片诊断：（尿）肾透明细胞癌可能性大尿）肾透明细胞癌可能性大尿液活检诊断：（肾）透明细胞癌男，67岁液基
8、薄片诊断：（尿液）考虑肾源性肿瘤（尿液）考虑肾源性肿瘤尿液活检诊断：（左肾）中分化鳞状细胞癌（左肾）中分化鳞状细胞癌图制片制片 收集新鲜的体液样本弃去上清液，震荡使细胞恢复悬浮状态将样本置离心机上，1500-2000转离心5-10分钟观察细胞团外观，若仍有肉眼可见粘液或血则加入30ml稀释10倍的DTT重复步骤2-3或用10%的冰醋酸将沉淀物加入保存液中，将保存液瓶静止15分钟后上机制片收集标本收集标本 恢复悬浮恢复悬浮观察外观观察外观 离心浓缩离心浓缩 胸腹水标本处理浆膜腔穿刺液采集的注意事项（胸腹水、心包积液等）浆膜腔穿刺术常由临床医生操作，送检标本量一般为100-200毫升为宜。抽出的标
9、本应立即送检，因积液在离体后各种细胞很快会自溶破坏。积液内如含有较多纤维蛋白原时，抽出后容易凝固，影响细胞学检查，因此在抽取标本时，可按标本总量加入1：10的0.106MOL/L的枸橼酸钠溶液混匀后送检，以防止凝固。男，72岁液基薄片诊断：（胸水）上皮源性恶性肿瘤（癌）胸水活检诊断：（左肺）低分化腺癌图CK（+），CK7（+），TTF-1（-）男，男，67岁岁液基薄片诊断：液基薄片诊断：（胸水）（胸水）可见恶性肿瘤细可见恶性肿瘤细胞，请临床结合病史综合分析。胞，请临床结合病史综合分析。胸水活检诊断：送检骨髓穿刺组织考虑为髓系白血病送检骨髓穿刺组织考虑为髓系白血病图男，67岁液基薄片诊断：（腹水
10、）考虑淋巴造血肿（腹水）考虑淋巴造血肿瘤瘤腹水活检诊断：（骨髓穿刺）符合（骨髓穿刺）符合B细胞性淋巴瘤细胞性淋巴瘤图CD3（散在+）,CD20（+）,MPO-,CD10（个别+）,Tdt-,CD5-,CD23-制片制片 将样本直接收集到离心管中，加入30ml清洗液将样本在振荡仪上1500-2000转振荡10分钟后，再置离心机上1500-2000转离心5-10分钟，弃去上清液观察细胞团外观，若仍有肉眼可见粘液或血则加入30ml稀释10倍的DTT重复步骤2-3或用10%的冰醋酸将沉淀物加入保存液中，将保存液瓶静止15分钟后上机制片收集标本收集标本 观察外观观察外观 振荡离心振荡离心针吸标本处理针吸
11、标本适应症与禁忌证适应症：乳腺囊液、肿大的淋巴结与各部位的肿块。禁忌证 肿块过小，直径小于0.5CM 肿块过深，固定性差，活动性大 动脉瘤和有严重出血性疾病的病人 肿块邻近为生命重要器官女，38岁液基薄片诊断：（右乳肿块）乳腺恶性肿瘤乳腺活检诊断：（右乳）浸润性导管癌图乳腺女，40岁液基薄片诊断：（右乳）梭型细胞呈中度不典型增（右乳）梭型细胞呈中度不典型增生生活检诊断：活检诊断：（右乳肿物）送检乳腺组织镜下可见大量的管（右乳肿物）送检乳腺组织镜下可见大量的管腔样结构，管腔内壁被覆单层扁平上皮，个别管腔内可见腔样结构，管腔内壁被覆单层扁平上皮，个别管腔内可见浆液；局灶呈丛状、乳头状增生，管腔内上
12、皮细胞个别呈浆液；局灶呈丛状、乳头状增生，管腔内上皮细胞个别呈钉突样，具有轻度异型性。病变符合复杂性血管瘤钉突样，具有轻度异型性。病变符合复杂性血管瘤（Complex Hemangioma）。）。包埋包埋 收集适量的体液样本将样本置离心机上1500-2000转离心5-10分钟观察细胞团外观，若仍有肉眼可见粘液或血则加入30ml稀释10倍的DTT重复步骤2-3或用10%的冰醋酸取细胞团并加入适量的预糊化淀粉，搅拌成面粉团，用包埋纸包住面粉团，放进包埋盒，合好并打上病理号收集标本收集标本 观察外观观察外观 离心浓缩离心浓缩非妇科标本包埋处理将包好的包埋盒放进固定液里固定数小时即可固定固定 病例回顾
13、患者，女，40岁，“头痛呕吐12天”寻医，临床以“脑膜炎，继发癫痫”收入院。入院检查：腰穿示脑压、脑脊液白细胞升高；MR示脑干、小脑脑膜及C1-T4脑髓表明脊膜呈线状、结节状增厚强化，考虑脑膜、脊膜炎可能性大（见下页图）。行抗菌抗病毒效果不佳。影像学资料病例回顾后抽少许脑脊液送病理科行液基薄片检验，镜下发现肿瘤细胞（下图），拟行免疫组化进一步明确 遂将剩余脑脊液经处理包埋成蜡块行免疫组化检测（见下页图），结合免疫组化液基薄片报告“(脑脊液）上皮源性恶性肿瘤，组织学类型及来源考虑胃肠道腺癌；建议做相应检查。”病例回顾免疫组化结果CK阳性CK阳性CK20阳性脑脊液包埋成蜡块，箭头示印戒样细胞胃镜和病理活检所见胃镜见胃窦部肿物 胃窦部活检总结相对于传统涂片而言，液基薄片价格稍贵，但后者明显提高了细胞样本的检测质量，性价比更高传统涂片由于血液、粘液、炎症等因素影响，常使样本模糊，存在检测误差；液基薄片可以明显提高癌变细胞的阳性检出率，并相应减少需要重复做普通涂片的次数，后续还可行免疫组化检测，核算的结果，费用并没有增加，但却降低了患者因被重做测试而引起的不必要的担心。谢谢！
